Sunteți pe pagina 1din 7

Definiie.

ncadrare
Microorganismele din genul Klebsiella sunt enterobacterii imobile, nesporulate, caracterizate printr-o intens activitate metabolic asupra hidrailor de carbon pe care i hidrolizeaz cu producerea de acizi i uneori de gaz. Glucoza este degradat cu producere de gaz. Specia tip a fost descris n 1885 sub numele de Bakterium lactis aerogenes. Numele actual dateaz din 1954 fiind atribuit n onoarea microbiologului german Edwin Klebs. Klebsiella pneumoniae este cunoscut i sub numele de Bacillus Friedlnder. Exist mai multe specii de exemplu K. pneumoniae, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis iK. oxytoca, aceste tulpini fiind i cele mai des implicate n patologia uman. n ultima perioad se consider K. ozaenae i K. rhinoscleromatis drept subspecii ale K. pneumoniae. Recent, civa membri ai genului Klebsiella au fost reclasificai pentru a forma un nou gen, Raoultella, pe baza informaiilor din studii genetice. Membrii acestui nou gen pot fi implicai i n patologia uman, iar denumirea a fost adoptat la nivelul comunitii tiinifice internaionale [1].

Caractere generale

35. 2. 1. Habitat
Klebsiella pneumoniae este larg rspndit n natur (sol, ap), dar i n intestinul omului i animalelor; n mediul spitalicesc se selecteaz tulpini multirezistente ce pot coloniza tractul urinar sau respirator la adult sau tractul intestinal la copil, mai ales dup terapia prelungit cu antibiotice cu spectru larg. Mai multe studii au urmrit pattern-ul de colonizare cu cu Klebsiella pneumoniaea indivizilor, cu scopul de a determina factorii de risc pentru infecii. S-a demonstrat astfel c aproximativ o treime din persoanele testate prezint portaj de Klebsiella n fecale. Spitalizarea i folosirea de antibiotice a crescut numrul celor colonizai de bacterii din genul Klebsiella, ct i numrul acestor bacterii per gram de fecale. Personalul medical prezint Klebsiella pe mini dup ce ngrijesc pacieni (ntr-un studiu, 17% din asistentele unei secii de terapie intensiv; rate i mai mari au fost nregistrate n cursul unui focar epidemiologic activ 30 % [2]).

35. 2. 2. Caractere morfotinctoriale


Klebsiella pneumoniae cuprinde bacili Gram-negativi, capsulai (capsula are dimensiuni de 2-3 ori mai mari dect diametrul bacteriei), imobili, nesporulai. Se pot dispune n diplo, n special n organismul uman.

35. 2. 3. Caractere de cultur


Se cultiv cu uurin pe medii uzuale fr cerine nutritive speciale. Pe medii gelozate s-au descris mai multe tipuri de colonii cel mai frecvent fiind tipul mucos (M): colonii mari, opalescente, uneori cenuii, cu suprafaa umed care dup o incubare prelungit prezint tendin la confluare i curgere pe suprafaa mediului. Pe medii lactozate sunt lactoz-pozitive. Klebsiella pneumoniae nu se dezvolt pe medii nalt selective i este parial inhibat pe cele moderat selective. S-a raportat apariia unor tulpini ce dezvolta colonii hipermucoide, aceste tulpini avnd i o virulen crescut [3].

35. 2. 4. Caractere biochimice


Pe mediile multitest germenii au urmtorul comportament enzimatic: pe mediul TSI sunt glucoz-pozitivi i uneori fermenteaz glucoza cu producere de gaz, sunt lactoz-pozitivi, nu produc hidrogen sulfurat; pe mediul MIU sunt imobili, indol-negativi i ureaz-pozitivi; pot crete pe medii avnd citratul drept unic surs de carbon. Sunt germeni catalaz pozitivi, oxidaz negativi.

35. 2. 5. Rezistena fa de factori fizici i chimici


Sunt puin rezisteni la cldur (distrui n 5-7 minute la 100C); pe sol, n alimente rezist un mare numr de zile. Dezinfectantele obinuite i distrug n intervale de timp cuprinse ntre 30 de minute i 2 ore.

35. 2. 6. Structur antigenic


Particularitile morfologice ale klebsiellelor se reflect n structura antigenic. Au fost descrise antigene somatice O (LPZ) specifice de grup i antigene capsulare polizaharidice K, specifice de tip. Exist peste 80 de tipuri antigenice, identificabile de ex. prin reacia de umflare a capsulei i (prin analize serologice sau de microbiologie molecular).

35. 2. 7. Caractere de patogenitate


Klebsiella pneumoniae este un microorganism condiionat patogen, care poate fi implicat n patologia uman prin multiplicare i invazivitate. Factorii de patogenitate sunt reprezentai de capsula (antigenul K) care i confer rezisten fa de fagocitoz i de endotoxina (antigenul O) eliberat dup distrugerea bacteriei.

Sideroforii membranari sechestreaz Fe2+ n focarul infecios, pentru a asigura un nivel adecvat creterii bacteriene. Dei nu reprezint un rol central n patogenitate, ntr-un model murin de peritonit, s-a demonstrat creterea virulenei tulpinilor de Klebsiella prin introducerea genei care codific sideroforul aerobactin. Biofilmul reprezint o matrice extrem de bine organizata ce nconjoar bacteriile. Ele favorizeaz aderarea bacterian pe suprafaa cateterelor. Adezinele cele mai ntlnite la tulpinile de Klebsiella pneumoniae sunt fimbriile de tipul 1 i 3. Exist o interrelaie ntre adezinele exprimate i cantitatea de biofilm produs [4].

35. 3. Patogenie i patologie. Principalele afeciuni produse


Considerat iniial ca fiind agent etiologic al pneumoniilor, s-a dovedit c numai 1-3 % din pneumonii sunt produse de Klebsiella pneumoniae, dar aceste pneumonii pot fi extrem de grave (pneumonii necrotice i hemoragice), n special la pacieni cu un sistem de aprare deficitar. Klebsiella pneumoniae poate fi implicat ntr-o mare varietate de boli precum toxiinfecii alimentare de tip infecios, infecii ale tractului respirator superior, infecii urinare etc. Din ce n ce mai frecvent acest microorganism apare n infecii nosocomiale (de spital), la fel ca i Klebsiella oxytoca. Klebsiella ozaenae a fost izolat din mucoasa nazal a pacienilor cu ozen (atrofie progresiv a mucoasei cu pierderea mirosului) iar Klebsiella rhinoscleromatis s-a izolat de la pacieni cu rinosclerom (granulom distructiv al nasului i faringelui). Tulpini aparinnd serotipurilor 1-5 au fost izolate din abcese la nivel pulmonar, hepatic, cerebral. Dintre acestea o tulpin de Klebsiella pneumoniae deosebit de virulent a fost izolat n special n rile asiatice, aceast tulpin produce majoritatea abceselor hepatice primare bacteriene [57]. ntr-un model murin, secvena de evenimente ce a condus la constituirea unui abces bacterian primar dup inoculare oral a fost: colonizare intestinal (la 12 ore), diseminare extraintestinal (ntre 12 i 24 ore), replicare hepatic (la 36 ore), metastazare septic (dup 48 ore). S-a tentat identificarea unor gene care favorizeaz producerea abcesului hepatic [8-10].

n ultima vreme tulpini de Klebsiella productoare de -lactamaze sunt tot mai des responsabile de infecii nosocomiale mai ales la pacieni iimunocompromii. De o importan particular sunt enzimele cu activitate lactamazic cu spectru extins (Extended Spectrum Beta Lactamaze, ESBL); tulpinile de Klebsiella productoare de ESBL sunt recunoscute n patologia uman datorit dificultii tratamentului curativ. Tratamentul de prim linie pentru tulpinile de K. pneumoniae productoare de ESBL a fost reprezentat de carbapeneme. n 1996 s-a identificat pentru prima oar n SUA o tulpin productoare de carbapenemaze (Klebsiella pneumoniae Carbapenemase - KPC).

35. 4. Diagnosticul de laborator n infeciile produse de Klebsiella


Diagnosticul de laborator este bacteriologic (direct). Cu toate c nu este cea mai reprezentativ entitate clinic pentru acest gen, vom discuta n continuare diagnosticul pneumoniei produse de Klebsiella pneumoniae. Diagnosticul complet include elemente clinice, paraclinice (ex. examenul radiologic) i de laborator; diagnosticul bacteriologic fiind util n stabilirea etiologiei i tratamentului antibiotic corespunztor. Diagnosticul bacteriologic (direct) include etapele cunoscute. 1. Recoltarea i transportul produsului patologic trebuie s se realizeze respectnd o serie de reguli (ct mai aproape de debutul bolii, nainte ca pacientul s fi primit antibiotice, ct mai rapid i corect din punct de vedere al tehnicilor utilizate, respectnd toate normele de asepsie i antisepsie, etc.). n infeciile produse de Klebsiella pneumoniae se pot recolta materii fecale, urin, snge, puroi, etc. n continuare vom discuta cazul n care p.p. este reprezentat de sput (vezi i anexa nr. 6). Din punct de vedere macroscopic, sputa poate avea un aspect mucoid, de culoare rou nchis, n jeleu de coacze. 2. Examinarea microscopic a produsului patologic include realizarea a minim dou frotiuri din produsul patologic recoltat i transportat corespunztor, care se vor colora cu albastru de metilen (AM) i respectiv Gram. Frotiurile se examineaz la microscopul optic cu imersie i se noteaz prezena celulelor de la nivel alveolar (ex. macrofage alveolare), prezena celulelor inflamatorii (ex. leucocite) i prezena bacililor Gram-negativi, de dimensiuni relativ mari, ncapsulai (nconjurai de o capsul voluminoas). Examinarea microscopic trebuie s demonstreze calitatea produsului patologic i s

realizeze o identificare prezumtiv a microorganismului implicat (vezi i anexa nr. 6). n coloraia cu albastru de metilen, capsula apare ca un halou n jurul klebsielelor. Utiliznd anticorpi anti-capsulari, se poate realiza o identificare rapid inclusiv direct, pe produsul patologic, prin reacia de umflare a capsulei (vezi i anexa nr. 2). 3. Cultivarea pe medii de cultur a produsului patologic se realizeaz n aa fel nct s se poat obine colonii izolate i respectiv o cultur pur, care se va identifica (vezi i anexa nr. 2). Klebsiella pneumoniae se poate dezvolta pe medii de cultur obinuite n 18-24 ore, la 35-37C. Se prefer utilizarea unor medii de cultur slab selective (ex. MacConkey). Klebsiella pneumoniae nu se dezvolt pe medii nalt selective i este parial inhibat pe cele moderat selective. Pe mediile solide Klebsiella pneumoniae formeaz colonii lactozpozitive, mari, de tip M bombate, cremoase, n pictur de miere, care dau aspectul de curgere pe suprafaa mediului de cultur, cu tendin de confluare. Se poate realiza i inocularea la animale de laborator sensibile, oarecele alb (vezi i anexa nr. 2). Exist medii de cultur selective/difereniale care pot ajuta n diagnosticul rapid al infeciilor cu Klebsiella sau aducnd informaii epidemiologice de valoare (izolarea de tulpini productoare de ESBL, datorit rezistenei la o doz de antibiotic inclus n mediu). Valorile de sensibitilitate i specificitate a acestor metode sunt foarte bune, dar trebuie s fie folosite cu pruden, pentru a nu oferi rezultate fals-negative prin limitarea altor germeni posibili implicai n procesul patogenic. [11] 4. Identificarea microorganismului implicat patogenic se va realiza pe baza mai multor caractere: Caractere morfotinctoriale: sunt bacili Gram-negativi, cu dimensiuni mari, capsulai, capsula fiind voluminoas, dispui n lanuri scurte, perechi sau izolai. n mediul de cultur pot pierde capsula. Caractere de cultur: produc colonii lactoz-pozitive, de tip M, mari (2-3 mm la 24 de ore, peste 4 mm la 48 ore), bombate, vscoase, cremoase, n pictur de miere, care dau aspectul de curgere pe suprafaa mediului de cultur, cu tendin la confluare. Pe mediul MacConkey coloniile apar roii (fermenteaz lactoza, cu producerea de gaz). Caractere biochimice: Klebsiella este un microorganism lactoz-pozitiv, ceea ce se poate

evidenia nc din etapa de izolare pe mediul MacConkey (vireaz culoarea mediului n rou);

alte caractere biochimice se studiaz dup repicarea unor colonii pe

medii multi- test (TSI, MIU), pe mediul Simmons sau n sisteme multi-test comerciale de tip API; Klebsiella pneumoniae este glucoz-pozitiv (cu producere de gaz), lactoz-pozitiv, nu produce H2S, imobil, ureaz-pozitiv, indol-negativ, care se dezvolt folosind citratul ca unic surs de carbon; K. oxytoca e indol-pozitiv acesta fiind un caracter ce poate fi folosit n schema de diagnostic de laborator diferenial. produce acetoin din glucoz, caracter evideniat prin reacia VogesProskauer (adugarea de hidroxid de potasiu duce la virarea n rou a unei culturi bacteriene n care se afl acetoin, n prezena unui indicator de pH precum alfa-naftol). Caractere antigenice: se utilizeaz seruri cu anticorpi cunoscui pentru identificarea tulpinilor deKlebsiella, prin tehnici de aglutinare, coaglutinare, ELISA [12], Western Blot sau latex aglutinare. Exist peste 80 de tipuri de antigen K la Klebsiella pneumoniae. Aceste reacii se practic n laboratoare de referin. Caractere de patogenitate: se poate utiliza inocularea la oarecele alb Alte caractere / teste utilizate n identificare care se pot utiliza (n testarea sensibilitii la bacteriofagi (unele dintre scheme au fost gruparea n funcie de rezistena la antibiotice i chimioterapice; bacteriocinotipie; caractere testate prin metode ale biologiei moleculare (stabilirea (vezi i anexa nr. 2). centre de referin): stabilite n Institutul Cantacuzino);

spectrului plasmidic, cu identificarea plasmidelor implicate n virulen etc.). 5. Antibiograma (verificarea sensibilitii la antibiotice i chimioterapice n vederea stabilirii tratamentului) este obligatorie i se realizeaz de obicei prin metode difuzimetrice. Determinarea CMI i CMB poate fi necesar (vezi capitolul 7). Klebsiella pneumoniae reprezint unul dintre microorganismele cu o rezisten remarcabil fa de antibiotice i chimioterapice. Cnd sunt detectate, tulpinile productoare de -lactamaze i carbapenemaze necesit teste moleculare pentru a determina cu exactitate substratul rezistenei.

S-ar putea să vă placă și