TALLER 4 BIOQUMICA GENERAL CINTICA ENZIMATICA 1) Responda si la siguiente frase es verdadera o falsa y justifique.

a) La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima es independiente de la concentracin del sustrato? b) En los niveles de saturacin del sustrato, la velocidad de una reaccin catalizada por una enzima es proporcional a la concentracin de la enzima? c) La constante de Michaelis KM es igual a la concentracin de sustrato en la cual V = Vmax/2? d) La velocidad de una reaccin catalizada por una enzima en presencia de una concentracin limitada de sustrato , se reduce en el tiempo? e) La forma sigmoidea de la curva V vs [S], para algunas enzimas reguladoras, indica que la afinidad de las enzimas por el sustrato se reduce conforme se disminuye la concentracin de sustrato. 2) La hidrlisis del pirofosfato a ortofosfato es importante para impulsar reacciones biosintticas tales como la sntesis de DNA. Esta reaccin hidroltica est catalizada en E. coli por una pirofosfatasa que tiene una masa de 120 Kd y estas constituida por 6 subunidades idnticas. Para esta enzima, una unidad se define como la cantidad de enzima que hidroliza 10 moles de pirofosfato en 15 minutos a 37 c bajo condiciones de ensayo estndar. La enzima purificada tiene una V Mzx de 2800 unidades por miligramo de enzima. a) Cuantas moles de sustrato se hidrolizan por segundo y por miligramo de enzima cuando la concentracin de sustrato es mucho mayor que KM? b) Cuantas moles de centro activo existen en un miligramo de enzima? Hay que suponer que cada subunidad tiene un solo centro activo. c) Cul es el nmero de recambio de la enzima? 3) La penicilina es hidrolizada y con ello inactivada por la penicilina (tambin conocida como - lactamasa), una enzima presente en algunas bacterias resistentes a antibiticos. La masa de esta enzima en Staphylococcus aureus es 29.6 Kd. La cantidad de penicilina hidrolizada en un minuto es una disolucin 10 ml que contiene 10 9 gr de penicilina purificada se midi como funcin de la concentracin de penicilina. Supngase que la concentracin de penicilina no cambia apreciablemente durante el ensayo.

Penicilina M 1 3 5 10 30 50

Cantidad hidrolizada (nanomoles) 0.11 0.25 0.34 0.45 0.58 0.61

a) Hgase la representacin de 1/V frente 1/[S] a partir de los datos de la tabla. Parece obedecer la penicilina a la cintica de Michaelis Menten? Si es as, cual es valor de KM? b) Cual es valor de Vmax? c) Cual es el nmero de recambio de la penicilina bajo estas condiciones experimentales? Hay que suponer un centro activo por molcula de enzima. 4) Suponer que dos sustratos A y B compiten por una enzima. Deducir una expresin que relacione la razn de las velocidades de utilizacin de A y B, V A/VB, con respecto a las concentraciones de estos sustratos y sus valores de K3 y KM. 5) La siguiente ecuacin considrela como una reaccin irreversible representada por el diagrama de energa libre

a) Usando las letras indicadas en el diagrama, relaciones cada una de las constantes de velocidad de la ecuacin con los diferentes niveles de energa determinados en el grfico.

6) Por procedimientos experimentales se obtuvieron los datos que aparecen en la siguiente tabla para una enzima en 10 mL de mezclas de reactivos. Use mtodos numricos para resolver las siguientes preguntas:

a) b) c) d)

Cual es la Vmax para la concentracin de la enzima? Cual es KM de la enzima? Demuestre si la reaccin esta regina o no por la cintica Michaelis Menten. Cuales son las velocidades iniciales para [S]= 1.0 x 10-6 M y [S]= 1.0 x 10-1 M? e) Calcul la concentracin total del producto durante los primeros cinco minutos en [S]= 2.0 x 10-3 M, puede hacer la misma calculacin para [S]= 2.0 x 10-6 M? f) Suponga que la concentracin de la enzima para cada reaccin se incrementa en un factor de 4. Cual sera el valor de KM? De Vmax?.