Les immunoglobulines et leurs fonctions

Marie-Nathalie Kolopp-Sarda MCU-PH Laboratoire dImmunologie Centre de Biologie Lyon Sud Octobre 2009

IMMUNOGLOBULINES ET FONCTION ANTICORPS Dfinition Les immunoglobulines (Ig) sont des glycoprotines doues dune fonction anticorps. Elles sont prsentes : - sous forme soluble dans le plasma et dans de nombreuses scrtions - sous forme membranaire comme lment du rcepteur de lAg la surface des cellules B (BCR) Terminologie : Immunoglobulines = anticorps = -globulines

Les immunoglobulines appartiennent la fraction des protines sriques.

profil normal en lectrophorse capillaire
Pic dalbumine

hmopexine Pic bta 1: transferrine Fraction

Pic dalpha 1 antitrypsine

Pic bta 2: C3 Fraction

Fraction pralbumine

orosomucode

Fraction alpha 2 : haptoglobine et alpha 2 macroglobuline

Support de limmunit humorale synthtises par les plasmocytes Concentration circulante : 15 g/L environ
Hmatopose CPA IL-1 Lymphocyte T IL-3, IL-6 IL-7, GM-CSF Lymphocyte B Lymphocyte B activ IL-1, IL-6, TNF GM-CSF, G-CSF, M-CSF

IL-6

Lymphocyte T activ

IL-2, IFNg

Cellule NK

Prolifration clonale : plasmocytes et B mmoire

Prolifration clonale : cellules T effectrices et mmoire

Lymphocyte T cytotoxique (CTL)

Gammapathie monoclonale en lectrophorse capillaire

Pic dimmunoglobulines Monoclonales au sein des gammaglobulines

STRUCTURE DES Ig
I Matriel dtude Anticorps monoclonaux dorigine humaine purifis (myelome)

II Structure de base (modle IgG1) Travaux de Porter-Edelman (1958) 4 chanes polypeptidiques : 2 ch. lourdes (H) identiques associes 2 ch. lgres (L) identiques = H2L2 Chanes oligosaccharidiques (1 7) : Rle important dans la fixation sur les cellules ou le transport

Une immunoglobuline est forme de deux chanes lourdes (, , , ou ) et de deux chanes lgres ( ou )

Ponts disulfures

25kDa

50kDa

STRUCTURE DES Ig (2)

* Chanes lourdes : varient selon classes (,,,,) ou sous-classes relies entre elles par un ou plusieurs ponts S-S MM 50 kDa (450AA) * Chanes lgres : communes toutes les classes de type Kappa (65%) ou Lambda (35 %) Chanes lgres relies chanes lourdes par ponts S-S MM 25 kDa (212AA) Rgion charnire trs flexible (60 180 ) pour fa ciliter liaison lantigne

STRUCTURE DES Ig (3)

III Structures particulires certaines Ig La chane de jonction J assure la cohsion de polymres pour les IgA et pour IgM La pice scrtoire S associe aux IgA dimriques retrouves dans les scrtions Htropolymres Ig et Ig (CD79a et b) associs aux Ig membranaires Segments transmembranaire et cytoplasmique des Ig membranaires

STRUCTURE DES Ig (4)

IV Notions de domaines Sur chanes lourdes et lgres des ponts S-S intracatnaires boucles peptidiques de 60 70 rsidus dAA de forte homologie = domaine.

Chanes lourdes : 4 domaines (sauf pour IgM et IgE 5) Chanes lgres : 2 domaines Rgion COOH-terminale est dite constante (CH et CL) Rgion NH2-terminale est dite variable (VH et VL)

Beaucoup de molcules impliques dans reconnaissance ou activation ont des structures analogues = superfamille des immunoglobulines.

Organisation en domaines variables (VL ou VH)

HYDROLYSE PAR LES ENZYMES PROTEOLYTIQUES

enzyme animale : pepsine pH5 F(ab)2 fragments peptidiques de Fc

enzyme vgtale : papane 1% * 2 Fab (Antigen binding) * 1 Fc : cristallisable support des fonctions biologiques

FONCTIONS BIOLOGIQUES DES Ig

Dualit fonctionnelle
1) fragment Fab : liaison lantigne Paratope sur lanticorps complmentaire de lpitope de lantigne.

dans les zones hypervariables ou CDR (Complementary Determining Region) des domaines variables VH et VL. 3 CDR (5 10 AA) sur VH et VL encadrs par 4 parties relativement constantes dites charpentes (framework regions) interaction Ag-Ac : liaisons H, lectrostatiques, Van der Waals et hydrophobes. notion de Valence.

FONCTIONS BIOLOGIQUES DES Ig (2)

2) fragment Fc : Porteur des fonctions effectrices des anticorps : - activation du complment voie classique, aprs liaison lAntigne (fixation C1q sur domaine CH2) IgM+++, IgG1 > IgG3 > IgG2 - liaison des rcepteurs spcifiques du Fc (cytophilie) * PN et macrophages fixent et phagocytent microorganismes recouverts dIgG (opsonisation) : FcRI, FcRII, FcRIII. * Lymphocytes peuvent tuer cellules recouvertes dIgG sans les phagocyter = mcanisme ADCC (Antibody Dependant Cellular Cytotoxicity) Domaines CH2 et CH3 impliqus dans la liaison au rcepteur du Fc. - catabolisme des immunoglobulines rgul par le domaine CH2 du Fc - passage transplacentaire

Ncessit de 2 fragments Fc proximit : IgM > IgG

ADCC (Cytotoxicit dpendante danticorps)

Destruction de lagent pathogne ou de la cellule cible

LES NIVEAUX DE DIVERSITE DES Ig

3 niveaux diffrents : isotypie caractres communs tous les individus dune mme espce dterminants localiss sur domaine constant des chanes lourdes (classe et sous-classe) ou des chanes lgres (type) allotypie variations entre individus dune mme espce diffrences structurales ponctuelles sur AA ou squences ligosaccharidiques, dterminants situs sur domaine constant des chanes lourdes et lgres ex : locus Gm (24 variants sur chanes 1, 2, 3) locus Am (2 variants sur chane ) locus Km ou Inv (3 variants sur chane Kappa) idiotypie variations associes au site de liaison lantigne et lies la partie variable des chanes lourdes et lgres des Ig (zones hypervariables)

LES DIFFERENTES CLASSES DIMMUNOGLOBULINES IgG

Chez lhomme adulte, IgG = 75 % des Ig sriques (environ 12 g/L) Structure : - Monomre : 2 chanes lourdes (avec 3 domaines CH) et 2 chanes lgres kappa ou lambda - 4 sous-classes : IgG1 (66%), IgG2 (23%), IgG3 (7%), IgG4 (4%), - diffrences structurales : . taille de la rgion charnire (IgG3 en particulier) . nombre et la position des ponts S S entre chanes lourdes . position du pont SS entre CL et CH et sur le rapport /. - Allotype Gm sur 1, 2, 3 - Faible pourcentage doligosaccharides (2 3%) Proprits physico-chimiques : - MM = 150 kDa - Cte de sdimentation 7 S

IgG
Proprits biologiques : - Valence = 2 - Demi-vie = 21 jours (IgG3 : 8 jours)

- Taux de synthse = 33 mg/kg de poids/jour - 45% des IgG sont intravasculaires Fonctions biologiques : - Activation du complment par voie classique IgG1 > IgG3 > IgG2 ; IgG4 = 0

- Cytophilie : Rcepteurs Fc sur les polynuclaires, les macrophages, (surtout IgG1 et IgG3), les lymphocytes, les plaquettes (agrgation par les complexes immuns) et les mastocytes (IgG4) - Responsable de lopsonisation et de lADCC

IgG
Anticorps neutralisants : IgG antitoxine Passage transplacentaire (IgG1, IgG3 et IgG4 +, IgG2+/-) rle dans la dfense immunitaire du ftus (immunit passive) fixation sur le syncytiotrophoblaste En pathologie : ractivit du fragment Fc des IgG avec le facteur rhumatode (IgM anti-IgG) Ractivit avec Protine A du staphylocoque (sauf IgG3) utilis pour la purification des IgG

 Caractristiques de la rponse immunitaire secondaire et de la mmoire

LES DIFFERENTES CLASSES DIMMUNOGLOBULINES 2 - IgA

10 15% des Ig circulantes (environ 2g/L chez ladulte), scrtions exocrines au niveau bronchique, digestif (salive), gnito-urinaire, dans les larmes et le lait (colostrum) Structure : - Monomre essentiellement pour IgA sriques 90% IgA1 et 10% IgA2 3 domaines CH. - Dimre pour IgA scrtoires (s-IgA) - Allotypie Am - Pourcentage doligosaccharides = 7 11 % Proprits physico-chimiques : - Monomre MM = 160 kDa, cte de sdimentation 7 S - Dimre (s-IgA) MM = 400 kDa, cte de sdimentation 11 S

IgA
la forme srique est monomrique la forme scrte est polymrique (dimrique) 2 IgA chane J pice scrtoire (protge de laction des enzymes protolytiques) dorigine pithliale

IgA

Proprits biologiques : - Valence = 2 pour le monomre et 4 pour le dimre - Demi-vie = 6 jours - Taux de synthse = 24 mg/kg de poids/jour - 40 % des IgA sont intravasculaires Fonctions biologiques : - Pas dactivation du complment par voie classique activation par voie alterne (complexe Ag-Ac ou IgA agrges) - Peu de cytophilie : FcRI (CD89) - transcytose dirige dans les cellules pithliales: IgA scrtoires - Premire ligne de dfense au niveau des scrtions contre bactries et virus = immunit locale, systme immunitaire muqueux commun, MALT

Transcytose dirige des IgA scrtoires

LES DIFFERENTES CLASSES DIMMUNOGLOBULINES 3 - IgM

IgM = 5 10 % des Ig sriques (1 1,5 g/L, adulte) Structure : - Monomre : forme membranaire la surface du lymphocyte B - Pentamre : forme sous laquelle les IgM sont scrtes et se trouvent dans le courant circulatoire - 5 monomres de base associs par des ponts S-S au niveau des fragments Fc (C3/C3 et C4/C4) et par la chane de jonction J (liaison covalente 2 rsidus cystne appartenant 2 monomres adjacents) - 4 domaines CH (fragment Fc possde CH) - Pas de zone charnire - Pourcentage dhydrate de carbone = 10 12 % Proprits physico-chimiques : - MM = 950 kDa, - Cte de sdimentation = 19 S

IgM

Proprits biologiques : - Valence thorique = 10 (sauf si encombrement strique) - Demi-vie = 5 jours - Taux de synthse = 6 mg/kg de poids/jour - 80 % des IgM sont intravasculaires

Fonctions biologiques : - Activation du complment par voie classique - Anticorps agglutinants et neutralisants (virus-bactries) - Rle accessoire important comme Ig scrtoire (pice S) - Pas de passage transplacentaire, mais anticorps produits par le ftus ds la 10me semaine de gestation - Les IgM : rponse primaire, - seuls AC produits par Ag thymoindpendants

LES DIFFERENTES CLASSES DIMMUNOGLOBULINES 4 - IgD

Classe dIg la moins bien connue sur le plan structural et fonctionnel. Concentration srique seulement 30mg/L, Ig de surface essentiellement Structure : - Monomre classique - Pourcentage doligosaccharides = 9 14 % Proprits physico-chimiques : - MM = 175 kDa - Cte de sdimentation 7 8 S

IgD

Proprits biologiques : - Valence = 2 - Demi-vie = 3 jours - Taux de synthse = 0,4 mg/kg de poids/jour - Molcule assez instable avec un fragment Fab trs sensible laction des enzymes protolytiques - 75% des IgD sont intravasculaires

Fonctions biologiques : - Trs mal connues - Pas dactivation du complment, ni de cytophilie, ni de passage transplacentaire - IgD prsentes la surface de la majorit des lymphocytes B, coexprimes avec IgM = rcepteur cellulaire pour les antignes

LES DIFFERENTES CLASSES DIMMUNOGLOBULINES 5 - IgE

Dernire classe dIg dcouverte en 1966 (ISHIZAKA) et la plus faiblement reprsente dans le srum (0,1 mg/L) Structure : - Monomre - 4 domaines CH - Pas de rgion charnire - Pourcentage dhydrate de carbone = 12 % Proprits physico-chimiques : - MM = 190 kDa - Cte de sdimentation = 8 S

IgE

Proprits biologiques : - Valence = 2 - Demi-vie = 2,5 jours (21 jours pour IgE membranaires) - Taux de synthse = 0,016 mg/kg de poids/jour - 51 % sont intravasculaires Fonctions biologiques : - Pas dactivation du complment - Forte cytophilie pour basophiles (sang) et mastocytes (tissus) : fixation au FcRI - Pas de passage transplacentaire - Rle biologique fondamental dans lhypersensibilit de type I ou immdiate (allergie anaphylaxie) - Immunit antiparasitaire (Helminthes) en synergie avec les osinophiles.

IgE : fonctions biologiques

Forte cytophilie (Fc) Mastocytes Polynuclaires basophiles Hypersensibilit immdiate

Polynuclaires osinoophiles : immunit anti parasitaire Rle essentiel dans lhypersensibilit immdiate (type I) (choc anaphylactique, allergies) pontage dun Ag multivalent 2 IgE Dgranulation des basophiles et des mastocytes

CE QUIL FAUT RETENIR

Dualit structurale et fonctionnelle des Ig Structure et fonctions des Ig Notions de domaines et de paratope Action des enzymes protolytiques Isotypie, allotypie et idiotypie Les 5 classes dimmunoglobulines

PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUESET BIOLOGIQUES DES Ig HUMAINES

IgG Chane lourde Variants isotypiques Formule molculaire Nombre de domaines Rgion charnire (nbAA) IgG1 IgG4 L22 4 12 62 1=15 2=12 3=62 4=12 non 150 7 3 12 75 85 21 (IgG3 :8) 33 IgG1,2,3 IgG4 Gm (24) IgG1, 2, 4 IgA IgA1 IgA2 (L22)n 4 2=13 1=26 IgM (L22)5 5 0 IgD L22 4 64 IgE L22 5 0

Chanes J et S MM (kDa) Constante de Sdimentation (en S) Contenu en glucides (%) Concentration (g/l) chez ladulte % des Ig sriques Demi-vie (jours) Taux de synthse (mg/kg poids et /jour) Activation du Complment Allotype de H Liaison Protine A du staphylocoque Voie directe Voie alterne

oui (sIgA) 160 (monomre) 7 (monomre) 11 (sIgA) 7 2 7 15 6 24 non IgA1 et A2 Am (3) non

oui (sIgM) 950 19 10 1,5 5 10 5 6 oui non

non 175 7 12 0,03 0,3 3 0,4 non oui

non 190 8 11 0,0003 0,003 2,5 0,016 non non

non

non

non