UNIVERSIDAD NACIONAL DANIEL ALCIDES CARRION

Facultad De Ingeniera Escuela De Formacin Profesional De Ingeniera Ambiental

Coloraciones Vitales Coloracin De Gram

Microbiologa

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Objetivos
Conocer que es una coloracin vital Realizar la coloracin Gram Aprender los pasos y el fundamento de la coloracin de Gram

Fundamento terico

Coloraciones vitales Son coloraciones que se le asignan a las bacterias con distintos qumicos con el fin de distinguir las propiedades de unas a otras. Bajo el microscopio, son necesarias tambin para obtener una imagen ms ntida de ellas, y as, obtener mejores observaciones. Entre ellas podemos encontrar la coloracin o tincin de Gram, Ziehl Neelsen y cpsula

Tipos de coloraciones

Diferencias Son 3 tcnicas diferentes para detectar distintos microorganismos, la tincin de Gram es para clasificar segn la presencia o no de membrana externa; mientras que la Ziehl-Neelsen son para un tipo especial de bacterias las cuales son denominadas Acido-Alcohol resistente (como por ejemplo Mycobacterium Tuberculosis), en uno de los pasos de la tincin de Gram se tiene que decolorar con una solucin de cido y alcohol, mientras que en estas bacterias (acido-alcohol resistente) esta decoloracin no sirve, lo cual deja sin poder hacer una buena tincin de Gram y la Capsula sirve para la estructura superficial, que consiste en la acumulacin de material mucoso o viscoso alrededor de la pared celular, en esta tincin se tie el entorno, no la cpsula.
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La Tincin De Gram Es la tincin diferencial ms utilizada en Bacteriologa pues permite separar las bacterias en dos grandes grupos, las Gram-positivas y las Gramnegativas, debe su nombre al bacterilogo dans Christian Gram que desarrollo la tcnica en 1884. La tincin de Gram requiere cuatro soluciones: 1. Primer colorante. Es un colorante bsico que en contacto con las clulas cargadas negativamente, reacciona con ellas colorendolas. El ms utilizado es el cristal violeta. 2. Solucin mordiente. Fija las tinciones y aumenta la afinidad entre el colorante y las clulas. Los mordientes empleados suelen ser sales metlicas, cidos o bases, como, por ejemplo, una solucin diluida de yodo. 3. Agente decolorante. Es un disolvente orgnico, por ejemplo, alcohol-acetona. 4. Colorante de contraste. Es un colorante bsico de distinto color que el primer colorante, como, por ejemplo, la safranina. Los dos grupos bacterianos a los que anteriormente nos referamos difieren en el color con el que finalmente aparecen. Las bacterias Gram positivas
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se teirn de azul por el cristal violeta y no perdern esta coloracin durante los pasos sucesivos. Las bacterias Gram negativas perdern la coloracin inicial del cristal violeta en los siguientes pasos y se teirn de rosa debido a la safranina. La diferencia est determinada por la composicin de su envoltura celular. Las bacterias gram positivas poseen una malla de peptidoglicano en su parte ms externa, mientras que las bacterias gram negativas, recubriendo una fina capa de peptidoglicano, presentan una membrana externa que envuelve toda la clula.

Materiales
Cultivo de bacterias Porta objeto Gotero Asa de siembra Mechero de bunsen Vaso Reactivos Agua salinizada Agua corriente Cristal de violeta Lugol (mordiente) Alcohol acetona Safranina
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Procedimiento
1. Preparar los frotis bacterianos Colocar en el porta objeto una gota de agua salinizada. Coger una muestra del cultivo bacterial. Hacer frotis y dejar secar.

2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9.

Teir con cristal violeta 1 min Lavar con abundante agua el exceso de colorante Cubrir con Lugol 1 min Lavar con agua el exceso de Lugol Decolorar con alcohol acetona hasta que la preparacin deje de perder color Lavar con abundante agua para eliminar el resto de disolvente Teir con safranina 1 min Lavar con agua para eliminar el colorante de contraste 10.Secar la preparacin

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Resultados
Se aprendi y realizo exitosamente la tincin de Gram siguiendo los pasos aprendidos en teora.

Conclusin
Las coloraciones vitales son de gran ayuda para la identificacin de qu clase de bacterias se encuentra en la muestra y como se demostr en la prctica una de las ms sencillas es la coloracin o tincin de Gram que consiste en separar a las bacterias en dos grupos, Gran negativas y Gran positivas, tambin hay que tener en cuenta de que esta tcnica no sirve para toda clase de bacterias pero si en su mayora.

Recomendaciones
Tener encendido el mechero al momento de coger la muestra del cultivo de bacterias, para mayor seguridad.
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Referencia bibliogrfica
Pollack, R.A., Findlay, L., Mondschein, W. and Modesto R.R. 2002. Laboratory Exercises in Microbiology. John Wiley & Sons, Inc. 232pp Cappuccino, J.G. and Sherman, N. 2001. Microbiology a Laboratory Manual 5 th edition. Benjamin Cumming Publishing Centro Educacional Adventista De Los Angeles, Especialidad De Laboratorio Quimico, Practica N 5, Prof. Priscillia Jara. Instituto de Agrobiotecnologa y Recursos Naturales. UPNA/CSIC microbiologa general (guin de prcticas)

Contenido
Objetivos ............................................................................................................................................. 2 Fundamento terico............................................................................................................................ 2 Coloraciones vitales ........................................................................................................................ 2 La Tincin De Gram ......................................................................................................................... 3 Materiales ........................................................................................................................................... 4 Procedimiento ..................................................................................................................................... 5 Resultados ........................................................................................................................................... 6 Conclusin ........................................................................................................................................... 6 Recomendaciones ............................................................................................................................... 6 Referencia bibliogrfica....................................................................................................................... 7

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