Universidad Andrs Bello Facultad de Ciencias de la Salud Departamento de Ciencias Biolgicas Laboratorio de Biologa Celular BIO 035

Trabajo Prctico n 5 Organizacin Subcelular

Introduccin Se cree que la vida en la tierra hace mucho tiempo comenz debido a una integracin espontanea de molculas, creando lo que actualmente conocemos como la unidad bsica, estructural y funcional de todos los seres vivos llamada clula. Los precursores en adoptar este concepto como tal fueron clulas simples y sencillas conocidas como procariontes (bacterias), gracias a estos se dio paso a formas ms complejas de vida como es el caso de las clulas eucariontas, que a diferencia de las primeras poseen ncleo manteniendo as el material gentico aislado de otros compartimientos celulares. Adems la clula eucarionta contiene una gran variedad de organelos para realizar funciones especficas por ejemplo mitocondrias (produccin de energa), cloroplastos (fotosntesis), retculo endoplasmatico rugoso (sntesis protenas) y

liso (sntesis de lpidos), lisosomas (digestin celular), peroxisoma (degradacin perxido de hidrogeno) entre otros. A travs del tiempo, la microscopia subcelular dio abasto para la visualizacin de estructuras en forma ms detallada y concisa, pero no para definir su funcionalidad. Debido a esta inquietud se adoptaron tcnicas que pudieran permitir el aislamiento de estos componentes celulares, obteniendo as una funcin especfica para cada organelo y comprendiendo como funciona esta gran maquinaria llamada clula. Una de las tcnicas ms usadas es el fraccionamiento celular que consiste en dos etapas: homogeneizacin y fraccionamiento propiamente tal. La homogeneizacin es la ruptura de la clula en sus componentes ms pequeos y el fraccionamiento una serie de centrifugaciones sucesivas obtenindose una sedimentacin de cuerpos celulares, dependiendo de su densidad.(1) Hiptesis En el primer precipitado de la centrifugacin, no encontraremos solamente ncleos celulares. Al ser rotas las clulas, no todos los organelos celulares conservarn intactas sus propiedades bioqumicas originales.(2) Objetivos Objetivo general: Conocer y comprender correctamente el fraccionamiento subcelular a travs de las tcnicas empleadas en este mtodo tales como la homogeneizacin y centrifugacin. Descubrir las tcnicas de homogeneizado existentes. Entender los principios en los que se basa la tcnica de centrifugacin. Reconocer el concepto de molculas marcadoras y comprender su utilidad para la evaluacin del fraccionamiento celular Lograr manipular de manera correcta el objetivo de inmersin del microscopio y adems comprara una muestra fresca de una fijada. Materiales y mtodos

Resultados Experimento n 1

Pellet + 1 ml de buffet (fraccin nuclear)

P1

P2 Sobrenadante de p1, el cual se vuelve a

Sobrenadante S1 (fraccin microsomal) Pellet + 1ml buffet (fraccin P2 mitocondrial) Experimento n 2 Suspensin de ncleos visto a microscopio a 40X

Suspensin de ncleos con azul de tripan visto en el microscopio a 40X

Fraccin enriquecida en mitocondrias P2 vista en el microscopio a 40X

Fraccin enriquecida en mitocondrias P2 ms azul de tripn vista en el microscopio a 40X

Experimento n 3

Rotulado P1 P2 S1

Tubo Blanco Fraccin nuclear Fraccin mitocondrial Fraccin microsomal

Succinato 0.1 M 1 ml 1ml 1ml 1ml

Azul de metileno 2 gotas 2 gotas 2 gotas 2 gotas

Agua microsomal 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

Vaselina 2 mL 2 mL 2 mL 2 mL

Tubos colocados a un bao termoregulado a 37 C

En En En En

el el el el

tubo tubo tubo tubo

blanco no se presentacin cambios. P1 se presento una decoloracin. P2 cambio el color celeste a un celeste verde agua. S1 cambio el tono del celeste a uno mas claro. Discusin

Conclusin

Bibliografa

(1) guia