CONCEPTO DE MICROSCOPIA Deriva del griego (micro- pekeo, scopen-ver) El microsc se define como todo instrumento q permite auemntar

la imagen de un objeto pequeo. Consta de un sistema de iluminacion q nos permite visualizar el objeto y un sistemad elentes q nos permite aumentar el tamao del objeto. su invencionocurrio a princip. dde XVII por el italiano Galileo y por Jangen segun los irlandeses. Fue tb un italiano llamado Marcelo Malpighu el q us elk microsc. xa estudiar de forma sistematica la estructura de la materia viva, siendfo la estructura pulmonar la primera descubierta. Investigadores holandeses descubren despues muchos datos analiticos del cuerpo humano. Como la forma y tamao de los hematies, la estructura osea , en concreto la estructura de la medula osea.

EL MICROSCOPIO El microscopio es un instrumento ptico que amplifica la imagen de un objeto pequeo. Es el instrumento que ms se usa en los laboratorios que estudian los microorganismos. Mediante un sistema de lentes y fuentes de iluminacin se puede hacer visible un objeto microscpico. Los microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamao original.

Actualmente existen dos tipos de microscopios: el ptico y el electrnico. En el microscopio ptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrnico utiliza un rayo de electrones controlado por un campo magntico. Los principales usos y aplicaciones de un microscopio Alguna vez se ha preguntado cuntas pequeas partculas hay suspendidas en el aire? o qu tan pequeos pueden resultar los microorganismos y bacterias que atacan nuestro cuerpo?. En el mundo de los negocios existen industrias que necesitan herramientas especficas para poder observar con detenimiento cada una de las pequeas partes de la composicin de algn cuerpo y para eso requieren de la ayuda de un microscopio.

Para qu sirve un microscopio? Un microscopio es un instrumento que nos permite observar entes demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. Este aparato fue un gran descubrimiento cuando fue utilizado por primera vez por el holands Anton van Leeuwenhoek el ao 1675. Los microscopios bsicamente se componen de una o varias lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.

Por lo tanto, se considera que los microscopios cuentan con dos secciones, una ptica, que sirve para observar, y la otra, que es una parte mecnica, la cual es la que sostiene a la primera. Tipos de microscopios Microscopio ptico Microscopio simple Microscopio compuesto Microscopio de luz ultravioleta Microscopio de fluorescencia Microscopio petrogrfico Microscopio en campo oscuro Microscopio de contraste de fase Microscopio de luz polarizada Microscopio confocal Microscopio electrnico Microscopio de iones en campo Microscopio de sonda de barrido Microscopio de efecto tnel Microscopio de fuerza atmica Microscopio binocular Microscopio reflector Usos y aplicaciones de los microscopios

Los microscopios pueden ser utilizados en distintas reas, como pueden ser: Escuelas Laboratorios clnicos Hospitales Industria farmacutica

Industria biolgica Industria alimenticia Cientfica Vela Quin es lder en la fabricacin y distribucin de instrumentos cientficos y de laboratorio para uso educacional y le ofrece los mejores microscopios que le ayudarn a cubrir sus necesidades, entre los que destacan el Microscopio Binocular Biolgico modelo VE-B2.

EL MICROSCOPIO METALOGRFICO

Todas las operaciones descritas en la preparacin metalogrfica tienen por objeto revelar, en una superficie metlica plana, sus constituyentes estructurales para ser observadas al microscopio. El microscopio es un instrumento muy til para el metalurgista. Por eso es importante saber sacar un rendimiento ptimo de sus posibilidades. El operador debe conocer los principios pticos de su funcionamiento, que encontrar descritos en cualquier texto de Fsica o, incluso, en las instrucciones del fabricante. Bsicamente est constituido por un dispositivo de iluminacin, un vidrio plano o prisma de reflexin, el ocular y el objetivo.El aumento de la imagen observada viene dado por el producto de los aumentos del objetivo por los del ocular.

La mxima ampliacin que se consigue con los microscopios metalogrficos es, aproximadamente, de 1500 aumentos. Con el empleo de lentes baadas en aceite puede mejorarse este lmite, hasta unos 2000 aumentos. No obstante, este es la mayor magnificacin que se puede conseguir con microscopa ptica, debido al tamao de la longitud de onda de la luz visible (aprox. 4000 ). Para aumentar la magnificacin, tendremos que emplear electrones (0.5 ) en vez de fotones para "iluminar" la muestra, lo que nos lleva a emplear microscopios electrnicos.

MICROSCOPIO METALOGRFICO

Este tipo de microscopio es de uso comn para el control de calidad y produccin en los procesos industriales. Con ellos, es posible realizar mediciones en los componentes mecnicos y electrnicos, permite adems efectuar el control de superficie y el anlisis ptico de los metales. De acuerdo al propsito de uso, existen multitud de variedades dependiendo del tipo de objetivos, oculares, aumento mximo permitido, enfoque, etc. Este tipo de microscopio difiere de los biolgicos en que el objeto a estudiar se ilumina con luz reflejada, ya que las muestras cristalogrficas son opacas a la luz.

Su funcionamiento est basado en la reflexin de un haz de luz horizontal que proviene de la fuente, dicha reflexin se produce, por medio de un reflector de vidrio plano, hacia abajo, a travs del objetivo del microscopio sobre la superficie de la muestra. Parte de esta luz incidente, reflejada desde la superficie de la muestra se amplificar al pasar a travs del sistema inferior de lentes, llegar al objetivo y continuar hacia arriba a travs reflector de vidrio plano; despus,de nuevo se amplificar en el sistema superior de lentes (ocular).

Imagen de un microscopio metalogrfico con estilo de platina invertida y con diferentes tipos de objetivos (x5, x10, x40, x100)

1.1.2.2. Microscopia electrnica de barrido

En el microscopio electrnico de barrido, un campo magnetico permite enfocar los rayos catdicos (electrones) y obtener una imagen tridimensional, por el examen de la superficie de las estructuras, permitiendo la observacin y la caracterizacin de materiales orgnicos e inorgnicos, proporciona aumentos de 200.000 dimetros. Von Ardenne, en 1.938, construy el primer Microscopio Electrnico de Barrido (MEB); posteriormente, en Inglaterra, se construy el primer MEB Ambiental, con el cual se pueden observar muestras hidratadas.

Descripcin del Equipo El MEB consta de las siguientes partes:

1. Can de electrones (e-). 2. Filamento de tungsteno o de hexaboruro de lantano-LaB6. 3. Anodo. 4. Columna en vaco. 5. Lentes condensadores (centran y dirigen el rayo de electrones). 6. Lentes Objetivas (controlan la cantidad de electrones del haz). 7. Detectores para colectar y medir electrones (produccin de imagen). 8. Bobinas de barrido (obligan al haz a barrer la muestra). 9. Control de aumento. 10. Generador de barrido. 11. Colector de electrones (electrones se atraen y se aceleran). 12. Escintilador (convierte la energa cinetica de los e- en luz visible). 13. Amplificador. 14. Pantalla (imagen). 15. Bombas de vaco. Diagrama de funcionamiento

La muestra es colocada en un pequeo espacio, al cual se le hace vaco despus de cerrada la puerta. La puerta tiene tres palancas que el operador usa para: subir y bajar la muestra, rotar la muestra y acercarla o alejarla. Un haz delgado de electrones, es producido en la parte superior del microscopio por medio del calentamiento de un filamento metlico (10-30 KV). El rayo de electrones primarios sigue un recorrido a traves de la columna de vaco del microscopio, esto, con el propsito, de evitar la dispersin de los

electrones. El trayecto del haz de electrones es enseguida modificado por un conjunto de bobinas deflectoras que lo hacen recorrer la muestra punto por punto y a lo largo de lneas paralelas (barrido), y a su vez atraviesa las lentes condensadoras o electromagneticas que le permiten ser reenfocado o centrado hacia la muestra. Posteriormente, el dimetro del haz de electrones puede ser modificado al pasar por las lentes objetivas que controlan la cantidad de electrones dentro de este. Cuando los electrones primarios golpean la muestra, son emitidos electrones secundarios por el propio especimen.

Estos electrones secundarios son atrados por un colector donde se aceleran y se dirigen al escintilador, donde la energa cinetica Es convertida en puntos de mayor o de menor luminosidad, es decir, en luz visible. Esta luz es dirigida a un amplificador donde se convierte en senal electrica, la cual pasa a una pantalla de observacin donde la imagen es formada lnea por lnea y punto por punto. Los circuitos que dirigen las bobinas de barrido (que obligan al haz a barrer la muestra), son las mismas que dirigen la parte de coleccin de electrones y que producirn la imagen. Resolucin del Equipo El MEB tiene una resolucin de 10 nm y una profundidad de foco de 10 m, mucho menor que el microscopio electrnico de transmisin. La ventaja del MEB es que proporciona imgenes tridimensionales, ya que ste especficamente examina la superficie de las esructuras.

Preparacin de las muestras Se debe tener en cuenta el material a observar y guiarse por parmetros especficos para cada muestra. Los siguientes pasos son utilizados en general y guan acerca de lo necesario en cada uno.

Limpieza Reactivo: solucin salina Objetivo: Remocin de contaminantes de la muestra Comentarios: En muestras como dientes y huesos es necesario limpiar la muestra con una bomba de aire. Para epitielio intestinal se utilizan enzimas (quimiotripsina) que degradan el moco intestinal. En esperma de mamferos es necesario lavar con solucin salina y posteriormente centrifugar suavemente. Relajacin Reactivo: Cloruro de magnesio, cloretano, hidrato de cloral y anestsicos locales como lidocana. Objetivo: Permitir que organismos marinos o de agua fresca, que utilizan el encogimiento y extensin para movilizarse, no se contraigan y pueda observarse toda la superficie de ste. Comentarios: Se aplica gradualmente hasta que cese el movimiento del organismo.

Fijacin Reactivo: Glutaraldehdo, formaldehdo, permanganato y acrolena. Objetivos: Permitir que cese la actividad biolgica de la clula y preservar la estructura celular. Mantener la integridad de la superficie. Evitar cambios autolticos, debido a que al haber remocin del organismo se presnetan cambios en temperatura, pH y concentracin de oxgeno y nutrientes. Comentarios: Se puede utilizar vapor de osmio, especficamente cuando se observan esporas de hongos. Es importante tener en cuenta la concentracin del fijador y de la muestra, debido a que diversos estudios muestran que a una mayor concentracin de ste, se dificulta la observacin de la muestra. Deshidratacin Reactivo: Etanol o acetona. Objetivo: Remover agua de los tejidos

Comentarios: Se utiliza ms comnmente etanol, debido a que la acetona, puede danar el secador en el SPC. Secado de punto crtico Reactivo: CO2 lquido y gaseoso. Objetivo: Remocin total del agua de la muestra Comentarios: Este paso se basa en lo siguiente: el CO2 a temperatura baja es lquido y a temperatura alta es gaseoso. Cuando la muestra sale deshidratada por el etanol, se coloca en el secador de punto crtico (SPC), all, la muestra se purga con CO2 lquido hasta que el etanol haya sido reemplazado, posteriormente se sella la cmara y se calienta hasta que la temperatura llegue a 31C, de esta forma el CO2 lquido se evapora y la muestra queda totalmente seca. Este procedimiento reduce de tamano la muestra.

Montaje de la muestra Objetivo Utilizado: Porta muestra o stub Objetivo: Colocar la muestra asegurada para permitir la colocacin en el rociador de oro. Comentarios: Para asegurar la muestra en el stub, se utiliza una cinta doble faz (tejidos) o carbono cemento conductivo CCC (dientes). Recubrimiento con oro (sputter)

Elementos: Oro, paladio o carbono

Objetivo: Permitir que el haz de electrones primarios choquen contra la muestra recubierta con un material conductor para que estas sean elctricamente conductivas. Comentarios: Este pocedimiento se realiza con un rociador o Sputter coater. Se coloca la muestra en la cmara, se sella y se programa el tiempo de recubrimientoen el cual el oro cae uniformemente, se hace vaco y automticamente el timer se enciende y la muestra se recubre totalmente segn el tiempo programado, aproximadamente son 2 minutos. Cuando el tiempo ha finalizado, lentamente empieza a ingresar aire a la cmara y de esta forma, la muestra est lista para colocarla en el MEB. El stub con la muestra recubierta no se debe tocar con los dedos, por lo tanto es necesario utilizar pinzas. Almacenamiento Objeto utilizado: Cmara libre de humedad Objetivo: Mantener la muestra totalmente seca para posterior observacin.

Aplicaciones Obtencin de imgenes 3D. Caracterizacin estructural. Estudio de caractersticas morfolgicas y topogrficas. Estudio de enfermedades del tallo piloso. Estudio de formacin de biofilms. Interaccin de microorganismos con clulas eucariotas.

Ventajas y Desventajas Mayor resolucin. Mayor nmero de seales, mayor informacin. Imagen de detalles profundos de la superficie de la muestra: 3D No da informacin acerca de viabilidad cell. Costos Destruccin de la muestra: fijacin y secado. Personal especializado.

Bibibliografia http://javeriana.edu.co/Facultades/Ciencias/neurobioquimica/libros/celular/programacell.htm