Biorremediacin

Se define como biorremediacin a cualquier proceso que utilice microorganismos, hongos, plantas o las enzimas derivadas de ellos para retornar un medio ambiente alterado por contaminantes a su condicin natural. La biorremediacin puede ser empleada para atacar contaminantes especficos del suelo, por ejemplo en la degradacin bacteriana de compuestos organoclorados o de hidrocarburos. Un ejemplo de un tratamiento ms generalizado es el de la limpieza de derrames de petrleo por medio de la adicin de fertilizantes con nitratos o sulfatos para estimular la reproduccin de bacterias nativas o exgenas (introducidas) y de esta forma facilitar la descomposicin del petrleo crudo.

Inspeccin y aplicaciones
Los procesos naturales de biorremediacin y fitorremediacin (remediacin por plantas) se han usado desde hace siglos; tal es el caso de la desalinizacin de terrenos agrcolas por la accin de plantas capaces de extraer las sales. La biorremediacin usando microorganismos fue inventada por el cientfico norteamericano George M. Robinson. ste trabaj como ingeniero petrolero asistente de la compaa Santa Mara de California en la dcada de 1960 y se dedic a experimentar con una serie de microbios en frascos contaminados de petrleo. Se puede clasificar a la biorremediacin como in situ o ex situ. La primera consiste en tratar el material contaminado en el lugar en que se encuentra sin trasladarlo a otra parte. Algunos ejemplos de estas tecnologas consisten en operaciones de compostaje, la ventilacin biolgica, la utilizacin de biorreactores, la filtracin por races o la estimulacin biolgica. En los procesos ex situ el material contaminado es trasladado a otro lugar para realizar o completar su descontaminacin. No todos los contaminantes son fciles de biorremediar por medio de microorganismos. Por ejemplo, los metales pesados como el cadmio y el plomo y el mercurio no son absorbidos o capturados por estos organismos. La incorporacin de algunos de estos metales dentro de la cadena alimentaria (bioacumulacin) agrava el problema. Se puede usar la remediacin por medio de plantas o fitorremediacin. Es muy til en estos casos porque es posible usar plantas transgnicas que concentren estas toxinas en sus partes areas (sobre la tierra), las cuales pueden ser cosechadas y eliminadas.1 Los metales pesados obtenidos de esta cosecha pueden ser concentrados an ms por incineracin para ser desechados o bien reciclados para usos industriales. La eliminacin de una gran variedad de contaminantes del medio ambiente requiere un conocimiento creciente de la relativa importancia de sus ciclos qumicos y redes de regulacin del ciclo del carbono en diversos ambientes y para cada compuesto en particular. Con seguridad que esta tecnologa se desarrollar an ms en el futuro.2

Tecnologas de ingeniera gentica

El uso de la ingeniera gentica para crear organismos especficamente diseados para la biorremediacin tiene gran potencial.3 La bacteria Deinococcus radiodurans (el organismo ms resistente a la radiacin que se conozca) ha sido modificado para que pueda consumir el tolueno y los iones de mercurio de desperdicio nuclear altamente radioactivo.4

Micorremediacin
Se llama Micorremediacin a una forma de remediacin en que se usan hongos para descontaminar suelos. Este trmino fue usado por primera vez por Paul Stamets y se refiere al uso de micelios fungales para la biorremediacin. Uno de los principales papeles de los hongos en los ecosistemas es el de descomposicin, que es efectuado por los micelios. stos segregan enzimas extracelulares y cidos que sirven para degradar la lignina y la celulosa, los dos componentes principales de la pared celular de las clulas de plantas. Estos compuestos estn formados de largas cadenas de carbono e hidrgeno con uniones qumicas muy fuerte que le dan la robustez a las fibras vegetales y a la madera. Estas estructuras qumicas son muy similares a las de muchos contaminantes actuales. Lo fundamental en la microrremediacin es identificar la cepa de hongos ms apropiada para tratar cada tipo especfico de contaminante. Algunas cepas dan buenos resultados para degradar gases neurotxicos como el agente VX y el gas sarn.

Ventajas
La biorremediacin tiene una serie de ventajas sobre otros mtodos. En el caso que la contaminacin est en lugares inaccesibles se puede realizar sin necesidad de cavar. Por ejemplo en el caso de derrames de petrleo que hayan penetrado en el suelo y amenacen contaminar a la capa de agua. Esto resulta mucho menos costoso que el proceso de excavacin e incineracin que sera la otra alternativa.

Supervisin
El proceso de biorremediacin puede ser supervisado usando mtodos como la medicin del potencial de reduccin-oxidacin (tambin llamado redox) en el suelo o el agua junto con la medicin del pH, temperatura, contenido de oxgeno, concentraciones de productos de degradacin (como el anhidrido carbnico)

1. Biorremediacin La biorremediacin puede ser definida como el uso de organismos vivos, componentes celulares y enzimas libres, con el fin de realizar una mineralizacin (compuesto blanco CO2 + H2O), una transformacin parcial, la humificacin de los residuos o de agentes contaminantes y una alteracin del estado redox de metales. Histricamente el compostaje fue una primitiva forma de biorremediacin en donde los residuos por ej. derivados de la recoleccin domiciliaria (restos orgnicos, inorgnicos, residuos industriales, etc.) son incluidos en containers permitiendo que puedan ser biodegradados por microorganismos (Senior and Balba, 1990). Los factores que gobiernan la biorremediacin son complejos y pueden variar enormemente dependiendo de la aplicacin. En muchos casos puede llegar a ser difcil distinguir entre los factores biticos y abiticos que contribuyen con la biorremediacin. La biorremediacin es un fenmeno comn en la naturaleza cuando en un ambiente o ecosistema se produce una alteracin del equilibrio como es el caso de una gran tala de rboles, esto origina un aumento considerable de materia orgnica en el suelo. En este caso los factores fsicos y biticos tratan de reponer el dao, se produce entonces un aumento de organismos saprfitos los cuales ocasionan una gran mineralizacin de la materia cada, adems el resto de esa materia puede ser reciclada o humificada Cabe remarcar que cuanto ms diversidad biolgica exista en un ecosistema con mayor eficiencia podr autodepurarse. Las tcnicas de biorremediacin pueden ser clasificadas segn el tratamiento y a la fase usada. Se denomina biorremediacin in situ cuando el suelo contaminado se trata en el lugar, el sitio permanece prcticamente inalterado durante el tratamiento y la biorremediacin ex situ el suelo es retirado y trasladado hasta una unidad de tratamiento. El tratamiento es efectuado en fase slida si el suelo es tratado sobre un lecho especialmente preparado y no hay lquido libre. Por el contrario se denomina fase barro cuando se lleva en un reactor y se forma barro entre el suelo y agua (Ferrari, 1996). En general existen dos estrategias para ayudar a un ecosistema a remediarse: La primera es agregar nutrientes de forma de estimular las poblaciones naturales y as aumentando su actividad y la segunda es introduciendo microorganismos exgenos dentro del ecosistema como forma de remediacin. En este ltimo caso con las nuevas tcnicas de la ingeniera gentica se pueden emplear microorganismos genticamente modificados hacindolos ms eficientes en la biorremediacin.

2. Biorremediacin de hidrocarburos La descomposicin microbiana de hidrocarburos es de considerable importancia econmica y ambiental por los perjuicios que ocasiona. Una de las principales causas de contaminacin del ambiente son los derrames de petrleo, tal como ocurri en marzo de 1989 cuando el superpetrolero Exxon Valdez choc con varios icebergs en el estrecho del Prncipe Guillermo en Alaska, derramando 11 millones de galones de petrleo en el agua ocasionando un impacto ecolgico inimaginable cuyo gasto de limpieza se estim en (U$ 1500 millones). Los hidrocarburos varan en su habilidad de ser degradados, los derrames de estos en el agua tienden a formar laminas en la superficie en donde el viento y el oleaje crean microscpicas emulsiones. Esto permite que los microorganismos predominantemente bacterias (pseudomonas, corinebacterias y micobacterias), algunas levaduras y hasta algas verdes tengan una mayor superficie de contacto con la partcula, facilitando el acceso a la misma y permitiendo su degradacin. Pero la biorremediacin en el agua se ve afectada por la disponibilidad de nutrientes debido a que estos generalmente se encuentran en bajas concentraciones, por lo que generalmente tras un derrame se adiciona fsforo y nitrgeno como forma de estimular el crecimiento de los microorganismos que potencialmente degradarn el hidrocarburo. En el caso de que el derrame sea en el suelo el proceso es diferente, la oxidacin es llevada a cabo por hongos y bacterias y el movimiento del hidrocarburo es ms vertical, adems el proceso de humificacin tiende a atrapar el residuo hacindolo ms persistente. En este caso el factor limitante no est en la disponibilidad de nutrientes sino que la disponibilidad de oxigeno es baja, por lo que se debe aerear el suelo o agregar perxido de hidrogeno (H2O2) para mejora el proceso. En los derrames, la fraccin de hidrocarburo ms voltil es evaporada con facilidad dejando a los componentes alifticos y aromticos para ser oxidado por diversos grupos de microorganismos. En experimentos llevados a cabo tras los derrames de petrleo se demuestra que el nmero de bacterias oxidantes aumenta de 103 a 106 veces poco despus del mismo y en condiciones favorables ms del 80 % de los componentes no voltiles son oxidados entre 6 meses y un ao del derrame. Algunas fracciones, como los hidrocarburos de cadena ramificada y los policclicos, permanecen mucho ms tiempo en el ambiente principalmente si llegan a zonas anaerobias ocasionando perjuicios a largo plazo. 3. Biorremediacin de Hidrocarburos Aromticos Polinucleares Los hidrocarburos aromticos polinucleares (HAPs) constituyen un grupo de contaminantes considerado de estudio prioritario debido a sus propiedades mutagnicas, txicas y cancergenas. En los ltimos aos la acumulacin de estos a ido aumentado (Menzie et al., 1992). Una gran variedad de estos compuestos orgnicos no voltiles pueden ser encontrados en el petrleo contaminante de suelo en donde los niveles de estos varan, pero generalmente altas concentraciones pueden ser encontradas en los derrames de hidrocarburos. El suelo tiene la capacidad de absorber estos compuestos y muchos son volatilizados en la atmsfera, pero son los microorganismos los principales degradadores de estos compuestos (Crawford et al., 1993). Los HAPs consisten en 2 o ms anillos benznicos ya sea en forma simple o mltiple formando cadenas o racimos y cuanto ms anillos tenga el compuesto ms resistente ser a la actividad enzimtica, (ver tabla 1. donde se describen las caractersticas fsicas de los HAPs). Lee and Ryan (Atlas, 1981) not que la biodegradacin del naphtaleno (2 anillos) era ms de 1000 veces superior que la del benzopireno (5 anillos), en general estructuras conteniendo 4 o ms anillos son difciles de degradar. Los estudios de degradacin de los HAPs comenzaron hace ms de 80 aos cuando Sohgen and Stormer aislaron bacterias capaces de degradar compuestos aromticos usndolos como fuente de carbono (Atlas, 1981). En ambientes acuticos los principales gneros de bacterias y hongos hallados son los siguientes, Pseudomonas, Achromobacter, Arthrobacter, Micrococcus, Nocardia, Vibrio, Acinetobacter, Brevibacterium, Corynebacterium, Flabobacterium, Candida, Rhodotorula y Sporobolomyces. En investigaciones realizadas en el suelo mostraron que 11 gneros de hongos entre los que se destaca Phanerochaetes chrysosporium que es considerado un microorganismo prometedor debido a la produccin de lignasa con alto potencial de degradar compuestos insolubles de alto peso molecular y 6 de bacterias fueron los grupos dominantes en la degradacin de HAPs. La degradacin bacteriana de estos compuestos normalmente envuelve la formacin cis,dihydrodiol

observado por la formacin de un dicido como el cido cis,cis-mucnico mientras que en eucariotas como los hongos la oxidacin da la formacin de trans,dihydrodiol, en ambos casos un diol es un intermediario indispensable (Alexander, 1977). Cerniglia y Heitkamp (1989) han sugerido los siguientes principios aplicados a la degradacin de los HAPs. 1) Una gran variedad de bacterias, hongos y algas tienen la habilidad de degradarlos. 2) La hidroxylacin de los HAPs envuelve la incorporacin de oxigeno molecular. 3) Los microorganismos procariotas metabolizan los HAPs con un ataque inicial de una dioxigenasa para dar cis,dihydrodiol que adems es oxidado para formar dihydroxidos. 4) HAPs con ms de 3 anillos de benzeno no sirven como sustrato para el crecimiento bacteriano lo que hace que deba estar sujeto a una transformacin co-metablica. 5) Muchos de los genes son codificados por plsmidos. 6) HAPs de bajos pesos moleculares como el naphtaleno son degradados rpidamente mientras que aquellos de alto peso como el anthraceno o el benzopyreno son ms resistentes. 7) La biodegradacin ocurre con mayor eficiencia en la interface sedimento/agua. 8) La adaptacin microbiana puede ocurrir por continuas exposiciones a los HAPs. Ultimamente se han desarrollado tcnicas de compostaje como forma de biorremediacin. Dado que si los microorganismos son capaces de degradar compuestos txicos en la naturaleza es de esperar que estos hagan lo mismo en un laboratorio bajo condiciones optimas. Este tratamiento consiste en la formacin de un barro con el material contaminado y agua. Tabla 1) Parmetros fsicos de los 16 HAPs de mayor prioridad segn USEPA. (PM=peso molecular, PF=punto fusin (C), PE=punto ebullicin (C), S=solubilidad en agua a 25 C) Nombre Naftaleno Acenaftileno Sinnimo N de anillos Formula PM 2 3 C10H8 C12H8 PF PE 218 280 S 31.7 -

128.17 80 152.20 8083

Acenafteno

1,8-Etilennafteno

C12H10 154.21 9396 C13H10 166.22 115

279

3.8

Fluoreno Fenantreno

2,3-Bencindeno

3 3

293

1.685 1.00

C14H10 178.23 100- 340 101 C14H10 178.23 216 340

Antraceno Fluoranteno Benzo(jk)fluoreno 1,2-Benzacenafteno

0.0446

C16H10 202.26 107- 384 110 C16H10 202.26 156 393404

0.206

Pireno

Benzo(def)fenantreno

0.123

Benzo(a) antraceno

1,2-Benzantraceno

C18H12 228.29 157- 438 155 C18H12 228.29 254 448

0.0094

Criseno Benzo(b) fluoranteno

1,2-Benzofenantreno

0.0018

3,4 Benzofluoranteno Benceno(e)

acefenantrileno

C20H12 252.32 163- 165

0.0014

Benzo(k) fluoranteno Benzo(a)pireno

8,9 Benzofluoranteno 11,12-Benzofluoranteno 5 Benzo(def)criseno 3,4-Benzopireno 5 C20H12 252.32 217 C20H12 252.32 179 480 495 0.0038

Dibenzo(ah) antraceno Benzo(ghi) perileno 1,2,5,6-dibenzantraceno 5 1,12-Benzoperileno 6 C22H14 278.35 266 524 0.0006 0.0002

C22H12 276.34 279- 510 277

Indeno(1,2,3-cd) pireno o-fenilenpireno 6 C22H12 276.34 180- 177 -

El tratamiento se efecta en un biorreactor donde se realiza el proceso en forma controlada, es decir se suministra nutrientes, se inocula con los microorganismos deseados, se mantiene en aereacin continua, as como el mantenimiento del pH y la temperatura. En experimentos en la Universidad de Helsinski con compostaje de suelos contaminados con clorofenol se observ una decontaminacin de los mismos. La concentracin de clorofenol fue reducida de 212 mg Kg-1 a 30 mg Kg -1 durante 4 meses de compostaje ( Valo and Salkijona-Salonene, 1986), adems se observ que el proceso de descomposicin se aceleraba si se inoculaba con Rhodococcus chlorophenolicus. El ambiente que se genera en el compostaje est caracterizado por elevadas temperaturas (>50C), alta concentracin de nutrientes, suficiente oxigeno y un pH neutro. La Shell Research Ltd. deline diferentes factores que limitan la degradacin de hidrocarburos en el suelo (Morgan and Watkinson, 1989). La optimizacin de esos factores puede ser llevada a cabo por un a buen compostaje. Williams and Keehan (1993) indicaron que los microorganismos que degradan contaminantes no difieren significativamente entre el suelo y el compostaje. Sin embargo la potencial transformacin vara por diferentes razones. Primero, la elevada temperatura que se genera en el compostaje incrementa la cintica enzimtica que envuelve el proceso. Segundo, la oportunidad para la cooxidacin puede ser aumentada debido a la variedad de sustratos presentados. Tercero, las modificaciones en el microambiente fsico y qumico del compostaje pueden servir para aumentar la diversidad microbiolgica. Finalmente, las altas temperaturas aumenta la solubilidad y la transferencia de masa, esto hace que sea ms metabolizado por los microorganismos. Las altas temperaturas son el factor ms determinante en el ambiente del compostaje, esto se debe a que la presin de seleccin sobre las bacterias se ve intensificada por el aumento de temperatura. Finstein, report que en compostajes con temperaturas superiores a 61C .las especies bacterianas decaen drsticamente (Racke and Frink, 1989). Bajas poblaciones a altas temperaturas en compostaje de suelo con petrleo han sido demostradas por estudios en la Mankato State University (Goetz, no publicado). Tanto bacteria termfilas gram positivas como negativas son capaces de degradar hidrocarburos tal como el gnero Thermomicrobium y muchos de los termfilos estn obligados a metabolizar hidrocarburos. Se ha descubierto una bacteria termfila Bacillus licheniformis HA1, el cual es muy efectivo para iniciar el compostaje. Su rol sera de prevenir la cada del pH en estadios tempranos del compostaje y permitira

el desarrollo de otros termfilos contribuyendo entonces con la descomposicin de la materia orgnica en fase termfila del compostaje. (Kiyohiko et al., 1994) 4. Biorremediacin de compuestos xenobiticos Se denomina compuesto xenobiticos (xeno, vocablo que significa extrao) a aquellos compuestos sintetizados artificialmente por sntesis qumica con fines industriales o agrcolas. Aunque estos compuestos pueden ser semejante a los compuestos naturales muchos son desconocidos en la naturaleza. As, los organismos capaces de metabolizarlos no podran existir en la naturaleza!. Algunos de los xenobiticos ms conocidos son los plaguicidas entre los que se incluyen herbicidas, insecticidas, nematicidas, funguicidas, etc.. Dentro de los plaguicidas se encuentran los cidos clorofenoxialquil carboxlicos, ureas sustituidas, nitrofenoles, triacinas, fenilcarbamato, organoclorados, organofosforados. Algunas de estas sustancias pueden actuar como donadores de electrones o como fuente de carbono para ciertos microorganismos. Estos compuestos tienen diferencias en la persistencia en el ambiente (ver tabla 2) pero esa persistencia es aproximada dado que depende de varios factores ambientales como la temperatura, el pH, la aereacin y el contenido de sustancias orgnicas del suelo. Algunos de los insecticidas clorados pueden persistir por ms de 10 aos. Hay que remarcar que en la degradacin de un plaguicida no solo intervienen los microorganismos, sino que tambin puede sufrir volatilizacin, filtracin o degradacin qumica. Plaguicidas en el suelo Cuando un plaguicida llega al suelo ste queda sometido a diversos factores que van a afectar su persistencia. El lavado de los suelos, la degradacin biolgica y qumica, la adsorcin por coloides, la volatilizacin y la absorcin por los cultivos son algunos de stos factores. El perodo en que un pesticida persiste en el suelo es de gran importancia ya que refleja el tiempo en que la plaga estar sometida al control, afectando la polucin del medio ambiente, su acumulacin en plantas, etc.. Tabla 2) Persistencia de herbicidas e insecticidas en los suelos Sustancia Tiempo para la desaparicin del 75 al 100%

Insecticidas clorados DDT Aldrn Clordano Heptacloro Lindano Insecticidas organofosforados Diazinn Malatin Paratin Herbicidas 2,4-D(cido 2,4-diclorofenoxiactico) 2,4,5T(cido2,4,5,triclorofenoxiactico) 4 semanas 20 semanas 12 semanas 1 semana 1 semana 4 aos 3 aos 5 aos 2 aos 3 aos

Dalapn Atrazina Simazina Propazina

8 semanas 40 semanas 48 semanas 1.5 aos

Degradacin microbiana Durante muchos aos se crea que los mecanismos de degradacin de los plaguicidas eran similares en animales y en microorganismos. Pero con el avance de las investigaciones se apreciaron las diferencias, en animales se da una conversin de stos compuestos de forma que puedan ser excretables, ste proceso se da principalmente en el higado. En microorganismos su utilizacin es por el contrario una forma de obtencin de energa o fuente de carbono. Las vas metablicas son muy variadas, fermentaciones, respiraciones anaerbicas, accin de exoenzimas y procesos quimiolittrofos pueden ser encontrados (Matsumura, 1982). Existen dos formas por la que la cual la microflora puede degradar el plaguicida. I) La sustancia favorece el crecimiento microbiano y es empleada como fuente de carbono, energa y raras veces como fuente de nitrgeno, azufre, etc.. El nmero de microorganismos aumenta y el aislamiento se realiza utilizando el plaguicida como nica fuente de nutrientes. Luego de que el compuesto fue degradado las poblaciones decrecen. II) Por cometabolismo, el compuesto no acta directamente como fuente de nutrientes sino que se debe emplear otras como la glucosa, que al disminuir en el medio inducen las enzimas necesarias para la degradacin del plaguicida. Las reacciones catablicas ocurren principalmente cuando las dosis de pesticidas son altas y la estructura qumica permite su degradacin. (Alexander, 1977) indica una serie de reacciones que pueden ser realizadas por microorganismos hetertrofos sobre los plaguicidas: Detoxificacin- Conversin de una molcula txica en otra no txica (Arthrobacter spp). Degradacin- Transformacin de una sustancia compleja en productos ms simples ej. la mineralizacin que da como resultado la aparicin de CO2, H2O, NH3, etc. (Pseudomonas spp) Conjugacin- Formacin de compuestos por reacciones de adicin, en donde el microorganismo combina el plaguicida con metabolitos celulares (adicin de aminocidos, cidos orgnicos, etc.). El estudio de la biodegradacin de los plaguicidas no es sencillo en el suelo, ya que las concentraciones son muy bajas. Se deben emplear cromatografias de fase gaseosa o lquida, espectrofotometra ultravioleta, para poder detectar trazas de pesticidas o sus intermediarios de la degradacin.