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UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS DEPARTAMENTO DE CINCIAS DO SOLO SETOR DE MICROBIOLOGIA DO SOLO Prof. Dr. Paulo Furtado Mendes Filho Profa. Dra. Vnia Felipe Freire Gomes

AULA PRTICA DE MICROBIOLOGIA AGRCOLA

1. PERODO: 2006.1 2. ASSUNTO: UNIDADE I - Laboratrio de Microbiologia do Solo, sua organizao, normas de biossegurana, equipamentos e materiais. 3. OBJETIVO: Conhecer os materiais e equipamentos tpicos de um laboratrio de microbiologia bem como as normas de trabalho para assegurar o sucesso e a segurana dos procedimentos. 4. CONTEDO: 4.1. Normas de biossegurana 4.2. Materiais e equipamentos tpicos do laboratrio de microbiologia

5. BIOSSEGURANA NO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA:

O laboratrio de Microbiologia do Solo, a semelhana de qualquer ambiente onde se realize atividades voltadas manipulao de produtos qumicos e operao de equipamentos que requerem cuidados especiais, merece uma ateno extra uma vez que no referido local se trabalha com microrganismos. A manipulao microbiana deve ser procedida em restrita consonncia com as normas da prtica assptica para que as probabilidades de insucesso (contaminaes) sejam mnimas. Nos trabalhos de isolamento, identificao, conservao e estudos sobre os efeitos dos microrganismos nos principais processos de interesse agrcola, so necessrias operaes como a esterilizao de meios de cultura, o uso de preparaes microscpicas e o cultivo artificial de microrganismos, necessitando o laboratrio de dependncias compatveis ao tipo de atividade, vidrarias apropriadas e materiais diversos, equipamentos em perfeito estado de funcionamento e asspticos, alm de cmaras de transferncia de espcimes dotada de sistema de pr-esterilizao e fluxo de ar laminar vertical. O laboratrio de Microbiologia Agrcola usualmente est enquadrado no nvel 1 de biossegurana, de acordo com os padres internacionais. Isto significa que os agentes presentes no apresentam ou apresentam um mnimo de agressividade ao ambiente ou s pessoas envolvidas no trabalho. O laboratrio no precisa estar separado das reas de trnsito de pessoas e as rotinas so geralmente conduzidas em bancadas sem proteo ao operador. O pessoal de laboratrio tem um treinamento especfico para as rotinas utilizadas no laboratrio e so supervisionados por um pesquisador com amplo treinamento em microbiologia ou cincias relacionadas. A Biossegurana o conjunto de aes voltadas preveno, minimizao ou eliminao dos riscos inerentes s atividades de pesquisa, produo, ensino, desenvolvimento tecnolgico e prestao de servios, riscos que podem comprometer a sade do homem, dos animais, das plantas e do ambiente

(Teixeira & Valle, 1996). Pressupe medidas de proteo individual e coletiva no posto de trabalho. As atividades de ensino, pesquisa e prestao de servios em laboratrio de Microbiologia requerem do Professor, do Tcnico e do Aluno uma srie de cuidados, justificada pelo risco sade, em funo do manuseio de material biolgico contaminado, bem como da utilizao de vidraria, equipamentos e produtos qumicos. As normas bsicas de biossegurana so: 1. Uso de avental (jaleco), bem como o de calados fechados; 2. O acesso ao laboratrio limitado ao pessoal envolvido na conduo dos trabalhos e com o conhecimento do supervisor; 3. O trabalho deve ser executado num ambiente limpo e organizado, com muita ateno e cuidado; 4. No permitido fumar, comer, beber, aplicao de cosmticos ou manipular lentes de contato, bem como portar ou conservar alimentos no recinto do laboratrio. As pessoas que usam lentes de contato devem usar culos de proteo ou protetores faciais; 5. Antes de iniciar e cada atividade, necessrio ler com ateno a tcnica a ser executada; 6. Vidraria e equipamentos danificados no devem ser utilizados; 7. Em caso de risco para os olhos, devem ser utilizados culos de proteo, evitando-se o uso de lentes de contato; 8. No permitido a pipetagem com a boca em nenhuma situao, devendo, para isto, ser utilizado pipetador automtico; 9. O smbolo de bio-risco (biohazard ) deve ser obrigatoriamente colocado na entrada principal do laboratrio sempre que agentes infecciosos estejam presentes (deve incluir o nome do agente em uso e o nmero telefnico de contato do pesquisador responsvel); 10. Na execuo de tcnicas que exijam o emprego de presso reduzida (frascos de Dewar, dessecador a vcuo etc.) ou de metais alcalinos, obrigatrio o uso de vidraria adequada, vestimenta, luvas e culos (EPI-equipamento de proteo individual; ver quadro anexo). Recipientes de parede fina ou fundo chato no devem ser submetidos ao vcuo; 11. O manuseio de gases venenosos ou irritantes deve ser feito em capela apropriada (com exausto). O mercrio no deve ser derramado. Caso isto ocorra, deve ser recolhido com uma pina apropriada e o resduo eliminado com o uso de carvo; 12. No caso de manuseio de material com alto grau de contaminao microbiolgica, as luvas devem ser utilizadas e descartadas aps o uso, de acordo com o nvel de biossegurana (NB) praticado; 13. Um programa de controle de insetos e roedores deve estar implementado e em andamento para todas as instalaes; 14. O material contaminado com produtos qumicos ou agentes biolgicos deve ser tratado adequadamente ou descartado em recipientes apropriados, contendo sinalizao especfica do risco, e

15. Ao trmino das atividades no laboratrio, bem como logo aps a execuo de tcnicas especficas, as mos devem ser exaustivamente lavadas com sabo lquido e enxugadas com toalhas de papel descartveis. De acordo com a atual legislao brasileira, biossegurana se constitui sinnimo de aspectos relacionados manipulao segura de organismos vivos de carter patognico, bem como a manipulao em regime de conteno e liberao de organismos geneticamente modificados (OGM). A Lei Nacional de Biossegurana No. 8974/95, promulgada em janeiro de 1995, autoriza o Poder Executivo, no mbito do Ministrio da Cincia e Tecnologia, a criar a Comisso Tcnica Nacional de Biossegurana (CTNBio), qual as Comisses Internas de Biossegurana (CIBio) esto subordinadas. Todas as Instituies ou Empresas brasileiras que desenvolvem atividades que envolvam organismos geneticamente modificados (OGM) devero criar sua CIBio (aprovao de projetos de pesquisa e fiscalizao quanto s normas de biossegurana adequadas). Os nveis de biossegurana esto distribudos de acordo com o quadro abaixo:
Nvel de biossegurana (NBS) Agentes Prticas Equipamento de segurana (Barreiras primrias) Usualmente no necessrias Facilidades (Barreiras secundrias)

No reconhecidos como causadores de doenas em adultos saudveis Associados com doenas humanas (riscos = injrias cutneas, ingesto e exposio s membranas mucides)

Prticas microbiolgicas padro

Pia aberta, dotada de gua corrente e desinfetante lquido

As prticas para NBS-1 mais: acesso limitado ao laboratrio, uso de sinais de biopericulosidade, precaues estritas, manual de biossegurana definindo os procedimentos de descarte, descontaminao e primeiros socorros

Barreiras primrias: Critrios de biossegurana Classe I ou II, ou outros aparatos fsicos de conteno usados na manipulao de agentes que causem respingos ou aerossis com materiais infecciosos EPI: Avental, luvas de ltex, proteo facial ou culos de segurana

NBS-1 mais: Autoclave disponvel

Agentes indgenas ou exticos com potencial de transmisso por aerossis; a doena pode apresentar conseqncias srias ou

As prticas para NBS-2 mais: acesso controlado ao laboratrio, descontaminao de todos os matrias descartados, descontaminao das vestimentas

Barreiras primrias: Critrios de biossegurana Classe I ou II, ou outros aparatos fsicos de conteno usados na manipulao de todos os

NBS-2 mais: Separao fsica dos corredores de acesso Acessos dotado de portas duplas, com ante-cmera lacrada O ar da exausto no recirculante

mesmo letais

antes da lavagem

agentes EPI; Avental, luvas de ltex, proteo respiratria (mscara) Barreiras primrias: Todos os procedimentos recomendados sob os critrios de biossegurana Classe I, II e III, associados vestimenta completa de segurana dotada de suprimento de ar descontaminado e presso positiva

Fluxo negativo de ar para o laboratrio

Agentes perigosos exticos que apresentam alto risco de doenas letais, transmisso por aerossis ou agentes com risco de transmisso desconhecido

As prticas para NBS-3 mais: uso de vestimenta prpria para o laboratrio, banho obrigatrio sada do laboratrio, descontaminao de todo o material utilizado ao final do trabalho

NBS-3 mais: Instalaes fsicas separadas ou zona de isolamento Sistemas dedicados de suprimento e exausto de ar, vcuo e descontaminao Outros requerimentos adequados ao nvel de risco praticado

Os critrios adotados para o estabelecimento do NBS-1 so os seguintes: Os organismos manipulados no oferecem riscos sade do homem e dos animais nem ao ambiente O laboratrio no precisa, necessariamente, estar separado das reas de circulao do prdio O trabalho pode ser conduzido em bancada aberta, desde que usadas as prticas padro de manipulao microbiana No h necessidade de utilizao de equipamentos especiais de conteno ou mesmo barreiras secundrias O pessoal envolvido nos trabalhos de laboratrio devem ter treinamento mnimo sobre os procedimentos correntes, supervisionado por pesquisador com larga experincia em microbiologia ou cincia correlata 6. BIBLIOGRAFIA RECOMENDADA: COMMITTEE ON HAZARDOUS BIOLOGICAL SUBSTANCES IN THE LABORATORY. Biosafety in the Laboratory. National Academic Press, USA, 222p. 1989. HUNGRIA, M. & R. S. ARAJO. Manual de Mtodos Empregados em Estudos de Microbiologia Agrcola. EMBRAPA. 1994. MANUAL DE INSTRUES SOBRE OS PRIMEIROS SOCORROS NO LABORATRIO. Informativo de Segurana Padro. PELCZAR,M.R.;M.R.REID & E.C.S.CHAN. Microbiologia. Ed. McGraw-hill, Brasil, So Paulo, 1072p. 1980. SOARES,J.B.;A.R.CASIMIRO & L.M.B.ALBUQUERQUE. Microbiologia Bsica. Ed. UFC, Fortaleza, 180p. 1991. STANIER,R.Y.;M.DOUDOROFF & E.A.ADELBERG. Mundo dos Micrbios. Ed. Edgar Blcher Ltda, So Paulo, 791p. 1969.

Equipamentos de Proteo Individual (EPI):

Vestimenta de proteo integral do corpo, preferencialmente descartvel

Mscara contra gases txicos com vedao total da fronte e filtros intercambiveis para vrios tipos de gases

culos de proteo contra respingos e aerossis

Proteo para os ps descartvel

Luvas para manipulao descartveis e, no caso de prticas moleculares ou suspenses microbianas, estreis

Kit de conteno contra derramamentos substncias agressivas no ambiente trabalho; de acordo com a natureza produto derramado deve-se usar o apropriado

de de do kit

Sistema de lavagem de olhos para o caso de acidentes envolvendo substncias qumicas; deve estar localizado em local de fcil acesso e estar bem visvel; logo aps a lavagem deve-se procurar um mdico