UNIVERSIDAD CATLICA DE TEMUCO FACULTAD DE RECURSOS NATURALES ESCUELA DE ACUICULTURA

Bioqumica

Integrantes: Andrs Norambuena Cristian Vsquez Jos Barriga Profesor Curso Fecha : Leonardo Anabaln : FRN 1109 S.01- Bioqumica : 05-06-2013

INTRODUCCIN

Las protenas son macromolculas compuestas por carbono, hidrgeno, oxgeno y nitrgeno. La mayora tambin contienen azufre y fsforo. Son compuestos muy complejos formados por cadenas de cientos y miles de aminocidos unidos entre s por enlaces peptdicos. Si bien slo los aminocidos son 20, las posibilidades de combinarlos son infinitas. Las propiedades de cada una de las protenas al igual que su funcionalidad dependen de la secuencia de aminocidos que la formen (SURIGUEZ MARIA)

Durante stos prcticos nos enfocaremos en trabajar utilizando el mtodo de espectrofotometra para cuantificar cantidades de protenas obtenidas a partir de su extraccin de una cierta variedad de porotos.

Las protenas se encuentran dentro de los componentes esenciales de todos los seres vivientes y para poder estudiarlas primero se requiere determinar su concentracin total en una muestra de origen biolgico. Sabiendo que las protenas son totalmente heterogneas entre s, an no se posee un mtodo capaz de calcular completamente la concentracin de protenas en una muestra, ya que eso depende del tipo de protena que se utilice como muestra estndar y como reaccione sta al mtodo que se le aplique.

Segn los materiales que se encuentran en el laboratorio se trabajar utilizado un espectrofotmetro tambin el mtodo de Biuret (el reactivo de Biuret es sulfato cprico diluido en una solucin alcalina), ya que en muestras biolgicas casi no existen sustancias aparte de las protenas que reaccionen con ste mtodo.

RESUMEN

Utilizando las muestras protenicas previamente obtenidas en prcticos pasados, aplicando el reactivo de Biuret, utilizando un espectrofotmetro y comparando sus resultados con una serie de datos previamente tabulados en clases ser posible graficar (para identificar ms fcilmente) una curva que demuestre las distintas concentraciones de protenas obtenidas de las muestras.

OBJETIVOS

Objetivos generales de la asignatura:

Comprender el funcionamiento de los seres vivos a nivel molecular. Familiarizar al estudiante con tcnicas de bioqumica experimental. Crear en el estudiante un hbito de lectura y estudio que ample sus conocimientos.

Desarrollar en el estudiante una actitud crtica y reflexiva acerca de la bioqumica y sus aplicaciones en los distintos campos laborales

Desarrollo de experimentos, anlisis e interpretacin de resultados

Objetivos especficos del prctico:

Conocer y determinar la concentracin de protenas que estn presentes e muestras biolgicas, segn el mtodo de Biuret.

DESARROLLO CUESTIONARIO

1) Si tuviera muestras biolgicas con protenas y alto contenido de grasas. Cmo tratara a su muestra para la determinacin de protenas? Explique en detalle.

En el caso que la concentracin de cidos grasos sea alta, uno de los primeros pasos es separar los cidos grasos con un mtodo de

congelacin de la muestra. Despus iniciar el descongelamiento por un mtodo de calentamiento el cual no desnaturalice la protena.

2) Qu otras tcnicas se pueden utilizar para la determinacin de protenas?

Adems del mtodo de Biuret tambin existen el mtodo de Lowry, el mtodo de Bradford y el mtodo de BCA (cido bicinconnico)

Est basado en el cambio de color del colorante Coomassie brilliant blue G-250 en respuesta a diferentes concentraciones de protenas. Este compuesto interacciona con aminocidos bsicos

(especialmente arginina) y aromticos. Esta unin del colorante con las protenas provoca un cambio en el mximo de absorcin del colorante desde 465 a 595 nm. Por lo tanto, este mtodo se basa en la propiedad del Azul Brillante de Coomasie G-250 de presentarse en dos formas con colores diferentes, rojo y azul. La forma roja se convierte en azul cuando el colorante se une a la protena. Experimentalmente se mide la diferencia de Absorbancias entre 595 y 465 nm (595-465nm).Pocas sustancias interfieren en su

determinacin, de las cuales son los detergentes y las soluciones bsicas.

Mtodo de BCA (cido bicincnico): El cido bicincnico (sal sdica) es un compuesto capaz de formar un complejo prpura intenso con iones Cu 1+ en medio alcalino. ste reactivo forma parte de la base de un mtodo analtico capaz de monitorizar el in cuproso producido en una reaccin entre las protenas con Cu 2+ en medio alcalino (reaccin de Biuret). La estabilidad del reactivo y el cromforo proporciona un mtodo para la cuantificacin de protenas que es sencillo, rpido, muy sensible y que muestra una gran tolerancia a compuestos que afectan otros mtodos.

Mtodo de Lowry: Es un mtodo colorimtrico de valoracin cuantitativa de las protenas. A la muestra se aade un reactivo que forma un complejo coloreado con las protenas, siendo la intensidad de color proporcional a la concentracin de protenas, segn la ley de Lambert-Beer. Este mtodo consta de dos etapas: Primera etapa Los iones Cu2+, en medio alcalino, se unen a las protenas formando complejos con los tomos de nitrgeno de los enlaces peptdicos. Estos complejos Cu2+-protena tienen un color azul claro. Adems, provocan el desdoblamiento de la estructura tridimensional de la protena, exponindose los residuos fenlicos de tirosina que van a participar en la segunda etapa de la reaccin. El Cu2+ se mantiene en solucin alcalina en forma de su complejo con tartrato.

Segunda etapa: La reduccin, tambin en medio bsico, del reactivo de Folin-Ciocalteau, por los grupos fenlicos de los residuos de tirosina, presentes en la mayora de las protenas, actuando el cobre como catalizador. El principal constituyente del reactivo de FolinCiocalteau es el cido fosfomolibdotngstico, de color amarillo, que al ser reducido por los grupos fenlicos da lugar a un complejo de color azul intenso.

3) Si tenemos una muestra biolgica animal y una vegetal. Es posible encontrar diferencias sustanciales en la concentracin de protenas totales entre las 2 muestras? Fundamente.

Si existe la posibilidad de encontrar diferencias en la concentracin de protenas entre muestras vegetales y animales, ya que en la animales

presentan una alta cantidad de aminocidos, diferencia reflejada en que protenas vegetales son menos complejas y menos grandes que las protenas animales. Por medio de la absorbancia se puede lograr encontrar diferencia entre concentracin y tamao de protena.

RESULTADOS

MATERIALES Y METODOS

Materiales y reactivos utilizados:

Batera con tubos de ensayo y un tubo blanco Pipetas de 1ml, 5ml y 10ml Solucin stock de gelatina de 20 mg/ml Agua destilada Espectrofotmetro Reactivo de Biuret

Mtodos utilizados:

Prepare una batera de tubos que incluyan el blanco, los tubos de la curva de calibrado y el tubo de muestra.

Mezcle bien cada tubo y djelos reposar por 15 minutos.

Lea frente a sus blancos en el espectrofotmetro a 570 nm.

Lea el tubo de muestra y calcule la concentracin de protenas de ella,

CONCLUSIN

BIBLIOGRAFA SURIGUEZ MARIA, FUNCIONES DE LA PROTEINAS, DISPONIIBLE EN: http://www.enbuenasmanos.com/articulos/muestra.asp?art=546