Evaluacin del efecto de la salinidad sobre la incubacin de huevos y eclosin de larvas del pargo amenco (Lutjanus guttatus)

Ma. Isabel Abdo de la Parra*, Luz Estela Rodrguez-Ibarra*, Gabriela Velasco-Blanco*, Noem Garca-Aguilar* y Blanca Gonzlez-Rodrguez*
El pargo flamenco Lutjanus guttatus es una especie con importancia comercial en el mercado mexicano y con potencial de cultivo; sin embargo, se conoce poco sobre las condiciones ambientales ptimas de las etapas tempranas de su ciclo de vida. Se ha determinado que la salinidad es uno de los principales factores de los que depende el desarrollo de los peces marinos. En el presente trabajo se evalu el efecto de diferentes salinidades sobre el desarrollo embrionario y la eclosin de larvas de pargo flamenco. Se colocaron 300 huevos fertilizados en contenedores de plstico con capacidad de 1 l con diferentes salinidades: 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 45% a 29 C, con aireacin constante y cada tratamiento con seis rplicas. Se determin el porcentaje de eclosin y longitud total de las larvas de cada tratamiento. A 0% el embrin ces su desarrollo y no hubo eclosin, a 5% el porcentaje de eclosin fue muy bajo (8.71.6%) y significativamente diferente (p<0.05) a los dems tratamientos; las larvas resultaron deformes al igual que las eclosionadas a 10% y 45%. En los tratamientos de 15% a 40% se obtuvo un porcentaje de eclosin mayor a 70% y las larvas tuvieron apariencia normal. Estos resultados demuestran que la incubacin de huevos de pargo flamenco puede llevarse a cabo en salinidades entre 15% y 40% sin afectar el desarrollo embrionario ni la eclosin de larvas. Palabras clave: Lutjanus guttatus, incubacin, larvas deformes, tratamiento, rplica.

Effect of salinity on egg incubation of the spotted rose snapper (Lutjanus guttatus)
The spotted rose snapper Lutjanus guttatus is a commercially important fish in mexican market and with aquaculture potential; yet little is known about its optimal environmental conditions during early stages of its life cycle. Salinity is known to be an important factor in natural and culture environments which can affect the different stages of fish development. In this paper an assessment was carried out on the effect of salinity on embryonic development and hatching rate. The following salinity conditions were applied to 300 fertilized eggs incubated in 1 l plastic containers: 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 and 45%, at 29 C and each treatment with six replicates. Hatching rate and total length of larvae in each treatment were determined. Incubation conditions at 0% affected negatively embryonic development and no hatching was observed; a significantly low hatching rate (p<0.05) was observed with 5% salinity (8.71.6%), compared to the other treatments; larvae were born deformed as in those hatched in salinities of 10% and 45%. Over 70% of larvae hatched in the 15% to 40 % salinity treatments and their development was normal. These results show that incubation rose snappers eggs can progress at salinities between 15% and 40% without affecting embryonic development and hatching larvae. Key words: Lutjanus guttatus, incubation, deformed larvae, replicate, treatment.

Introduccin La creciente actividad de la pesca comercial ha derivado en que algunas poblaciones marinas se encuentren sobreexplotadas y esto ha originado
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Centro de Investigacin en Alimentacin y Desarrollo, A.C. Unidad Mazatln. Av. Sbalo Cerritos s/n. Mazatln, Sin. 82010 Mxico. abdo@ciad.mx

que las poblaciones silvestres de peces sean capturadas cuando todava no alcanzan la talla de primera madurez sexual, con lo que se reduce la posibilidad de la renovacin de las poblaciones. En algunas regiones del mundo se ha comprobado que el cultivo de peces marinos es una alternativa tecnolgicamente viable para contrarrestar la presin que se ejerce sobre la pesca extractiva de juveniles y producir alimentos de
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igual calidad y a menor costo para consumo humano, tambin es una actividad generadora de empleos y de desarrollo econmico y social de la regin. En el Noroeste de Mxico, el cultivo de peces marinos representa una alternativa de alto potencial para promover la diversificacin de la camaronicultura, as como para la utilizacin de instalaciones ociosas. El pargo flamenco Lutjanus guttatus (Steindachner, 1869) es una especie con importancia comercial en el mercado nacional, ya que alcanza precios hasta de $80.00 kg. Se distribuye desde el Golfo de California hasta Per (Allen, 1995); presenta carne blanca a rosada sin espinas, se adapta con facilidad a condiciones de cautiverio y al alimento artificial granulado; caractersticas que aumentan su potencial para cultivo. A partir del ao 2000, el Centro de Investigacin en Alimentacin y Desarrollo (CIAD), Unidad Mazatln, inici la investigacin biotecnolgica para el cultivo de los peces marinos botete diana Sphoeroides annulatus (Jenyns, 1842) y pargo flamenco. En la actualidad se tienen los protocolos de induccin a la reproduccin y el cultivo larvario (Ibarra-Castro y Duncan, 2007; Ibarra-Castro y lvarez-Lajonchre, 2009; Abdo de la Parra et al., 2010a), as como el protocolo de la determinacin de requerimientos nutricionales y desarrollo de dietas prcticas para el pargo flamenco (Garca-Ortega, 2009; Abdo de la Parra et al., 2010b). Sin embargo, para aumentar la produccin de juveniles es necesario establecer las condiciones ambientales ptimas para la incubacin de huevo, eclosin y supervivencia de larvas de L. guttatus. La temperatura y la salinidad del agua son dos de las principales variables que influyen en los procesos vitales de los peces. Investigaciones en otras especies de peces marinos indican que la incubacin de huevos fuera del intervalo ptimo de salinidad de la especie afecta el desarrollo embrionario, produce malformaciones, puede alargar el tiempo de eclosin y disminuir la supervivencia, tanto de embriones como de larvas eclosionadas (Henne y Watanabe, 2003; Jian et al., 2003; Berlinsky et al., 2004). En el presente estudio se evalu el efecto de diferentes salinidades en la incubacin de huevos, porcentaje de eclosin y apariencia de larvas recin eclosionadas de pargo flamenco para coadyuvar en el desarrollo de la tecnologa de cultivo y la produccin masiva de juveniles.
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Materiales y mtodos El material de la investigacin se obtuvo de un lote de reproductores de L. guttatus del CIAD Unidad Mazatln. Algunas hembras de pargo flamenco fueron inducidas al desove con la hormona GnRHa ([D-Ala6 Pro9 NEt]- GnRH) a una dosis de 75-100 g kg-1 por medio de un implante tipo EVAc (Zohar y Mylonas, 2001) que se les coloc en la cavidad peritoneal, debajo de la aleta caudal, siguiendo el protocolo establecido por Ibarra-Castro y lvarez-Lajonchre (2009). Las hembras inducidas se colocaron, junto con algunos machos maduros sexualmente, en un tanque de fibra de vidrio circular de 18 m3 con flujo de agua y aireacin continua. En el tanque se instal un colector de huevos por rebozo, con malla de 0.5 mm de abertura. Despus de una hora de detectado el desove, se tom una muestra de huevo y se estim el porcentaje de fertilizacin (Ibarra-Castro, 2005) con un microscopio ocular, el cual fue de 97 por ciento. Cuando los huevos frtiles alcanzaron el estadio de embrin formado, aproximadamente de seis a ocho horas post fertilizacin (HPF) (Ibarra-Castro, 2005), se colectaron y se colocaron en probetas graduadas. Se tom una muestra de huevos y se observaron con el microscopio ocular para verificar el estadio embrionario. Se colocaron 300 huevos fertilizados de pargo flamenco en cada vaso de precipitado de 1 l con agua de diferentes salinidades: 0, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 y 45%, con seis replicados por tratamiento. Para disminuir la salinidad del agua de mar se utiliz agua dulce previamente declorada y para aumentar la salinidad se utiliz agua de mar concentrada, que se obtuvo hirviendo el agua de mar (35%) por ms de media hora. La salinidad se determin mediante un refractmetro modelo SR-6. Cada contenedor estuvo provisto de aireacin para mantener el oxgeno disuelto mayor a 5 mg l-1; la temperatura se mantuvo constante a 29 C. Para determinar el tiempo de eclosin de las larvas, cada media hora se observaron los contenedores de incubacin despus de las 16 HPF. Para obtener el porcentaje de eclosin (%E) se contabiliz el nmero de larvas eclosionadas en cada contendor y se aplic la siguiente ecuacin:
E

= (NL/NH) x100

Ec. 1

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donde: E = porcentaje de eclosin; NL = nmero de larvas eclosionadas y NH = nmero de huevos incubados. Se observ una muestra de diez larvas de cada replicado al microscopio ocular para determinar si presentaban deformaciones, obtener la longitud total (LT) con un micrmetro ocular y tomar fotografas. Los resultados de E se transformaron a arcoseno y se determin la normalidad de su distribucin (prueba de Bartlett), as como la homocedasticidad de la varianza (prueba de Levene). Los datos presentaron distribucin normal y se analizaron mediante un anlisis de varianza de una va (p<0.05); para determinar las medias significativamente diferentes se aplic una prueba de comparacin mltiple de rangos de Tukey (Zar, 1996) mediante el programa Statgraphics Versin 5 (STSC Inc., Rockville Maryland USA). Resultados La eclosin inici a las 19 HPF en los diez tratamientos. Para eclosionar, el embrin mueve brusca y continuamente la cola hasta que logra liberarse del corion. Una larva normal recin eclosionada presenta un saco vitelino que se extiende ms all de la cabeza y con una sola gota de aceite, los ojos no estn pigmentados y la boca y el ano estn cerrados (Fig. 1e). Los porcentajes de eclosin se presentan en la tabla 1. En el tratamiento de 0% de salinidad no hubo eclosin, el embrin inici el desarrollo y a las tres HPF ces su desarrollo. El huevo muerto es opaco a diferencia del huevo vivo, que es transparente y por tanto es posible observar su desarrollo embrionario con el microscopio ocular (Fig. 1a). En el tratamiento de 5% de salinidad, el porcentaje promedio de eclosin fue muy bajo (8.7%) y present diferencias significativas (p<0.05) con los dems tratamientos. Las larvas que eclosionaron fueron deformes (Fig. 1b) y no sobrevivieron ms de una hora post eclosin HPE. En los tratamientos de 10% y 45% de salinidad, el porcentaje promedio de eclosin fue menor de 40% y la mayora de las larvas fueron deformes (Fig. 1c y d), mientras que las de apariencia normal presentaron poca movilidad y murieron en pocas HPE.

En los tratamientos de 15% a 40% se presentaron porcentajes de eclosin superiores a 70%, sin diferencias significativas (p>0.05) entre ellos (Tabla 1); las larvas mostraron apariencia y movimiento normales (Fig. 1e). La longitud total promedio de las larvas recin eclosionadas en estos tratamientos fue de 2.150.17 mm, sin diferencias significativas (p>0.05) entre los tratamientos. Las larvas del resto de los tratamientos no se midieron, ya que la mayora present deformidades.
Tabla 1 Porcentaje promedio de eclosin de los huevos de Lutjanus guttatus a diferentes salinidades* Salinidad (%) 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
*Superndices (p<0.05). diferentes denotan

Eclosin MediaDE (%) 0 8.71.6a 27.115.1ab 72.421.1c 79.412.2c 75.715.3c 74.215.1c 75.718.2c 71.27.2c 37.226.6b
diferencias significativas

Discusin Para mantener el balance de sales en los fluidos corporales de los peces y para facilitar el intercambio gaseoso con el medio, es necesario que la salinidad est en los grados apropiados (Tucker, 1998). La salinidad, adems de afectar la fisiologa de los huevos y larvas de los peces, tiene un efecto directo en su crecimiento y su supervivencia porque influye en la cantidad de energa necesaria para la osmorregulacin (Watanabe, 2000). Los resultados en este estudio indican que la salinidad del agua en la que se incubaron los huevos de pargo flamenco afect el desarrollo embrionario, la eclosin y la supervivencia de las larvas. Los huevos incubados con una salinidad de 0%, cesaron su desarrollo despus de dos horas de incubacin (10 HPF) y 100% muri. Este efecto tambin se
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Fig. 1. Efecto de la salinidad (%) en la eclosin de los huevos del pargo amenco Lutjanus guttatus: a) Huevo vivo, b) huevo muerto y larvas deformes en 5%, c) larvas deformes en 10%, d) larvas en 45% y e) larvas con apariencia y comportamiento normales en 15% a 40%.

ha observado en otras especies de peces marinos como la cabrilla sardinera Mycteroperca rosacea (Streets, 1877) (Gracia-Lpez et al., 2004), el besugo negro Acanthopagrus butcheri (Munro, 1949) (Haddy y Pankhurst, 2000), la lubina negra Centropristis striata (Linnaeus, 1758) (Berlinsky et al., 2004). En el tratamiento con salinidad a 5%, el porcentaje de eclosin fue muy bajo, de modo que la mayora de las larvas no pudo eclosionar completamente y las que lograron completar el proceso de eclosin presentaron deformidades como la aleta caudal doblada y el cuerpo encorvado y no sobrevivieron ms de una hora post eclosin (HPE). Esto sucede porque la musculatura de la cola no alcanza a desarrollarse debidamente, lo que les dificulta liberarse del corion (Young y Dueas, 1993); posiblemente por esta razn, las larvas de pargo del presente estudio no lograron completar el proceso de eclosin. Por otro lado, aunque algunas larvas de pargo flamenco lograron eclosionar a 10% de salinidad, su apariencia y su comportamiento no fueron normales, as, presentaron tambin la extremidad posterior doblada y esttica. En cambio a 45% hubo mayor porcentaje de eclosin, pero la mayora de las larvas muri al entrar en contacto con el medio. En otros estudios realizados sobre el tema se ha reportado que, al igual que las larvas de pargo flamenco, la platija Rhombosolea tapirina (Gnther,
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1862) no sobrevive al ser incubada a altas o bajas salinidades (Hart y Purser, 1995). En el presente estudio se demostr que los huevos de pargo flamenco pueden incubarse en un amplio intervalo de salinidad que va desde 15% a 40%, con altos porcentajes de eclosin y supervivencia de las larvas eclosionadas. Este intervalo de salinidad no afect el desarrollo embrionario y las larvas eclosionadas en estos tratamientos no presentaron deformidades, su comportamiento fue normal y la longitud total promedio inicial de 2.150.17 mm fue similar. Allen (1995) report que los juveniles de pargo flamenco habitan en estuarios y bocas de ro, lo que la hace una especie eurihalina. Para otras especies de pargo tambin se ha reportado que toleran amplios intervalos de salinidad; Bortone y Williams (1986) en Tucker (1998) mencionan que los juveniles de L. griseus (Linnaeus, 1758) toleran intervalos de salinidad entre uno y 35%, en tanto que los juveniles de L. synagris (Linnaeus, 1758) de 19% a 35%. Tucker (1998) menciona que los huevos de peces marinos pueden tolerar amplios mrgenes de salinidad, como la platija R. tapirina (Hart y Purser, 1995), la dorada Sparus sarba (Forsskl, 1775) (Mihelakakis y Kitajima, 1994), la lubina negra C. striata (Berlinsky et al., 2004), la cabrilla sardinera M. rosacea (Gracia-Lpez et al., 2004), el besugo negro A. butcheri (Haddy y Pankhurst, 2000), el lenguado Paralichthys

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lethostigma (Jordan y Gilbert, 1884) (Henne y Watanabe, 2003), el botete diana S. annulatus (Martnez-Rodrguez et al., 2003) y el botete cola roja Takifugu flavidus (Li, Wang y Wang, 1975) (Zhang et al., 2010). Aun y cuando la flotabilidad de los huevos de peces marinos pelgicos sea afectada por la salinidad del medio (Henne y Watanabe, 2003), los embriones pueden desarrollarse en salinidades menores de 35% y eclosionar normalmente; sin embargo, en salinidades menores de 30% los huevos ya no flotan y permanecen en el fondo del tanque todo el periodo de incubacin, lo cual puede estresarlos o hacerlos ms susceptibles a enfermedades (Tucker, 1998). En el presente estudio no se detect algn indicio de enfermedad o infeccin en ninguno de los tratamientos, porque se trat de evitar que los huevos permanecieran en el fondo de los contenedores de incubacin, manteniendo la aireacin constante. Conclusin La baja o la alta salinidad del agua a la que se incubaron los huevos de pargo flamenco L. guttatus afect significativamente el desarrollo del embrin, la eclosin y la supervivencia de las larvas. Los huevos pueden incubarse entre 15% y hasta 40% sin resultados adversos.

Agradecimientos Los autores agradecen la asistencia tcnica de los seores Manuel Cruz y Juan Huerta. Este trabajo fue financiado por el Fondo Mixto Sinaloa (FOMIX) SIN-2006 C01- 37105 dirigido por M.I. Abdo de la Parra. Literatura citada ABDO-DE LA PARRA, M.I., L.E. RodrguezIbarra, F. Campillo-Martnez, G. VelascoBlanco, N. Garca-Aguilar, L.S. lvarezLajonchre y D. Voltolina. 2010a. Efecto de la densidad de siembra sobre el crecimiento y supervivencia larval del pargo lunarejo

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