UNIVERSIDAD AUTNOMA DE CHIAPAS FACULTAD DE CIENCIAS QUMICAS CAMPUS IV

LICENCIATURA EN QUIMICO FARMACOBIOLOGO

Laboratorio de Anatoma 3 A

CATEDRATICO (A): Francisco Javier Ramrez Aguilar INTEGRANTES DEL EQUIPO: SANDY BERENICE GALLEGOS ORANTES MARCO ANTONIO REYNA BECERRA RAMIRO ALFONZO HERNANDEZ CRUZ JORGE WILLIAM MALO PEREZ

TEMA: manejo y utilidad del microscopio ptico compuesto (moc)

Fecha en el que se desarrollo: 31 de enero del2013

TAPACHULA, CHIAPAS; MEXICO.

OBJETIVOS Conocer sus partes y su funcin del MOC, asi como el cuidado, manejo y utilidad en el laboratorio de anatoma y O.M.

NTRODUCCION. E L M I C R O S C O P I O. TIPOS DE MICROSCOPIOS. Los microscopios magnifican la imagen y aumentan la capacidad para ver detalles que de otro modo no podramos percibir. En el laboratorio se uso el microscopio para apreciar detalles de organismos pequeos y microscpicos (invisibles a simple vista), se conocern los diferentes tipos de microscpicos y sus usos, y se estudiarn varias clases de clula, sus estructuras y funciones.

HAY DOS TIPOS PRINCIPALES DE MICROSCOPIO: EL MICROSCOPIO DE LUZ Y EL MICROSCOPIO DE ELECTRONES. El microscopio de luz: usa un rayo de luz para iluminar los objetos, que son entonces magnificados y enfocados por lentes de cristal. Los microscopios de luz ms comunes son el estereoscopio (microscopio de diseccin) y el microscopio compuesto. El estereoscopio se utiliza para observar objetos relativamente grandes, de aproximadamente 0.05 a 20 milmetros. El microscopio compuesto: se utiliza mayormente para estudiar objetos o secciones finas, entre aproximadamente 0.2 a 100 micrmetros. Para ver ms detalles se usan tinciones que resaltan partes de lo que deseamos estudiar o se emplean microscopios especializados. Entre los microscopios especializados que usan una fuente de luz estn el microscopio de campo oscuro, el microscopio de contraste de fases y el microscopio de fluorescencia. Los microscopios de campo oscuro y de contraste de fases se usan para observar organismos, vivos o muertos, que no pueden teirse. En el microscopio de campo oscuro, la luz no pasa directamente a travs del organismo y slo se observa la luz reflejada de la muestra, por lo cual sta se ver brillante sobre un fondo oscuro. En el microscopio de contraste de fases, el ndice de refraccin de la luz es mayor en la muestra que en el medio donde se coloca, lo cual hace que sta se vea oscura sobre un fondo claro.

El microscopio de fluorescencia usa luz ultravioleta en vez de luz visible; los organismos o clulas con compuestos fluorescentes emiten luz visible al iluminarlos con luz ultravioleta, por lo cual brillan sobre un campo oscuro. Los microscopios electrnicos usan un haz de electrones, en vez de luz, y sus lentes son imanes en vez de lentes de cristal. Estos microscopios proveen un aumento de hasta 200,000 veces el tamao del organismo (200,000 x) y por lo tanto se utilizan para observar organismos o partculas sumamente pequeas, como los virus, o detalles celulares que de otra manera no podramos ver.

HAY DOS TIPOS DE MICROSCOPIO ELECTRNICO: El microscopio electrnico de transmisin (Transmission Electron MicroscopeTEM) y el microscopio electrnico de rastreo (Scanning Electron Microscope-SEM). Con el microscopio electrnico de transmisin se observan imgenes planas de organelos y de otros detalles intracelulares, mientras que con el microscopio electrnico de rastreo se observan imgenes tridimensionales de las superficies de las estructuras

PARTES DEL MICROSCOPIO. 1.Base. Sostn del instrumento. 2. Columna o brazo. Sostiene los lentes oculares y los lentes objetivos. 3. Platina. Superficie para colocar la laminilla. 4. Ajuste mecnico de la platina. Ajuste para mover la laminilla. 5. Revlver. Contiene los lentes objetivos. 6. Lentes objetivos. Lentes principales del microscopio. Estos lentes son para focales porque permiten que la imagen quede casi enfocada al cambiar de objetivo. Usualmente hay cuatro lentes objetivos: a. Rastreo magnifica cuatro veces (4x) b. Baja potencia 10x c. Alta potencia 40x d. Inmersin de aceite 100x 7. Cabezal. Contiene los lentes oculares. 8. Lentes oculares. El microscopio es monocular si tiene un ocular y binocular si tiene dos oculares. Los oculares magnifican diez veces (10x) y uno de ellos puede tener un puntero. 9. Anillo de enfoque del lente ocular izquierdo. Se usa para enfocar bien la imagen con el ojo izquierdo luego de haber enfocado con el ojo derecho; este

ajuste compensa por la diferencia entre la agudeza visual de ambos ojos. 10. Ajuste de distancia interpupilar. Aumenta o disminuye la distancia entre los lentesoculares para compensar por diferencias en la distancia entre los dos ojos. 11.Tornillo macromtrico o ajuste grueso. Sube y baja la platina rpidamente; slo se usacon los lentes objetivos de 4x y 10x. 12. Tornillo micromtrico o ajuste fino. Sube y baja la platina muy lentamente; se usa con todos los lentes objetivos para perfeccionar el enfoque de la imagen. 13. Iluminador o lmpara. Provee una intensidad variable de iluminacin. 14. Interruptor. Prende y apaga el iluminador. 15.Indicador de encendido. 16. Ajuste de iluminacin. Controla la intensidad de la iluminacin. 17. Condensador. Enfoca la luz en el plano de la laminilla. 18. Ajuste del condensador. Sube y baja el condensador, aunque ste siempre debe quedar un poco por debajo de su posicin ms alta. 19. Diafragma. Controla el dimetro del rayo de luz que llega a la laminilla; no debe usarse para aumentar o dismunuir la intensidad de la iluminacin. Al disminuir la apertura del diafragma, se aumenta el contraste de la imagen y la profundidad del foco, pero se disminuye la resolucin. Para obtener la mejor imagen posible hay que cambiar la apertura del diafragma cada vez que cambia el lente objetivo. 20. Filtro azul. Absorbe el exceso de luz roja y amarilla que produce el iluminador de tungsteno para que la iluminacin sea ms similar a la luz natural.

OBSERVACIONES Y RESULTADOS Objetivo 10X

Objetivo 40X

Objetivo 100X

Se observaron eritrocitos de sangre, no tienen ncleo ,la orilla mas oscura y en el cetro ms claro.

DISCUSION Observamos las partes que componen a un microscopio compuesto, conociendo as su sistema mecnico de iluminacin y ptico. Dentro del sistema mecnico encontramos que est formado por piezas que no intervienen en la formacin de la imagen, ni en el campo de luz. El sistema de iluminacin lo integran aquellas partes encargadas de colectar la luz dosificarla y dirigirla a travs del preparado.

CUESTIONARIO 1. Hacer un esquema del recorrido de la luz a travs de un microscopio ptico compuesto.

ultravioleta, microscopia fluorescencia.

de

contraste

de

fases

2.Consultar el fundamento de microscopia electrnica, microscopia de campo oscuro, microscopia de luz y microscopia

Microscopia electrnica: La microscopa electrnica es una tcnica que requiere instrumentos de alta complejidad y personal altamente especializado. Se utilizan la microscopa electrnica de transmisin o convencional y la de barrido. Microscopia en campo oscuro: utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espcimen. El objeto iluminado dipersa la luz y se hace as visible contra el fondo oscuro que tiene detrs, como las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitacin cerrada. Microscopia de la luz ultravioleta: Es un microscopio en el que se usa la luz ultravioleta, que es una radiacin cuya longitud de onda es de aproximadamente 200 nm y en consecuencia permite un mayor poder de resolucin que la luz

visible. Microscopia de contrastes de fases: El microscopio de contraste de fase permite observar clulas sin colorear y resulta especialmente til para clulas vivas. Este aprovecha las pequeas diferencias de los ndices de refraccin en las distintas partes de una clula y en distintas partes de una muestra de tejido. Microscopia de fluorescencia: es una variacin del microscopio de luz ultravioleta en el que los objetos son iluminados por rayos de una determinada longitud de onda. La imagen observada es el resultado de la radiacin electromagntica emitida por las molculas que han absorbido la excitacin primaria y reemitido una luz con mayor longitud de onda. Mencionar ejemplos de la utilidad de las anteriores Microscopias 3.- Mencionar ejemplos de la utilidad de las anteriores microscopias. Ejemplo del microscopio electrnico. Una imagen de una bacteria streptococcus tomada al escner con un microscopio electrnico.

Ejemplo de microscopia de fluorescencente. Teniendo un microscopio fluorescente una cmara adjunta es una experiencia maravillosa puedes ver y las clulas y ver las propiedades de la protena que por su puesto no se ve con un ojo comn. Esta imagen es un espcimen de la clula PtK2 de un rin marsupial

Ejemplo de microscopia de contraste de fases. Diagrama para el microscopio de contraste de fases. K: filtro anular, L: vista transversal del filtro anular, M: condensador, O-O: objetivo, P P: ocular, Q: diafragma del ocular. La placa de fases est colocada entre las lentes del objetivo y funciona como otro filtro que crea la difraccin de la luz. A y b: configuracin de los filtros para producir el contraste negativo o positivo respectivamente. Modificado de Richards O W. (1954). Phase Microscopy 19501954 (99).

Ejemplo de microscopia de campo oscuro. Configuracin esquemtica del principio de iluminacin de campo oscuro (luz transmitida). El filtro opaco es de forma circular y forma un cono de luz vaco que incide sobre el espcimen en forma oblicua y los rayos refractados, difractados y reflejados por el espcimen penetran en el sistema ptico del microscopio para formar la imagen. Modificado de Davison M, Abramowitz M. Optical Microscopy. Olympus Microscopy Resource Center (15).

Clulas epiteliales observadas en microscopio de campo oscuro. Modificada de Wegerhoff, R., Weildich O, Kassens M. (2005). Basis of light microscopy image (12).

Ejemplo de microscopia por fluorescencia. Esquema bsico de la iluminacin en el microscopio de fluorescencia. La luz blanca emitida por la fuente de luz es filtrada dejando pasar por ejemplo, solo la luz azul. El espejo dicroico refleja la luz de cierta longitud de onda (en este caso azul) pero deja pasar otras. Filtra la luz azul que excita al fluorocromo (fluorescena) pero por el contrario, deja pasar la luz verde emitida. Tomada de wikipedia.org (111). Los filtros empleados son tiles porque por ejemplo, cuando se emplea la fluorescena, el espcimen se ilumina con una luz azul monocromtica pura y filtrada. Para visualizarlo se emplea otro filtro el cual es completamente opaco a la luz azul pero deja pasar la luz verde (o amarilla y roja emitidas por otros fluorocromos). Las estructuras celulares marcadas mediante inmunofluorescencia aparecen iluminadas de verde contrastando con un fondo negro.

(fig. 6-24). Figura 6-24.-Micrografias de clulas en divisin, tomadas con un microscopio de fluorescencia. Se emplearon tres fluorocromos: DAPI (emite luz azul) para marcar cromosomas, GFP (protena verde fluorescente intracelular que emite luz verde) y rodamina (luz roja) para marcar microtbulos. Cada fluorocromo amerita el uso de filtros especficos, dependiendo de la longitud de onda necesaria para su excitacin, sealada arriba y a la izquierda en cada imagen y expresada en nm. Tomada de wikipedia.org (111).

4. Describir brevemente los tipos de microscopio electrnico Encontramos 2 tipos de microscopio el de transmisin y barrido que a continuacin describiremos: Microscopio electrnico de transmisin(MET): Permite la observacin de muestras de cortes muy finos. Una parte de los electrones son absorbidos o rebotan por el objeto y otros lo atraviesan formando una imagen aumentada del objeto en cuestin. Las muestras no deben ser mayores de un par de miles de 14iolgica (1 ngstrom es igual a 0.0000000001 metros). Se ha de colocar una placa fotogrfica detrs del objeto para registrar la imagen aumentada. Cabe destacar que este tipo de microscopios pueden aumentar un objeto hasta un milln de veces.

Microscopio electrnico de barrido (MEB):En ste no es necesario que el espcimen se encuentre en capas para observarlo. El MEB explora la superficie de la imagen punto por punto, y recorre la muestra con un haz muy concentrado de electrones. stos pueden provocar la aparicin de electrones secundarios, que posteriormente sern recogidos por un dispositivo situado a los lados del objeto en cuestin. Cada punto ledo de la muestra corresponde a un pxel, de forma que cuantos ms electrones haya, mayor ser el brillo del pxel en el monitor. A medida que el haz de electrones barre la muestra, se presenta la imagen de sta en el monitor. Los MEB pueden llegar a ampliar una imagen unas 200.000 veces. 5. Consultar dos tcnicas de preparacin de muestras biolgicas para ser observadas con microscopio electrnico. TCNICAS DE PREPARACIN DE UNA MUESTRA BIOLOGICA. La preparacin de las muestras 15iolgicas es sencilla y los requisitos que deben cumplirse son: fijacin, deshidratacin y secado; para observar una muestra biolgica, se recubren con una capa de carbn o de oro, segn las condiciones en las que se trabaje la muestra y el objetivo del estudio, es decir, para ser analizadas por EDS o para ser vistas al microscopio. Antes de tratar las muestras se debe tomar en cuenta el material a ser observado y guiarse por los parmetros especficos para cada muestra.

CONCLUSION Gracias al invento del microscopio se han podido observar los seres unicelulares, pluricelulares, eucariontes y procariontes que causan enfermedades, nos permite saber mas de ellos o conocer su propia naturaleza y saber mas acerca de ellos que a nuestros ojos es imposible ver. Tambin ha servido como una base para estudios posteriores a la biologa celular, bioqumica, biologa molecular, y gentica.

BIBLIOGRAFIA FARIAS MARTINEZ GUILLERMO, QUIMICA CLINICA, 9 EDICION, EL MANUAL MODERNO ALFONSO BALCELLS, LA CLINICA Y EL LABORATORIO INTERPRETACION DE ANALISIS Y PRUEBAS FUNCIONALES 9 EDICION MEXICO

Web-biografa http://electronicoscopio.blogspot.mx/2009/06/tipos-de-microscopioselectronicos.html