Determinacin de cenizas en carne.

Resumen del mtodo: Pesar un crisol vaco Colocar en el mismo aproximadamente 2 gramos de muestra Pesar nuevamente. Calcinar a 525C durante 8 horas. Enfriar en desecador. Pesar nuevamente. Calcular el porcentaje de cenizas obtenido segn la siguiente frmula:

Seminario: Algo ms sobre la evaluacin de la incertidumbre de medicin

Docentes:
Dra. Lic.

Celia Puglisi Enrique Vivino

W% =

z x 100 yx

Z= masa del crisol + ceniza X= crisol vaco Y= crisol + muestra

INTI - Instituto Nacional de Tecnologa Industrial (Argentina).

Clculo de incertidumbre en la determinacin de nitrgeno

Mensurando: Ejercicio: Enve a travs del chat las fuentes de incertidumbre que usted considere que influyen en esta medicin. Lo que se determina es la cantidad de nitrgeno contenido en la muestra. Este se transforma en NH4+por accin del cido sulfrico a temperatura elevada. Se agrega hidrxido de sodio y posteriormente se destila como NH3 y se recoge sobre cido brico. Finalmente se titula con cido sulfrico. Mtodo: "Nitrogen in meat" AOAC 39.1.15

Clculo de incertidumbre en la determinacin de nitrgeno

Posibles fuentes de incertidumbre

Muestreo: El laboratorio trabaja sobre muestras que, generalmente, son remitidas por el cliente.

Expresin matemtica para el clculo:

%nitrgeno =

Vt N PA 100 mm 1000

Vt= Volumen de titulante en ml. N= Concentracin del cido sulfrico (normalidad) PA= 14 mm = Masa de muestra

Condiciones de almacenamiento: Se mantiene la muestra en fro y en envase cerrado, dado que la carne puede sufrir alteraciones. El laboratorio cuenta con procedimientos para el manipuleo de la muestra.

Posibles fuentes de incertidumbre

Efectos instrumentales: Los instrumentos de medicin que se utilizan son la balanza y la bureta. Para la primera debe mantenerse un adecuado control. La segunda debe ser adecuadamente calibrada. El equipo para mineralizar las muestras debe controlarse para asegurar que las temperaturas y los tiempos sean los requeridos por el mtodo. Igualmente debe controlarse el equipo destinado a destilar el amonaco

Posibles fuentes de incertidumbre

Estequiometra: Las reacciones qumicas que intervienen en este ensayo son suficientemente conocidas como para asegurar el resultado. Para que sta se cumpla deben controlarse las condiciones experimentales. Condiciones de medicin: Las mismas deben ser controladas para que se mantengan dentro de lo especificado por el mtodo. Efecto de la muestra o matriz: El mtodo se aplica estrictamente a las matrices crnicas.

Reactivos: Deben cumplir con las condiciones especificadas por el mtodo.

Posibles fuentes de incertidumbre

Posibles fuentes de incertidumbre

Influencia de los clculos o modelo matemtico utilizado: En el clculo intervienen volumen y concentracin de soluciones adems de la masa de muestra. La frmula antes mencionada se aplica solamente si se mantienen las especificaciones del mtodo. Correccin por blanco: En general se controla que los reactivos no provoquen blancos apreciables. De ser necesario se introduce una correccin en la frmula, teniendo en cuenta el volumen de titulacin requerido para el blanco.

Efecto del operador: Es importante que el operador sea bien entrenado en la lectura de volmenes de la bureta y sobretodo en la apreciacin del punto final de la titulacin.

Aspectos aleatorios no controlables: Se intenta evaluarlos a travs del clculo de repetitividad del mtodo.

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

La incertidumbre propia de la balanza, de acuerdo con su certificado de calibracin, es de 0,13 mg para el rango entre 10g y 210g. El mtodo establece una masa de muestra de aproximadamente 1 g. La incertidumbre relativa de la pesada de la masa resulta entonces 0,13/1000 = 0,00013.

De acuerdo con la frmula mencionada anteriormente, tratndose de una expresin multiplicativa, la incertidumbre en la concentracin de nitrgeno (%N) se debe calcular sumando las incertidumbres relativas de cada parmetro que figura en la frmula. Ur(%N) = [(UrV)2 + (UrN) 2 + (mm)2 ]

A continuacin se calcularn los elementos de esta expresin

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

Incertidumbre

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

3) Por diferencias entre la temperatura de calibracin y la de medicin (suponiendo la falta de control en 3C) puede tomarse como incertidumbre 0,006 ml. La incertidumbre debida al volumen de una medicin ser

debida a la titulacin:

Se consider: 1) Volumen medido con la bureta Lectura: la mnima divisin es 0,1 ml Se estima que puede apreciarse 0,05 ml, considerando distribucin rectangular la incertidumbre por lectura.

= 0,032 + 0,014 2 + 0,0062 = 0,033ml

0,05 Ul = = 0,03ml 3
2) Valores obtenidos al calibrar la bureta dan una desviacin standard de 0,014 ml (para un dado volumen) En general para el clculo de la concentracin se utilizan alrededor de 20 ml, resultando entonces en valor relativo 0,033/20 =0,00165.

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

Incertidumbre

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

debida a la apreciacin del punto final

Para estudiar la incertidumbre estadstica se utilizaron los valores del volumen de cido sulfrico necesario para neutralizar cantidades conocidas de borx de alta pureza. La frmula utilizada es:
donde c es la concentracin de brax medida m es la masa de brax (utilizado como patrn) V es el volumen utilizado para titular M peso equivalente del Brax

Las titulaciones se realizaron por triplicado, en cada caso se calcul la desviacin standard y se la dividi por el promedio para calcular la desviacin standard relativa. El desvo stndard relativo de 27 triplicados fue 0,0035. Este valor se tom como incertidumbre estadstica relativa en la apreciacin del punto final.

c=

m vM

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

Si se considera la incertidumbre en la pureza del brax. El certificado del fabricante expresa 99,5% 100,5% de pureza para a/b.

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

La incertidumbre relativa en la concentracin de cido sulfrico ser entonces la combinacin de la incertidumbre en el volumen, la incertidumbre en la determinacin del punto final, y la incertidumbre en la pureza del brax ( se desprecia la incertidumbre en la masa de brax)

Si se supone una distribucin rectangular resultar en valor relativo:

Urp =

0,05 = 0,0029 3

Urc = 0,00165 2 + 0,0035 2 + 0,0029 2 = 0,0048

Cuantificacin de los componentes de la incertidumbre

Al titular la solucin proveniente de la muestra se considera incertidumbre en el volumen usado, determinacin del punto final y concentracin Combinado las incertidumbres relativas se tendr una incertidumbre debida a la titulacin, que determina la concentracin de nitrgeno en la muestra.

Componente estadstica de la incertidumbre

Se calcul la desviacin estndar relativa intramuestra sobre 50 muestras analizadas por duplicado (correspondientes a muestras recibidas por el laboratorio), obtenindose el valor 0,015 La concentracin de nitrgeno en las muestras se encontraban entre 1,5g/100g y 5 g/100g.

Urt = 0,00165 2 + 0,0035 2 + 0,0048 2 = 0,00619

Componente estadstica de la incertidumbre

Evaluacin del sesgo

Se realizo sobre el mismo material de referencia.

Utilizando material de referencia el valor obtenido sobre 25 duplicados fue 0,012 (se supone que la diferencia se debe principalmente a una mayor homogeneidad del material)

El valor certificado era 1,68 g/100g. Se obtuvo un promedio de 1,67 con un desvo estndar de 0,02 g/100g. Esto representa una desviacin estndar relativa de 0,012. El material de referencia fue certificado por medio de un ejercicio interlaboratorio y el certificado indicaba la desviacin estndar interlaboratorio 0.052 g/100g. Sobre la base de estos datos se concluy que el mtodo no presenta desvo sistemtico apreciable.

Componente estadstica de la incertidumbre

Frmulas utilizadas en los clculos

La desviacin standard para una muestra analizada por duplicado es

Se combinaron ambas incertidumbres para el clculo final.

Urc = 0,015 + 0,0062 = 0,016

La evaluacin de la incertidumbre indica que la incertidumbre relativa para la repetitividad es igual a 0,015, mostrando que la mayor componente proviene de las componentes aleatorias del proceso, por ejemplo del proceso de mineralizacin, destilacin, entre otras

si =

d2 i 2

donde di es la diferencia entre los dos valores

La desviacin standard relativa es:

s ir =

si xi

donde x i es el valor promedio para esa muestra

Frmulas utilizadas en los clculos

Para k muestras puede calcularse una desviacin standard relativa global s2 ir srg = k Esta frmula se utiliz para calcular la desviacin standard relativa para los duplicados y para los clculos sobre el factor en la titulacin. Para una misma muestra analizada varias veces por duplicado se encontr que

Otra metodologa
En caso de no contar con un material de referencia, se trata de utilizar una muestra de control de contenido de nitrgeno conocido. En este ejemplo se utiliz glicina, un aminocido dnde se supone que el nitrgeno se comportar de manera similar que el de la protena. Por tratarse de una sustancia con pureza certificada se conoce la concentracin de nitrgeno

s
srg k x

2 i

Dado que el valor del promedio es el mismo, es de esperar que resulte una igualdad, pero la pequea diferencia numrica encontrada puede atribuirse a que los valores de promedio utilizados para calcular las distintas sir no son siempre coincidentes con el promedio general.

Otra metodologa
Se evalu la recuperacin utilizando la glicina, obtenindose una recuperacin media de 99,77%. Con sta muestra se construyeron los grficos de control que se muestran a continuacin. Con este mecanismo se comprueba que el proceso est bajo control estadstico.

Ejemplo

Debe demostrarse que los resultados obtenidos evaluando la incertidumbre con cualquier metodologa son adecuados. Una manera de demostrarlo es participando en interlaboratorios o bien cotejando los resultados con los obtenidos por otros laboratorios, para lo cual ser necesario contar con los correspondientes informes.

Se comparan aqu los valores obtenidos por el laboratorio organizador con los de los participantes.

Ejemplo
Ensayo interlaboratorio para anlisis de carne - Determinacin de nitrgeno

Ejemplo
Resumen de los resultados obtenidos

Datos enviados por los participantes

5 4,8 4,6 4,4 4,2 4 3,8 3,6 3,4 3,2 3 2,8 2,6

Parmetro

Valor referencia (g/100g)

Incert

Valor medio interlab (g/100g)

Desv est.interlab

Valor medio informado (g/100g)

Humedad

53,96

0,74

54,36

0,79

Ceniza

3,01

0,13

3,12

0,11

Valor medio
2,4 2,2 2 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 nparticipante

Valor de referencia v ref interlab +/- sL Valor medio interlaboratorio

Grasa

17,14

0,38

17,06

1,2

Nitrgeno

3,69

0,11

3,66

0,11

Grfico de control o grfico de Shewhart

Ejemplos de situaciones fuera de control

Combinacin de incertidumbres estndar

Use of uncertainty information in compliance assessment Todas las fuentes de incertidumbre son proporcionales a la concentracin del mesurando y entonces pueden ser tratadas como una desviacin estndar relativa
http://www.eurachem.org/guides/Interpretation_with_expanded%20u ncertainty_2007_v1.pdf

DECISIN DE LA COMISIN DE LAS COMUNIDADES EUROPEAS (12 de agosto de 2002) Por la que se aplica la Directiva 96/23/CE del Consejo en cuanto al funcionamiento de los mtodos analticos y la interpretacin de los resultados
http://www.cde.ua.es/dsi/elpdf/l_22120020817es00080036.pdf

Comunidad Europea Regulacin EEC N 315/93 Directiva 2002/32/EC

http://ec.europa.eu/food/food/chemicalsafety/contaminan ts/report-sampling_analysis_2004_en.pdf

Antes de establecer cualquier especificacin debe tenerse en cuenta que el valor de un parmetro especfico: Puede depender del mtodo de anlisis usado Siempre depende del mtodo de muestreo utilizado para verificar el cumplimiento con las especificaciones.

Nmero de cifras significativas:

Es necesario tener en cuenta el n de cifras significativas que especifica cualquier legislacin y el n de cifras significativas usadas cuando se expresa un resultado analtico. Algunos analistas expresan el resultado con el mismo n de cifras significativas que la especificacin. Es necesario establecer un criterio uniforme. Ejemplo:

Cuando se desarrolla una legislacin debe tenerse en cuenta como mnimo:

Las unidades en que debe expresarse un resultado El n de cifras significativas que debe contener el informe La interpretacin de un resultado analtico en relacin con el lmite de la especificacin La exactitud esperada para el mtodo que probablemente se use y por lo tanto evaluar si el n de cifras significativas expresadas en la legislacin es realista

Especificacin

Rango donde debe caer un resultado satisfactorio

1 1,0 1.00

0 a 1,4 0 a 1,04 0 a 1,004

En caso de alguna accin judicial solo se tomarn acciones si el analista est seguro (ms all de dudas razonables), que el lmite ha sido excedido.

La legislacin que contiene niveles mximos debe siempre tener en cuenta como deben expresarse e interpretarse los resultados analticos.

INCERTIDUMBRE Significa duda. Cuando se aplica a una medicin es un parmetro que caracteriza la dispersin de valores que pueden ser atribuidos razonablemente al mesurando. Definida de esta manera, la incertidumbre indica un intervalo de valores que, segn el criterio del operador, pueden ser razonablemente atribuidos al mesurando.

Resultados precisos pero no justos

El error se define como la diferencia entre un resultado individual y un valor verdadero y es por lo tanto un valor nico.

NO HAY EXACTITUD !

Resultados justos pero no precisos

Resultados ni precisos ni justos

NO HAY EXACTITUD !

NO HAY EXACTITUD !

Resultados precisos y justos

HAY EXACTITUD !

desviaci desviacin standard

Algunos conceptos estadsticos bsicos

Nmero de determinaciones independientes es el nmero de valores que se utilizaron para calcular el promedio promedio = 1/n xi La estimacin de la desviacin estndar se define por

s=

(x x )
i

n 1
desvest

en Excel

s =

(xi x )2 n 1

en las calculadoras de bolsillo

n-1

10

DISTRIBUCION NORMAL

16%

+ 68%
16%

2 2,25%

95,5%

+2 2,25%

Desviacin estndar del promedio de n mediciones

Incertidumbre de medicin y cumplimiento de las especificaciones

El promedio de n mediciones es el mejor estimador de la magnitud a medir y si se le quiere asignar una incertidumbre resulta:

Lmite de control superior

sx = s

Resultado e incertidumbre fuera del lmite

Resultado fuera del lmite Incertidumbre dentro

Resultado dentro del lmite pero incertidumbre fuera

Resultado e incertidumbre dentro del lmite

www.ILAC.org Guia G8

Ensayos cualitativos En un sentido amplio proveen un declaracin de aptitud o una categorizacin del producto que se analiza. A partir de los resultados por lo general se toman decisiones.

Si existe un lmite permitido para alguna propiedad de un determinado producto y se lo clasifica como que pasa y esta clasificacin es incorrecta esto constituye un riesgo. Es necesario poder asegurar que los mtodos de ensayo producen resultados con bajo riesgo de clasificacin incorrecta Por lo general se puede dar una indicacin de la probabilidad de que una clasificacin sea correcta.

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Incertidumbre en ensayos cualitativos Pueden distinguirse dos situaciones cuando se habla de proporcin de falsos negativos La probabilidad o frecuencia de respuestas negativas cuando la respuesta debiera ser positiva. Es decir, la fraccin de positivos verdaderos que dan respuestas negativas. La frecuencia de respuestas negativas incorrectas en una serie de ensayos, es decir, la fraccin de la poblacin de ensayos que dan resultados falsos negativos

Los ensayos cualitativos por lo general conducen a aseveraciones como pasa / no pasa o presente / ausente En estos casos puede suceder que haya falsos positivos o falsos negativos

Error beta () Probabilidad de que la muestra analizada sea realmente no conforme aunque se haya obtenido una medicin conforme (decisin de falso conforme)

Lmite de decisin (CC) Lmite en el cual y a partir del cual se puede concluir con una probabilidad de error que una muestra no es conforme

Error alfa () Probabilidad de que la muestra analizada sea realmente conforme aunque se haya obtenido una medicin no conforme ( decisin de falso no conforme)

Capacidad de deteccin (CC) Contenido mnimo de un analito que puede ser detectado, identificado o cuantificado en una muestra, con una probabilidad de error En el caso de analitos para los que no se ha establecido un lmite permitido, la capacidad de deteccin es la concentracin mnima en la que un mtodo puede detectar muestras que contengan ese analito con una certeza estadstica de 1-. En el caso que se haya establecido un lmite permitido, la capacidad de deteccin es la concentracin en la que un mtodo puede detectar lmites de concentracin permitido con una certeza estadstica de 1-

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En una medicin analtica existe un umbral de concentraciones por debajo del cual la identificacin positiva se hace no confiable:
Concentracin gg-1 200 100 75 50 25 No. de replicados 10 10 10 10 10 resultados positivos/negativos 10/1 10/1 5/5 1/9 0/10

El conocimiento de la incertidumbre de los resultados de una medicin es esencial para la interpretacin de los resultados. Si no hay una declaracin cuantitativa de la incertidumbre es imposible decidir : Si las diferencias observadas entre resultados refleja algo ms que una variabilidad experimental Si las muestras cumplen o no con leyes que estn basadas en lmites.

Decisiones incorrectas tomadas sobre esta base pueden resultar en innecesarios gastos en la industria, aplicacin incorrecta de una ley o consecuencias adversas en la salud de la sociedad.

Frasco 1 2 3

pH 6,25 6,25 6,26

promedio 6,25

s 0,01

Especificacin: entre 5,0 y 7,5

Comprimido

Contenido (mg)

% sobre el valor Promedio declarado (%)

s (%)

s relativa

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

101,1 102,0 101,6 98,7 100,6 96,3 99,0 102,2 101,5 100,9

101,1 102,0 101,6 98,7 100,6 96,3 99,0 100,2 101,5 100,9 100,2 1,74 1,74

96,74
Especificacin: La cantidad de principio activo en cada una de las 10 unidades de dosificacin debe encontrarse en el intervalo 85,5 a 115,0 del valor declarado. Desviacin estndar relativa menor o igual al 6%

100,2

103,6

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