REVISION (BIOLOGIA CELULAR)

Acta Cientfica Venezolana, 55: 288-303, 2004

TELOMERO, TELOMERASA Y CANCER

Francisco Arvelo y Alvaro Morales Laboratorio de Cultivo de Tejidos y Biologa de Tumores, Instituto de Biologa Experimental, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela, Apartado 47114, Caracas-Venezuela, 1041-A. 2 Centro de Biotecnologa, Unidad de Genmica y Polimorfismo Gentico, Instituto de Estudios Avanzados, Valle de Sartenejas, Apartado 17606, Caracas 1015-A. e-mail: franarvelo@yahoo.com
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Recibido: 02/02/04; Revisado: 05/05/04; Aceptado: 13/07/04

RESUMEN: Los telmeros son estructuras nucleoproteicas especializadas que constituyen las extremidades de los cromosomas y cuya longitud predice la capacidad replicativa de las clulas. Por otra parte, la telomerasa, que es la enzima que sintetiza el ADN telomrico y, por tanto, controla la sntesis de los telmeros, jugara un papel importante en el proceso de inmortalizacin de las clulas. Los mtodos empleados para cuantificar esta enzima son reproducibles, seguros y semicuantitativos, y han permitido mostrar que la telomerasa es sobre-expresada en muchos tipos de tumores malignos, no as en los tejidos somticos normales. El estudio de la regulacin de la longitud de los telmeros y de la actividad de la telomerasa ha permitido comparar dos fenmenos biolgicos diferentes y fundamentales, como lo son la senescencia y el cncer, por lo que el telmero y la telomerasa podran constituir un blanco atractivo para el desarrollo de nuevos agentes antitumorales. Palabras clave: Telmero, telomerasa, senescencia, cncer, quimioterapia.

TELOMERE, TELOMERASE AND CANCER

ABSTRACT: Telomeres are specialized nucleoprotein structures that constitute chromosome ends and whose length predicts the replicative capacity of cells. Activation of telomerase, the ADN polymerase that synthetizes telomeric repeats, seems to be necessary for cell immortalization. Methods for measuring telomerase activity which are reliable, reproducible and semi-quantitative, have shown that telomerase is over expressed in most human cancers but not in normal somatic tissues. Research on the regulation of telomere length and telomerase activity, highlights the connection between senescence and cancer. Thus, telomeres and telomerase represent attractive targets for the discovery of new anticancer agents. Key Words: Telomere, telomerase, senescence, cancer, chemotherapy

INTRODUCCION Los seres humanos, ante la finitud de la vida y lo inevitable del envejecimiento, han anhelado la vida eterna y para ello se han empeado en buscar la fuente de la eterna juventud. Esa bsqueda permanente ha sido motivo de muchas ficciones, las cuales han generado mitos y leyendas a lo largo de toda la historia de la humanidad. Es a partir del desarrollo de la ciencia que hoy tenemos un cuadro ms real y exacto de lo que es la vida y sus posibilidades, incluso sin olvidar el anhelo de trascedencia que siempre ha animado al hombre. As, en su permanente bsqueda de la verdad, la ciencia tambin est tratando de evitar, o al menos retrasar, el incuestionable deterioro durante el envejecimiento, centrando buena parte en sus esperanzas en el campo de la gentica al considerar que la clave de este deterioro orgnico observado con el paso del tiempo, se encuentra en el ADN. Actualmente se considera que la clave del envejecimiento est en el proceso de la divisin celular y que el reloj biolgico que controla la vida de cada clula sea el telmero, los cuales forman regiones terminales de todos los cromosomas tanto de los eucariotas como de algunos cromosomas procariotas lineales. La funcin

de esta regin del cromosoma no esta completamente dilucidada, pero sin embargo existen numerosas propuestas, con base experimental, que hablan acerca de la funcin del telmero en el ciclo celular, senescencia y control de la expresin gentica a nivel transcripcional. Por otro lado, en el mbito estructural, el telmero ayuda a mantener la integridad del cromosoma evitando la fusin de sus extremos y la degradacin por nucleasas, as mismo participa en el anclaje de los cromosomas a la matriz nuclear y juega un papel muy importante durante la meiosis, el apareamiento y recombinacin homologa11. Estas caractersticas asociadas al telmero hacen que adquiera una importancia especial en algunas enfermedades, como puede ser el crecimiento descontrolado que se observa en el cncer y en la posibilidad de disear terapias ms adecuadas para controlar esta enfermedad86. Por ello, en este trabajo, haremos especial nfasis en la estructura del telmero y la telomerasa en cuanto a su composicin y las protenas responsables de la estructura y la sntesis. Por otra parte, discutiremos las implicaciones que pueden tener la estructura y el tamao del telmero tanto en el ciclo celular, cncer y senescencia.

Telomero, telomerasa y cncer Telomero: Estructura y composicin Los telmeros de la mayora de eucariotas estn formados por dos tipos de secuencias de ADN. Una de ellas, denominada secuencia telomrica, repeticin telomrica o repeticin terminal, constituye el extremo de la cadena de ADN del cromosoma, mediante la repeticin en tndem de un oligonucletido corto. Generalmente esta secuencia telomrica es ms rica en G en una de las hebras la que forma el extremo 3, que sobresale unos 12-16 nucletidos sobre la hebra que aporta el extremo 5. Ese extremo saliente es reconocido por protenas ligantes del telmero (TBP, telomere binding proteins), que actan a modo de caperuza protectora de dicho ADN terminal. Existen tambin unas secuencias ms complejas adyacentes a las anteriores que se denominan asociadas a telmeros o secuencias subtelomricas. Blakburn y Gall en 1978 reportaron, por primera vez, la secuencia telomrica a partir del ADN del gen ribosomal del protozoario ciliado Tetrahymena termophila10. Este estudio permiti la posterior identificacin, caracterizacin y clonamiento de telmeros en una gran variedad de otros organsmos, (Tabla I). En los humanos, el ADN del telmero est constituido por repeticiones hexamricas del tipo TTAGGG19,92, las cuales estan repetidas entre 150 y 2000 veces85, encontrndose mayor nmero de repeticiones en el 3 terminal, el cual finaliza en repetidos hexamricos de cadena simple, haciendo a esta porcin mas larga que la hebra complementaria 5-terminal11. Un acortamiento de la longitud de los telomeros ocurre en el curso del envejecimiento, cuyas disminuciones son generalmente del orden de 10 a 200 pares de bases por ao segn los diferentes tipos de tejidos. Una disminucin de la longitud de los telmeros es observado en el caso de los fibroblastos de la piel130, mioblastos de los msculos esquelticos27, clulas de la mucosa intestinal52, leucocitos135 y clulas endoteliales del sistema vascular16. Acompaando a las secuencias repetitivas del ADN telomerico, en sentido 5 hacia el centromero, se encuentran secuencias ricas en GC llamadas secuencias subtelomricas, las cuales poseen bajo nmero de repeticiones hexamericas y aunque estas no participan directamente en la homeostasis del telmero, su estructura puede jugar un papel importante en la formacin de la estructura del telosoma. Es importante destacar que aunque la secuencia telomrica se encuentra conservada en muchos organsmos, el tamao del 3 terminal u overhang es especie especfica40, asi como tambin muchas de las protenas encargadas de la elongacin. Esto indica que la longitud del telmero ha sido una de las caractersticas ms importantes para el mantenimiento de la integridad cromosomal y adems evidencia las distintas adaptaciones, de las diferentes especies, a los dictados de su biologa celular. Las repeticiones hexamricas que se encuentran en simple cadena permiten al ADN telomrico adoptar estructuras secundarias muy particulares debido a la

289 interacin de los grupos guaninas a travs de enlaces de hidrgeno. Estas estructuras se denominaron quartetos G, debido a que estan involucrados cuatro grupos de guanina, los cuales pueden interaccionar intra o inter cadena101,102. Es importante destacar que el overhang puede encontrarse formando tanto estructura de horquilla como quartetos G al mismo tiempo43,44. Las primeras evidencias de la estructura quarteto G se obtuvieron en preparaciones de ADN telomrico sintetizado in vitro bajo condiciones apropiadas tales como temperatura, concentraciones de cationes, pH, etc y posteriormente, se demostr la existencia de estas estructuras in vivo6,9,15,103. Existe un grupo importante de protenas involucradas en la formacin y proteccin del telmero, entre las que destacan la telomerasa Rap1, TRF1 y TRF29,28,59. Rap1 es una protena telomrica que se ha encontrado tanto en humanos como levaduras y ciliados, controlando en los primeros la longitud del telmero a travs de su interaccin con TRF2. Tanto TRF2 y TRF1 son protenas estructurales que se unen a las secuencias repetidas en tanden telomericas TTAGGG99. La TRF1 se encuentra en la regin doble cadena del telmero, mientras que TRF2 est asociada a la regin simple cadena u overhang, poseyendo ambas protenas un dominio tipo Myb hlice-vuelta-hlice en su regin carboxi-terminal y un dominio de formacin en su regin central49. La prdida de funcin de TRF2 origina anormalidades cromosmicas, detencin del ciclo celular y activacin de la respuesta del ATM-p53, que responde a daos en el ADN. Estas dos protenas no forman heterodmeros y tienen una gran diferencia en su Nterminal, el cual es cido en TRF1 y bsico en TRF2. La TRF1 y la TRF2 se encuentran estrechamente relacionados en el dominio de unin al ADN y ambas protena pueden unirse al ADN telomrico doble cadena in vitro. Se sugiere que TRF1 actuara en cis sobre la regulacin de la longitud del telmero, bloqueando as el acceso de la telomerasa al extremo 3-terminal de la cadena sencilla del cromosoma63,74, mientras que TRF2 juega un papel clave en la homeostasis del telmero, ya que modificaciones en su patrn de expresin producen una marcada consecuencia en la regulacin y sntesis del telmero. Una hiptesis es que el TRF2 se comporta como una protena sensora de la longitud del telmero y que esto se realiza a travs de la unin a los repetidos telomericos de la regin de doble cadena. Por otra parte se ha podido establecer la responsabilidad de TRF1 y TRF2 en la formacin de la estructura telomerica llamada T-Loop, que es esencial para la proteccin de los extremos de los cromosomas de la degradacin por nucleasas y fusin. Adems, esta estructura juega un papel determinante en la organizacin de la cromatina en las regiones telomericas y subtelomericas116. Por otra parte se ha determinado el papel de la protena con actividad poli(ADP-ribosa) polimerasa (PARP) en los telmeros humanos, con homologa con las ankirinas de 142 kDA y dominio cataltico de una PARP e identificada como una protena de unin a TFR1, la cual se denomin tankirasa I115. Esta protena

290 tiene un dominio con repetidos ankyrin y reconoce el N-terminal acidico de TFR1, lo que indica que es una interaccin especfica con TFR1, ya que TRF2 no tiene esta caracterstica. Se han distinguido algunas protenas PARPs que se encuentran involucradas en los mecanismos de reparacin en respuesta al estres genotxico, las cuales poseen un dominio de unin al

Arvelo y Morales ADN, el cual es responsable de la activacin de la enzima cuando existe dao en el ADN110,120. Otro grupo de protenas tales como POT1, Pin X1, Tin2 y Tankirasa, adems de estar involucradas en los mecansmos de reparacin intervienen en la modulacin de la actividad de la telomerasa, formacin de la heterocromatina y sealizacin celular 70,81,144.

Tabla I: Secuencias repetitivas telomricas en eucariotas Grupo Vertebrados Organismo Human, mouse, Xenopus Physarum, Didymium Dictyostelium Trypanosoma, Crithidia Tetrahymena, Glaucoma Protozoarios ciliados Paramecium Oxytricha, Stylonychia, Euplotes Protozoarios esporozoitos Plantas superiores Insectos Nemtodos Algas Levaduras de fisin Plasmodium Arabidopsis Bombyx mori Ascaris lumbricoides Chlamydomonas Schizosaccharomyces pombe Saccharomyces cerevisiae Candida glabrata Candida albicans Candida tropicalis Candida maltosa Candida guillermondii Candida pseudotropicalis Kluyveromyces lactis Repetidos Telomricos (5'-3' terminal) TTAGGG TTAGGG TTAGGG AG(1-8) TTAGGG TTGGGG TTGGG(T/G) TTTTGGGG TTAGGG(T/C) TTTAGGG TTAGG TTAGGC TTTTAGGG TTAC(A)(C)G(1-8) TGTGGGTGTGGTG (from RNA template) or G(2-3)(TG)(1-6)T (consensus) GGGGTCTGGGTGCTG GGTGTACGGATGTCTAACTTCTT GGTGTA[C/A]GGATGTCACGATCATT GGTGTACGGATGCAGACTCGCTT GGTGTAC GGTGTACGGATTTGATTAGTTATGT GGTGTACGGATTTGATTAGGTATGT

Hongos filamentosos Neurospora Hongos Protozoarios Kinetoplastidios

Levaduras de gemacin

(tomado de: http://cechlab.colorado.edu/telomere/teltable.html)

Telomero, telomerasa y cncer Telomerasa: Estructura y Composicin La telomerasa humana es un complejo de ribonucleoprotena que tiene un peso molecular de aproximadamente un megadalton 108, variando este valor segn el mtodo de purificacin, lo cual puede reflejar una heterogeneidad fisiolgica, pudiendo ser inherente a la va de activacin, ensamblaje o regulacin de esta enzima. Existen por lo menos tres pasos para el correcto ensamblaje de la holoenzima, los cuales son: a) acumulacin de ARN; b) activacin cataltica y c) secuestro en los telmeros. La acumulacin estable de muchos ARNs, que no codifican protenas, requieren de un procesamiento activo del transcripto primario el cual puede consistir en el clivaje del precursor, en la modificacin de la base o el azcar o en el ensamblaje dentro de una protena que lo protege de degradacin por nucleasas. La subunidad de ARN de la telomerasa de distintos grupos filogenticos es altamente divergente, no slo en su secuencia, sino tambin en su estructura secundaria, modificaciones, estabilidad celular y requerimientos transcripcionales. La subunidad ARN de la telomerasa de humanos tiene 451 nt y al igual que en otros vertebrados e incluso en levaduras, es producto de la ARN pol II20. Cuando la subunidad ARN de ciliados es transcrita por la ARN pol III, y el gen de la subunidad de humanos es transcrita artificialmente por pol III, sta produce un ARN truncado y es procesado de manera diferente. En los humanos es conocido el mecanismo mediante el cual la subunidad ARN de la telomerasa (hTR) es procesada y adems no se ha encontrado evidencia de poliadenilacin, demostrndose que sta no es necesaria para la terminacin de la transcripcin82,89. Sin embargo, al igual que otros ARN, la hTR requiere de un motivo de orquilla (H/ACA) para que pueda estabilizarse y acumularse en la clula. Este motivo, est muy conservado en los vertebrados, sin embargo no as para levaduras y ciliados, cada uno de los cuales pareciera emplear un estrategia distinta para la acumulacin de la subunidad ARN de la telomerasa89. El motivo H/ACA se asocia a cuatro protenas comunes a todos los ARN nucleares pequeos (snoRNA), inicialmente identificadas en levaduras como Gar1p, Cbf5p, Nhp2p y Nop10p32,39. La prdida de expresin de algunas de estas protenas producen la detencin del ciclo celular; a excepcin de Gar1p, todas las dems previenen la acumulacin de snoRNA41. En los seres humanos se han identificados algunas protenas que presentan homologa en cuanto a su funcin. Como ejemplo tenemos que la protena diskerina es homloga a Cbf5p, la cual se une a una secuencia especfica en el ARN blanco y cambia uridina por pseudouridina. Otras tres protenas, de las identificadas en humanos, la hNHP2, hNOP10 y hGAR1 interactan con el motivo H/ACA de todos snoRNA y con hTR. En experimentos donde se hicieron cambios a nivel de la secuencia de hTR, se observ que las variantes que no se podan acumular, tampoco fueron capaces de interactuar con ninguna de estas cuatro protenas

291 descritas54. Resultados similares se obtuvieron al cambiar la secuencia del motivo H/ACA de hTR, lo que indica que esta subunidad tiene los mismos requerimientos que el resto de las snoRNA para lograr su estabilidad y su posterior acumulacin en la clula.32 Adems de stas protenas, recientemente se han descrito algunas ribonucleoprotenas nucleares heterogneas (hnRNPs) que incluyen A1, C1/C2 35 y chaperonas como p23/hsp9057 , hStau, L2277, el autoantgeno La y TEP12,51 ,los cuales son protenas accesorias de la telomerasa humana. Numerosas observaciones experimentales sugieren que estas protenas poseen un rol importante en la biologa del telmero, como lo sealan los siguientes hechos: 1) a travs de experimentos de inmunoprecipitacin se ha observado que hnRNP A1, hnRNP D y hnRNP C1/C2 interactan con la holoenzima telomerasa; 2) hnRNPs A1, A2-B1, D y protenas homlogas de otros organismos, pueden asociarse a las secuencias repetitivas de ADN simple cadena telomrico in vivo; 3) todas las hnRNPs que se asocian al telmero y a la telomerasa son componentes integrales de la matriz nuclear, sitio putativo de unin de los telmeros, lo que sugiere que ellos puedan estar prximos a el complejo de hnRNPs o unidos directamente a stos. Por otra parte, la expresin deficiente de hnRNP A1 en clulas de ratn produce telmeros cortos, sin embargo, la longitud de los mismos aumenta cuando se restituye hnRNP A1, lo que indica que estas ribonucleoprotenas estn estrechamente involucradas en la regulacin de la longitud del telmero19,54. Sobre la base de estas observaciones se han propuesto dos modelos para explicar como la holoenzima telomerasa se une al telmero. Uno de los modelos plantea una estructura telomrica en lazo o T-loop, la cual tiene unida hnRNP A1 y otras hnRNPs accesorias que al interaccionar con la holoenzima telomerasa producen un cambio conformacional que expone la hebra 3 cadena sencilla para permitir entonces la elongacin por parte de la telomerasa. El otro modelo supone un telmero sin estructuras en lazo, que al ser reconocido por la hnRNP A1 induce el secuestro de la holoenzima telomerasa hacia el extremo 3terminal y por consiguiente produce la elongacin del telomero40. Interaccin de la subunidad cataltica y la subunidad ARN Estos resultados permiten especular que la hTR posee dos dominios funcionales: la regin molde y la regin de doble orquilla y que existe un tercer dominio que permite que stas dos regiones puedan plegarse correctamente para interactuar cada una con un dominio distinto de hTERT122. En algunos tejidos la ausencia de actividad telomerasa es debida a la represin del gen, mientras que en otros tejidos se debe a que slo se expresa el ARNm inactivo de la hTERT, el cual consiste en una protena truncada que no posee la funcin cataltica. Llamativamente esta protena slo pierde el motivo

292 cataltico, por lo que puede unirse a la hTR. Esto hace, suponer un modelo de competencia en el cual ambas protenas, la inactiva y la activa, compiten por los sitios de unin a la hTR, lo que sugiere a su vez que uno de los puntos de regulacin de la actividad telomerasa pueda estar en el mbito de la expresin de ambos transcriptos. Este modelo hace suponer que existen distintos tipos de regulacin de esta actividad en los humanos y probablemente obedece a la diferencia en la regulacin del ciclo celular de las clulas de los diferentes tejidos en los humanos19. Aspectos fisiolgicos de la actividad telomerasa y el telomero El tiempo de vida de las clulas humanas vara considerablemente de un tipo celular a otro. La mayora de las clulas de humanos tienen un tiempo de vida relativamente corto (aproximadamente 100 divisiones), mientras que otras estn dotadas de una longevidad excepcional, como es el caso de las clulas hematopoyeticas, piel, intestinales o endometriales, estas ltimas se dividen un gran nmero de veces durante el ciclo mestrual73. En contraste, existe una correlacin con la represin de la actividad de la telomerasa en clulas en maduracin terminal o en estado de diferenciacin.3 Un nmero de seales extra o intracelulares tales como la radiacin ultravioleta125, Zn97 interferon , estrgenos y citocinas34,88, afecta la actividad de la telomerasa. Por otra parte, en cuanto a las clulas de las lneas germinales responsables de la produccin de los gametos, el tiempo de vida es prcticamente ilimitado, ya que se propagan de una generacin a otra. Estos tipos celulares tienen en comn que compensan el acortamiento de los telomeros a travs de la sntesis de ADN telomerico por la enzima telomerasa. La enzima puede actuar varias veces sobre el mismo sustrato y a cada ciclo de sntesis agrega 6 nucleotidos 62 Durante la embriognesis, la actividad de la telomerasa est presente inicialmente en todos los tejidos, la cual va decreciendo gradualmente en el transcurso de su desarrollo138. En los humanos el gen hTERT presenta una sola copia localizada en la parte distal del cromosoma 5p15.3313, ocupando 37 kb y conteniendo 16 exones119. Se han realizado numerosos estudios en la regulacin del promotor hTERT137, el cual es blanco de numerosas vas de sealizacin celular, sin embargo no se conoce con certeza el mecanismo diferencial de transcripcin hTERT entre clulas normales y tumorales. Existe una variedad de factores transcripcionales que participan en la expresin gnica de hTERT114, entre los que se incluyen el Myc que induce actividad de telomerasa por incremento en los niveles de expresin de hTERT136, as como el Sp1, el receptor de estrgeno y NF-B145. La sobreexpresin de c-Myc conduce a un incremento significativo en la actividad transcripcional del promotor, habindose observado que el gen c-Myc se encuentra frecuentemente desregulado en los tumores humanos,

Arvelo y Morales donde la sobreexpresin de myc puede causar reactivacin de la telomerasa136. La ceramida endgena o exgena modula la actividad promotora hTERT va actividad proteoltica de la ubiquitina conjugada al factor de transcripcin c-Myc. 90 Se ha reportado que el arsnico inhibe la transcripcin del gen hTERT y que este proceso es mediado en parte por una disminucin de las actividades transcripcionales de c-Myc y Sp1. Myc y Mad1 presentan efectos antagnicos en la transcripcin de hTERT, siendo Mad inducido por tratamiento con 12-O-tetradecanoyl-phorbol13-acetato el cual acta como un represor sobre el promotor hTERT. La desmetilacin del ADN con 5azacitidina en lneas celulares induce la expresin de hTERT, lo que sugiere que la metilacin del DNA contribuye a la represin de hTERT en algunas clulas20,48. Por otra parte, hay factores post-transcripcionales que participan en el control de la funcin de la enzima, y se han identificado por RT-PCR al menos seis variantes de mRNA-hTERT, incluyendo la variante hTERT que presenta una deleccin en los resduos que participan en la actividad cataltica de la protena, por lo que inhiben dicha actividad endgena con el consecuente acortamiento del telomero127. Solamente los tejidos que expresan hTERT y que contienen los motivos completos de la transcriptasa reversa demuestran actividad cataltica131, existiendo una gran variedad de lneas celulares y tejidos tumorales que presentan diferencias considerables en su patrn de procesamiento, lo que sugiere el posible papel de variantes en la regulacin de la telomerasa65. Adems, el proceso de ensamblaje de la holoenzima est relacionado a la regulacin de hsp-90, protena que se encuentra muy elevada durante el proceso de la transformacin celular. En extractos celulares la adiccin de componentes purificados de la protena de choque trmico, la hsp-90, incrementa la reconstitucin de la actividad de la enzima3,22,121. La subunidad hTERT de la telomerasa parece ser fosforilada, y este proceso es modulado por una compleja red de proteinas quinasa que a su vez establecen enlaces entre la actividad de la telomerasa y las vas de las seales de traduccin. La protena quinasa C (PKC) es una quinasa serina/treonina responsable de las vas de seal de traduccin que dirige varios procesos fisiolgicos tales como la diferenciacin, proliferacin y expresin gnica. Las protenas quinasas aumentan la actividad de la telomerasa mediante la fosforilacin de hTERT71,78,79 e inversamente la protena fosfatasa 2A (PP2A) inhibe la actividad de la telomerasa. Es posible que PKC y PP2A esten relacionados recprocamente en el control de la actividad de la telomerasa, hecho consistente con la nocin de pensar que un balance entre PKC y PP2A juegan un papel importante en la tumorigenesis.78 Por otra parte, el componente RNA de la telomerasa, el hTR ha sido encontrado mutado en la disqueratosis congenita (DKC), que es un sndrome que se expresa en la mdula sea, caracterizado por pigmentacin anormal de la piel, leucoplasia y distrofia de las uas8. Las clulas DKC

Telomero, telomerasa y cncer tienen bajos niveles de hTR y de la actividad de la telomerasa, poseyendo adems telomeros cortos135. En contraste con hTERT, hTR no es un factor limitante para la actividad de la telomerasa, algunas veces hTR es considerado como basal con expresin ms o menos constante. En los humanos el gen hTR se encuentra ubicado en el cromosoma 3q2613 y tanto en ellos, como en las levaduras, la subunidad RNA es transcripta por una RNA polimerasa tipo II109. Semejante a hTERT, el gen hTR contiene islotes CpG y los elementos responsables para la actividad promotora estn contenidos en una regin de 231 pb anterior al sitio de inicio de la transcripcin. Es importante sealar que el promotor hTR es metilado en algunas lneas celulares ALT y est asociado con una ausencia total de expresin hTR en estas lneas, pero sin embargo no existen evidencias de metilacin del promotor hTR en tejidos somticos normales56. Telomeros y Envejecimiento Celular La senescencia se caracteriza por una condicin donde las clulas aunque viables y metabolicamente activas, no proliferan. 83 La transicin que ocurre en este proceso es en cierta forma semejante a la diferenciacin celular, ya que es irreversible y est acompaada de cambios morfolgicos y de expresin gnica. La senescencia se caracteriza morfolgicamente por un ensanchamiento y aplanamiento de las clulas ms cambios de expresin gnica, algunos de los cuales contribuyen a la induccin de la senescencia, mientras que en otros son la consecuencia. El primer grupo comprende la induccin de genes que codifican para la p21 y p16 e inhibidores de la proliferacin celular 4,7, mientras que para el segundo grupo se incluye la induccin de la SA--galactosidasa (SA siglas de senescence-associated), un marcador que permite la deteccin de clulas senescentes31. La senescencia es un proceso biolgico normal que afecta a casi todas las clulas del organismo humano, por lo que estudios recientes sugieren que la misma contribuye al envejecimiento del organismo y su principal papel podra ser prevenir el desarrollo del cncer, accin benfica que representara una ventaja evolutiva. Ya sabemos que en el curso de la carcinognesis varios mecanismos que controlan la proliferacin celular son destruidos y que cada etapa necesita la mutacin de un gen, la seleccin de clulas mutadas y una amplificacin de estas clulas que favorece la aparicin de nuevas mutacines42. Esto sugerira que la estructura del telomero juega un papel importante en el ciclo celular y en las vas de sealizacin que se activan por daos en el metabolismo celular, donde el hecho de que el mismo deba mantener una longitud mnima, indispensable para mantener la poblacin en constante divisin, sugiere que esta mnima longitud supone una estructura de la cromatina necesaria para mantener el correcto funcionamiento de esta regin de los cromosomas destruidos18, 68,132,141.

293 Por otra parte, se seala a TRF2 como una de las protenas responsables en la activacin de la senescencia, ya que se ha encontrado que la sobreexpresin de TRF2 en fibroblastos evidencian que el exceso de esta protena produce el acortamiento progresivo de los telmeros111. Por otra parte, debido a que la inhibicin de p53 puede retardar la senescencia y que TRF2 disminuye considerablemente sus niveles, se evalu si la sobre-expresin de TRF2 en clulas deficientes en p53 originara algn efecto sobre el punto de senescencia. Se evidenci que a pesar de la ausencia de una p53 activa, la sobre-expresin de TRF2 disminuy el punto de senescencia de 5kb a 3kb, lo que sugiere que el factor ms determinante en la senescencia es la estructura del telmero ms que su longitud, ya que an cuando los telmeros se acortaron mucho ms de lo necesario para que las clulas entrasen en senescencia, stas permanecieron en divisin por lo que esto parece ser ms dependiente de la estructura que forma TRF2 y el ADN telomrico ms que de la longitud del telmero61. Basndose en estos datos se ha propuesto un modelo que explica la relacin entre el telmero y la senescencia y que implica que el telmero puede encontrarse en dos formas o estructuras: una protegida (capped) y otra desprotegida (uncapped). La forma protegida constituye un complejo de protena-ADN con estructura T-loop, el cual es altamente cooperativo y protege el extremo de los cromosomas de la degradacin de las nucleasas y de la fusin72. El modelo desprotegido supone un telmero sin estructura T-loop, el cual se encuentra linearizado y susceptible a la degradacin por nucleasas y con tendencia a la fusin36. El estado protegido tiene lugar en telmeros largos, ya que estos pueden unir mayor cantidad de protenas y tendencia a formar T-loop, mientras que los cortos estaran en estado desprotegido debido a que no pueden unir suficientes cantidades de protenas para formar T-loop. Por otra parte, el telmero puede pasar del estado protegido a desprotegido y viceversa. Un telmero corto en estado desprotegido puede atraer actividad telomerasa y alargarse para formar entonces la estructura protegido, pero por el contrario, si un telmero largo con estructura protegido no mantiene su longitud, ste puede acortarse a tal punto de no tener suficientes sitios de unin para protenas telomericas y no formar estructura de protegido. Esto traera como consecuencia la susceptibilidad del telmero por las nucleasas133,134 y a la fusin de sus extremos, lo que dara lugar a estado de senescencia o inestabilidad cromosomica que a su vez disparara la seal para iniciar el proceso de la apoptosis7. Aunque la estructura del telmero y la actividad de la telomerasa se vinculen tanto al ciclo celular como al cncer, los supresores de la funcin telomerasa no son considerados oncogenes, ya que, aunque casi todas las lneas celulares tumorales expresan actividad telomerasa, estas no tienen un control activo sobre el ciclo celular y no basta solo su presencia para inmortalizar una lnea celular. Sin embargo, una clula

294 cancerosa necesita tener actividad telomerasa, ya que sin su presencia la longitud del telmero disminuye, lo que generar una inestabilidad cromosmica y la apoptosis. En tal sentido, la actividad telomerasa o sus represores son un requisito para la clula cancerosa, pero a su vez, no son los responsables de originar una clula cancerosa50,123. Ciclo Celular y Senescencia Dos sistemas, el p16lnk4a/pRB y p53/p21waf1 estn involucrados en el proceso de la senescencia y sus efectos bloquean el ciclo celular. Un componente importante del primer sistema es la induccin del gene que codifica para la protena p16lnk4a, que es un inhibidor de la kinasas CDK4 y CDK6. Estos dos ltimos, miembros de la familia de las CDK (cyclin-dependent kinase), controlan los puntos de transicin que se encuentran entre cada una de las diferentes fases del ciclo celular, las fases G1, S, G2 y M76. La protena pRB bloquea la transicin de G1 a S y su actividad es inhibida cuando es fosforilada por las kinasas CDK4 y CDK6; la induccin de p16lNk4a inmoviliza el ciclo celular inhibiendo la fosforilacin de pRB. El segundo sistema acta cuando la senescencia es independiente del primer sistema y su accin sobre la proliferacin celular es ms global, siendo uno de sus mayores componentes la activacin del factor transcripcional p53, que una vez activado estimula la transcripcin de numerosos genes, entre los cuales se encuentra el que codifica para la protena p21WAF1 33 Esta ltima bloquea el ciclo celular a dos niveles: por una parte inhibe al antgeno PCNA ( proliferation cell nuclear antigen), un factor esencial en la replicacin del ADN; por otra parte bloquea el conjunto de las CDK. En las clulas senescentes, la protena p53 es activa y los niveles de expresin de p21 y p16 son elevados, por otra parte la protena pRB es hipofosforilada4,118. El antgeno T del virus SV40, una oncoprotena, se asocia a p53 y pRB inactivndolas, bloqueando la accin de estos dos sistemas contra la senescencia y aumentando la duracin de vida de las clulas139. En clulas humanas en cultivo, el momento de la induccin de la senescencia es determinada por el nmero de divisiones celulares que han efectuado, ms que por el tiempo cronolgico que han pasado en cultivo83. As, si el nmero de divisiones celulares son artificialmente disminuidas, entonces el nmero de divisiones que sern ejecutadas, ser la misma por un tiempo cronolgico ms largo. Si una poblacin celular es congelada 20 divisiones antes de la senescencia y aos ms tarde es vuelta a colocar en cultivo, las clulas tendrn las 20 divisiones que le restan, lo que implica la existencia de un reloj mittico capaz de contar el nmero de divisiones celulares. La naturaleza de este reloj ha permanecido por mucho tiempo en el plano especulativo y algunos mecanismos han sido propuestos, tales como la disminucin progresiva de la metilacin del genoma; la acumulacin aleatoria de mutaciones en los genes; la

Arvelo y Morales acumulacin de protenas incorrectamente replicadas y las prdidas progresivas de zonas heterocrmaticas en el genoma. En 1973, Olovnikov fue el primero en sugerir que el acortamiento de las extremidades de los cromosomas limita la duracin de vida de las clulas y segn su modelo, el acortamiento de los cromosomas conduce a la eliminacin de genes esenciales que hacen que disminuya la vitalidad de las clulas100. Sin embargo se sigue pensando que la senescencia es inducida por mecanismos menos destructores, pero ms complejos. Es un hecho de que existen en las clulas humanas sistemas que reparan daos en el ADN, los cuales, una vez activados, bloquean la divisin celular y ponen en marcha los mecanismos de reparacin del acido nucleico. Cuando estos daos son causados, por ejemplo, por rayos gamma, que originan rupturas en los cromosomas, estos sistemas producen un estado similar a la senescencia. En el curso de esta transicin, que est acompaada de una activacin de p53 y una induccin de p21WAF1 y p16INK4a, el ciclo celular se encuentra irreversiblemente bloqueado30. Ahora bien, los telomeros son susceptibles a rupturas en el ADN que podran potencialmente inducir la activacin de estos sistemas que sern bloqueados por un complejo denominado telosoma, que protege la extremidad de los telomeros. Este modelo de mecanismo propone que cuando un telomero se hace demasiado corto, el telosoma se disocia o cambia de conformacin y que este evento induce a la senescencia, exponiendo los telomeros a los sistemas de vigilancia de la integridad del genoma. Aqu cabe preguntarse cuales son las protenas integrantes de los telosomas y su particular papel que juegan en la induccin de la senescencia. El conocimiento que se tienen acerca de la estructura del telosoma es fruto de los estudios que se han llevado a cabo en levaduras. El de la levadura Saccharomyces cerevisae est constituido por ocho protenas diferentes y una de ella es Rap1p, que forma homodimeros que reconocen la secuencia de repeticiones telomericas, permitiendo asi la formacin de un complejo ms grande constituido por la protenas Rif1p, Rif2p,Sir2p,Sir3p y Sir4p,12 lo que sugiere que la formacin de este complejo confiere a la cromatina una estructura ms compacta que la hace inaccesible a factores de transcripcin, la telomerasa y los sistemas de vigilancia de la integridad del genoma. Cuando el telomero se acorta y el nmero de molculas Rap1, a los cuales est asociado, es insuficiente, este complejo se disocia o cambia de conformacin, lo que permite el acceso de la telomerasa114. En las clulas humanas, el factor Rap1p es remplazado por dos ortlogos, los factores hTRF1 y hTRF2 (TRF: TTAGG repeat factor). El papel del primero es similar al de Rap1, es decir, controlar el acceso de la telomerasa a nivel de cada uno de los telomeros17,128, mientras que el segundo bloquea la activacin de los sistemas de vigilancia de la integridad del genoma y es esencial para la formacin de la estructura en lazo tipo T o T-loop, la cual protege la extremidad de los telomeros. El T-loop se origina, como ya hemos visto,

Telomero, telomerasa y cncer por un repliegue de los telomeros y por la insercin de la extensin simple cadena 3 en la seccin doble cadena de los telomeros, donde ella se hibrida a la cadena de la cual es complementaria. La introduccin de una mutante dominante negativa de hTRF2 conduce a la destruccin del bucle T; a la activacin de p53; a la induccin de la SA--galactosidasa y a la detencin del ciclo celular, mimetizando la senescencia44,60. La activacin de la p53 y la induccin de la senescencia son dependientes de la funcionalidad del gen que codifica para ATM (ataxia-telangiectasia mutation), una quinasa activada por la presencia del daos en el ADN75. Ahora bien, la quinasa ATM puede asociarse a p53 y activarla por fosforilacin en su dominio amino terminal64, lo cual sita la funcin de la quinasa entre el reconocimiento de los telomeros que han estado expuestos y la activacin de la p5315. Por otra parte, una molcula que podra participar en la activacin de la p53 es la poly(ADP-ribose)polymerase (PARP)23,113, enzima que utiliza una estructura en dedos de zinc para buscar interrupciones en la doble hlice de ADN. Despus de identificar un defecto, la PARP sintetiza un plimero de ADP-ribosa, la cual se une entre otras protenas a la p53, formando con est ltima un complejo el cual es esencial para la activacin de la p53. Su inhibicin conduce, por lo tanto, a la prolongacin de la duracin de vida de las clulas117,129. Inhibidores de la Telomerasa En el hombre existe una prdida programada del ADN telomrico en las clulas somticas, siendo esta dinmica particular probablemente debida a la ausencia de la telomerasa funcional, que podra limitar las capacidades replicativas, pudiendo servir, en principio, como un mecanismo supresor de tumores, ya que con frecuencia se ha propuesto que la activacin de la telomerasa y la reversin de la prdida del telmero participan en la carcinognesis140. Por otra parte, de acuerdo con esta hiptesis, la proliferacin ilimitada de las clulas in vitro est correlacionada al alargamiento del ADN telomrico. Esta estabilizacin de las extremidades est directamente relacionada a una disminucin de la inestabilidad del cariotipo de estas clulas, reforzando la idea de que los telmeros son indispensables para la integridad del genoma24. Como la telomerasa es sobreexpresada en tumores, pero no en muchas clulas somticas normales, existe una caracterstica diferencial de expresin entre las clulas tumorales y normales, lo que hace a la telomerasa un blanco para drogas antitumorales. Diferentes estrategias han sido desarrolladas para inhibir la actividad de la telomerasa e interferir con el desarrollo del tumor, siendo blancos potenciales la subunidad cataltica; el RNA componente de la telomerasa y otras protenas asociadas con la telomerasa y el ADN telomerico. La bsqueda de inhibidores de la telomerasa ha sido posible por la introduccin de pruebas enzimticas que

295 permite medir semicuantitativamente la actividad de la telomerasa en extractos celulares. La tcnica TRAP (telomere repeat amplification protocol), basado en la amplificacin de repetidos telomricos, permite detectar actividad hasta en un mnimo de 10 clulas. Sin embargo se ha detectado actividad de telomerasa en ciertos tipos de clulas normales y en algunos tumores benignos, por lo que se ha recomendado el uso de diluciones seriadas y controles internos para minimizar los falsos positivos.66 Por otra parte, se han desarrollados anlisis cuantitativos basados en RT-PCR a tiempo real, siendo una de las tcnicas ms confiables con la que se dispone en la actualidad. Hay que sealar que la regulacin de la actividad de la telomerasa est altamente correlacionada con la expresin de hTERT26 donde su mRNA presenta algunas variantes por procesamiento alternativo que genera variantes inactivas, por lo que, las tcnicas de RT-PCR deben ser realizadas con un diseo de primers que permita diferenciar estas variantes58. Recientemente, estas pruebas enzimticas han sido aplicadas para la evaluacin sistemtica de miles de productos qumicos y desarrollar inhibidores de la actividad de la telomerasa53. Inhibidores como blanco teraputico para la hTERT como subunidad cataltica La protena hTERT representa el factor limitante de la actividad de la telomerasa, adems de la existencia, en clnica, de inhibidores de la transcriptasa reversa, los cuales pueden ser de dos clases: a) Anlogos de nuclesidos que presentan actividad antitelomerasa, como la Azidotimidina (AZT), que es un potente inhibidor de los telomeros en clulas tumorales y promueven la muerte celular93. b) Los L-enantiomeros NTPs, L-dTTP y L-dGTP, que inhiben la actividad de la telomerasa143. Un potente nuclesido inhibibidor de la telomerasa, 6tio-2-deoxiguanosina5-trifosfato (TDG-TP) presenta un valor muy bajo de IC50 y con una gran especificidad con respecto a otras transcriptasas reversa.37 El 2,3-deoxiguanosina 5-trifosfato, carbovir 5-trifosfato y D-carbociclico-2deoxiguanosina 5-trifosfato son tambin otros inhibidores de la actividad de la telomerasa. El screening de 16.000 productos sintticos origin solamente seis compuestos con inhibicin de la actividad de la telomerasa, que incluyen cuatro derivados isotiazolona. El ms potente inhibidor es el 2[3-(trifluorometil)fenil]isotiazolina-3-ona (TMPI) que tiene un valor de IC50 ( 1M) y que inhibe la telomerasa actuando sobre los residuos de cisteina53. La rubromicinas y sus anlogos ( quinonas, antibioticos que poseen anillos benzofurano y benzodipirano) inhiben la telomerasa humana con una IC50 de 3M126. Un derivado amida carboxlica (BIBR) con una IC50 de 0.093M que

296 interacta con la subunidad cataltica e induce un acortamiento del telomero25. Oligonucletidos antisentido han sido utilizados para inhibir la subunidad cataltica mRNA, siendo el fosforotioate anti-hTERT un oligmero de aproximadamente 20-22 bases de largo que induce inhibicin de la viabilidad en la lnea celular DU145107 de cncer de prstata. Por otra parte,inhibidores de la fosforilacin de hTERT han sido utilizados tales como las protenas quinasa C (PKC): bis-indolilmaleimida I y H-7, las cuales originan una fuerte inhibicin de la actividad de la telomerasa en clulas tratadas71. Inhibiendo la transcripcin de hTERT es una manera especfica para lograr la inhibicin de la telomerasa, estudindose alguna posibilidad con el arsnico, que es efectivo en el tratamiento de algunas leucemias, a pesar de sus propiedades carcinognicas, habindose demostrado que inhibe la transcripcin de hTERT y que esto puede ser explicado en parte por una disminucin de las actividades de los factores de transcripcin c-Myc y Sp121. Inhibidores como blanco teraputico para el ARN (hTR) El ARN de la telomerasa (hTR) es absolutamente necesario para la transcripcin reversa de la telomerasa y por lo tanto un blanco natural para los agentes antitelomerasa. A diferencia de hTERT, el hTR est presente en muchos tejidos normales que no expresan actividad de telomerasa y ningn papel ha sido demostrado para el mismo en clulas telomerasanegativas. Como consecuencia, la inhibicin de hTR en estas clulas telomerasa-negativas, tales como las clulas somticas normales, no parece tener efectos txicos. Oligononucletidos fosforotioate (PS) inhiben la telomerasa de una manera no selectiva y probablemente interactua con la subunidad cataltica, mas que con el ARN. El 2-0-metil-ARN ( 2-0-MeARN) inhibe a la telomerasa con una potencia superior a la que poseen los anlogos PNAS a pesar de una baja afinidad por el ARN complementario.98 Otras molculas antisentido tales como los derivados de fosfororamidates, incluyendo el 2-deoxi-, hidroxi-,metoxiy el fluor-N3P5 fosforomidates fueron ensayados contra la telomerasa in vitro, demostrndose especificidad y actividad dosisdependiente con una IC50 con valores en el orden de 1nM104. Los oligonucetidos con alta actividad antitelomerasa son complementarios para una significativa porcin de la regin molde, especialmente el segmento rCCC. Otros dos sitios en la secuencia primaria son susceptibles a la inhibicin por fosforamidates con un valor para la IC50 de 0.4nM45,55. Las ribozimas contienen 2 componentes esenciales: por un lado, las secuencias de reconocimiento del ARN sustrato (por apariamiento de bases complementarias) y, por otro lado, su centro cataltico que adopta una estructura tridimensional denominada cabeza de martillo (hammerhead), y produce la escisin del ARN sustrato, inactivndolo y suprimiendo la sntesis de la

Arvelo y Morales protena correspondiente. Se han ensayado ribozimas para la destruccin selectiva contra el componente ARN de la telomerasa humana presentando una actividad especfica de escisin con la consiguiente inhibicin de la actividad de la enzima telomerasa en extractos celulares. La introduccin de ribozimas en clulas malignas del endometrio son capaces de inhibir la actividad de la telomerasa146. Un anti-hTR ribozimas, incluido en clulas de melanoma, inhibe la actividad de la telomerasa en estas clulas38. Una secuencia de ribozimas fue clonada en un vector de expresin y transfectada en la lnea celular JR8, obteniendose clones que presentaron una reducida actividad de la telomerasa, as como un aumento en el tiempo de duplicacin. La sntesis de ADN telomerico por la transcriptasa reversa involucra la formacin transitoria de un duplex DNA/ARN; molculas que interacten con este duplex pueden inhibir la enzima bien sea impidiendo la separacin de las hebras o distorsionando el substrato105. La modificacin del hTR ARN puede contener moldes mutados que originen un decrecimiento de la viabilidad celular e incremento de la apoptosis en lneas celulares tumorales de prstata (LNCaP) y de mama (MCF-7)67. La sntesis de secuencias mutadas puede afectar la estructura del telomero en clulas humanas, por lo que la toxicidad de las mutantes telomerasas, es debido a una disfuncin de la subunidad ARN. Estos resultados soportan el hecho de que el uso potencial de estos moldes mutados podran ser utilizados como una estrategia antineoplsica47. Otro componente de la telomerasa que puede actuar como blanco es la protena de choque trmico hsp90, en la que su inhibicin bloquea el ensamblaje de la telomerasa activa. La geldanamicina, cuyo blanco es hsp90, reduce parcialmente la actividad de la telomerasa84. Por otra parte, se conocen inhibidores que tienen como blanco el ADN telomerico ms que actuar sobre la misma telomerasa, tal es el caso del Cisplatino, que reduce la actividad de la telomerasa de una manera especfica y dependiente de la concentracin, como se ha observado en el cncer testicular14. Dosis subletales del alcaloide vincristina induce a una reduccin en la actividad de la telomerasa en tres diferentes lneas celulares de linfoma80. El etoposido no inhibe propiamente la telomerasa pero produce lesiones al telomero, por lo que puede interferir con la replicacin del mismo147. Las radiaciones ionizantes tambin modulan la actividad de la Telomerasa, habindose observado un decrecimiento de la actividad de la telomerasa en proporcin a la regresin del tumor despus de la radioterapia106. Inhibidores que no presentan un blanco teraputico especfico En la actualidad existen un mayor nmero de inhibidores que como blanco actan contra la actividad de la telomerasa; tal es el caso de los sealados anteriormente. Sin embargo, existen algunos de ellos

Telomero, telomerasa y cncer cuyo blanco no es preciso y as su objetivo de impacto bien podran ser la subunidad cataltica, el ARN o el sitio de reconocimiento de la holoenzima. En base a esta consideracin, podemos pensar que la telomerasa, al ser principalmente expresada por las clulas tumorales, el uso de secuencias regulatorias de la transcripcin (hTR y hTERT) puede conducir a la sntesis de un gen suicida que puede eliminar selectivamente las clulas tumorales. Por tal consideracin, se construyo un vector de expresin conteniendo el gen con la cadena A de la toxina de la dipteria (DT-A), y se ha fusionado con secuencias regulatorias de la transcripcin de hTR y hTERT, con lo cual se obtuvo inhibicin de la sntesis de la protena en clulas del carcinoma de vejiga e hgado transfectadas con este plsmido.1 La induccin de la expresin del gen Bax por intermedio del promotor hTERT promueve la apoptosis in vitro e inhibe el crecimiento tumoral46. La construccin de un vector de expresin constitutido por caspasa-6 bajo el control del promotor hTERT ( hTERT/rev-caspase-6) promueve la apoptosis en clulas de glioma69. La subunidad cataltica es capaz de activar una respuesta por parte de los linfocitos T citotxicos (CTL)87. La inmunizacin contra TERT, estimula a los linfocitos T citotxicos que lisan las clulas tumorales de melanoma y timona e inhibe el crecimiento de diferentes tumores en raton96. Por otra parte, se han reportado inhibidores sin que se tenga una descripcin precisa de su mecanismo de accin, como es el caso de las quinolonas, ofloxacina y levofloxina que inhiben la actividad de la telomerasa en lneas celulares de carcinoma123,142. Galato de epigalocatequina (EGCG), con una IC50 de 1M, interacta con la telomerasa e induce un acortamiento del telmero y posterior senecencia en clulas cancerosas94. El Alterperynol, un

297 metabolito obtenido de hongos, inhibe la actividad de la telomerasa humana124. Un derivado de la rodocianina, MKT077 presenta una inhibicin de 50% con un valor de 5M, a su vez un derivado de MKT077, el FJ5002 con una IC50 de 2M incrementa una progresiva erosin en los telomeros y aumentando una inestabilidad cromosmica. Telomestatin con una IC50 de 0.005M y aislado de Streptomyces anulatus se presenta como el ms potente inhibidor de la actividad de la telomerasa95,112. Muchas perspectivas han sido abiertas por la hiptesis segn la cual muchos canceres deben activar la enzima telomerasa para desarrollarse. Sin embargo, hay preguntas que estn en suspenso requiriendo mayor informacin, tales como: La activacin de la telomerasa es necesaria para la inmortalizacin o aparece una vez que la clula es inmortal? El acortamiento de los telmeros es causa de la senescencia? El mecanismo de mantenimiento de la longitud de los telmeros, que son telmerasa independientes, corren el riesgo de volver ineficaces a las drogas antitelomerasas? A pesar de estas incertidumbres, es necesario constatar que la telomerasa puede cumplir con muchos de los criterios para ser blanco especfico para la aplicacin de una terapia antitumoral. Las drogas antitelomerasa parecen ser, as, en el futuro, un complemento para los tratamientos antineoplsicos convencionales actuales, sobre todo, cuando la masa tumoral es pequea, por lo que esta terapia es prometedora para tratar de erradicar la enfermedad infraclnica.

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