PRACTICA N 03 ORGANIZACIN DE LA MATERIA VIVA: BIELEMENTOS, CARBOHIDRATOS Y LIPIDOS

I.

INTRODUCCIN Los seres vivos son sistemas formados por numerosos elementos. Se ha encontrado que la materia viva est constituida por proporciones variables de unos 65 a 70 elementos, denominados en conjunto BIOELEMENTOS O ELEMENTOS BIOGENICOS. Slo seis elementos se encuentran formando la mayor parte de la masa de un organismo (96 a 98%). Estos elementos son Carbono (C), Hidrgeno (H). Oxigeno (O), Nitrgeno (N). Azufre (S) y Fsforo (P) a los que se les llama BIOELEMENTOS PRIMARIOS por ser indispensables en la sntesis de carbohidratos, lpidos protenas y acido nucleicos. Otro grupo ms numeroso de elementos constituyen los BIOLEMENTOS SECUNDARIOS, entre los que se encuentran los llamados que son: Calcio (Ca), Hierro (Fe), Silicio (Si), Cobre (Cu), Magnesio (Mn), Boro (B), Flor (F) y Yodo (I); y los variables, que pueden faltar en algunos organismos, como son: Bromo (Br), Cinc (Zn), Titanio (Ti) Vanadio (V), Plomo (Pb), Cobalto (Co) y Aluminio, etc. Un tercer grupo de elementos que se encuentran en proporciones inferiores al 0 1% se denominan OLIGOELEMENTOS Entre stos pueden considerarse a muchos elementos indispensables. Los elementos integrantes de los seres vivientes se presentan en forma de iones, molculas y partculas coloidales, entre las cuales podemos citar el agua, sales minerales, carbohidratos, lpidos, protenas cidos nucleicos y vitaminas La presente prctica abordar el reconocimiento de cuatro de los bioelementos primarios (C, H, O, N), como componentes de algunas molculas (H20 CaC03, NH3); de separar algunas molculas principales de los carbohidratos y de algunas caractersticas de los lpidos.

Los objetivos de esta prctica son reconocer en nuestras orgnicas, los elementos C, H, O y N como constituyentes principales de la materia viva, determinar el contenido de agua y sales.

1. Determinar el contenido de agua y sales minerales en nuestras orgnicas. 2. Identificar los carbohidratos ms importantes. 3. Reconocer lpidos a travs de sus propiedades ms importantes. II. MATERIAL Y METODO 2.1. Materiales, Equipos y Reactivos 2.1.1. Proporcionados por laboratorio - Mortero y piln - Kitasatos - Mangueras - Mecheros - Gradillas - Petris - Matraces - Estufa - Mufla 2.1.2. Aportado por los alumnos - Porcin de pollo, un pescado fresco (jurel, sardina o anchoveta), arteria. - taza de leche de vaca. - Una copa de aceite comestible - Fsforo, tijeras, navajas - Papa, almidn - Bilis 2.2. PROCEDIMIENTO Reconocimiento de elementos 2.2.1. Reconocimiento de C, H, O y N - Agua de cal - Hidrxido de sodio - cido Clorhdrico - Oxido de Calcio - Lugol - Reactivos de Feling Ay B - Lactosa

a. Fundamento.- Toda materia orgnica presenta los elementos C, H, O y N en sus composicin, los cuales se ponen de manifiesto al calentar materia orgnica hasta su combustin completa. el agua (H y O) se presenta al principio como gotas de agua evaporadas de la muestra, el nitrgeno (N) como vapores blanquecinos con olor caracterstico y el carbono (C), como residuo en el carbn. b. Tcnica: - En un tubo de ensayo limpio y seco, colocar 5 gramos de pollo (pescado) finamente picado - Llevar al calor (mechero) - A medida que se va calentando, observar la formacin de gotas pequeas de agua (H y O), en las paredes del tubo El desprendimiento de vapores blanquecinos con olor a cuerno quemado indican el nitrgeno (N). y el residuo quemado en el fondo del tubo, la presencia de carbono (C).

2.2.2. Determinacin del contenido de agua a. Fundamento.- El contenido de agua se obtendr por diferencia, entre el peso de la muestra hidratada y el peso de la muestra seca, al haber perdido el agua por evaporacin.

b. Tcnica: - Pesar una muestra pequea de materia orgnica (10g), en una cpsula previamente tarada. - Colocar la muestra a deshidratar en una estufa a temperatura de I050C por 2.5 horas. - Controlar el peso hasta que se mantenga constante. - Relacione la diferencia de peso con respecto al peso inicial (peso hmedo) expresarlo en porcentaje 2.2.3. Reconocimiento de Carbohidratos A. Reconocimiento de glucosa (reaccin de Fehling) a. Fundamento.- Los monosacridos en solucin fuertemente alcalina, son reductores muy enrgicos, ya que en pH muy altos sufren enolizacin, formando compuestos

denominados ENEDIOLES muy reactivos que se oxidan fcilmente Como consecuencia de ello, reducen los iones cpricos (Cu-2).

En la reaccin de Fehling, el reactivo Fehling A proporciona los iones Cu-2, que van a ser reducidos. El reactivo Fehling B. formado por tartrato sdico-potsico e hidrxido sdico proporciona la alcalinidad necesaria para que el proceso se realice Al calentar un azcar reductor con uno de los reactivos de cobre alcalino ocurre el siguiente proceso:

Azcar + Alcali ---- ENEDIOLES (reductores del complejo + cprico-tartrato) -2 Cu Cu2O + H2O ---Oxido cuproso (Rojo ladrillo) 2(Cu OH) -------Cu-2 + HO (mezcla de cidos azucareras) Hidrxido Cuproso (amarillo)

La glucosa se oxida y reduce los iones cpricos que pasan a cuprosos (Cu-1). Estos se combinan con los iones hidrxido, formando hidrxido cuproso (amarillo), que por el calor se convierte en xido cuproso (rojo ladrillo)

b. Tcnica: - Colocar en un tubo de ensayo cantidades guales (2ml) de soluciones A y B de Fehling. - Llevar al calor hasta ebullicin para asegurarse que no hay autorreduccin. - Aadir solucin de glucosa gota a gota a medida que se va calentando y se observar a formacin de una precipitado rojo ladrillo (xido cuproso)

B. Reconocimiento de Almidn a. Fundamento.- El almidn cuando est bajo forma de micelas se tie de color azul por el yodo La AMILOSA en disolucin coloidal toma color azul, la AM1LOPECTINA da color violceo El resultado final del reconocimiento es la aparicin, en el tubo de ensayo, de un color azul violceo brillante El lugol contiene yodo en su composicin. b. Tcnica: - Machacar en un mortero, una porcin de papa pelada. - Agregar agua destilada (unos 20 ml.), mezclar y decantar el sobrenadante en un tubo de ensayo.

- Tomar en tubo de ensayo 2 ml de lquido sobrenadante obtenido en el paso anterior y en otro tubo tomar 2 ml de solucin de almidn previamente preparada. - Dejar caer lugol, gota a gota a ambos tubos y agitar simultneamente - Observar, explicar y anotar lo que ocurre en ambos tubos. 2.2.4. Reconocimiento de Lpidos A. Insolubilidad en agua a. Fundamento.- Los lpidos poseen en su estructura qumica radicales lipfilos (-CH3, -CH2-. CH2-CH; etc.) capaces de establecer enlaces de Van der Waals con otros grupos o molculas lipfilicas; y el grupo carboxilo (-COOH) que en medio acuoso se comporta como cido liberando un protn (IT) y quedando en forma polar (-COO-). Esto permite establecer atracciones de tipo elctrico con molculas de agua u otros grupos polares (el grupo carboxilo es hidrfilo). Por todo lo anterior, los lpidos en agua se ubican poniendo en contacto con el agua sus grupos hidrfilos y alejando de ella sus cadenas lipfilas. Los grupos lipfilos predominan sobre los grupos hidrfilos. b. Tcnica: - En dos tubos de ensayo tomar 1 ml de aceite y luego aadir 5 ml de agua destilada. - Tapando la boca del tubo agitar fuertemente, observar la formacin de una suspensin inestable que tiene a separarse. - Agregar a un tubo 2 ml de bilis y al otro 2 ml de NaOH al 20%. - Agitar fuertemente y dejar en reposo durante 1 Observar la formacin de una solucin estable

(emulsin), comparar ambos tubos y explique la accin de la bilis. B. Solubilidad en solventes orgnicos (cloroformo, ter, benceno, etc.) a. Fundamento.- La predominancia de los grupos lipfilos sobre los grupos hidrfilos en los lpidos permite la formacin de enlaces de Van der Waals. Con otros grupos o molculas lipfilas. Esto es lo que ocurre en las soluciones de lpidos con solventes orgnicos. b. Tcnica: - Colocar en un tubo de ensayo 0.5 ml de aceite. - Aadir 3 ml de cloroformo, ter o benceno. - Agitar el tubo fuertemente - Observar la solubilidad del aceite y comparar con la experiencia 4 3 1 en el segundo paso. C. Saponificacin a. Fundamento.- El trmino saponificacin describe la hidrlisis de steres en general Los glicridos son esteres de cidos grasos y glicerina La hidrlisis alcalina de glicridos (grasas) conduce a la formacin de sales de los cidos grasos que reciben el nombre general de jabones. En la industria esta hidrlisis se usa para la obtencin de jabones y glicerina. En el ser vivo, la hidrlisis de triglicridos se efecta mediante la accin de enzimas especficas (lipasas) que producen cidos grasos y glicerina. b. Tcnica: - Colocar en un tubo de ensayo 0.5 ml de aceite. - Aadir 1 2 ml de alcohol para facilitar la saponificacin. - Agregar 0,5 ml de solucin de hidrxido de sodio 40%.

- Calentar

por

algunos

minutos

(agitando

con

precaucin). - Dejar enfriar y aadir 5 ml de agua - Agitar fuertemente el tubo de ensayo - Observar la formacin de espuma que indica la presencia de jabn.

III.

RESULTADOS Representar mediante esquemas sus resultados obtenidos.

IV.

DISCUSION Consultar la bibliografa recomendada y explicar los resultados obtenidos en la prctica.

V.

CONCLUSIONES Anotar sus conclusiones de la prctica de acuerdo a los objetivos propuestos, resultados y discusin correspondiente.

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS HAAPER. E. 1976. Manual de Qumica Fisiolgica 5 Edic. 653 p HEREJERA P 1967 Bromatologa. II parte Universidad Nacional de Trujillo. KIMBALL. J 1982. Biologa. Fondo Educativo Interamericano, S.A 4ta Edic. Mxico SS3 p. NASSON. a. 1972. Bioqumica. Edic. Omega, S.A. Barcelona 8S7 p.

VII. CUESTIONARIO 1. Un alimento enriquecido con L-glucosa. podra ser metabolizado por el organismo humano, explique su respuesta. 2. El almidn puede ser sintetizado por el organismo humano? Puede ser aprovechado. Explique. 3. Cmo se llama el polisacrido fuente energtica principal del organismo humano? 4. Cul es la estructura qumica de los siguientes compuestos?

La Sacarosa La Maltosa La Lactosa

5. Identifique y represente la unin de las molculas en la formacin de almidn, glucgeno y celulosa. 6. Investigue en la bibliografa la reaccin de la saponificacin y presenten forma esquemtica, los reaccionantes y los productos. 7. Explique a qu se debe la diferencia de estado entre grasas slidas y lquidas, a nivel molecular. 8. Recuerde cules son las [unciones principales que cumplen las grasas en los organismos vivos. 9. Explique cincos ejemplos en los cuales aplique los conocimientos de la presente prctica a su especialidad.

PRACTICA N 04 RECONOCIMIENTO DE LAS PROTEINAS V SUS PROPIEDADES I. INTRODUCCION Las protenas constituyen un conjunto de sustancias nitrogenadas que son los componentes fundamentales de la materia viviente, de la que forman el 50% del peso seco. En ellos hay siempre C. O. H, N, y adems, generalmente S y P. junto a otros elementos. Las protenas resultan de la asociacin de sustancias simples llamadas aminocidos los que a su vez estn constituidos por cidos orgnicos y radicales amino. Entre las principales caractersticas de las protenas est su estructura y su elevado peso molecular que oscila entre 6.000 a muchos millones de daltons; esto determina propiedades caractersticas de solubilidad en agua y soluciones salinas, as tambin su desnaturalizacin o precipitacin por accin de cidos y lcalis fuertes o dbiles. Las protenas son elementos constitutivos de hormonas, enzimas, o como elementos estructurales del cuerpo: pelos, lana, colgeno, queratina. etc... Otras protenas participan en la contraccin muscular o el transporte de oxgeno a los tejidos. La presente prctica esta orientada que el alumno realice algunas experiencias de laboratorio que permitan el reconocimiento de protenas y el estudio de algunas de sus propiedades. Los objetivos de esta prctica son: reconocer a las protenas en diferentes muestras biolgicas e identificar las principales propiedades de las protenas. II. Materiales, Equipos, Reactivos - Tubos de ensayo - Pipetas - Mechero - Gradila - Solucin de albmina al 2% - Solucin de hidrxido sdico al 20% - cido ntrico al 25%

- Amoniaco al 25% - Acetato de plomo al 10% - Cloruro de mercurio al 15% 2.9.2. Materiales proporcionados por los alumnos: - Un (01) huevo por grupo de trabajo. 2.2. Procedimiento 2.2.1. Reaccin de Biuret Es un mtodo cualitativo para determinar de protenas, que sirve como base para cuantificar la presencia de las mismas en muestras biolgicas. Todas las protenas dan la reaccin de Biurer, la cual es caracterstica de las sustancias que poseen dos o ms enlaces peptdicos. Tcnica: a) Colocar en un tubo de ensayo 3 ml de la solucin de albmina b) Seguidamente aadir 3 ml de la solucin de hidrxido sdico c) Dejar en reposo 3 4 minutos. d) Aadir 3 o 4 gotas de sulfato cprico e) La reaccin positiva se manifiesta con la aparicin de un color azul violeta 2.2.2. Reaccin Xantoproteica Se emplea para determinar la presencia de protenas que contienen a los aminocidos troxina y triptfano. Esta reaccin consiste en adicionar cido ntrico concentrado a las protenas, lo que formar un precipitado blanco que deviene a amarillo al calentarlo, adquiriendo color anaranjado cuando se alcaliniza la solucin. Tcnica:
a) Colocar en un tubo tic ensayo i mi (le solucin de albmina b) Aadir 3 ml de cido ntrico concentrado. c) Observar la formacin de un precipitado blanco lechoso d) Llevar al calor del mechero hasta la aparicin de un color amarillo.

e) Enfriar el tubo de ensayo en chorro de agua fra. f) Luego aadir amoniaco en exceso g) Observar la aparicin de un color anaranjado (reaccin positiva)

2.2.3. Reaccin de la Cistina. Esta reaccin se emplea para determinar cualitativa de las protenas cistena. El azufre contenido en estos aminocidos se combinan con el plomo del acetato pata formar sulfuro de plomo de color pardo oscuro Tcnica: a) b) c) d) Colocar en tubo de ensayo 1 ml de solucin de albmina Agregar 5 a 8 gotas tic acetato de plomo 10% Observar la formacin de un precipitado blanco lechoso Aadir Solucin saturada de hidrxido de sodio, en cantidad suficiente para disolver el precipitado. e) f) Calentar el tubo de ensayo hasta ebullicin Observar la formacin de un color pardo oscuro (reaccin positiva)

2.2.4. Precipitacin de las protenas por cidos fuertes y por sales metales pesados. Entre las principales propiedades de las protenas esta la precipitacin por concentraciones elevadas de sales inorgnicas, as tambin las protenas precipitan o se desnaturalizan por accin de los cidos o bases fuertes dando origen a cationes y aniones respectivamente.

Tcnica: a) Rotular cuatro tubos de ensayo del I al IV y armar el siguiente sistema.

COMPONENTES

TUBOS DE ENSAYOS

I Albmina HNO3, concentrado NaOH Sol. Saturada Acetato de Plomo Cloruro de Mercurio 2 ml 8 gotas -

H 2 ml

IlI 2 ml -

IV 2 ml 1 ml

l ml

1 ml

Observar lo que sucede en cada tubo y anotar sus resultados

III.

RESULTADOS Represente mediante esquemas los resultados obtenidos.

IV.

DISCUSION Consultar la bibliografa recomendada y explicar sus resultados obtenidos.

V.

CONCLUSIONES Anotar sus conclusiones de acuerdo a los objetivos y resultados obtenidos

VI.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS VILLES, C. SALOMN. E. y DAVVIS. P W I9S7 Biologa. Nueva Edit Interamericana, S.A. Mxico HARO, V; A 1988 Biologa. Ediciones Jouer Espaa. SALOM F; CANTARIMA. F 1979 Curso de Prcticas de Biologa General. Edit. Blume Madrid. Espaa.

VII. CUESTIONARIO 1. Cul es el fundamento de la reaccin de Biuret? 2. Cul es el fundamento de la reaccin Xantoproteica? 3. Que significa cada uno de los siguientes trminos: floculacin. desnaturalizacin y coagulacin de las protenas. 4. La desnaturalizacin es un proceso reversible? Por qu?

PRCTICA N 05 RECONOCIMIENTO DE ENZIMAS I. INTRODUCCION Las enzimas son protenas catalticas que intervienen en las reacciones qumicas que se realizan en los sistemas biolgicos. La sntesis o degradacin de cualquier sustancia requiere de una serie de pasos, cada uno de los cuales necesita una enzima especfica, siendo la especificidad carcter importante de la accin enzimtica por la cual cada enzima solo acta sobre una sustancia (substrato) o grupo de sustancias afines La accin enzimtica, como corresponde a un catalizador, es reversible. La enzimas por su modo de accin se clasifican en hidrlticas y respiratorias. Entre las hidrolticas tenemos a los carbohidrasas (ejemplo, amilasa) que acta sobre los carbohidratos, las lipasas que actan sobre las grasas, los proteasas que actan sobre las protenas Las enzimas respiratorias son oxidantes fundamentalmente y estn encargadas de catalizar los procesos respiratorios celulares, entre ellos se encuentran las deshidrogenasas que desprenden pares de tomos de hidrgeno y desdoblan la molcula de oxgeno para formar agua, y las carboxilasas que desprenden CO2 de los cidos orgnicos. La presente prctica tiene como objetivos: Reconocer a las enzimas en diferentes muestras biolgicas y comprobar algunas propiedades de las enzimas.