1.

Las enzimas
En todos los organismos es preciso sintetizar macromolculas a partir de molculas sencillas, y para establecer los enlaces entre stas se necesita energa. Esta energa se consigue rompiendo los enlaces qumicos internos de otras macromolculas, sustancias de reserva o alimentos. Todo ello comporta una serie de reacciones coordinadas cuyo conjunto se denomina metabolismo. Dado que las sustancias que intervienen en estas reacciones son, generalmente, muy estables, se requerira una gran cantidad de energa para que reaccionaran entre s, ya que, si no, la velocidad de reaccin sera nula o demasiado lenta. Para acelerar la reaccin en un laboratorio bastara con aumentar la temperatura o bien con aadir un catalizador, es decir, una sustancia que aumente la velocidad de la reaccin. En los seres vivos, un aumento de temperatura puede provocar la muerte, por lo que se opta por la otra posibilidad, es decir, el concurso de catalizadores biolgicos o biocatalizadores. Las molculas que desempean esta funcin son las enzimas. Las enzimas son, con la excepcin de las ribozimas, que se explicarn ms adelante, protenas globulares capaces de catalizar las reacciones metablicas. Son solubles en agua y se difunden bien en los lquidos orgnicos. Pueden actuar a nivel intracelular, es decir, en el interior de la clula donde se han formado, o a nivel extracelular, en la zona donde se segregan. Las enzimas cumplen las dos leyes comunes a todos los catalizadores: la primera es que durante la reaccin no se alteran, y la segunda es que no desplazan la constante de equilibrio para que se obtenga ms producto, sino que simplemente favorecen que la misma cantidad de producto se obtenga en menos tiempo. Las enzimas, a diferencia de los catalizadores no biolgicos, presentan una gran especificidad, actan a temperatura ambiente y consiguen un aumento de la velocidad de reaccin de un milln a un trilln de veces. En 1981 se descubri un ARN que, sin precisar la intervencin de ninguna protena, es capaz de catalizar reacciones de corte y empalme conducentes a la eliminacin de segmentos de ARN. Se lo denomin ribozima. Posteriormente se ha descubierto un ARN capaz de catalizar la sntesis de otro ARN, teniendo, por tanto, actividad enzimtica. 1.1. ACTIVIDAD ENZIMTICA En toda reaccin qumica se produce una transformacin de unas sustancias iniciales, denominadas reactivos o sustratos (S), en unas sustancias finales o productos (P). Esta transformacin no se verifica directamente, ya que es necesario un paso intermedio en el cual el reactivo se active, de forma que sus enlaces se debiliten y se favorezca su ruptura. Este paso intermedio recibe el nombre de complejo activado y requiere un aporte de energa, generalmente en forma de calor, que se conoce como energa de activacin (fig. 1, pgina siguiente). Las enzimas pueden actuar de dos formas: unas, fijndose mediante enlaces fuertes (covalentes) al sustrato, de modo que se debiliten sus enlaces y que no haga falta tanta energa para romperlos; y otras, atrayendo a las sustancias reaccionantes hacia su superficie de modo que aumente la posibilidad de encuentro y que la reaccin se produzca ms fcilmente. Las enzimas, una vez que han realizado la transformacin del sustrato o sustratos en productos, se liberan rpidamente de ellos para permitir el acceso a otros sustratos.

Las enzimas suelen formar complejos multienzimticos, de forma que el producto de una enzima constituye el sustrato de la siguiente. Esto permite que no sea precisa una elevada concentracin del sustrato. Adems, se pueden disponer en las membranas celulares, lo que permite formar compartimientos donde el sustrato alcance concentraciones notables aunque en la clula no sea abundante. Algunas enzimas no son activas hasta que sobre ellas actan otras enzimas o iones. Estas enzimas se denominan zimgenos o proenzimas. Por ejemplo, el pepsingeno, que el HCl transforma en pepsina. Algunas enzimas que realizan bsicamente la misma funcin presentan variantes moleculares, es decir, diferencias en la secuencia de aminocidos. Suelen presentar diferencias de velocidad de reaccin. Generalmente se encuentran en diferentes tejidos o compartimientos celulares o aparecen en diferentes estadios del desarrollo. Estas enzimas se denominan isoenzimas o isozimas. 1.2. ESTRUCTURA DE LAS ENZIMAS Segn su estructura, se pueden diferenciar dos tipos de enzimas: las enzimas estrictamente proteicas, que son holoprotenas (fig. 2), y las denominadas holoenzimas, que son enzimas constituidas por la asociacin, ms o menos fuerte, de una fraccin polipeptdica o apoenzima y de una fraccin no polipeptdica o cofactor. Los cofactores pueden ser activadores inorgnicos, como los iones metlicos, que generalmente se encuentran en pequeas cantidades (menos de un 0,1 por 100, por lo que son oligoelementos). Por ejemplo, el Zn en las carboxipeptidasas, el Mg en las quinasas, el K en la piruvato quinasa, etc.

Tambin pueden ser activadores orgnicos, como los grupos prostticos, molculas fuertemente unidas a la cadena polipeptdica, como, por ejemplo, el grupo hemo en los citocromos, el grupo hemino en las peroxidasas, etc.; o coenzimas, molculas que actan asociadas a enzimas, como, por ejemplo, el ATP, el NAD, las vitaminas, etc. As pues, los oligoelementos y las vitaminas resultan imprescindibles para los organismos, ya que son cofactores de diversas enzimas. En la cadena polipeptdica de una enzima se pueden distinguir tres tipos de aminocidos:

Aminocidos estructurales, sin funcin dinmica. Aminocidos de fijacin, encargados de establecer enlaces dbiles con el
sustrato. Constituyen el centro de fijacin de la enzima.

Aminocidos catalizadores, que se unen al sustrato mediante enlaces covalentes, de forma que en dicho sustrato se debilita la estructura molecular favoreciendo su ruptura. Constituyen el centro cataltico de la enzima. Ambos centros, el centro de fijacin y el centro cataltico, suelen hallarse contiguos y forman el llamado centro activo de la enzima. 1.3. LAS COENZIMAS Las coenzimas pueden actuar de distintas formas. Algunas coenzimas no se fijan a la enzima, sino que actan conjuntamente en la transformacin del sustrato; otras se fijan a la apoenzima formando parte del centro activo. En este caso, la unin coenzima con al apoenzima se denomina holoenzima. Las coenzimas suelen alterarse durante la reaccin enzimtica, pero, una vez acabada sta, se regeneran rpidamente, y vuelven a ser funcionales.

Las coenzimas no suelen ser especficas de un solo tipo de apoenzima, dndose algunos casos de coenzimas que pueden unirse a ms de 100 tipos de apoenzimas diferentes, cada una con una funcionalidad especfica. Entre las coenzimas ms conocidas se encuentran el NAD (nicotinamida-adenn-dinucletido), el NADP (fosfato de NAD), el FMN (flavn-monomucletido), el FAD (flavn-adenn-dinucletido), etc. Todas ellas pertenecen a enzimas deshidrogenasas, como, por ejemplo, el NAD, que capta hidrgenos, transformndose en NADH2, y los transporta hasta un aceptor final de hidrgenos. Otras coenzimas importantes son la coenzima A, encargada de transferir grupos acilo (COCH3) y el ATP (adenosn-trifosfato), que transfiere grupos fosfato (fig. 3). 1.4. REGULACIN DE LA ACTIVIDAD ENZIMTICA La actividad de una enzima depende de un cierto nmero de factores, entre los que estn la temperatura, el pH, la concentracin del sustrato, los activadores, los inhibidores, etc. a) Temperatura. Si a una reaccin enzimtica se suministra energa en forma de calor, al ser captada por las molculas es transformada en energa cintica. As, aumenta la movilidad de estas molculas y, por tanto, el nmero de encuentros intermoleculares. Si la temperatura es excesiva, la enzima se desnaturaliza perdiendo totalmente sus propiedades, lo que paraliza la actividad enzimtica (fig. 4 A ). Existe una temperatura ptima para la cual la actividad enzimtica es mxima. b) pH. Todas las enzimas tienen dos valores lmite de pH entre los cuales son efectivas. Traspasados estos valores, la enzima se desnaturaliza y deja de actuar. Entre estos lmites existe un pH ptimo con el cual la enzima posee una mxima eficacia. El pH ptimo est condicionado por el tipo de enzima y de sustrato, debido a que el pH influye en el grado de ionizacin de los radicales que componen el centro activo de la enzima y tambin

influye en el grado de ionizacin de los radicales del sustrato. As, cada reaccin enzimtica tendr un pH ptimo; por ejemplo, la pepsina es ms efectiva sobre la hemoglobina con pH 2,2 y sobre la ovoalbmina con pH 1,5 (fig. 4 B ). c) Concentracin del sustrato. En una reaccin enzimtica, al incrementar la concentracin del sustrato, para una concentracin de enzima constante, se produce un aumento de la velocidad de reaccin, tendente a restablecer el equilibrio qumico entre las concentraciones de sustrato y de producto. Esto es debido a que, al abundar ms las molculas de sustrato, aumenta la probabilidad de encuentro entre el sustrato y la enzima. Si la concentracin del sustrato es excesiva, la velocidad de reaccin no aumentar, debido a que se produce una saturacin de las enzimas, que se hallan todas en forma de complejo E-S. Este hecho llev a L. Michaelis y M. L. Menten a formular la ecuacin siguiente: V Vmax. [S] [S] KM

En la ecuacin de Michaelis-Menten se pone de manifiesto que la velocidad de reaccin ( V ) depende de la concentracin del sustrato [S], de la velocidad mxima ( Vmx.) que se puede alcanzar con una determinada concentracin de enzima y de la denominada constante de Michaelis-Menten, KM, que depende de la afinidad que hay entre la enzima y el sustrato. La constante KM es igual a la concentracin del sustrato, para la cual la velocidad de la reaccin corresponde a la mitad de la velocidad mxima (fig. 4 C ). d) Activadores. Algunos iones favorecen la unin de la enzima con el sustrato; por ejemplo, la enzima fosforilasa regula la formacin de ATP a partir de ADP y un grupo fosfato (H3PO4), y se ve activada por la presencia de iones magnesio Mg2 (fig. 4 D ).

iones magnesio Mg2 (fig. 4

).

e) Inhibidores. Los inhibidores (I) son sustancias que disminuyen la actividad y la eficacia de una enzima o bien impiden completamente la actuacin de la misma. La inhibicin puede ser de dos tipos: irreversible y reversible.

La inhibicin irreversible o envenenamiento de la enzima tiene lugar cuando el inhibidor o veneno se fija permanentemente al centro acA tivo de la enzima alterando su estructura y, por tanto, inutilizndola (fig. 5 ).

La inhibicin reversible tiene lugar cuando no se inutiliza el centro activo, sino que slo se impide temporalmente su normal funcionamiento. Existen dos formas: competitiva y no competitiva. La inhibicin reversible competitiva se debe a la presencia de un inhibidor cuya molcula es similar al sustrato, por lo que puede competir con ste en la fijacin al centro activo de la enzima. Si se fija el inhibidor, la enzima B no puede romperlo, como hara con el sustrato. Por tanto, la enzima no puede actuar hasta que no se libera de dicho inhibidor (fig. 5 ). La inhibicin reversible no competitiva es debida a un inhibidor que, o acta Csobre el complejo enzima-sustrato hacindolo fijo, o se une a la enzima impidiendo el acceso del sustrato al centro activo (fig. 5 ). 1.5. ESPECIFICIDAD DE LAS ENZIMAS Los aminocidos de fijacin de una enzima se disponen en el espacio de forma que pueden establecer enlaces con los radicales de la molcula del sustrato. Esto origina una especificidad entre la enzima y el sustrato, ya que slo se producir actividad enzimtica cuando los radicales de los aminocidos de fija-

cin coincidan espacialmente con radicales del sustrato y permitan su unin (fig. 6). Existen tres tipos de especificidad:

Absoluta, cuando la enzima slo reconoce un tipo de sustrato. Por ejemplo, la enzima D-fructosa 6-fosfotransferasa acta nicamente sobre la D-fructosa, produciendo D-fructosa-6-fosfato, pero no puede actuar sobre la L-fructosa.

De grupo, cuando la enzima reconoce solamente a un grupo de molculas

similares que poseen un determinado tipo de enlace qumico. Por ejemplo, la glucosidasa acta slo sobre los glcidos en los que aparece el enlace glucosdico.

De clase, cuando la actuacin de la enzima no depende del tipo de molcula, sino del tipo de enlace. Por ejemplo, las fosfatasas separan los grupos fosfato de cualquier tipo de molcula. 1.6. ENZIMAS ALOSTRICAS Las enzimas alostricas suelen estar constituidas por varias subunidades o protmeros. Cada protmero posee dos centros: un centro regulador y otro centro cataltico o activo. Al unirse a este centro una molcula, el activador, modulador o ligando, la conformacin del protmero vara, haciendo funcional al centro cataltico. De esta forma, la enzima alostrica pasa de un estado inhibido (T) a un estado cataltico o activo (R). La variacin en la conformacin de un protmero se transmite a los otros protmeros asociados hacindolos activos, efecto que se denomina transmisin alostrica. Algunas enzimas alostricas se hallan en estado inhibido y requieren un activador, generalmente el sustrato, para pasar al estado cataltico. Por el contrario, otras enzimas alostricas se encuentran normalmente en estado cataltico, y es la unin del producto de la reaccin enzimtica con el centro regulador lo que

induce que estas enzimas pasen a un estado inhibido. Esta caracterstica permite que las enzimas alostricas acten como reguladores en los sistemas enzimticos, constituidos por varias enzimas (fig. 7). 1.7. NOMENCLATURA Y CLASIFICACION DE LAS ENZIMAS Segn la funcin que realizan las enzimas, stas se clasifican en seis grupos: oxidorreductasas, transferasas, hidrolasas, liasas, isomerasas y ligasas o sintetasas (fig. 8). De acuerdo con esta clasificacin, para denominar una enzima se cita primero el nombre de un sustrato, a continuacin el nombre de la coenzima, si la hay, y finalmente la funcin que realiza la enzima. Por ejemplo, la malonato coenzima A-transferasa, la citocromo oxidasa, la succinato flavndeshidrogenasa, etc. Generalmente se utiliza el nombre del sustrato acabado en -asa. Por ejemplo: sacarasa, maltasa, amilasa, etc. Algunas enzimas, sin embargo, conservan su antigua denominacin, como la tripsina, pepsina, etc. En la clasificacin actual, cada enzima est numerada con cuatro cifras: la primera indica la clase, la segunda la subclase, la tercera la subdivisin de la subclase y la cuarta es la especfica de la enzima. Por ejemplo, la malonato CoAtransferasa es la enzima 2.8.3.3 (cuadro 1). a) Oxidorreductasas. Catalizan reacciones en las que tiene lugar una oxidacin o reduccin del sustrato. Son enzimas propias de la cadena respiratoria. Existen 14 subclases, destacando las deshidrogenasas y las oxidasas. Las deshidrogenasas separan el hidrgeno del sustrato (son, por tanto, oxidantes). Usan como coenzimas el NAD, NADP, FAD, etc. Las oxidasas captan electrones del sustrato y los transfieren a un aceptor, el oxgeno. Para ello, primero se reducen y luego se oxidan. b) Transferasas. Transfieren radicales de un sustrato a otro sin que en ningn momento queden libres dichos radicales. Segn el radical a transferir, se dividen en ocho subclases. c) Hidrolasas. Son enzimas que actan mediante reacciones de hidrlisis, rompiendo enlaces por introduccin de los radicales OH y H procedentes de la ruptura de una molcula de agua. Segn el enlace que rompan, se

d) Liasas. Catalizan reacciones en las que se rompen enlaces CC, CN o CO, con prdida de grupos y, generalmente, con la aparicin de enlaces dobles. Por ejemplo, las desaminasas retiran radicales amino. e) Isomerasas. Son enzimas que regulan reacciones de isomerizacin, en las que el sustrato se transforma en otra molcula ismera. f) Ligasas o sintetasas. Unen molculas o radicales mediante la energa proporcionada por la desfosforilacin de una molcula de ATP.
CUADRO I

FUNCIONES Y CLASIFICACIN DE LAS ENZIMAS Clase 1. Oxidorreductasas 2. Transferasas Funcin Reacciones de xido-reduccin Transferencis de grupos Subclases ms importantes 1.2. Actan sobre C O 1.6. Actan sobre NAD o NADP 2.1. Grupos de un tomo de C 2.2. Grupos aldehdo o cetnicos 2.7. Grupos fosfato 3. Hidrolasas 4. Liasas 5. Isomerasas 6. Ligasas Hidrlisis Adicin a dobles enlaces Isomerizacin Formacin de enlaces 3.2. Enlaces glucosdicos 3.4. Enlaces peptdicos 4.1. Adicin a C C 4.2. Adicin a C O 5.1. Racemasas 6.1. Enlaces CO 6.3. Enlaces CN 6.4. Enlaces CC