UNIVERSIDADE ESTADUAL DO NORTE DO PARAN

C AMPUS J ACAREZINHO C ENTRO

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ANA CAROLINA ELEUTERIO ANA PAULA PASCHOAL BRUNA PAIVA CINTYA DE OLIVEIRA LETCIA BUDEL

IMUNOLOGIA DOS TUMORES

Prof. DALVA

JACAREZINHO

2009 Imunologia dos tumores

A imunologia dos tumores o estudo das interaes entre o sistema imunolgico e o cncer e surge aps o uso de cirurgia, quimioterapia e radioterapia para impedir recadas O objetivo compreender em que condies uma clula cancerosa pode ser reconhecida como estranha e ser eliminada pelo sistema imunolgico, para depois conceber as tcnicas teraputicas que utilizam esses mecanismos para controlar ou destruir o tumor. Causa dos tumores A transformao de clulas normais em clulas malignas pode ocorrer de modo espontneo ou ser induzida por agentes carcingenos (qumicos, fsicos ou virais). A natureza dessa transformao ajuda a determinar se o sistema imune do hospedeiro dera capaz ou no de conter o tumor. Essa rea de conhecimento inclui o estudo de protenas antignicas de clulas tumorais, da resposta imune a tumores e das conseqncias imunolgicas dos tumores. So consideradas importantes caractersticas das clulas tumorais, o crescimento autnomo sem estmulos exgenos, invasivo e metasttico via linftica e sangnea. Para a melhor aplicao do conhecimento imunolgico, seria ideal que a clula tumoral produzisse antgenos especficos, no presentes nas clulas normais. Como isso no ocorre, tm sido estudados antgenos associados a tumores, chamados de Marcadores Tumorais, produzidos exclusivamente por clula neoplsica ou no exclusivamente, mas em quantidade suficiente para ser distinta da quantidade de tecidos noneoplsicos. Mutaes espontneas

Podem ocorrer devido: Ao fato de que as quatro bases nucleotdicas podem existir sob duas formas diferentes, uma usual e outra muito rara. Quando uma base adquire, temporariamente, a sua forma rara, pode emparelhar-se com uma base diferente. A erros na replicao do DNA motivados pela DNA polimerase. Quase sempre estes erros so reparados durante o processo de replicao do DNA, contudo, alguns persistem. A erros na meiose ou mitose (no disjuno de homlogos ou cromatdeos, tendo como consequncia formao de clulas com excesso ou falta de cromossomas). Podem ocorrer em qualquer gene e em qualquer local do gene, no entanto so mais frequentes em Regies com sequncias de DNA repetitivas ou simtricas, os chamados pontos quentes. Nestes locais, aumenta o risco de uma cadeia de DNA emparelhar consigo prpria durante a replicao; Genes de maior tamanho, que, assim, tm uma maior probabilidade de sofrer alteraes na sua sequncia de bases;

 Genes do genoma mitocondrial que no tem mecanismos de reparao do DNA. Mutaes induzidas

Agentes mutagnicos substncias qumicas ou radiaes que aumentam a probabilidade de ocorrncia de mutaes. Principais agentes mutagnicos: Fontes naturais de radiao como raios csmicos, luz solar e minerais radioativos da crosta terrestre. Certos minerais da crosta (urnio, rdio, carbono 14...) emitem radiaes ionizantes, os raios , e . Estas radiaes, especialmente os raios , tm energia suficiente para remover eltrons dos tomos e quebrar o esqueleto de aucares e fosfato do DNA; Substncias qumicas, como agentes aquilantes, acridinas, drogas usadas em quimioterapia, nitrosaminas e nitrito de sdio. Formas de atuao dos agentes mutagnicos: Alterao das bases nucleotdicas por agentes qumicos. No caso do cido ntrico e dos seus derivados, podem transformar a citosina presente no DNA, na sua forma rara; para tal, ocorre a converso de -NH2 em =NH. Tem por consequncia a alterao do emparelhamento das bases; Adio de grupos qumicos s bases por agentes qumicos, como, por exemplo, o benzopireno, um dos componentes do fumo do tabaco, que adiciona um grupo qumico guanina, tornando-a indisponvel para o emparelhamento das bases; Danificao do material gentico por radiaes. As radiaes ionizantes (raios X) produzem radicais livres, altamente reativos, e que podem alterar as bases do DNA para formas no reconhecveis, ou causar anormalidades cromossmicas. As radiaes ultravioletas do Sol so absorvidas pela timina do DNA, promovendo o estabelecimento de ligaes covalentes entre bases adjacentes, o que causa grandes problemas durante a replicao do DNA. Caractersticas A imunologia tumoral se baseia no fato de que as clulas tumorais expressam antgenos que as distinguem das clulas normais. Esses antgenos podem ser divididos em 2 grupos: Os antgenos tumorais representam uma variedade de molculas que podem ser definidas como fatores sricos, fatores nucleares ou citoplasmticos com especificidades distintas, os quais so capazes de contribuir consideravelmente no diagnostico e prognstico das neoplasias, tornando assim um importante subsidio para o tratamento e a cura da doena. Atualmente, os antgenos podem ser classificados atravs de diferentes modalidades variando conforme os padres de expresso, ou seja:

Antgenos Tumorais Especficos (ATEs)

Antgenos Tumorais Exclusivos, so antgenos tumorais especficos, expressos somente em um ou em alguns tumores, atravs de processos de mutaes que so caractersticas daqueles tumores S esto presentes nas clulas tumorais, mas no nas clulas normais do hospedeiro. Abordagens moleculares so mais gratificantes para identificar esses antgenos do que ouso de anticorpos monoclonais Antgenos Associados aos tumores (ATAs)

So expressos, tanto em clulas normais, quanto em clulas cancerosas, porm a expresso quantitativa ou associada a outros marcadores serve para identificar as clulas tumorais. Os anticorpos monoclonais so ideais para a identificao desses antgenos. Antgenos de transplante associados a tumor (TATA) que so reconhecidos pela imunidade mediada por clulas: 1. Antgenos T Esses antgenos so compartilhados por muitos tumores. So aqueles que possuem a capacidade de estimular clulas B a produzirem anticorpos sem a necessidade da ativao da clula T auxiliar, que normalmente d o segundo sinal para a deflagrao da resposta imune (o primeiro sinal dado pelo antgeno). Em geral so polmeros com numerosos determinantes antignicos repetidos e no produzem memria imunolgica. 2. Antgenos especficos de tumor (TSTA) Esses antgenos especficos para cada tumor. 3. Antgenos oncofetais So antgenos de diferenciao presentes durante o desenvolvimento fetal, mas que normalmente no so expressos na vida adulta. Esses antgenos (AFP e CEA), no entanto, so expressos por clulas tumorais. Imunoterapia Para melhorar a capacidade do sistema imune de localizar e destruir o cncer, os pesquisadores desenvolveram modificadores da resposta biolgica. Essas substncias so utilizadas para as seguintes funes: Estimular a resposta antitumoral do corpo, aumentando o nmero de clulas assassinas dos tumores ou produzindo um ou mais mensageiros qumicos (mediadores);

 Atuar diretamente como agentes assassinos de tumores ou mensageiros qumicos; Frear os mecanismos normais do corpo que suprimem a resposta imune; Alterar as clulas tumorais, aumentando assim a sua probabilidade de desencadear uma resposta imune ou tornando-as mais suscetveis a serem lesadas pelo sistema imune; Melhorar a tolerncia do organismo radioterapia ou s substncias qumicas utilizadas na quimioterapia O interferon o modificador da resposta biolgica mais conhecido e mais amplamente utilizado. Quase todas as clulas humanas produzem o interferon de forma natural, mas ele tambm pode ser produzido por meio de tcnicas biolgicas moleculares recombinantes. Embora seus mecanismos de ao no estejam totalmente claros, o interferon tem um papel no tratamento de vrios cnceres. Respostas excelentes (incluindo algumas curas) ocorreram em cerca de 30% dos indivduos com sarcoma de Kaposi, em 20% dos indivduos jovens com leucemia mielide crnica e em 15% dos indivduos com carcinoma de clulas renais. Alm disso, o interferon prolonga o perodo esperado livre da doena em indivduos que se encontram em remisso do mieloma mltiplo e de algumas formas de linfoma. Na terapia com clulas assassinas, alguns dos linfcitos (um tipo de leuccito) do paciente com cncer so removidos de uma amostra de sangue.No laboratrio, eles so expostos a uma substncia chamada interleucina-2 (um fator de crescimento do linfcito T), para criar clulas assassinas ativadas pela linfocina, que so novamente injetadas no indivduo pela via intravenosa. Essas clulas possuem uma maior capacidade que as clulas normais de detectar e destruir clulas cancerosas. Embora cerca de 25 a 50% dos indivduos que apresentam melanoma maligno ou cncer do rim respondam bem terapia com clulas assassinas ativadadas pela linfocina, essa forma de tratamento encontra-se ainda em fase experimental. A terapia humoral (anticorpos) promove a produo de anticorpos pelo organismo. Substncias como extratos de bactrias da tuberculose enfraquecidas (atenuadas), que sabidamente aumentam a resposta imune, foram tentadas em alguns tipos de cncer. A injeo de bactrias da tuberculose diretamente em um melanoma quase sempre provoca reduo do cncer. Ocasionalmente, o efeito estende-se aos tumores que se disseminaram a outras partes do corpo (metstases). Os mdicos tambm tm utilizado com xito as bactrias da tuberculose para controlar o cncer de bexiga que ainda no invadiu a parede do rgo. Outra procedimento experimental envolve a ligao de anticorpos especficos contra o tumor com medicamentos antineoplsicos. Os anticorpos, sintetizados em laboratrio e injetados no paciente, guiam os medicamentos at as clulas cancerosas. Alternativamente, outros anticorpos sintetizados em laboratrio podem aderir tanto clula cancerosa quanto ao linfcito assassino, unindo as duas clulas de modo que o linfcito assassino consiga destruir a clula cancerosa. At o momento, essa investigao ainda no pde ser aplicada de forma ampla em qualquer esquema de tratamento antineoplsico.

Pesquisas recentes oferecem esperana de novos tratamentos. Alguns deles utilizam fragmentos de oncogenes, os quais so importantes na regulao e no crescimento celular.

Dosagem de Marcadores Tumorais Na dosagem de marcadores tumorais tm sido apresentadas algumas dificuldades como desconhecimento dos mecanismos de liberao, metabolismo e excreo desses marcadores, distribuio no-gaussiana na populao (sadia e com a neoplasia) e variveis individuais. Dentre as principais aplicaes das dosagens de marcadores tumorais, destacam-se a utilidade como marcador prognstico e de follow up de paciente com diagnstico e como marcador precoce na deteco de recorrncias. Tambm podem ser aplicados na triagem de casos e no monitoramento teraputico. Como essas dosagens devem ser consecutivas, necessrio utilizar mtodos altamente sensveis, precisos e reprodutveis, padronizados frente a padres de referncia que permitam comparabilidade de seus resultados ao longo do tempo. Nos testes para dosagens de marcadores tumorais so freqentemente utilizados anticorpos monoclonais produzidos em camundongos no esquema de sanduche. Em raras amostras humanas, parte das imunoglobulinas (Ig) pode interagir com essas os anticorpos monoclonais (HAMA human antimouse antibodies) marcados, simulando a presena do marcador tumoral. Para superar essa dificuldade, podem ser empregados artifcios, como o uso de diluentes contendo protenas murinas, o uso de anticorpos quimricos, ou a fragmentao da molcula de anticorpo monoclonal. Os anticorpos monoclonais quimricos podem ser construdos por DNA recombinante (transgnicos), em que substitui o gene da frao Fc da imunoglobulina do hibridoma murino pelo humano, ou ainda, pela produo de hibridoma humano, para o que necessria a obteno de clones humanos produtores de anticorpos anti-marcador tumoral, ainda invivel. A fragmentao de molcula de imunoglobulina retira parte da frao Fc, responsvel pelo aparecimento dos HAMA. Nos kits da metodologia Elecsys so empregados duas dessas abordagens simultaneamente, permitindo a garantia de no interferncia de eventuais anticorpos HAMA.

MARCADORES TUMORAIS MARCADOR INDICAO Indicao Cncer de prstata + exame clnico = 96% S Mais sensvel e menos especfico que PAP. Cncer testicular quando associado com AFP (pior prognstico) AUMENTO INESPECFICO Prostatite aguda Adenoma de prstata (toque retal, ciclismo, equitao, atividade sexual) Gravidez Coriocarcinoma (mola hidatiforme) OBSERVAO Marcador de escolha para triagem, diagnstico e seguimento de cncer de prstata. Aumento ps-tratamento indica metstase. Marcador de escolha para diagnstico e acompanhamento de cncer testicular

FSA

Free Beta HCG

CA 125

Cncer Ovariano Maior sensibilidade para adenocarcinoma seroso (80%) que mucinoso

Patologias do epitlio celmico (ascite cirrtica, Marcador de escolha peritonites, pericardites) para cncer ovariano, Endometriose, cistos incluindo indicao ovarianos, final da cirrgica. gravidez

CA 15-3

Patologias hepticas Cncer de mama Marcador mais benignas. til para seguimento especfico para cncer Adenocarcinomas Associado com CEA maior de mama. til quando metastticos (pncreas, sensibilidade associado com CEA tero, pulmo) Dosagem no citosol Protease presente em Altos nveis pior das clulas tumorais. todas as clulas e prognstico do cncer de Marcador invasivo e aumentada em tumor de mama fator de pior mama prognstico Feocromocitomas, Marcador de escolha tumores trato digestivo e para triagem, Cncer medular de tiride pncreas, pulmo. diagnstico e Sensibilidade ~ 90% Insuficincia renal seguimento de cncer crnica. medular tiroidiano Hiperparatiroidismo Doenas da tiride Graves, bcio nodular, tiroidites Marcador de escolha para seguimento de cncer tiroidiano

Cath-D (cathepsina D)

Calcitonina

TG Cncer diferenciado Tireo-globulina de tiride

CA 19-9

Carcinomas do trato digestivo Marcador de alta Patologias benignas de Pncreas (85%) especificidade para pulmo (fibrose cstica), Trato biliar carcinomas de pancreatites Colorretal ( + CEA) pncreas e trato biliar Gstrico (+CEA e CA 72-4) Marcador til para confirmar neoplasias Rarssimo em doenas quando associado com benignas outros marcadores Metstases mais rgoespecficos.

CA 72-4

Marcador especfico de neoplasia (TGI, mucinoso de ovrio, pncreas)

Hepatocarcinoma (30 a

Aumentado no lquido

Marcador de escolha

Mecanismos Mecanismos Imunolgicos que atuam contra clulas tumorais Praticamente todos os componentes do sistema imunolgico podem contribuir para a defesa contra as clulas tumorais Clulas T: so, sem dvida, o principal mecanismo de defesa para o organismo contra essas clulas. Atuam tanto diretamente sobre elas (clulas CD8+) como ativando outros componentes do sistema imune ( as clulas CD4* que atuam atravs de linfocinas). Entretanto dependem de clulas apresentadoras de antgenos (APC), pois na maioria das vezes as clulas tumorais expressam apenas MHC classe I e no a classe II. Clulas B: secretam anticorpos (o principal a IgG) e funcionam como APC.Os anticorpos podem agir tanto fixando complemento quanto promovendo a ADCC (citotoxidade mediada por anticorpo) Clulas NK**: representam a primeira linhagem de defesa do hospedeiro contra o crescimento das clulas transformadas. Tambm representam um auxlio quando recrutadas pelas clulas T. Sua ao mediada pela liberao de fatores citotxicos ou de granzinas e perforinas. Macrfagos; so importantes na iniciao da resposta imune por desempenharem o papel de APC. Alm disso podem atuar diretamente como clulas efetoras mediando a lise do tumor. As principais citocinas envolvidas na ativao dos macrfagos (MAF) SO O INF-, a IL-4, o TNF e o GM-CSF (fator de estimulao de crescimento granulcito-macrfago). OBS: * IL-2, IFN- e TNF so as principais citocinas envolvidas. ** As clulas transformadas comumente apresentam uma quantidade diminuda de MHC-I e esse o sinal para as NK. Mecanismos de escape das clulas tumorais Imunosseleo: mutaes randmicas (ao acaso), devido a instabilidade gentica, produzem clulas tumorais que ao so reconhecidas como estranhas pelo sistema imune do hospedeiro e essas clulas, conseqentemente so selecionadas (pelo prprio sistema imune), Fatores solveis: as clulas tumorais secretam substncias que suprimem diretamente a reatividade imunolgica. Clulas T supressoras, Tolerncia: como as clulas tumorais, na maioria das vezes, no so apresentadoras de antgenos, elas no fornecem um sinal co-estimulador para as clulas T (interao B7-CD28 ou CD40-CD40L), o que leva a apoptose ou a um estado de anergia das clulas T.

 Perda de antgenos do MHC (modulao): mais de 50% dos tumores podem perder um tumorais alelos de classe I do MHC, o que leva a uma incapacidade de apresentao de antgenos peptdeos tumorais. Bibliografias Artigos

Aspectos Imunolgicos de Antgenos Tumorais utilizados na deteco e tratamento de neoplasias. Karyne Morgado Loro, Irandaia Ubirajara Garcia (Faculdade de Cincias Biolgicas/PUC-Campinas) ANTGENOS Universidade Federal da Bahia Faculdade de Medicina Departamento de Anatomia Patolgica e Medicina Legal Disciplina de Imunologia MED 194 Monitor: Alessandro Almeida Sites

Roche in News http://www.rochediagnostica.com.br/roche_in_news/web/InNews_15/infor me_cientf.asp MSD - Brazil http://www.msd-brazil.com/msdbrazil/corporate/index.html