GUIA DE PRACTICAS: BIOLOGIA GENERAL

FACULTAD INGENIERIA DE INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

Blgo. PEDRO MARCELINO ADRIANZN JULCA, Mg.Sc.

DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS BIOMEDICAS Y BIOTECNOLOGIA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE LA AMAZONIA PERUANA

2012 I/II

INTRODUCCION
La presente gua de prcticas recoge la experiencia en el laboratorio de Biologa de los profesores del Departamento Acadmico de Ciencias Biomdicas y Biotecnologa, quienes desde hace ya muchos aos comenzaron a trabajar en las prcticas de laboratorio, y que a la fecha seguimos buscando ideas y elaborando materiales que respondan a nuestras necesidades docentes y a las concepciones pedaggicas que defendemos. Como consecuencia ltima de esa extensa tarea nace la presente gua que ahora presentamos, la misma que estar sujeta a mejoras e innovaciones de acuerdo a las exigencias y avances en el quehacer cientfico. El objetivo general del curso prctico de Biologa es que el alumno adquiera habilidades y destrezas en el manipuleo de materiales, as como estimular el anlisis crtico que exige la metodologa cientfica. Este manual contiene 9 guas de prcticas, diseadas para que el estudiante se familiarice y se involucre gradualmente en el mundo de la Biologa y est elaborado de acuerdo a la infraestructura de los laboratorios que presenta nuestra universidad. El orden de presentacin corresponde al orden en el desarrollo del curso terico de Biologa General. LOS AUTORES CONTENIDO N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 TEMA PRACTICA 01: GENERALIDADES: NORMAS DE BIOSEGURIDAD PRACTICA 02: DESCRIPCION Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO. PRACTICA 03: APLICACIN DEL METODO CIENTIFICO.. PRACTICA 04: RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS BIOGENESICOS Y CONSTITUYENTES MINERALES PRACTICA 05: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS ORGANICAS PRACTICA 06: OBSERVACION DE CELULAS ANIMALES Y VEGETALES.. PRACTICA 07: OBSERVACION DE TEJIDOS ANIMALES Y VEGETALES PRACTICA 08: MITOSIS EN MERISTEMO DE CEBOLLA PRACTICA 09: NUTRICION AUTOTROFA Y HETEROTROFA.. PRACTICA 10: REPRODUCCION CELULAR, MITOSIS Y FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO CELULAR... PREPARACION DE SOLUCIONES. Pg. 3 7 15 19 23 28 32 36 39

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PRACTICA N 01 GENERALIDADES

NORMAS DE BIOSEGURIDAD
I. INTRODUCCIN El alto grado de desarrollo alcanzado en el diagnstico de laboratorio, la aparicin de enfermedades y la utilizacin de tcnicas de punta desarrolladas los ltimos 20 aos han trado consigo grandes riesgos difciles de medir, y dada la importancia de preservar la salud y la vida del personal vinculado al trabajo de laboratorio se ha creado una disciplina tcnica llamada Bioseguridad, la cual debe estar integrada a todos los procedimientos o tcnicas como parte del aseguramiento de la calidad de los procesos y est basada en conocer los niveles de riesgos y las medidas de seguridad Bsicas, por lo que en el Laboratorio de Biologa, para el desarrollo de todas las prcticas se presenta la necesidad de plantear las normas y reglas de Bioseguridad que deben cumplir los estudiantes a fin de no poner en riesgo su integridad fsica y salud. Se entiende como Bioseguridad a los mecanismos y medidas que permiten prevenir y proteger ante cualquier riesgo la salud del personal docente, tcnicos, administrativos, y alumnos que realizan labores acadmicas o de investigacin en los ambientes de laboratorios, gabinetes, etc., frente a los agentes biolgicos, qumicos y fsicos. II. OBJETIVOS - La presente prctica tiene como objetivo minimizar los probables accidentes que pudieran ocurrir en los laboratorios de nuestra universidad. - As mismo, tomar conciencia para asumir con responsabilidad las normas bsicas de Bioseguridad. III. METODOS Y PROCEDIMIENTOS 3.1 NORMAS DE COMPORTAMIENTO EN EL LABORATORIO 1. Colocar en el exterior de la puerta de entrada al laboratorio, una lista de los nombres y nmeros de telfono de oficinas, instituciones y personal del laboratorio con el que se debe entrar en contacto en caso de emergencia. El ingreso al laboratorio de prcticas se har en el horario establecido. Dentro del laboratorio el uso del mandil es obligatorio. Lavarse las manos antes y despus de las prcticas de laboratorio. En caso de tener cabello largo, recogerlo hacia atrs durante las prcticas. Evitar que las mangas/puos, pulseras, etc., estn cerca de las llamas. Proteger la piel que est expuesta a salpicaduras, roces u objetos expelidos. No vestir pantalones cortos, faldas o sandalias en el laboratorio. Desarrollar el hbito de mantener las manos lejos de la boca, nariz, ojos y cara, para evitar la autoinoculacin. Utilizar mascarillas y guantes, cuando sea necesario, segn el tipo de trabajo. Mantenga su mesa de trabajo en orden y tenga un lugar definido para cada objeto. Evitar molestar en el laboratorio con sonidos o conversaciones de alto volumen. No comer, beber, fumar, guardar alimentos ni aplicarse cosmticos dentro del laboratorio. Lea bien las instrucciones antes de dar inicio a su trabajo prctico, si tiene dudas pregunte al profesor o a su instructor. Siga correctamente las instrucciones de la prctica y utilice los reactivos en cantidades necesarias para evitar errores posteriores.

2. 3.
4.

5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14.

15. Etiquete todas las sustancias, reactivos y soluciones, nunca confe la identificacin de los mismos a sus sentidos. 16. Es importante que la cristalera y recipientes utilizados en la preparacin de reactivos estn completamente limpios. 17. Antes de utilizar cualquier aparato elctrico debe comprobarse el estado de funcionamiento, y voltaje. 18. Mantener en equilibrio el rotor de la centrfuga en funcionamiento. 19. Nunca deje aparatos funcionando sin vigilancia. 20. Limpiar con paos adecuados los lentes (oculares y objetivos), para evitar contagio con agentes infecciosos. 21. Cuando no utilice el mechero, apguelo. 22. Manipular cuidadosamente las lminas portaobjetos, a fin de evitar cortes o abrasiones en la piel. 23. Manipular las sustancias que desprendan vapores, gases irritantes o mal olor, as como la incineracin y calcinacin de combustibles y/o inflamables, bajo la Campana Extractora. 24. No usar la boca para pipetear sustancias txicas, qumicas o que emanen vapores. 25. Limpiar los derrames pequeos inmediatamente. Si se produce un derrame Importante de sustancias qumicas, avisar inmediatamente al responsable del laboratorio. Si se derraman sustancias voltiles o inflamables, apagar inmediatamente los mecheros y los equipos que puedan producir chispas. 26. Evitar acumular en el lavadero, desechos que puedan obstruirlo, tales como: papel de filtro, algodn, gasas quirrgicas, sedimentos y otros similares, estos deben ser colocados en lugares adecuados. 27. No descartar soluciones que contengan solventes orgnicos en el lavadero. Use frascos reservados para este fin. 28. El calentamiento de lquidos voltiles inflamables debe hacerse siempre en bao de agua (por ningn motivo se dejaran disolventes voltiles cerca de flamas) 29. Cuando se trabaja con lquidos o vapores corrosivos y txicos (sulfato de dimetilo, cido sulfrico, cloroformo) hacerlo bajo la proteccin de una campana de extraccin con un buen escape y ventilacin suficiente. 30. Tener neutralizantes disponibles para cualquier emergencia: bicarbonato de sodio para los cidos y cido actico diluido para los lcalis. 31. Los reactivos mutagnicos deben ser eliminados en envases de oxidacin. 32. Mantener el suelo del laboratorio siempre limpio y seco. 33. Es indispensable familiarizarse con la posicin de los extintores de incendios, cajones de arena y salidas de emergencia. 34. Antes de abandonar el laboratorio, cada reactivo, material y/o equipo utilizado debe dejarse en el lugar que se encontr inicialmente. 3.2 PRECAUCIONES QUE SE DEBE TENER EN CUENTA DURANTE EL USO DE CUALQUIER MATERIAL BIOLOGICO: 1. Utilizar una sola pipeta para cada uno de los reactivos teniendo cuidado que se encuentre completamente limpia, debido a que, el uso indistintamente de una pipeta en uno y otro reactivo ocasiona la alteracin de los mismos con el consiguiente error en los resultados de las reacciones. 2. Cuando un medio de cultivo u otro material de naturaleza infecciosa, que accidentalmente se ha derramado o roto el recipiente que lo contiene, se debe de notificar de inmediato al instructor de prctica a fin de que bajo su supervisin se realice la desinfeccin de la zona u objeto contaminado.

3. Despus del uso de agujas de inoculacin, lancetas y otros equivalentes se deben esterilizar al mechero o colocar en soluciones desinfectantes y/o bactericidas respectivamente, evitando de este modo contaminacin en el laboratorio. 4. Las lminas porta-objetos con preparados de bacterias patgenas, deben manejarse con mucho cuidado y despus de ser observadas y analizadas deben ser colocadas en depsitos adecuados que contengan soluciones bactericidas. 5. Descontaminar las superficies de trabajo por lo menos una vez antes de todo trabajo y cuando se produzca cualquier salpicadura de material infeccioso. 6. No pipetear con la boca sustancias contaminadas con agentes infecciosos y/o qumicos. 7. Considerar todas las muestras como potencialmente infecciosas para evitar el posible contagio. 8. Evite el contacto de las mesas, papel y cualquier otro material de uso en el laboratorio con las muestras biolgicas, potencialmente contaminadas. 9. Verificar que el material infeccioso por descartar sea fcilmente identificable como tal y se esterilice lo antes posible. 10. Desinfectar el rea de trabajo antes y despus de cada actividad diaria, con fenol al 5%, cresol al 3% u otro desinfectante, dejndolo actuar durante 30 minutos. 11. Colocar horizontalmente el material de vidrio reusable (pipetas, lminas portaobjetos, etc.) en un depsito con mezcla sulfocrmica y esterilizarlo al final de la jornada de trabajo. 12. Tomar las muestras de sangre se deben utilizando jeringas y agujas descartables. 13. Autoclavar todo material infeccioso antes de ser eliminado.

El smbolo de "Riesgo Biolgico" y su uso. En todo laboratorio microbiolgico es obligatoria la utilizacin del smbolo internacional de "Riesgo Biolgico" para indicar la presencia, bien sea actual o potencial, de dicho peligro. Con el citado smbolo, deben ser identificados: equipos, recipientes, materiales, laboratorios, reas con animales de experimentacin, etc., que contienen o estn contaminados con agentes microbianos viables, que puedan implicar algn tipo de riesgo para el operador y/o entorno. El trmino "Riesgo Biolgico" aplicado a este smbolo, se define como: "Aquel agente infeccioso que presenta un riesgo, real o potencial, para el bienestar del ser humano, bien sea por su accin directa a travs de su contaminacin, o indirectamente por el dao causado al medio ambiente".

ACTIVIDAD 1: Recolectar y graficar o pegar smbolos relacionados a bioseguridad laboratorial, hospitalaria, empresarial, industrial, etc., indicando sus significados:

PRACTICA N 02 DESCRIPCION Y MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO I. INTRODUCCION La palabra microscopio deriva de las voces griegas (micros = pequeo y skopein = observar); es un instrumento que permite visualizar cerca y aumentado, cuerpos pequeos y sus detalles estructurales, cuyas dimensiones son inferiores al lmite del poder de resolucin del ojo humano calculado en 70 - 100 um (0.1 mm). En el laboratorio es importante conocer la magnificacin o el grado de aumento que ha sufrido la imagen del objeto que est siendo observado. Es importante tambin el poder de resolucin del microscopio, es decir, el poder separar dos puntos que se encuentran muy prximos entre s. Por ejemplo: Si existen dos puntos separados por una distancia de 0.2 mm a ms, la vista los distingue por separado, pero si dos puntos presentan una separacin de 0.1 mm a menos, la vista lo observar como un solo punto; en cambio el microscopio lo diferenciar por separado. El poder de resolucin de un microscopio depende de su abertura numrica y de la longitud de onda que usa. A menor longitud de onda, mayor poder de resolucin. II. OBJETIVOS Identificar las diferentes partes que constituyen el microscopio y reconocer las funciones de cada una de ellas. Adquirir habilidad en el uso y manejo correcto del microscopio, siguiendo las indicaciones de las guas de laboratorio.. III. MATERIALES De la Ctedra - Microscopio compuesto - Lminas porta objeto. Del alumno - Recorte de peridico con letras pequeas. - Fibras vegetales y animales (algodn, caa, coco, pelo, cerdas, etc). - Pedazo de algodn. - Laminillas cubre objeto. - Tijeras. - Gotero. - Servilletas o papel absorbente

IV. PROCEDIMIENTO 4.1. PARTES DEL MICROSCOPIO COMPUESTO Se pueden agrupar en cuatro sistemas: a. El sistema de soporte. b. El sistema de aumento. c. El sistema de iluminacin. d. El sistema de ajuste. A. EL SISTEMA DE SOPORTE 1. EL PIE Es la parte que sostiene al microscopio, asegurando perfecta estabilidad del aparato en posicin vertical, inclinada u horizontal. Presenta diferentes formas siendo la ms comn la de herradura. 2. LA COLUMNA, BRAZO O BASTIDOR Es la parte articulada al pie por medio de una bisagra llamada charnela (en algunos casos), sostiene la platina, el tubo ptico, lleva los tornillos macromtrico y micromtrico. Generalmente tiene la forma de un arco, es por donde se toma para su traslado de un lugar a otro. 3. LA PLATINA Es una plancha metlica colocada en posicin horizontal, presenta un orificio en la parte central que permite el paso de luz proveniente del sistema de iluminacin. En algunos

modelos la platina lleva adherida un par de pinzas que sirven para sujetar la lmina portaobjeto o un carro mvil (charriot) para el desplazamiento del preparado hacia la derecha o izquierda durante la observacin. Su funcin es sostener las placas con los preparados biolgicos que se van observar 4. EL REVOLVER (CAMBIADOR DE OBJETIVOS) Es un dispositivo metlico de forma circular, atornillado en la parte inferior del tubo ptico, gira sobre su eje central; presenta 3 o 4 orificios a los que van atornillados los objetivos. Este dispositivo sirve para cambiar la posicin de los objetivos durante las observaciones. B. EL SISTEMA DE AUMENTO. 1. EL OCULAR. Denominado as porque va cerca al ojo del observador, dispuesto en un tubo cilndrico de metal, con un diafragma intermedio, ambos lentes presentan las caras planas hacia el ojo del observador y las caras convexas hacia el objeto. La lente que va cerca al ojo del observador se denomina ocular propiamente dicho y la lente inferior como lente de campo; en la parte lateral y superior del tubo cilndrico lleva una numeracin que indica el nmero de aumento propio del ocular. Aumento. El poder de aumento se encuentra marcado en el ocular: Un ocular x 4, aumenta 4 veces la imagen que produce el objetivo. Un ocular x 6, aumenta la imagen 6 veces. Un ocular x 10, aumenta la imagen 10 veces. El poder de aumento de los microscopios utilizados en los laboratorios mdicos oscila entre 50 y 1000. 2. OBJETIVOS. Llamado as porque va cerca del objeto a observar, constituye la parte ms importante del microscopio de los cuales depende su alcance. Est constituido por un tubo metlico cilndrico cnico, que lleva en su interior un sistema de lentes destinados a dar la imagen real e invertida del objeto. a. Objetivos Secos. Son aquellos en los que, entre el lente frontal y el preparado a observar, no existe sustancia alguna, excepto el aire. Se utiliza generalmente para observaciones de preparados en fresco. Por el nmero de aumentos son de tres clases: 1. Pequeo aumento o panormico: mayor de 0 y menor de 10X. 2. Mediano aumento: mayor de 10 y menor de 30X. 3. Gran aumento: mayor de 30 y menor de 80X. b. Objetivos de Inmersin. Son aquellos en los que, entre el lente frontal y el preparado a observar, se interpone una sustancia lquida, comnmente el aceite de cedro, cuyo ndice de refraccin es de 1.5; se utilizan generalmente para observaciones de preparados en seco. Caractersticas del Objetivo de Inmersin: Es el de mayor aumento: 80X, 100X, 120X, 150X. El lente frontal es ms pequeo. Lleva inscrito una fraccin: 1/12; o un decimal: 1.20; 1.30. De acuerdo a la procedencia lleva una franja o una raya negra para facilitar su identificacin. La Abertura Numrica (AN) La AN tambin se halla grabada en la manga de la lente, junto a la indicacin del poder de aumento; 0.30 en el objetivo de 10. 0.65 en el objetivo de 40 1.30 en el objetivo de 100 Distancia Focal: Es la distancia que media entre la parte inferior del lente frontal y del objeto a observar, cuando se tiene un enfoque perfecto. Estas distancias focales para los diferentes objetivos son: Pequeo aumento: entre 0.5 y 3 cm Mediano aumento: entre 3 mm y 0.5 cm

 Gran aumento: 1 mm y 3 mm entre 0.8 mm y 1.20 mm C. SISTEMA DE ILUMINACION Se encuentra ubicado en la parte inferior de la platina y comprende: 1. El espejo. De forma circular, presenta dos caras, una plana y otra cncava, sujeto por medio de un eje giratorio. Se utiliza para enviar los rayos luminosos hacia el preparado. Para trabajos con poco aumento puede utilizarse la superficie cncava; mientras que para trabajo con gran aumento es necesario utilizar la cara plana. 2. El diafragma. Es un dispositivo constituido por un sistema de laminillas metlicas dispuestas concntricamente, de tal forma que permita cerrar y abrir, regulando de esta manera la entrada de luz emitida por el espejo. 3. El condensador. Es un dispositivo constituido, por un sistema de dos o ms lentes montadas dentro de un cilindro cnico truncado de metal, est situado por debajo de la platina. Este sistema ptico sirve para concentrar o condensar los rayos luminosos emitidos por el espejo; funciona accionando un tornillo. 4. Porta filtro. Es un dispositivo que permite colocar filtros de diferentes colores, los cuales facilitan la observacin. LA LUZ: La luz es una forma de energa transportada continuamente por el espacio a velocidades muy elevadas (330.000 Km/s en el vaco). La luz est formada por pequeos corpsculos que salen de un foco luminoso en forma de ondas. El brillo de la luz es proporcional a la altura o amplitud de la onda y su color depende de la longitud de sta. La luz blanca est constituida por una gama de colores del espectro visible, stos colores son: rojo, anaranjado, amarillo, verde, azul y violeta. Cada color corresponde a una longitud de onda determinada, por consiguiente, la luz blanca se compone de muchos rayos de luz, todos vibrando con diferentes longitudes de onda. (Figuras 1.3 y 1.4). La luz de una sola longitud de onda se llama monocromtica. Si bien se utilizan casi solo microscopios de luz blanca, la mayora de las lentes modernas estn diseadas para el uso de luz monocromtica verde.

D.

EL SISTEMA DE AJUSTE El sistema comprende: 1. TORNILLO MACROMETRICO. Se utiliza primero para lograr la aproximacin del enfoque. Se encuentra situado en la parte superior o inferior de la columna, permite desplazamiento del tubo ptico y de la platina. 2. TORNILLO MICROMETRICO. Hace que el objetivo se desplace ms lentamente. Se encuentra situado en la parte superior o inferior de la columna por debajo del macromtrico. En los microscopios modernos, el micromtrico y el macromtrico se encuentran accionados por un solo tornillo. 3. TORNILLO DE AJUSTE DEL CONDENSADOR. Se utiliza para elevar el condensador y aumentar la iluminacin o descenderlo y reducir la iluminacin. 4. TORNILLOS PARA CENTRAR EL CONDENSADOR. Puede haber tres tornillos colocados alrededor del condensador: uno al frente, uno en la izquierda y otro a la derecha. Se usan para centrar el condensador exactamente en relacin con el objetivo. 5. ELEVADOR DEL DIAFRAGMA IRIS. Este es un pequeo elevador que se encuentra fijo al condensador. Se puede mover para cerrar o abrir el diafragma, reduciendo o aumentando as el ngulo y la intensidad de la luz. 6. REGULADORES DE LA PLATINA METALICA. Se utilizan para desplazar el portaobjeto sobre la platina (presente en los microscopios mejorados).

4.2. ILUMINACION Y ENFOQUE: La iluminacin y enfoque son dos condiciones principales para realizar una observacin microscpica. La iluminacin se consigue utilizando fuentes luminosas adecuadas, que pueden ser: natural o artificial. Los rayos de luz son reflejados por el espejo o por la lmpara de iluminacin hacia el objeto o preparado. Cuando se examina con grandes aumentos, la luz debe ser intensa, en cambio cuando se hacen con menores aumentos, la luz debe ser menos intensa, lo que se consigue desplazando en forma vertical (arriba o abajo) al condensador, y graduando la abertura del diafragma. Obtenida la iluminacin conveniente, se efectuar el enfoque del preparado, utilizando primero el macromtrico hasta encontrar la imagen (enfoque aproximado), y por ltimo accionando el tornillo micromtrico que permite el enfoque perfecto (visualizacin de la imagen). CONDICIONES NECESARIAS PARA LA ILUMINACIN Y ENFOQUE. Son las siguientes: Objetivo a menor aumento (panormico). Diafragma abierto. Espejo en posicin correcta, dirigido hacia la fuente de luz. Descienda el objetivo hasta que se encuentre inmediatamente por arriba de la preparacin que se encuentra en el porta objetos. Utilizando el tornillo macromtrico eleve el objetivo hasta que observe una imagen clara a travs del ocular. Nota: Al realizar el enfoque perfecto se debe tener en cuenta las distancias focales a las que trabajan los diferentes objetivos, a fin de evitar las rupturas de los lentes frontales y destruccin del preparado a observar. 4.3. AMPLIFICACION Cuando se trabaja en el laboratorio con el microscopio, es de gran importancia conocer los poderes o grados de aumento de magnificacin de los objetos observados. As tenemos que, el grado de aumento es la amplificacin que ha sufrido la imagen del objeto que est siendo observado. Para obtener la amplificacin se multiplica el nmero de aumento del ocular por el nmero de aumento del objetivo. Ejemplo:

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La lente ocular presenta el nmero 10X y el nmero de la lente del objetivo es 4X, el poder de amplificacin del microscopio cuando se trabaja simultneamente con estas dos lentes ser de: Amplificacin: 10X x 4X = 40 dimetros. 4.4. CUIDADO DEL MICROSCOPIO. El microscopio compuesto (MC) es un instrumento muy delicado y de costo muy alto, de all que se deben seguirse los siguientes cuidados para su uso: 1. Limpiar los lentes con papel especial, papel de silicona para no rayarlos. 2. Al transportarlo de un sitio a otro se tomar con la mano derecha la columna del MC y con la mano izquierda el pie del MC. El instrumento debe ir ligeramente inclinado hacia atrs para evitar la cada de los lentes o espejos. 3. El microscopio se utiliza en posicin vertical. 4. Al realizar la observacin de preparados en fresco, evite que el agua fluya sobre la platina. 5. No colocar los dedos sobre los lentes o el espejo, pues la grasa ocasiona que estos elementos se empaen dificultando la buena visin. Por otro lado, la grasa facilita el desarrollo de microorganismos que deterioran el MC. 6. Cuando se use el objetivo de inmersin, procure usar poca cantidad de aceite de cedro. Luego de finalizar la observacin, limpie el objetivo con xilol. 7. Cuando termine de utilizar los microscopios de luz incorporada, desconecte cuidadosamente los enchufes del tomacorriente. No tire del enchufe para evitar su maltrato. 4.5. MANEJO DEL MICROSCOPIO COMPUESTO. Esta parte de la clase prctica tiene como objeto lograr que el estudiante maneje en forma adecuada el microscopio en la observacin de una muestra en fresco. PROCEDIMIENTO A: Limpiar el portaobjeto y cubreobjeto: 1. Con un gotero coloque una gota de agua en el centro del portaobjetos. 2. Cortar la letra y minscula del peridico y colocarlo en el centro de la lmina portaobjetos y cubrir con una laminilla. 3. Con el fin de limitar la cantidad de burbujas de aire en esta preparacin observe la siguiente indicacin: a. Poner el borde del cubreobjeto sobre la gota de agua del portaobjetos de tal manera que el fluido humedezca por completo el borde. b. Todo este procedimiento se conoce como un PREPARADO MICROSCOPICO DIRECTO O EN FRESCO. 4. A continuacin observe la y con objetivo panormico (4X) a Describa la imagen y la orientacin de la letra. b Aleje de si el porta-objetos (hacia adelante). En qu sentido parece moverse la letra?.... c Mueva el portaobjetos hacia la izquierda En qu sentido parece moverse la letra? NOTA: Para cambiar el objetivo de menor aumento (4X) a objetivo de mediano aumento (10X) simplemente gire el revlver para colocarlo en su lugar. Aclare la imagen utilizando el tornillo micromtrico.

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d Esquematice sus observaciones. Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

PROCEDIMIENTO B 1. Limpie la lmina porta-objetos y cubre-objetos, maneje las lminas nicamente por los bordes. 2. Con un gotero coloque una gota de agua en el centro de la lmina, luego ponga una fibra seleccionada. 3. Coloque la laminilla cubre-objetos sobre la muestra. A esta lmina preparada se le llama preparacin hmeda o en fresco. 4. Colocar la preparacin al microscopio y proceder al enfoque y observacin. 5. Esquematice sus observaciones
NOTA Para evitar cmaras de aire en la preparacin, debe colocar uno de los borde de la laminilla cubreobjetos a un costado de la gota de agua, en un ngulo de 45, de tal manera que el fluido humedezca por completo el borde de la laminilla para luego dejarlo caer sobre la preparacin.

Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

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INVESTIGACION ADICIONAL

1. Escribir los nombres de las partes que corresponden al microscopio:

2. Cules son las caractersticas y diferencias entre un microscopio ptico y un electrnico? 3. Con qu aumentos pueden ser observados una bacteria, una clula vegetal y una clula
animal?

4. Investigue las magnitudes empleadas en microscopa.

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BIBLIOGRAFIA

Lehninger,A.,1987; Bioqumica; Edic.2; Edit. Mundiales. Madrid - Espaa. 430 pp. Solomon, E.P.; Berg, L. Martn, D. 2001; Biologa; Edic. 5ta, Edit. McGraw-Hill Interamericana de Mxico S.A. de C.V.1237 pp. Villee, C.A.1988; Biologa; Edic. 4, Edit. McGraw-Hill Interamericana de Mxico S.A. de C.V.875 pp.

Del Alumno: - Otros textos que considere til en la absolucin de las preguntas.

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PRACTICA N 3 APLICACIN DEL MTODO CIENTFICO: METABOLISMO DE Saccharomyces cereviseae I. INTRODUCCION La ciencia no define la verdad, ms bien define una forma de pensar; es un proceso en el cual se usan experimentos para contestar preguntas. A este proceso se lo denomina mtodo cientfico. El mtodo cientfico es un proceso riguroso para realizar observacin de fenmenos especficos y para buscar el orden que sostiene estos fenmenos. El mtodo cientfico como camino a seguir mediante una serie de operaciones, reglas y procedimientos fijos de antemano de manera voluntaria y reflexiva, para alcanzar un determinado fin que puede ser material o conceptual rene las siguientes caractersticas: a. b. c. d. e. f. g. Es fctico en el sentido de que los hechos son su fuente de informacin y respuesta. Trasciende los hechos. Se atiene a reglas metodolgicas. Se vale de la verificacin emprica. Es autocorrectivo y progresivo. Sus formularios son de tipo general. Es objetivo.

En condiciones ideales la Biologa y otras ciencias utilizan el Mtodo Cientfico, el cual consta de las siguientes acciones interrelacionadas: Observacin, Hiptesis, Experimentacin y Conclusin. De todos los pasos, el que verdaderamente separa la ciencia de otras disciplinas es el proceso de experimentacin. Para probar, o refutar, una hiptesis el cientfico disear un experimento para probar esa hiptesis. A travs de los siglos, muchos experimentos han sido diseados para estudiar la naturaleza de la gravedad. Detengmonos en uno de ellos. al final del siglo XVI, en general se crea que la gravedad haca que los objetos pesados cayesen ms rpido que los objetos livianos. La leyenda dice que el cientfico italiano Galileo crea otra cosa. Galileo conjetur que las fuerzas que actan sobre un objeto que cae son independientes al peso de este objeto. En 1590, galileo plane un experimento. El subi a lo alto de la inclinada Torre de Pisa y, desde arriba, dej caer varios objetos grandes. Los dos diferentes objetos caen exactamente a la misma velocidad. El experimento de Galileo prob que su hiptesis era correcta, las fuerzas que influyen sobre un objeto son independientes del peso del mismo. Por qu? Galileo haba descubierto que la fuerza de la gravedad (que no sera definida hasta varias dcadas ms tarde por un cientfico llamado Sir Isaac Newton) era constante. A pesar de sus pesos diferentes, dos objetos caern (en realidad los objetos son jalados) al suelo exactamente a la misma velocidad. Los experimentos producen resultados que apoyan o rechazan la hiptesis, y se propone una conclusin; los resultados tienen que ser replicables por el mismo investigador, y tambin por otros. En la naturaleza existen microorganismos o microbios, muchos de ellos producen enfermedades, mientras que otros son tiles en la salud y la industria. Uno de los microorganismos tiles en la industria el hongo levaduriforme, Saccharomyces cereviseae, es empleado en la panificacin y fabricacin de bebidas alcohlicas, que se encuentra en el ambiente; nosotros lo podemos ubicar en lugares donde hay sustancias azucaradas y constituye la capa fina pulverulenta de algunas frutas dulces. En bebida preparadas a base de granos y frutas se observa la accin de las levaduras por la presencia de burbujas (CO2) y espuma que hace aumentar aparentemente el volumen del lquido, los mismos que constituyen la evidencia de la fermentacin, adquiriendo adems sabor y olor caracterstico.

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II. OBJETIVOS Objetivo General: Aplicar el mtodo cientfico en un trabajo prctico experimental, evaluando la actividad del Saccharomyces cereviseae, levadura de uso industrial. Objetivos Especficos: Describir una problemtica relacionada al trabajo con levaduras. Formular una hiptesis considerando una variable experimental. Registrar y procesar datos para reportar resultados que aceptan o rechazan la hiptesis. Listar resultados relevantes como conclusin del trabajo prctico experimental. Elaborar un informe de prctica. III. MATERIALES De la ctedra: - Tubos de ensayo. - Pipetas graduadas. - Agua destilada. - Glucosa. - Cloruro de sodio (SSF) - Termmetro. - Bao mara: 37, 95 - Balanza. IV. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL: Cada mesa de trabajo debe seleccionar un ensayo para poder practicar el mtodo experimental y emplear los materiales requeridos en el sistema, as como definir la hiptesis y con los resultados redactar sus conclusiones. ENSAYO A: Variable experimental, temperatura. Armar el siguiente sistema: Contenido Suspensin de levadura al 10% Solucin salina fisiolgica (SSF) Sacarosa al 1% Globos Temperatura Tubo 1 Tubo 2 5 ml. 5 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 1 Temperatura Bao Mara ambiente 40 C 30 minutos de observacin Tubo 3 5 ml. 1 ml. 1 ml. 1 Bao Mara Ebullicin De los alumnos: - Sacarosa. - 10 g de Saccharomyces cereviseae, levadura. - Papel secante (toalla o higinico). - 6 globos medianos. - Bolsa para depositar residuos slidos. - Jabn germicida. - Plumn de tinta indeleble. - Hilo pabilo.

HIPTESIS:

CONCLUSIN EXPERIEMENTAL:

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ENSAYO B: Variable experimental, tiempo de actividad. Armar el siguiente sistema: Contenido Suspensin levadura 10% SSF Sacarosa 1% Globos Temperatura empleada Tiempo HIPTESIS:

Tubo 1 Tubo 2 5 ml. 5 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 ml. 1 1 Bao Mara 40 C Bao Mara 40 C 10 minutos 20 minutos 40 minutos de observacin

Tubo 3 5 ml. 1 ml. 1 ml. 1 Bao Mara 40 C 40 minutos

CONCLUSIN EXPERIMENTAL:

ENSAYO C: Variable experimental, tipo de sustrato. Armar el siguiente sistema: Contenido Suspensin levadura 10% SSF Sustrato Globos Temperatura HIPTESIS:

Tubo 1 Tubo 2 5 ml. 5 ml. 1 ml. 1 ml. H20, 1 ml. Glucosa, 1 ml. 1 1 Bao Mara 40 C Bao Mara 40 C 30 minutos de observacin

Tubo 3 5 ml. 1 ml. Sacarosa, 1 ml. 1 Bao Mara 40 C

CONCLUSIN EXPERIMENTAL:

TRABAJO ASIGNADO: 1) Redactar una problemtica relacionado a un tema de su inters profesional. 2) Listar 02 hiptesis relacionadas a la problemtica elegida. 3) Elaborar 01 objetivo general y 02 objetivos especficos de la problemtica seleccionada e indicar la(s) variable(s) experimental(es).

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PROBLEMTICA: . HIPOTESIS: 1. .. 2. .. OBJETIVOS: a. General: .. b. Especficos: b.1. .. b.2. .. VARIABLES: a. Dependiente: ..... b. Independiente: ..

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PRCTICA N 04 RECONOCIMIENTO DE ELEMENTOS BIOGENESICOS Y CONSTITUYENTES MINERALES I. INTRODUCCIN Los Bioelementos como el C, H, O, N, S, P, al unirse mediante enlaces forman las biomolculas orgnicas como los Carbohidratos, Lpidos, Protenas, cidos Nucleicos. Por otro lado, es necesario sealar que ciertos elementos minerales se presentan en forma inica dentro del organismo, en este estado realizan funciones especficas como por ejemplo el Calcio (Ca2+) que interviene en la excitabilidad muscular y en la coagulacin sangunea, el in Sodio (Na +) abundante en los lquidos intersticiales y el in Potasio (K+) necesarios en la transmisin de impulsos nerviosos, el Carbonato de Calcio (CaCO3) que forman los caparazones de los moluscos, el Fosfato de Calcio (CaPO4) que forman los esqueletos de los animales superiores, el Cu2+, Zn2+ y otros que actan como cofactores enzimticos en las vas metablicas de la clula. El agua juega un papel importante dentro de la clula y los organismos vivos, lugar donde se producen las reacciones enzimticas. Las sales del medio interno y las protenas contribuyen en la regulacin del pH debido a que el medio interno es metablicamente activo pudiendo cambiar su pH, por lo cual es necesario conocer los valores normales del pH, as como poder determinar el valor que presenta en cada fluido biolgico. II. OBJETIVOS - Identificar cualitativamente los elementos biogensicos ms abundantes de los seres vivos. - Comprobar la presencia de agua y sales minerales en organismos vivos. - Determinar el valor de pH de muestras biolgicas. III. MATERIALES Y REACTIVOS De la Ctedra Tubos de ensayo Mechero Placas petri Vasos de precipitado Tubos de ensayo Gradillas Pinzas de madera Del estudiante (por subgrupo) 2 hojas frescas de cucarda 1 trocito de carne 1 Gillette 5ml de leja 5ml de jugo de limn 5ml de jugo de camu camu 5ml de orina fresca 5ml de leche 1 manzana 1 papa 50g de almidn 1 huevo de gallina. Pipetas volumtricas Papel indicador de pH. Agua destilada Solucin de glucosa 1% Solucin de almidn

Materiales de limpieza y descarte de los estudiantes (por subgrupo) Detergente (100g) Leja (1 frasco) Toalla pequea Papel toalla Bolsas plsticas color negro Plumn de tinta indeleble punta fina.

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A.

IDENTIFICACIN DE ELEMENTOS BIOGENSICOS MAYORES: C, H, O, N

Cortar una pequea hoja de cucarda en pedacitos e introducirlos en un tubo de ensayo que

est limpio y seco.

Calentar el tubo en la llama de un mechero y observar con detenimiento a medida que se

va calentando, el desprendimiento de gas, al mismo tiempo note que en las paredes del tubo se forman gotitas y en el fondo quedan residuos. Anote sus resultados y grafique sus observaciones. Repita la experiencia utilizando trocitos de carne fresca de pollo, de res o de pescado. Nota Usted la diferencia? Qu indica la formacin de gotitas de agua? Qu elementos identific en las experiencias realizadas? Cmo los reconoci a cada uno de ellos? Esquematizar lo observado y responder las preguntas anteriores:

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B.

RECONOCIMIENTO DE CRISTALES DE OXALATO, FOSFATO Y CARBONATOS EN ORINA HUMANA. Centrifugar 10 ml de orina a 3000 rpm durante 5 minutos. Eliminar con mucho cuidado el sobrenadante evitando remover el sedimento. Tomar una a dos gotas del sedimento y colocarlo en una lmina portaobjeto. Cubrir con una laminilla o cubreobjeto. Observar a menor aumento (10x) y gran aumento (40x) Identificar los diferentes tipos de cristales: la orina normal contiene cristales y componentes amorfos que precipitan al enfriarse la orina. Segn el pH de la orina pueden precipitar: Orina alcalina: cristales de urato amnico, trifosfatos, fosfato clcico, fosfatos amorfos y carbonato clcico Orina cida: cristales de cido rico, cristales de oxalato clcico, cristales de urato sdico y uratos amorfos Estos cristales se consideran normales si proceden de solutos que se encuentran fisiolgicamente en la orina. Sin embargo, a veces pueden detectarse cristales en la orina de pacientes con cistinuria (cristales de cistina) o con necrosis heptica masiva (cristales de leucina y tirosina). Esquematizar lo observado. Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

Resolucin:

Resolucin:

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C.

MEDICION DEL pH DE MUESTRAS BIOLOGICAS

- Introducir un extremo de la tira de papel indicador de pH en la sustancia a investigar. - Compare con la escala de colores, del papel indicador de pH especial. - Anote sus valores en el siguiente cuadro:

SUSTANCIA

VALOR pH

REACCIN

COLOR

INFORMACION ADICIONAL: Listado de soluciones indicadoras INDICADOR Acido pcrico Rojo para-metileno Azul de timol Amarillo de metilo 2,6-nitrofenol Anaranjado de metilo Azul de bromofenol Rojo de congo Anaranjado de etilo Rojo de alizarina-5 Verde de bromocresol Rojo de metilo Rojo de cloro fenol Para-nitrofenol Azul de bromotimol Rojo de fenol Azul de timol Fenolftalena
ACIDO

COLOR ACIDO Incoloro Rojo Rojo Rojo Incoloro Rojo Amarillo Azul Rojo Amarillo Amarillo Rojo Amarillo Incoloro Amarillo Amarillo Amarillo Incoloro

INTERVALO pH 0.1 0.8 1.0 3.0 1.8 2.8 2.9 4.0 2.0 4.0 3.1 4.4 3.0 4.0 3.0 5.0 3.4 4.5 3.7 5.0 3.8 5.4 4.2 6.2 4.8 6.4 5.0 7.0 6.0 7.6 6.4 8.0 8.0 9.6 8.0 9.8

COLOR BASICO Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo Amarillo-naranja Azul purpura Rojo Amarillo Purpura Azul Amarillo Rojo Amarillo Azul Rojo Azul Rojo-violeta
ALCALINO

Escala de pH

SUPERACIDOS

Ac ido c lorhdrico Ac ido d e batera

Ju go g strico

Ju go de tomate

O rina Leche AG UA PUR A

Agua de ma r

Ja bn de ma no

Amoniaco

Leja

V inagre

Ca f Cerveza

SUPERBASES

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PRACTICA N 5 RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS ORGANICAS INTRODUCCIN En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de molculas orgnicas en gran cantidad: carbohidratos, lpidos, protenas y nucletidos. Todas estas molculas contienen carbono, hidrgeno y oxgeno. Adems, las protenas contienen nitrgeno y azufre, y los nucletidos, as como algunos lpidos, contienen nitrgeno y fsforo. Se ha dicho que es suficiente reconocer cerca de 30 molculas para tener un conocimiento que permita trabajar con la bioqumica de las clulas. Dos de esas molculas son los azcares glucosa y ribosa; otra, un lpido; otras veinte, los aminocidos biolgicamente importantes; y cinco las bases nitrogenadas, molculas que contienen nitrgeno y son constituyentes claves de los nucletidos. En esencia, la qumica de los organismos vivos es la qumica de los compuestos que contienen carbono o sea, los compuestos orgnicos. El carbono es singularmente adecuado para este papel central, por el hecho de que es el tomo ms liviano capaz de formar mltiples enlaces covalentes. A raz de esta capacidad, el carbono puede combinarse con otros tomos de carbono y con tomos distintos para formar una gran variedad de cadenas fuertes y estables y de compuestos con forma de anillo. Las molculas orgnicas derivan sus configuraciones tridimensionales primordialmente de sus esqueletos de carbono. Sin embargo, muchas de sus propiedades especficas dependen de grupos funcionales. Una caracterstica general de todos los compuestos orgnicos es que liberan energa cuando se oxidan. Entre los tipos principales de molculas orgnicas importantes en los sistemas vivos estn los carbohidratos, los lpidos, las protenas y los nucletidos. OBJETIVOS - Determinar cualitativamente los carbohidratos presentes en muestras biolgicas. - Reconocer cualitativamente las protenas presentes en muestras biolgicas. - Demostrar la solubilidad de los lpidos en diferentes tipos de solventes. MATERIALES Y REACTIVOS De la Ctedra Tubos de ensayo Mechero Placas petri Vasos de precipitado Tubos de ensayo Gradillas Pinzas de madera Pipetas volumtricas Agua destilada Del estudiante (por subgrupo) 1 Gillette 5ml de leche 5ml de aceite Bilis de pollo (1) Reactivo de Fehling Solucin de glucosa 1% Solucin de almidn Solucin de lugol Acetona Cloroformo Sulfato de cobre al 1% NaOH 5%.

1 manzana 1 papa 50g de almidn 1 huevo de gallina.

Materiales de limpieza y descarte de los estudiantes (por subgrupo) Detergente (100g) Papel toalla Leja (1 frasco) Bolsas plsticas color negro Toalla pequea Plumn de tinta indeleble punta fina.

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IDENTIFICACIN DE AZCARES REDUCTORES A) Reaccin de Fehling: Es una reaccin cualitativa que sirve para determinar la presencia de un azcar reductor que no sea sacarosa (carece de carbono anomrico y no es azcar reductor). El reactivo de fehling presenta sulfato de cobre, carbonato de sodio, citrato de sodio, y agua. En la reaccin para determinar a los azucares reductores los agentes estabilizantes de la reaccin son el carbonato y citrato, el sulfato de cobre es el reactante especficamente el Cu que va ha reaccionar con los grupos qumicos de aldehdos y cetonas. Que en reacciones de oxido reduccin el Cu se convierte en CuO dando un color rojo ladrillo que precipitar posteriormente.

COMPONENTES Solucin de glucosa Leche evaporada Manzana rallada

I 1 ml

TUBO DE ENSAYO II 1 ml

III

1 ml 2 ml

Reactivo de fehling 2 ml 2 ml Mezclar por inversin el reactivo con cada uno de los componentes

Someter a la accin del calor Observar la formacin de un precipitado rojo ladrillo (CH2O), en bao de agua fra
Graficar sus observaciones

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RECONOCIMIENTO DEL ALMIDN El fundamento de esta tcnica se basa en la especificidad del almidn cuando esta presente en solucin, la cual da un color azul en presencia del Yodo. El yodo presenta: yoduro de potasio y yodo bisublimado, mas agua (solucin de Lugol). El yodo de la solucin tiene afinidad por los enlaces 1-4 y 1-6 de la molculas de almidn, esta interaccin del yodo por dichos enlaces producen el cambio de coloracin. La amilosa en disolucin coloidal toma color azul, la amilopectina da una coloracin rojo violcea. Experimento:

I Solucin de almidn 1 ml Papa rallada 1 ml Clara de huevo Reactivo de lugol 2 gotas 2 gotas Observar los primeros cambios de coloracin Mezclar por inversin
Graficar sus observaciones

COMPONENTES

TUBOS DE ENSAYO II

III 1 ml 2 gotas

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RECONOCIMIENTO DE PROTENAS A) Reaccin de Biuret: Se debe a los componentes que presenta: el hidrxido de sodio y sulfato de cobre; el cual el agente denaturante de las protenas es el hidrxido y el reactante es el sulfato de cobre. Las protenas despus de ser denaturadas facilitan la interaccin del Cu con los pares de electrones sin compartir del grupo amino del pptido mediante enlaces de coordinacin con la formacin de un complejo coloreado prpura violceo. Experimento - Rotular tres tubos de ensayo, en el primero agregar 1 ml de albmina (huevo), en el segundo tubo leche, y en el tercero la solucin de almidn. - Aadir 0.5 ml de NaOH al 40%, y 4 gotas de sulfato de cobre al 1% a cada tubo.

TUBOS

Huevo

Leche

Sol. Almidn

NaOH 40%

SO4Cu2 1%

1 1 ml. 0,5 ml. 4 gotas. 2 1 ml. 0,5 ml. 4 gotas. 3 1 ml. 0,5 ml. 4 gotas. Observar la formacin del color violeta en los tubos que presentan protenas
- Observar en los dos tubos la formacin de un color violeta, si fuera la reaccin Biuret (+) caso contrario de Biuret (-) Esquematizar lo observado.

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RECONOCIMIENTO DE LPIDOS En este experimento la identificacin se da por el comportamiento de las molculas de aceite con el agua, las cuales no se homogenizan, debido a que estas presentan caractersticas diferenciales, mientras que el agua es polar, el aceite es no polar, esto hace que microscpicamente se note que el aceite forme micelas en solucin acuosa. Donde las colas hidrofbicas de las molculas de aceite se esconden del agua adoptando la forma de micelas. Experimento:

COMPONENTES

Aceite Agua destilada Acetona 2 ml Cloroformo 2 ml Despus de agregar por las paredes del tubo cada componente Hacer una primera observacin, luego Mezclar por inversin cada tubo y dejar en reposo unos 5 minutos
Graficar sus observaciones

I 2 ml 2 ml

TUBO DE ENSAYO II 2 ml

III 2 ml

BIBLIOGRAFA 1. CORTEZ, R. 1181, Gua de prctica de laboratorio Biologa 1.a Edicin. Edit. UNT. Pag. 75. 2. LEHNINGER, A. 1987 Bioqumica. 2a edicin. Edt. S.A. Barcelona Espaa Pag. 1095. 3. PLANAS M. 1982 . Biologa de los Elementos. 2 a edicin. Edit. OMEGA. Madrid. Espaa. pag. 961. 4. CORTEZ R. 1981. Gua de Practicas de Laboratorio - Biologa .2 edicin. Edit. UNI, pag 77. 5. LENINGER, A. 1987. Bioqumica 2 Ed. Omega S.A. Barcelona- Espaa. pag. 1095. 6. MURRAY R.K. GRANNER DE MAYES P.A. Y RODWELL. V.W. 1994. Bioqumica de Harper 13 ed. Edit. El Manual S.A. de C.V. Mxico D.F. pp. 961. Plummer PT 1981. Bioqumica Prctica. Edit. Mc. Graw Hill Latinoamericano S.A. Bogot Colombia.+ 7. SALOMON, F. CANTARINO, M. 1979. Curso de prctica de Biologa General.

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PRCTICA N 06 OBSERVACIN DE CLULAS ANIMALES Y VEGETALES I. INTRODUCCIN Las clulas son las unidades bsicas de los seres vivos. La mayora de ellas son de pequeo tamao por lo que es indispensable el uso de instrumentos como los microscopios para su visualizacin. Por lo general el poder resolutivo del ojo humano es de 0.2mm (200 m), o sea la menor distancia vista o resuelta por el ojo humano es de dos lneas separadas 1mm de distancia; si hay dos lneas a 200 m de distancia, veremos una sola lnea. Los microscopios se utilizan para mejorar la resolucin. La invencin del microscopio en el siglo XVII posibilit la serie de descubrimientos posteriores de las mismas. En 1665 Robert Hooke utilizando un microscopio ptico simple, examin un corte de corteza, encontr que esta estaba compuesta por una masa de diminutas cmaras, que llam clulas, en realidad slo vi las paredes celulares, ya que este tejido est muerto a la madurez y las clulas ya no tienen contenido. Ms tarde, Hoock y algunos de sus contemporneos observaron clulas vivas. La Biologa ha logrado desarrollarse debido al avance de la ciencia y tecnologa de los ltimos tiempos que han contribuido al esclarecimiento de la estructura y funcin celular y dentro de este aspecto, la utilizacin del microscopio ha permitido ampliar el campo de la investigacin biolgica convirtindose en uno de los instrumentos bsicos.

II. OBJETIVOS - Observar clulas animales y vegetales en el microscopio. - Identificar a travs del microscopio las estructuras bsicas de las clulas animales y vegetales. III. EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS De la ctedra: - Microscopios compuestos, placas petri, goteros, frascos de vidrio volumtricos, agua destilada, papel secante, metanol, solucin de lugol, colorante Giemsa. De los Alumnos: - Mandil Limpio, 04 lminas porta objetos, 04 laminillas cubre objeto, 06 palitos mondadientes. - Un pedazo pequeito de bulbo de cebolla, lancetas, 1 gillette nuevo, 1 pedacito de papa, 1 huevo de ave, 1 pinza de punta recta.

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PROCEDIMIENTO: Clulas Animales Huevo de Gallina: El huevo de gallina es una clula animal macroscpica especializada, en el se puede distinguir las partes bsicas de la clula tales como la membrana celular, citoplasma y ncleo. Su observacin se centrar en la yema del huevo (clula) para ello: Colocar el contenido de un huevo de gallina en una placa petri y observe lo siguiente: - La membrana vitelina que envuelve la yema del huevo, constituye a la membrana celular. - El citoplasma en la zona hialina perifrica que rodea al ncleo. - El ncleo junto al citoplasma se desplaza hacia un extremo de la yema dando lugar al polo animal. El ncleo es esfrico, de color blanquecino, recibe el nombre de vescula germinativa. Dibuje sus observaciones

Clulas Epiteliales de la mucosa bucal Realizar un raspado de la mucosa bucal con la ayuda de un mondadientes. Colocar el material obtenido en el centro de una lmina porta objetos que contiene una gota de lugol, mezclar con el mondadientes y cubrir la preparacin con una laminilla. Observar las clulas epiteliales y su estructura bsica con el objetivo de menor y mediano aumento. Dibuje sus observaciones Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

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Clulas sanguneas Con la ayuda de una lanceta estril efecte un pinchazo en el pulpejo del dedo. Retire con un algodn la primera gota de sangre y la siguiente ponerla en un portaobjetos. Realice el extendido con la ayuda de otra lmina y dejar secar por tres minutos a temperatura ambiente. Poner la lmina con el extendido en metanol (fijacin) por 30 segundos y secar a temperatura ambiente. Cubrir completamente la lmina con el colorante Giemsa por 12 minutos. Lavar la lmina con agua potable y secarla a temperatura ambiente. Aadir sobre el frotis teido una gota de aceite de inmersin y observar con objetivo de 100X). Dibuje sus observaciones

Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

Resolucin:

Resolucin:

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Clulas Vegetales Clulas epidrmicas de la cebolla Con una pinza retire la epidermis de la cara interna de la catfila de cebolla y extender un pedacito en el centro de una lamina portaobjetos. Agregar una gota de lugol, dejar dos minutos y luego cubrir con una laminilla. Observar las clulas de la catfila y su estructura bsica, utilizando objetivo de menor y mediano aumento. Dibuje sus observaciones: Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

Clulas del tubrculo de papa Con la ayuda de la hoja de afeitar obtener lminas muy finas del tubrculo de papa. Colocar una lmina fina de papa sobre una lmina portaobjetos (realice por duplicado). Agregar una gota de agua sobre una de las lminas con la muestra y en otra lmina aadir una gota de lugol y cubrir a ambas laminillas cubre objetos. Utilizando objetivo de menor y mediano aumento, observar la presencia de clulas pentagonales conteniendo granos de almidn en su interior. Dibuje sus observaciones: Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS CURTIS, H et al. (2001). Biologa. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Madrid - Espaa. Corts, J. (2001). El microscopio ptico. http://www.joseacortes.com/practicas/microscopio.htm http://beltecsci.com Raissman, J. (2007). Microscopa. http://www.biologia.edu.ar/microscopia/microscopia1.htm

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PRCTICA N 07

OBSERVACIN DE TEJIDOS ANIMALES Y VEGETALES

I. INTRODUCCIN Un tejido, es un conjunto asociado de clulas de la misma naturaleza, diferenciadas de un modo determinado, ordenadas regularmente, con un comportamiento fisiolgico comn. Estos componentes celulares estn dispuestos en una matriz de caractersticas particulares para cada tejido. Esta matriz es usualmente generada por las clulas que componen el tejido, por lo que podemos decir que los tejidos estn constituidos, fundamentalmente, por un componente celular, y en algunos casos, por un componente extracelular. Es uno de los niveles de organizacin biolgica, situado entre el nivel celular y el nivel orgnico. Un tejido puede estar constituido por clulas de una sola clase, todas iguales, o por varios tipos de clulas ordenadamente dispuestas. En todo caso, las clulas que conforman un tejido tendrn siempre un origen comn. La parte de la Biologa encargada del estudio los tejidos orgnicos es la Histologa. Existe ms de una centena de tejidos diferentes en los animales y algunas decenas en los vegetales. La estructura ntima de los tejidos escapa a simple vista, para lo cual se usa el microscopio para visualizarla. Todos los tejidos de un organismo animal proceden de la divisin y diferenciacin celular que experimenta el zigoto tras la fecundacin. En el embrin existen tres tipos principales de tejido que son el ectodermo, endodermo y mesodermo de los que se deriva el resto de tejidos. Respecto a los animales, estos presentan cuatro tejidos fundamentales: epitelial, conectivo, muscular y nervioso. Por otro lado, la nutricin es el proceso biolgico en el que los organismos asimilan y utilizan los alimentos y los lquidos para el funcionamiento, el crecimiento y el mantenimiento de las funciones normales. La nutricin tambin es el estudio de la relacin entre los alimentos y los lquidos con la salud y la enfermedad, especialmente en la determinacin de una dieta ptima. Aunque alimentacin y nutricin se utilizan frecuentemente como sinnimos, son trminos diferentes ya que la nutricin hace referencia a los nutrientes que componen los alimentos y comprende un conjunto de fenmenos involuntarios que suceden tras la ingestin de los alimentos, mientras que la alimentacin comprende un conjunto de actos voluntarios y conscientes que van dirigidos a la eleccin, preparacin e ingestin de los alimentos. La nutricin hetertrofa en el caso de un protozoario consta de las siguientes etapas: Captura, Ingestin, Digestin: aqu los lisosomas vierten sus enzimas digestivas en el fagosoma, que se transformar en vacuola digestiva. Las enzimas descomponen los alimentos en las pequeas molculas que las conforman, Paso de membrana, Defecacin o egestin, Metabolismo (Anabolismo y Catabolismo), y Excrecin. II. OBJETIVO Identificar diferentes tejidos animales en muestras fijadas. Reconocer los tejidos vegetales adultos de diferentes especies vegetales. Realizar la digestin enzimtica del almidn. III. MATERIALES Y METODOS De los Alumnos: Musgo, Renaco, Cactus, putu-putu, huama, Gillette, lminas, laminillas, galleta, almidn, pan, pltano cocido, amilasa salival, Ilustraciones sobre tejidos. De la Ctedra: Microscopio, vaso precipitado, pipeta Pasteur, solucin de lugol, amortiguador fosfato, solucin de cloruro de sodio, bao Mara, microscopios, lminas fijadas.

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IV.

PROCEDIMIENTOS Identificacin de Tejidos Animales. Se proceder a identificar imgenes de diferentes tejidos de animales. 1. Tejido Epitelial, clulas queratinizadas, que se estratifican de manera compacta, presentan un solo ncleo. Epitelio simple cilndrico: Localizacin: __________________________ Funcin: __________________________ Esquematizar:

2. Tejido seo, clulas cuyo citoplasma es relativamente granular, presentan numerosas prolongaciones que le dan una forma caracterstica como crculos concntricos al ncleo. Localizacin: __________________________ Funcin: __________________________ Esquematizar:

3. Tejido Cartilaginoso, los condrocitos ocupan pequeas cavidades o lagunas. Suelen ser ovoides o esfricas, cada clula es irregular. Localizacin: __________________________ Funcin: __________________________ Esquematizar:

4. Tejido Cardiaco, formado por clulas lineales unidas a los extremos por discos intercalados, presentan estras, aunque son involuntarios. Localizacin: __________________________ Funcin: __________________________ Esquematizar:

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Reconocimiento de Tejidos Vegetales 1. Observacin del Tejido Conductor. Con la ayuda de una pinza coloque una hojita de musgo sobre una lmina, luego aada una gota de agua, cubrir con una laminilla y observe en el microscopio. Observar una vena media inconspicua la que est formada de clulas del tejido conductor. Observaciones macroscpicas: Campo Microscpico:

Resolucin: 2. Observacin del Parnquima clorofiliano Realice un corte superficial muy fino de la hoja del Renaco, colquelo en una lmina porta objeto, agregue una gota de agua, cubrir con una laminilla y observe en el microscopio. Observar un conjunto de clulas poligonales que representan el tejido epidrmico, adems se observa debajo un conjunto de clulas alargadas de color verde y debajo clulas circulares grandes que corresponden al Clornquima. Observaciones macroscpicas: Campo Microscpico:

Resolucin: 3. Observacin del Parnquima Acufero (Cactus) Realice un corte muy fino del cactus, colquelo en una lmina porta objetos, agregue una gota de agua, cubrir con una laminilla y observe en el microscopio. Observar un grupo de clulas almacenadoras de agua (parnquima acufero). Observaciones macroscpicas: Campo Microscpico:

Resolucin:

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4. Observacin del Parnquima Aerfero (Putu-Puto). Repita el mismo procedimiento de los casos anteriores, pero con la hoja del putu-putu o huama para la observacin del tejido aerfero (Aernquima). Observaciones macroscpicas: Campo Microscpico:

Resolucin: Identificar y poner los nombres a los tejidos que aparecen en la figura adjunta:

V.

BIBLIOGRAFIA 1. Biblioteca de Consulta Microsoft Encarta 2003. 1993-2002 Microsoft Corporation. 2. CURTIS, H et al. 2001. Biologa. Sexta edicin. Editorial Panamericana. Madrid-Espaa. Pgs. 3. CORTEZ R. 1981. Gua de Prcticas de Laboratorio Biologa.2 ed. UNI pp. 75. 4. SALOMON, F. CANTARINO, M. 1979. Curso de prctica de Biologa General. Ediciones Blurne, Rosario 17. Madrid Espaa pp. 115.

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PRCTICA N 08 MITOSIS EN MERISTEMO DE CEBOLLA (Allium cepa) I. INTRODUCCIN: La duplicacin de todos los constituyentes de una clula, seguida de su divisin en dos clulas hijas suele denominrsele el ciclo celular. Los procesos de duplicacin y de reduccin a la mitad, en animales o plantas el ciclo celular. Los procesos de duplicacin y de reduccin a la mitad, en animales o plantas el ciclo celular requiere aproximadamente un tiempo de 20 horas para completarse, se destina aproximadamente una hora para la mitosis el resto del tiempo es necesario para el crecimiento de interfase se denomina fase S, el tiempo entre la divisin mittica y el comienzo de la duplicacin se denomina G1 o fase de intervalo, despus de completada la fase S, la clula no suele estar dispuesta a dividirse inmediatamente si no que sufre una segunda fase o intervalo, La fase G2. El proceso de la mitosis, asegura que cada clula hija reciba exactamente el mismo nmero de cromosomas que tena clula paternal. Aunque cada cromosomas original permanece intacto y provoca la sntesis de una rplica exacta de s mismo. El cromosoma creado es idntico en estructura y funcin, al principio estn unidos de tal manera que no se distinguen. A medida que progresa la mitosis y se contraen los cromosomas, se va haciendo ms manifiesta la lnea de separacin entre ellas, el trmino mitosis en sentido estricto se refiere a la divisin del ncleo, en dos ncleos hijos cariocinesis, posteriormente se da la divisin del citoplasma citocinesis estos dos procesos se dan de manera muy coordinada. Los tejidos meristemticos estn formados de clulas pequeas de pared delgada con ncleo grande, sin vacuolas o, en todo caso pocas, su principal funcin consiste en crecer, dividirse y diferenciarse en todos los dems tipos de tejidos. Al principio dl desarrollo, el embrin de la planta esta enteramente formada por clulas meristemticas que se diferencian en tejidos especficos (Protector, fundamental, conductor). En un rbol ya adulto los tejidos meristemticos se encuentran en partes de la planta que crecen activamente (extremos de races y tallo y cambium). El meristemo de las races y tallo llamado meristemo apical y meristemo lateral del cambium. II. OBJETIVOS: - Aplicar la tcnica de squash o prensado en meristemos de cebolla. - Observacin de clulas en Mitosis e interfase. - Determinar el ndice mittico. III. MATERIALES. De la Ctedra: - Microscopios elctricos, - Pipetas Pasteur, - Orcena actica, - Papel filtro, - Luna de reloj, - Mecheros de alcohol, - Pinzas de madera. Del alumno: - Meristemos de cebollas - Lpiz - Lminas y laminillas - Papel higinico - Bistur

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IV. PROCEDIMIENTOS - Cultivar bulbos de cebolla mediana a pequeas con sustrato agua por un tiempo no mayor de 72 horas. - Despus de coger cuidadosamente la cebolla escoger una de sus raicillas tiernas. - Luego proceder hacer un corte transversal de tamao de 1.5 cm. De longitud partiendo de la parte terminal de la raz. - Posteriormente llevara a una luna de reloj que contenga el colorante Orcena. Actica. - Calentar hasta la aparicin de vapores por dos veces. - Sacar las raicillas a una lmina, identifique la parte terminal y cortar 0.5 de longitud, a este mismo segmento crtelo longitudinalmente a dos mitades. - En la lmina en el que estn las dos mitades de raicillas cortados a la mitad agregue una gota de colorante y luego el cubre objeto. - Con mucho cuidado cubra con papel secante, con un lpiz por la parte del borrador golpe suavemente. - Luego observe al microscopio. - Determinar el ndice mittico al contar ms de 100 clulas y porcentualizar cada una de las fases de mitosis. - Esquematizar con fotos o grficos todo el proceso:

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V. BIBLIOGRAFA - CURTIS. H. 2001. Biologa. 6ta. Edicin. Editorial Panamericana. Madrid. Pag. 274-295.

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- BURGOS O. 1991. Manual de Prcticas de Biologa Celular. Universidad Nacional de Trujillo. Trujillo-Per. PRCTICA N 09 NUTRICION AUTOTROFA Y HETEROTROFA I. INTRODUCCION El problema de la nutricin en las plantas puede parecer sencillo, adems parece fcil entender como crecen los alimentos y estos ltimos devoran alimentos y se supone, que luego lo utilizan para construir ms material animal. Las plantas, sin embargo, con raras excepciones no se alimentan de sta manera y lo hacen a travs de un proceso fotosinttico, es decir con dependencia de luz, CO2 y sales minerales. En la alimentacin animal es de vital importancia la accin de las enzimas hidrolasas para degradar macromolculas hasta sus monmeros sencillos vitales que puedan ser absorbidos y formar parte del medio interno, as como de la economa celular. La amilasa cataliza la descomposicin hidroltica del almidn y el glucgeno en el organismo animal. La actividad de la amilasa depende de las sntesis del pncreas y de las glndulas salivales, cuyo estado determina, en cierta medida en el nivel de actividad de enzima en la sangre. La hidrlisis especifica de la amilasa es en los enlaces glucosdicos de 1 4 en el almidn y en el glucgeno. II. OBJETIVOS Al trmino de la presente prctica el estudiante estar en la capacidad de: 1. Separar e identificar clorofila por cromatografa en papel. 2. Verificar el producto de la actividad de la amilasa salival. 3. Diferenciar la nutricin auttrofa de la hetertrofa. III. MATERIALES De la ctedra: - Mortero y piln. - Pipetas, matraces. - Agua destilada - Amortiguador fosfato y cloruro de sodio - Bao Mara de 37 0C. - Solucin de lugol De los alumnos: - Hojas tiernas de cucarda. - Arena blanca lavada. - Almidn, pan, pltano cocido y otros. - Amilasa extrada de la saliva. - Papel de filtro

IV. FUNDAMENTO TERICO DE LA ACTIVIDAD SALIVAL Saliva; es una mezcla homognea de secreciones producidas principalmente por las glndulas salivares y por las glndulas bucales menores, que desempea una doble funcin: participa en el proceso de la digestin y facilita la deglucin del alimento. La saliva es un liquido claro, algo viscoso, alcalino (pH entre 6 y 7), que contiene un 95% de agua, un 3% de sustancias orgnicas y un 2% de sales minerales (grandes cantidades de iones de potasio y bicarbonato, y menos de iones cloro y sodio). Adems, contiene dos tipos de secreciones proteica: una secrecin serosa rica en ptialina (una alfa amilasa), que contribuye a la digestin del almidn y una secrecin mucosa, que contiene mucina, elemento lubricante que facilita la masticacin y el paso del bolo alimenticio hacia el esfago tras la deglucin. Cada minuto se secreta unos 0.5 ml de saliva, excepto durante el sueo, donde la secrecin es escasa. La saliva tiene un papel importante en el mantenimiento de los tejidos bucales, ya que ejerce un efecto de limpieza y arrastre de sustancias alimenticias y de grmenes patgenos que contribuirn en ese caso a la aparicin de caries dentales e infecciones, as como al deterioro de los tejidos. Adems, contiene iones tiocianato, enzimas proteolticas y anticuerpos proteicos que destruyen las bacterias bucales.

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V. PROCEDIMIENTO 1. CROMATOGRAFA EN PAPEL DE LA CLOROFILA Colocar las hojas y un poco de arena blanca en un mortero y muela todo y agregue 10 ml de acetona. Filtrar poco de la muestra problema. Con otra cantidad de muestra armar un sistema cromatogrfico de papel vertical. En los 2 ltimos casos observar las bandas de colores que quedan en el papel filtro. Analizar sus observaciones y graficar.

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2.

ACTIVIDAD DE LA AMILASA SALIVAL. Armar el siguiente sistema: Preparar una batera de 4 tubos debidamente rotulados y agregar lo siguiente: En el tubo 1, agregar 2 ml de PBS, 1 ml de sustrato de solucin de almidn al 5%, 0.5 ml de solucin salina (S.S.) y 0.5 ml de solucin de amilasa salival. En los tubos siguientes repetir el paso anterior pero cambiando los sustratos que significan las muestras problemas (galleta, yuca, pltano, pan, arroz, frejol, etc.). Incubar en bao Mara a 37 0C por un tiempo de 20-30 minutos. Transcurrido el tiempo, agregar 3 gotas de solucin de lugol y analizar sus resultados.

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PRCTICA N 10 REPRODUCCIN CELULAR, MITOSIS Y FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO CELULAR I. INTRODUCCIN. Todos los seres vivos desde los unicelulares hasta los pluricelulares presentan una caracterstica fundamental que les permite perpetuarse. Este proceso, conocido como la reproduccin muestra muchas variantes entre las diversas especies de organismos. En todos los casos, el evento fundamental que antecede es la replicacin del material gentico. Tanto en la reproduccin asexual y sexual ocurre este complejo proceso estrictamente regulado y que es sometido a un control de calidad permanente a fin de garantizar la fidelidad del mismo. En la reproduccin asexual por biparticin (procariotas), por gemacin (levaduras) y/o y o en el ciclo celular de muchas de nuestras clulas permiten que los descendientes sean genticamente idnticos (existe clonacin), sin embargo, en el proceso de meiosis los descendientes son haploides y genticamente diferentes, debido a que en este procesos las clulas germinales experimentan la recombinacin gentica, que representa una de las fuentes de variacin gentica de los organismos que se reproducen sexualmente. Respecto a la Mitosis, es un evento final y corto (~ 1 hora de duracin) de todo el ciclo celular (Fases G1+ S+ G2 (interfase) y Mitosis) que toma aproximadamente 24 horas. La Mitosis representa la etapa final de la reproduccin celular y permite la distribucin correcta de los cromosomas (material gentico+protenas) a las clulas hijas.

Figura 01. Reproduccin sexual y asexual en afidos II. OBJETIVOS Al finalizar la prctica, el alumno ser capaz de: - Reconocer las fases de la mitosis. - Reconocer algunas formas de reproduccin asexual. - Observar los espermatozoides humanos. III. MATERIALES De la Ctedra: - Microscopio compuesto. Lminas fijadas de meristemo de cebolla con diferentes fases de la mitosis. Solucin de levadura con glucosa. Aceite de inmersin. Xilol. Del alumno - Pan o frutas enmohecidas (por mesa de trabajo) - Semen humano fresco (por mesa de trabajo)

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- 02 alfileres, 02 goteros, 04 Lminas portaobjetos y laminillas cubreobjetos, suero fisiolgico, 03 cebollas con meristemos, libros de texto Biologa. IV. PROCEDIMIENTOS. REPRODUCCIN CELULAR: MITOSIS Tipo de reproduccin asexual que se da en clulas de algunos organismos. La mayor parte de las divisiones celulares en las clulas corporales de los organismos eucariticos conllevan un proceso llamado Mitosis, en el cual participa el ncleo (Cariocinesis), asegurando que cada clula hija reciba una copia de cada cromosoma de la clula progenitora; as mismo, el citoplasma se divide (citocinesis) para formar dos clulas. Comprende 4 fases importantes y secuenciales: profase, metafase, anafase y telofase. En una lmina fijada con un corte histolgico de meristemo de raz de cebolla, observe con mayor aumento las diferentes fases de la mitosis y determine sus caractersticas. Esquematice sus observaciones. Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

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FORMAS DE REPRODUCCIN ASEXUAL: A. POR BROTE O GEMACIN: Utilizando solucin de levadura, proceda a realizar la siguiente experiencia: - Con ayuda de un gotero, coloque una gota de la solucin de levadura en el centro de una lmina portaobjetos y cbralo con una laminilla cubreobjetos. - Observe al microscopio con objetivo de menor y mediano aumento. - Identifique las gemas o yemas presentes de la superficie de cada uno de estos organismos y trate de visualizar el ncleo en la clula madre y en el brote formado. - Esquematice sus observaciones. Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

B. POR ESPORULACIN: Utilice una porcin de pan o fruta con moho - Con ayuda de un alfiler, extraiga una pequea porcin de moho, depostelo sobre una lmina portaobjetos que contiene una gota de agua y cbralo con una laminilla cubreobjetos. - Observe al microscopio con menor y mediano aumento lo siguiente : - Unas estructuras filamentosas parecidos a hilos llamados HIFAS, que en su extremo superior presentan un abultamiento esfrico denominado ESPORANGIO el cual contiene una gran cantidad de clulas reproductoras llamadas ESPORAS, que al ser liberadas originarn a nuevos organismos. - Esquematice sus observaciones. Campos Microscpicos:

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Resolucin: Resolucin: C. POR YEMAS : Utilice una papa y realizar la siguiente experiencia. - Deje una papa que al ambiente con una semana de anticipacin dndole condiciones hmedas, estas presenta yemas de crecimiento, donde a partir de esta crecer una pequea plntula. - Esquematice sus observaciones.

FORMAS DE REPRODUCCIN SEXUAL: 1. IDENTIFICAR LAS ESTRUCTURAS DE UNA FLOR Con ayuda de un estereoscopio observar las diferentes estructuras de la flor, e identificar las partes con la ayuda del texto; diferenciar entre flores masculinas femeninas y hermafroditas. Partes de la flor: vulo, estambre, pistilo, ptalos, spalos. Dibuje lo observado.

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2. IDENTIFICACIN DEL GAMETO SEXUAL MASCULINO DEL HOMBRE: ESPERMATOZOIDE. Los gametos (vulo y espermatozoide) se fusionan por un proceso llamado fecundacin, dando lugar a la formacin del huevo o cigoto. OBSERVACIN DE ESPERMATOZOIDES EN SEMEN HUMANO El espermatozoide es el gameto o clula sexual del macho que contiene a los genes o caracteres hereditarios del progenitor. En el espermatozoide se puede distinguir tres partes principales: Cabeza, que consta del ncleo y un casquete o acrosoma, Cuello o porcin media, y Flagelo. Utilizando semen humano realice la siguiente experiencia: - Con ayuda de un gotero coloque una gota del esperma humano en una lmina portaobjetos que contiene una gota de suero fisiolgico y cbralo con una laminilla cubreobjetos. - Observe al microscopio con menor y mediano aumento, el movimiento del espermatozoide y sus dems caractersticas. - Esquematice sus observaciones. Campos Microscpicos:

Resolucin:

Resolucin:

FACTORES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO CELULAR - Utilice tres placas petri con medio nutritivo, ensalive un hisopo y extienda por todo el medio en una primera placa, haga lo mismo con las dos siguientes placas pero utilizando sudor. - Luego, a la primera placa agregue cinco discos con antibiticos, dos a la segunda placa, y a la tercera placa no se agrega nada. - Deje incubar durante tres das anote sus resultados. - Observar que alrededor de los discos existe un halo o espectro en el cual las bacterias no pueden crecer. - Dibuje sus observaciones y explique por qu no crecen las bacterias.

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CUESTIONARIO 1. Respecto a la Mitosis, mencione los eventos ms importantes que ocurren en la profase, metafase, anafase y telofase. 2. Mencione las caractersticas del esperma o semen humano. 3. Investigue: Los rganos que conforman el aparato reproductor femenino y masculino de la especie bovina, grafquelos. Verifique si existe parecido con el de la especie humana.

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V. BIBLIOGRAFIA. CLAUDE V. 1988. Biologa. 7ma edicin. Editorial Mc GRAW- HILL. Mxico. Pag. 504-510. ONDARZA R. 1991. Biologa Moderna. 9na Edicin. Edicin. Editorial. Trillas Buenos Aires, Argentina. Pag. 500-520. CURTIS H. 2001. Biologa. 6ta Edicin. Editorial Panamericana. Madrid Espaa. Pag 274-295. BURGOS O. 1991. Manual de Practicas de Biologa Celular. Universidad Nacional de Trujillo. TrujilloPer.

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 PREPARACION DE SOLUCIONES Y REACTIVOS SOLUCIONES PORCENTUALES EN PESO (% EN PESO) Pesar el n de gramos del reactivo en un matraz y aforar con agua a 100 ml. SOLUCIONES PORCENTUALES EN VOLUMEN (% EN VOLUMEN) Colocar el n de ml del reactivo en un matraz y aforar con agua a 100 ml. SOLUCIONES MOLARES Disolver un n de gramos de soluto igual a su peso molecular y aforar con agua a 1000 ml para obtener una disolucin 1 M. BENEDIT, REACTIVO DE Usos: identificacin de protenas Citrato sdico o potsico........................................................ 173 g Carbonato sdico cristalino........................................... . 200 g Sulfato de cobre cristalino..................................................... 17,3 g Agua destilada................................................. . 1000 ml Disolver el carbonato y el citrato en 800 ml de agua calentando ligeramente. Disolver el sulfato de cobre en 100 ml de agua, aadir esta disolucin a la anterior y agitar. Aforar con agua a 1000 ml. FENOLFTALENA Usos: indicador de pH. Fenolftalena.................................................... 1g Alcohol etlico de 96%........................................................... 50 ml Agua....................................................................................... 50 ml Disolver la fenolftalena en el alcohol y despus aadir el agua. INDOFENOL Usos: identificacin de vitamina C Indofenol................................................................................ 0,1 g Agua....................................................................................... 100 ml LICOR DE FEHLING Usos: identificacin de azcares reductores a) Solucin Fehling A: Sulfato de cobre.................................................................... 34,6 g Agua....................................................................................... 500 ml Disolver el sulfato de cobre en 400 ml de agua y aforar a 500 ml. b) Solucin Fehling B Tartrato sdico-potsico........................................................ 173 g Hidrxido de sodio................................................................. 50 g Agua....................................................................................... 500 ml Disolver el tartrato sdico-potsico (sal de Rochelle) y el hidrxido sdico en 400 ml de agua y aforar a 500 ml. Dejar reposar durante dos das. LUGOL Usos: presencia de almidn y tincin Gram Yodo...................................................................................... .. Yoduro potsico..................................................................... .. 300 ml agua destilada......................................................... .. Disolver y filtrar. 1g 2g 300 ml

OVOALBMINA, SOLUCIN DE Usos: solucin isotnica para la mayora de los tejidos Disolver clara de huevo (fresca o desecada) en una solucin de cloruro sdico al 7,5% Suero fisiolgico Cloruro sdico...................................................................... .. 0,9 g Agua destilada...................................................................... .. 100 ml

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COLORANTES AZUL DE METILENO Usos: tinciones simples de tejidos animales y vegetales. Azul de metileno.................................................................... 1 g Etanol al 90%......................................................................... 25 ml Hidrxido de potasio.............................................................. 0,01 g Agua....................................................................................... 100 ml Disolver el azul de metileno en el etanol y aadir el resto. Para contraste de flagelos se puede usar una disolucin de azul de metileno al 1 % en agua. CARMN ALUMNICO Usos: tincin diferencial en vegetales Alumbre potsico o amnico................................................. 3a5g Carmn................................................................................... 1 g Formol.................................................................................... 1 ml Agua....................................................................................... 100 ml Disolver el alumbre en el agua y despus aadir el carmn calentando la disolucin hasta ebullicin durante 15 minutos. Dejar enfriar, filtrar y aadir 1 ml de formol. CRISTAL VIOLETA (VIOLETA DE GENCIANA) Usos: tincin Gram y de tejidos vegetales Cristal violeta (violeta de genciana)...................................... 1g Agua...................................................................................... 100 ml Calentar hasta ebullicin, filtrar y dejar reposar una semana. EOSINA: Usos: tincin de tejido animal y vegetal. Tambin para contrastar con otros. Eosina.................................................................................... 1 g Alcohol etlico al 70%............................................................ 100 ml Disolver el colorante en el alcohol y filtrar. GIEMSA Usos: tincin de frotis sanguneos y protozoos. Solucin de Giemsa............................................................... 10 ml Agua destilada....................................................................... 90 ml Es importante que se utilice agua destilada. Mejora la tincin si en lugar de agua destilada se utiliza la misma cantidad de una disolucin preparada a partir de una pastilla comercial de sales tampn a pH=7,2. La solucin de Giemsa puede adquirirse comercialmente o prepararse del siguiente modo: Azur-eosina-azul de metileno................................................ 0,76 g Glicerina................................................................................ .. 50 ml Metanol absoluto.................................................................. .. 50 ml Disolver el polvo de Giemsa (Azur-eosina-azul de metileno) en la glicerina, calentar durante una hora (mejor 2) al bao Mara a unos 60 C, aadir el metanol y dejarlo reposar una semana en oscuridad. Filtrar y guardar en frascos muy limpios enjuagados con alcohol. HEMATOXILINA DE MAYER Usos: tincin de tejidos. Se puede contrastar con eosina. Solucin madre de hematoxilina......................................... 1 ml Alumbre de potasio................................................................ 5 g Timol...................................................................................... 0,1 g Agua....................................................................................... 100 ml Disolver el alumbre de potasio (sulfato de aluminio-potasio) en 75 ml de agua, aadir 1 ml de solucin madre de hematoxilina y aforar con agua hasta 100 ml. Finalmente aadir el timol, para impedir la proliferacin de hongos. Dura varios meses. La solucin madre e hematoxilina puede adquirirse comercialmente o prepararse del modo siguiente: Hematoxilina en polvo.......................................................... .. 10 g Alcohol absoluto.................................................................... .. 100 ml Disolver el polvo de hematoxilina en alcohol caliente, enfriar y dejar envejecer esta disolucin durante un mnimo de 4 semanas. Conservacin indefinida.

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ORCENA Usos: tincin de cromosomas. Solucin A (Actica y clorhdrica): Orcena................................................................................... .. 2 g cido actico glacial............................................................. .. 45 ml Agua...................................................................................... .. 55 ml cido clorhdrico concentrado...................1 ml Disolver el polvo de orcena en el cido actico caliente. Enfriar y aadir el agua. Dejar reposar 48 horas y filtrar. Finalmente aadir 1 ml de cido clorhdrico. Solucin B (actica): Orcena................................................................................. .. 2 g cido actico glacial............................................................. .. 45 ml Agua...................................................................................... .. 55 ml Disolver el polvo de orcena en el cido actico caliente. Enfriar y aadir el agua. Dejar reposar 48 horas y filtrar. Sugerencia: preparar 200 ml de la solucin B y despus separar 100 ml de esta para obtener la solucin A al aadir 1 ml de HCl. ROJO NEUTRO (SOLUCIN 1/10000) Usos: coloracin vital de protozoos y otros organismos. Rojo neutro........................................................................... .. 0,1 g Agua...................................................................................... .. 1000 ml Se puede utilizar una disolucin 1/5000 diluyendo 0,2 g de rojo neutro en 100 ml de agua, que mata las clulas, pero permite coloraciones ms intensas. Sudn III: Usos: tincin de lpidos Acetona................................................................................ .. Alcohol al 70%...................................................................... .. Sudn III................................................................................ .. Disolver y filtrar. 50 ml 50 ml Hasta saturacin.

VERDE BRILLANTE Usos: tincin diferencial de cartlagos y fibras musculares. Observacin de esporas. Para tincin diferencial preparar una disolucin saturada de verde brillante en etanol de 90%. Para observacin de esporas preparar una disolucin acuosa al 5% VERDE DE METILO ACTICO Usos: tinciones simples y contraste de ncleos. Verde de metilo................................................................... 1 g cido actico.......................................................................... 1 ml Alcohol absoluto.................................................................... 100 ml Disolver el verde de metilo en alcohol y aadir el cido actico. MEDIOS DE CULTIVO AGAR NUTRITIVO Usos: cultivo de microorganismos, algas unicelulares y hongos Peptona.................................................................................. 15 g Cloruro sdico........................................................................ 5 g Agar........................................................................................ 12 g Glucosa.................................................................................. 10 g Agua destilada....................................................................... 1000 ml Disolver calentando suavemente y despus esterilizar al microondas durante 5 minutos o hervir durante 15 minutos como mnimo (esterilizacin parcial). MEDIO DE CULTIVO PARA HONGOS Harina de avena..................................................................... 3 g Agar........................................................................................ 2 g Agua destilada....................................................................... 100 ml Disolver harina en agua fra evitando los grumos, aadir Agar, disolverlo y calentar hasta ebullicin.

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