COLUNA Winogradsky Ilustrao da fotossntese microbiana e ciclo do enxofre Introduo O estudo de microrganismos fototrficos assim como outras bactrias

envolvidas no ciclo do enxofre, nem sempre fcil de ilustrar, embora presente em muitos programas. A observao directa a partir de amostras provenientes do meio possvel, mas isto apresenta uma srie de problemas: Onde que estas amostras? Em que ponto (que temporada)? Como identificar microorganismos observados? Alcanar os alunos com uma coluna Winogradsky uma ilustrao dramtica. Ele simples de implementar e pode ser uma boa ferramenta de ensino, tanto com alunos de segundo como BTS, operaes que vo desde a identificao visual simples de microrganismos e caracterizao de suas interaes metablicas.

A observao direta Muitos microorganismos pode ser observada a partir de amostras "frescos" feita a partir do ambiente. Representantes dos protozorios, cianobactrias, algas, fungos e bactrias, so frequentemente encontrados. Para as bactrias, interessante observar fototrficas, formas filamentosas e outra espira, que no so muito comuns em laboratrios de microbiologia. Thiothrix formar massas filamentosas esbranquiadas ao longo de um pouco de gua rpido poludo com sulfato. Beggiatoa freqentemente associada com as razes submersas de salgueiros, s vezes na presena de alga filamentosa verde Spirogyra . Achromatium e fototrfico enxofre roxo como Thiopedia pode ser observado na superfcie do sedimento preto. Fototrficas enxofre roxo pode desenvolver aterrado localmente nas guas sulfurosas, bem como cimento de contato. Coluna Winogradsky enriquecimento: Para a observao de bactrias fototrficas, para alm da observao directa requer um bom conhecimento das espcies encontradas uma tcnica de enriquecimento tem sido fazer uma coluna Winogradsky. misturado sedimento preto (lama da borda da lagoa) matria orgnica (papel, fcula de batata, ovos, vitamina B 12 , ...) add gesso (sulfato de clcio) ou tiossulfato como reservas de enxofre suplemento de carbonato de clcio para promover a fotossntese preencher 1/2 ou 2/3 de um teste de 500 mL de altura, e completa at a borda com gua a partir do mesmo meio.

Cubra com uma tampa ou em uma parafilm no hermtica para minimizar a evaporao de gua sem impedir a oxigenao leve do meio. Este conjunto colocado perto de uma janela e constantemente acesa sempre do mesmo lado, com pelo menos uma lmpada de 60 W.

Diagrama esquemtico de uma coluna "ideal" praticamente impossvel se dar bem com todos os grupos de organismos representados neste diagrama. Por contras, podemos observar a sua sucesso ao longo do tempo. Depois de alguns dias escurecido pela produo de matria orgnica de H 2 S (principalmente pela reduo de sulfatos e sulfitos por Clostridium e Desulfovibrio ). Quase todo o oxignio no meio consumido pelas bactrias aerbias e so formadas inclinaes opostas do oxignio dissolvido e do sulfureto de hidrognio. Geralmente, Rhodospirillum rubrum, bactrias prpura enxofre no se desenvolve na primeira coluna para a superfcie do sedimento: logo que haja suficiente anaerbica e antes da produo de H 2 S importante. As bactrias verdes sulfurosas, ento, crescer um pouco abaixo para formar um segundo anel de verde. So suplantadas pelas fototrficas bactrias de enxofre roxas logo em seguida.

RESULTADOS DE EXPERINCIA Resultados em Primavera de 2002 - BTS Biotecnologia - A Martinire-Duchre

Chlorobium Rhodospirillum Chromatiaceae Chromatiaceae

Sedimentos rize , papel de filtro, gesso (massa corrida " Alabastine "), vive. B 12

Os resultados em 2003/2004 - BTS bioqumico - AMBERIEU 26 de setembro de 2003 : a criao de uma coluna. Em uma amostra de 1 litro, os sedimentos muito negras no matagal em um pouco rpido sobre a gua introduzida. O papel de filtro foi adicionada, 15 g de gesso de Paris e 15 g de carbonato de clcio e 15 g de amido, a vitamina B12. 500 ml introduz-se na coluna e completar com gua do mesmo rio, coberto com uma tampa de uma placa de Petri. A coluna colocado perto de uma janela com uma fonte de luz adicional de 60 W. Depois de alguns dias, os sedimentos se completamente negro, com a presena de gs. A forma de crosta superficial esbranquiada. Um cheiro de H 2 S aparece ... 05 de novembro de 2003 : um vu vermelho observado na superfcie do sedimento. Parte retirada e observada x 40 altamente mvel espiras grande (cerca de 10 microns) foram observados. 07 de novembro de 2003 : O espectro plotado clulas inteiras em suspenso na gua entre 340 e 1100 nm: os picos em 374, 480, 514, 546, 587, 801 e 883 nm. Comparando os espectros obtidos espectros de referncia so identificados como a bactria Rhodospirillum rubrum (bactrias prpura fototrfico no-enxofre). Exemplo do espectro obtido para a banda vermelha da coluna 03 de maro de 2004: de facto Rhodospirillum rubrum .

10 de dezembro de 2003 : a faixa verde apareceu com a burocracia que um pouco turva. Observamos x 40 grandes bacilos no verde muito regular. O espectro de clulas inteiras em suspenso na gua nos permite identificar Chlorobium limicola (fototrficas bactrias verdes sulfurosas)

Pode-se tambm encontrar neste tipo de coluna: algas, cianobactrias e outros ciliados. Em particular, se o sedimento complementada com fcula de batata, pode-se observar a presena de muitas espcies de ciliados Paramecium bursaria , paramecia hosting em seus zoochlorelles citoplasma.

Bactrias fototrficas:
Procariontes fototrficas Fotossntese anaerbica Bactrias prpura Nonsulfur Rhodospirillum Rhodopseudomonas Rhodobacter Rhodocyclus Sulfuroso Thiospirillum Chromatium Thiocapsa Amoebobacter Bactrias verdes Nonsulfur Chloroflexus Sulfuroso Chlorobium Prosthecochloris Pelodictyon Chlorochromatium Fotossntese aerbica Cianobactrias Anabaena Oscillatoria Microcystis

Rhodomicrobium Heliobacterium

Thiopedia Ectothiorhodospira

Pelochromatium

Fototrficas bactrias esto presentes nos meios de comunicao de maior liquidez. Em lagos e lagoas, eles so encontrados em diferentes profundidades dependendo do seu comportamento em relao ao oxignio, sua necessidade de H 2 S e seus equipamentos pigmento que lhes permite captar a luz a uma profundidade mais ou menos. A observao de uma amostra de sedimento preto na beira de uma lagoa (15-20 cm de profundidade) nos permite observar vrias espcies de bactrias fototrficas, alguns dos quais tm uma forma, uma forma de agrupamento ou deslocamento de recursos.

Frmula qumica do bacteriochlorophylls

fonte: O mundo microbiano, Stanier , Prentice-Hall, 1986

Os pigmentos de bactrias: fototrficas

fonte: Os procariontes - Vol I

Bactrias envolvido no ciclo do enxofre

Reduo Oxidao Chromatiu m , Rhodo bacter , Thiopedia, Chlorobiu m. Thiobacill us, Thiothrix, Sulfolobus , Beggiato a, Achromati um

Desulfovibrio, Desulfobacterium, Desulfobacter,Desulfococcus, Desulfoarculs, Desulfomonas,Des ulfobacillus, Desulfosarcina, Desulfobulbus,Desulfobotulus, Desulfomicrobium,Thermodesulfobac terium, Desulfonema,Desulfotomaculum Archaeoglobus

O enxofre, o elemento essencial para a vida est presente em seres vivos, a mais de 1 a 2% da sua massa. a forma de aminocidos contendo enxofre (cistena, metionina) e nos centros de ferro-enxofre protenas. Na natureza, o enxofre principalmente na forma de sulfato no mar ea rocha ou metal sais de sulfeto (por exemplo, pirita). Tambm podem estar presentes na forma elementar, enxofre, que ocorrem prximo vulces. O ciclo do enxofre na natureza envolve um certo nmero de microorganismos: sulfatorducteurs como anaerbia Desulfovibrio ou Clostridium , bactrias fototrficas ( Chromatium , Thiopedia ...), as bactrias aerbias, tais como Thiobacillus ou Achromatium arqueobactrias, tais como bactrias methanogens. Reduo de sulfato Sulfato de reduo e outras formas oxidadas naturais de enxofre pode ser feito de duas maneiras: A reduo de assimilao produz ons sulfeto, necessrios para a sntese celular. A reduo dissimilatria, em que o composto contendo enxofre oxidado s serve como um aceitador de electres final da produo de ATP, sob condies anaerbias ("sulfatos de respirao"). As bactrias redutoras de sulfato so encontradas principalmente no sedimento preto e lodo, onde o material orgnico decomposto pela atmosfera anaerbica (at 10 7 sulfatorducteurs / ml de sedimento). Limpar o sulfureto de hidrognio corresponde ao produto terminal da respirao dos sulfatos (dissimilatria). Desulfovibrio produz sulfeto de enxofre e hidrognio por decomposio sulfato contido na gua do mar Esta bactria tambm indiretamente envolvidos na corroso de ferro, liberando prtons de hidrognio molecular.ons frricos formados precipitam sulfetos para formar sulfeto de ferro e dar-lhes sedimento preto. Enrich por bactrias redutoras de sulfato pode ser inoculado meio nutriente contendo lactato e sulfato , e adicionar uma unha grande entre os quais fornece um potencial redox suficientemente baixa polarizaocathodique.Le enxofre elementar, assim como de outros substratos, tais como tiossulfato, sulfito ou DMSO ( dimetil sulfxido ) pode ser reduzido por facultativos bactrias aerbias, tais como Campylobacter , Proteus ,Pseudomonas e Salmonella .

Reduo de enxofre: Enxofre (S ) tambm pode actuar como aceitador de electres: enxofre elementar deve ser reduzido a sulfureto de Desulfuromonas acetoxidans que no pode reduzir o sulfato de sulfito de sdio. Esta reaco acoplada oxidao de substratos, tais como o acetato ou o etanol. A oxidao de enxofre: Elementar e / ou sulfureto de enxofre oxidado em sulfato. Ou anaerobicamente por bactrias como Chromatium , Rhodobacter ou Chlorobium . Ou aerobicamente por Thiobacillus thiooxidans em ambientes cidos. Thiothrix, Sulfolobus e Beggiatoa em ambientes neutros.

fototrficas

Descrio bactrias encontradas

Chromatium Gram negativos curvos grandes, largas e arredondadas, contendo incluses de enxofre. Ela se move atravs de dois flagelos polar. fototrficas anaerbio enxofre roxo

Thiopedia rosea Clulas redondas Thiopedia rosea formam "quadrado".

colnias

vermelhas

fototrficas anaerbio enxofre roxo

Rhodospirillum rubrum Spirille Gram-negativos, altamente mveis por flagelao polar

fototrficas anaerbio prpura enxofre no-

Thiocystis

fototrficas anaerbio enxofre roxo

Thiospirillum Spirillaire forma incluses de enxofre Chlorobium, ver http://www.egbeck.de/skripten/12/bs12-24b.htm Chloroflexus

fototrficas anaerbio enxofre roxo fototrficas anaerbio sulfurosa verde fototrficas anaerbio sulfurosa verde

Anabaena Cianobactria

Fototrficas aerbico no-sulfurosa

Oscillatoria Cianobactria

Fototrficas aerbico no-sulfurosa

Microcystis Cianobactria

Fototrficas aerbico no-sulfurosa

Thiobacillus Os bacilos gram-negativos Achromatium oxaliferum 400 x entre Euglena Achromatium oxaliferum bactrias de enxofre um todo, no fototrficas. Ele contm incluses de enxofre e de carbonato de clcio.Organismos microbianos so grandes (at 100 micron). Estas bactrias so encontrados nos sedimentos. Desulfovibrio, consulte http://www.rohmhaas.com/rhcis/markets_and_products/applications.html Clostridium Bacilos Gram-positivos em forma de esporos. Beggiatoa alba x 400 uma bactria Gram filamentosa - incolor contendo numerosas incluses de enxofre no seu citoplasma. Ele facilmente observado em amostras de lama, 20 cm abaixo da superfcie da gua. Ele pode ser encontrado ligado a um algas verdes filamentosas e associado com Thiopedia rosea . Ele move por deslizamento, como Oscillatoria que filogeneticamente distantes. Thiodictyon elegans

Aerbico chimiolithotrophe

anaerbio sulfatorducteur anaerbio sulfitorducteur

x 1000

Composio dos meios de cultura

Mileux cultura para Chromatium spp

Soluo I: NH4Cl KH2PO4 MgCl2 Agar gua mg Soluo II: NaHCO3 a gua Soluo III: Na2S, 9H2O gua 2g 100 ml 0,1 g 1L 0,1 g NaEDTA 5,2 g 0,05 g FeCl2, 4H2O 1,5 g 20 g de ZnCl2 70 mg 780 mL de MnCl2, 4H2O 100 H3BO3 CoCl2, 6H2O CuCl2, 2H2O NiCl2, 6H2O Na2MoO4, 2H2O VOSO4 2H2O Na2WO4, 2H2O 6 mg 190 mg 17 mg 25 mg 188 mg 30 mg 2 mg Oligoelementos gua destilada

1g 100 ml

Esterilizado separadamente durante 15 minutos a 120 C, arrefecimento a 50 C e mistura II e III I. Dispense em tubos de 16 milmetros tambm aconselhvel adicionar a vitamina B12, a 20 mg / L e 1 mL / L de soluo de elementos trao. Os meios de cultura para Rhodopseudomonas e Rhodospirillum NH4Cl 0,5 g MgSO4 7H2O 0,4 g CaCl2, 2H2O 0,05 g NaCl 0,4 g Hidrogenocarbonato de sdio malato 1,5 g Extrato de levedura 0,1 g gua para 1000 mL Mover para tampo de fosfato de pH seleccionados com o seguinte: Na2HPO4, 12 H2O 0,1 M (35,85 g / L), NaH2PO4, 2H2O 0,1 M (15,6 g / l) pH 5,0-6,0 promove Rhodopseudomonas acidophila ( pH max = e Rhodomicrobium vannielii pH 7.0 promove Rhodospirillum rubrum e Rhodopseudomonas palustris . 5,5)

Ambiente para as bactrias de enxofre NH4Cl 0,1%, 0,1% de KH2PO4, 0,05% de MgCl2, 0,2% de NaHCO 3, Na 2 - 9H2O 0,1%, NaCl a 0,1%

Ambiente para as bactrias no-enxofre NaHCO3 a 0,5%, 0,2% de NaCl, (NH4) 2SO4 a 0,1%, K2HPO4 0,05%, MgSO4 0,01%, extracto de levedura 0,2% de Na2S - 9H2O 0,01%. Para estas duas reas, garrafas de autoclave de 120 mL (deixar um pouco de renda para inculo). O gar podem ser adicionados para solidificar o meio com 15 g / L, a fim de caixas de fluxo. Sementeira: Adicionar 5 mL de sedimento preto do ambiente aqutico e encher a garrafa com meio de cultura. Firmemente. Meio de cultura para Thiobacillus thiooxidans NH4Cl KH2PO4 MgCl2 6H2O CaCl2, 2H2O O enxofre em p gua destilada at 0,1 g 3,0 g 0,1 g 0,14 g 10,0 g 1000 mL

Dissolver todos os ingredientes, exceto enxofre, ajustar o pH 4,2 e autoclave. Esterilizar enxofre separadamente numa garrafa. Antes da utilizao, remover o enxofre para a superfcie do meio autoclavado. Opcionalmente, a adio de 0,01% de extrato de levedura esterilizado separadamente. Meio de cultura para Beggiatoa CaSO4 soluo ( saturada ) de 20 ml 0, 2g NH4Cl 0 , 45 mg de FeSO4, 7H2O 0,7 g K2HPO4 0 , 1 mg de ZnSO4, 7H2O 0,01 g MgSO4, 7H2O 0 , 2 mg de MnSO4, 4H2O 2 mg Soluo de elementos vestigiais 5 mL de CuSO4 5H2O 5g -Na acetato 0 , 5 g de H3BO3 10 mg Caldo nutriente (Difco) 0 , 5 g de Co (NO3) 2 1 mg Agar 10 g Na2MoO4, 2H2O 1 mg Catalase 0,22 microns filtrada 15 000-35 000 unidades gua qs 1000 mL gua destilada at 1000 mL Ajustar a pH 7,4 antes da autoclavagem. A catalase adicionado ao tempo de utilizao. Mdio para Desulfovibrio Soluo 1: K2HPO4 NH4Cl Na2SO4 CaCl2, 2H2O MgSO4 7H2O Na DL- lactato de Extracto de levedura Oligoelementos: de EDTA

0,5 g de 1,0 g 1,0 g 0,1 g 2,0 g 2,0 g 1,0 g

soluo a 2: de FeSO4, 7H2O gua destilada

0,5 g 10 mL

Resazurine gua destilada, Soluo 3: Tioglicolato de sdio cido ascrbico gua destilada

1,0 mg 980 mL

0,1 g 0,1 g 10 mL

Ferva a soluo de um ento legal sob azoto. Adicionar as solues de 2 e 3, para ajustar o pH 7,8 NaOH e tubos de distribuio de anaerbicas. Distribua o cinza precipitado. Autoclave . O tioglicolato e ascorbato so agentes redutores. O desenvolvimento de Desulfovibrio visvel pelo aparecimento de um precipitado de sulfureto de ferro preto, aps 15 dias a 30 C.

Bibliografia
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http://pacelab.colorado.edu/courses/MCDB_4350_2002/PDFs/Vig. 20Winograd.final.1002%% 20.pdf A Coluna Winogradsky Verso pdf : http://www.lyon.edu/webdata/users/dthomas/BIO100L/Winogradsky_column.pd f ou liberao html : http://www.lyon.edu/webdata/users/dthomas/BIO100H/lab/winogradsky.h tml A Coluna Winogradsky (animao flash) http://www.sumanasinc.com/webcontent/anisamples/microbiology/winogradsky.html Winogradsky coluna (por exemplo) http://www.umanitoba.ca/faculties/science/microbiology/wall/228/wino.htm Microbiologia fichas para escola http://www.microbiologyonline.org.uk/forms/Column.pdf O Winogradsky Coluna: A demonstrao de Sucesso Microbiana Laboratrio de Exerccio 10 http://www.oznet.ksu.edu/ed_agron645/lab/645winogradsky_lab.htm

Os resultados do Estudo Coluna Winogradsky http://ecosystems.mbl.edu/SES/MicrobialMethods/Winogradsky/default.htm

Os procariontes - Vol I

http://www2.ac-lyon.fr/enseigne/biotech/Winogradsky.html, acessado em 14/07/2013.