Compartimentos intracelulares e transporte

Profa. Ana Paula FFI0710- Biologia Molecular e Celular II IFSC, 2012

Clula endotelial bovina corada: verde, membranas do RE; em laranja, mitocndrias

Todas as clulas so procariticas ou eucariticas

Cl. procaritica (E. coli) Cl. eucaritica (plasmcito)
Ncleo Complexo de Golgi

Lisossomo

Membrana externa

Membrana interna (plasmtica)

nucleide Retculo endoplasmtico

Mitocndria

nucleide

Membrana nuclear Membrana plasmtica Complexo de Golgi Mitocndria peroxissomo Lisossomo

Membrana interna Parede celular periplasma Membrana externa Retculo endoplasmtico rugoso Vescula secretora

Compartimentos envoltos por membranas nas clulas eucariticas

Ncleo RE Aparelho de Golgi Lisossomos Endossomos Peroxissomos Mitocndrias Cloroplastos Circundado pelo envelope nuclear com poros; Sntese de DNA e RNA Sua membrana contnua a membrana ext. nuclear. Sintetiza a maior parte de lipdeos e protenas p/ distribuio Recebe e modifica protenas e lipdeos vindos do RE e despacha para outros stios na clula Pequenos sacos com enzimas digestivas. Degradam organelas esgotadas e materiais endocitados. Compartimento de distribuio de materiais endocitados Contm enzimas utilizadas em reaes oxidativas que degradam lipdeos e destroem molculas txicas. Stio de fosforilao oxidativa. Sntese de ATP e fixao de CO2 pela fotossntese

Viso geral da principal via de distribuio de protenas em clulas eucariticas

Mecanismos de importao pelas organelas

O destino de uma protena sintetizada no citosol depende de sua seqncia de aminocidos; Sinal de distribuio Se no h sinal: residem no citosol; Sinais diferentes podem direcionar p/: ncleo, mitocndrias, cloroplastos, peroxissomos ou RE.

Como a protena pode ser importada ?

1. Transporte por poros nucleares : importao p/ o ncleo. Os poros funcionam como portes seletivos. Translocadores proticos: realizam o transporte de protenas atravs das membranas das organelas. Vesculas de transporte: carregam protenas a partir do RE. Todos requerem energia!

2.

3.

Qual o compartimento destino?

Seqncia sinal (15 a 60 aminocidos) Sinal de distribuio tpico. Freqentemente removido aps a sntese As seqncias-sinal que especificam o mesmo destino podem variar. Propriedades fsicas mais importantes que a seqncia exata.

Destino: ncleo
Envelope nuclear: 2 membranas concntricas.
O envelope nuclear perfurado por POROS NUCLEARES Formam canais para o trnsito de macromolculas Entram: protenas nucleares Saem: RNAm maduro (mRNPs= complexo mRNA+protenas) e subunidades ribossomais, tRNAs Seqncia-sinal = 1 ou 2 seq. curtas contendo vrias K ou R Sinal de localizao nuclear

Micrografia eletrnica (criofratuta) de uma ponta de raiz de cebola mostrando o ncleo e os poros nucleares. Fonte:http://www.bioweb.wku.edu

Complexo poro nuclear

(~120 milhes de Daltons; 100 diferentes protenas em vertebrados)

RE

Membrana nuclear externa Espao perinuclear Membrana nuclear interna Complexo poro nuclear

Fibrilas citoplasmticas
Anel citoplasmtico Membrana ext. Domnio luminal Membrana int.

Anel nuclear Cesta nuclear Anel distal

www.scripps.edu/~stoffler/proj/NPC/npc.html

Membrana nuclear externa

Fibrilas citoplasmticas

Membrana nuclear interna Fibrila nuclear

cesta nuclear

Lmina nuclear

Complexo poro nuclear

Acima: microscopia-eletrnica de uma fina fatia do envelope nuclear (250 nm), no fixada e no corada revelando complexos poronucleares individuais. Abaixo: mudanas estruturais reversveis mediadas por clcio visualizados por AFM. O anel distal (seta) pode agir como um diafragma, abrindo aps a adio de quantidades milimolares de clcio e fechando aps a remoo de clcio.

Destino: ncleo
A interao de uma protena direcionada ao ncleo com o poro nuclear requer auxlio de Receptores de importao nuclear

Ligam-se ao sinal de localizao nuclear Ajudam a direcionar a protena por interao com as fibrilas dos poros. A transferncia utiliza energia da hidrlise do GTP
http://www.sinauer.com/cooper5e/animation0901.html

Transporte ncleo-citoplasmtico

Volume 11, Issue 12, 2001, Pages 497503

Como a protena pode ser importada ?

1. Transporte por poros nucleares : importao p/ o ncleo. Os poros funcionam como portes seletivos. Translocadores proticos: realizam o transporte de protenas atravs das membranas das organelas. Vesculas de transporte: carregam protenas a partir do RE.

2.

3.

Protena precurssora

Importao de protenas para o interior da matriz mitocondrial

Hsc 70 citoslica
Seqncia de direcionamento p/ a matriz

Destino: mitocndria e cloroplastos

As protenas se desdobram para entrar; possuem uma seq.-sinal, geralmente clivada aps a translocao; O transporte a um stio especfico na organela requer outra seqnciasinal;

Receptor de importao citosol

Poro principal de importao

Stio de contato

Espao intermembrana

Protease de processamento da matriz

Matriz mitocondrial protena ativa

Seqncia de direcionamento clivada

Setas identificam locais de contato entre a membrana externa e interna na mitocndria

Fonte: Lodish et al., 2004.

Destino: Retculo Endoplasmtico (RE)

Porta de entrada p/ : Golgi, endossomos, lisossomos e secreo; Recebe 2 tipos de protenas do citosol:
Hidrossolveis, que so completamente translocadas pela membrana do RE e liberadas no lmen secreo. Transmembrnicas, que so parcialmente translocadas pela membrana do RE e tornam-se embebidas nela. As protenas entram enquanto so sintetizadas...

A seqncia-sinal guiada
1. Por uma partcula reconhecedora de sinal (PRS ou SRP) presente no citosol, liga-se sequncia-sinal de RE exposta Pelo receptor de SRP, embebido na membrana do RE.

2.

H stios moleculares de posicionamento conectando os ribossomos que esto sintetizando protenas aos canais de translocao disponveis.

Sntese de protenas solveis e seu transporte co-traducional atravs da membrana do RE

(Partcula reconhecedora de sinal)

Seqncia sinal

citosol

Sntese de protenas transmembranas na bicamada lipdica do RE

Nem todas as protenas que entram no RE so liberadas no lmen... Algumas permanecem na membrana do RE (ou outras organelas)
unipasso multipasso

Sntese e insero na membrana do RE das protenas unipasso do tipo I

citosol

Translocon aberto

Peptidase sinal

Seqncia de finalizao de transferncia Seqncia sinal clivada

Lmen do ER

Sntese e insero na membrana do RE das protenas unipasso do tipo II

citosol

Lmen do ER

Sequncia sinalncora interna

Arranjo das sequncias topognicas nas protenas de membrana unipasso e multipasso inseridas na membrana do RE

Algumas protenas so presas membrana por uma ncora fosfolipdica

Glicosilfosfatidilinositol (GPI)

Transporte vesicular: viso geral das vias secretora e endoctica de distribuio de protenas

Qual o caminho das protenas a partir do RE? Como so carregadas?