IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO-FOSFORICE PRIN CROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE (7.70.

Metoda se utilizeaz pentru identificarea pesticidelor organo-fosforice din ap,furaje, plante verzi, coninut gastric, albine.

Principiul metodei
Pesticidele organo-fosforice sunt extrase din proba de analizat cu eter de petrol, dup care extractele obinute se purific pe coloan cu florisil, se concentreaz i se spoteaz pe placa cromatografic unde compuii organo-fosforici sunt pui n eviden cu ajutorul unor reactivi de culoare specifici.

Materiale necesare
Reactivi
- eter de petrol - acetonitril pentru cromatografie, saturat cu eter de petrol - sulfat de sodiu anhidru - cloroform - florisil (60-80 mesh), activat 2 ore la 650C - silicagel 60 G - amidon - vat de sticl - benzen - aceton - hexan - alcool etilic - eter etilic - brom - clorur feric sol. 0,1 % n etanol 80 % - acid sulfosalicilic sol. 1 % n etanol 80 % - acid acetic glacial - tetrabromofenolftalein ethyl ester sol. 0,2 % n aceton - soluie de azotat de argint: 0,5 g azotat de argint se dizolv n 25 ml ap i se dilueaz la 100 ml cu aceton - soluie de acid citric: 5 g acid citric se dizolv n 50 ml ap i se dilueaz la 100 ml cu aceton - soluie de 2,6- dibromchinon-4-clorimid: 1g de 2,6 dibromchinon-4-clorimid se dizolv n 100 ml de alcool etilic, acidulat cu 1 ml acid acetic glacial - etaloane de pesticide organo-fosforice

Sticlrie

- plnii de separare x 100 ml, 500ml, 2000 ml - plnii de filtrare - pahare Erlenmayer x 200 ml - pahare Berzelius x 100 ml - coloane cromatografice (lungimea 300 mm, = 20-25mm) - pipete Pasteur - cilindri gradai x 25, 50, 100, 250 ml - baloane cotate x 100 ml - exicator

Aparatur
- echipament pentru cromatografie n strat subire - baie de ap termoreglabil - balan tehnic - balan analitic - rotavapor - etuv termoreglabil

Modul de lucru
1. Extracia probelor Ap: se iau pentru analiz 1000 ml ap i se trec ntr-o plnie de separare de 2 l. n plnie se mai adaug 10 ml soluie saturat de clorur de sodiu i apoi se extrage succesiv cu eter de petrol n poriuni de 100, 50 i 50 ml. Extractul eteric se usuc pe o coloan cu 40 g Na 2SO4 anhidru i se concentreaz la un volum corespunztor determinrii. Pentru extracie se mai pot folosi i ali solveni cum ar fi: benzen, cloroform, clorur de metilen etc. Furaje, coninut gastric: 20-25 g prob de analizat se extrag cu cca. 100 ml eter de petrol timp de 4-5 ore, agitnd energic din cnd n cnd. Extractul se filtreaz i se concentreaz la cca. 20 ml, dup care se supune partiiei cu acetonitril. 2. Partiia cu acetonitril Extractul concentrat de la punctul A) se trece ntr-o plnie de separare de 100 ml, transferul efectundu-se cu eter de petrol astfel ca volumul final s fie de cca. 25 ml. Se adaug 25 ml acetonitril saturat cu eter de petrol, se agit energic i apoi se las n repaus pentru separea straturilor. Partiia acetonitril-eter de petrol permite separarea reziduurilor de pesticide (care trec n acetonitril) de grsimi (care rmn n eter de petrol). Extracia cu acetonitril se repet, iar extractele reunite se trec ntr-o plnie de separare de 500 ml care conine 300 ml soluie apoas de sulfat de sodiu 2 %. Plnia de 500 ml (conine faza apoas i organic) se agit puternic 1 minut i se las n repaus cel puin 30 minute. Dup separare, stratul organic care conine pesticidele se purific pe o coloan cu florisil. 3. Purificarea pe coloan cu florisil Coloana de sticl, lung de 300 mm i cu un diametru de 20-25 mm, prevzut cu frit sau cu dop de vat, se umple cu un strat de 10 cm de florisil activat care se acoper cu un alt strat de 1 cm de sulfat de sodiu anhidru. Coloana se umecteaz cu 50 ml eter de petrol, reglndu-se viteza de curgere a lichidului prin coloan la 5 ml/minut, dup care se introduce extractul eteric al reziduurilor de pesticide. Eluarea reziduurilor de insecticide organo-fosforice de pe coloana cu florisil se face succesiv cu urmtoarele amestecuri de solveni: 200 ml 6 % eter etilic n eter de petrol; 200 ml

15 % eter etilic n eter de petrol i 200 ml 50 % eter etilic n eter de petrol. Dup eluie cele trei poriuni de eluat se concentreaz la un volum de 1-5 ml i se trece la determinarea propiu-zis a insecticidelor. Pentru probele de plante, furaje verzi i albine se procedeaz astfel: se introduc 20-25 g de prob mrunit ntr-un mixer peste care se adaug 350 ml amestec de 35 % ap n acetonitril. Se omogenizeaz timp 5 minute, se iau 250 ml filtrat i se introduc ntr-o plnie de separare. Peste extractul apos se adaug 100 ml eter de petrol. Se agit amestecul 2 minute. Se adaug 10 ml soluie saturat de NaCl i 600 ml ap, agitndu-se energic, dup care se las straturile s se separe. Se arunc faza apoas, iar stratul de solvent se spal de 2 ori cu cte 100 ml ap. Faza eteric se trece ntr-un Erlenmayer de 100 ml cu dop. Se adaug 15 g Na 2 SO4 anhidru i se agit. Nu se las mai mult de o or cu Na2SO4 deoarece poate avea loc o adsorbie a reziduurilor de insecticide pe acesta. Extractul se filtreaz i se concentreaz la un volum de civa ml. Observaie: dac extractul este colorat, se poate purifica pe o coloan cu florisil. 4. Separarea cromatografic Extractele obinute sunt supuse separrilor cromatografice pe cromatoplci cu diametrul de 20 x 20 cm, acoperite cu silicagel G sau alumin. Grosimea stratului adsorbant este cuprins ntre 0,25-0,50 mm. Plcile se activeaz la 110C timp de o or. Spoturile se aplic la 1,5 cm de marginea inferioar a plcii. Distana de migrare este de aproximativ 17 cm, astfel nct s se obin o separare convenabil. Pentru aprecierea calitativ, aplicarea spoturilor se face cu pipete Pasteur bine efilate, dup care depozitul spotat se usuc sub curent de aer, pentru a mpiedica mprtierea solventului pe o suprafa mai mare de 0,5 cm diametru, chiar dac aplicaia se repet (cazul extractelor foarte diluate). Alturi de spoturile probei de analizat se pun spoturi dintr-o soluie etalon de insecticide individuale sau n mixtur. Cromatografia se execut n sistem ascendent n tancuri etane care se satureaz n prealabil pentru echilibrare, prin cptuire cu hrtie de filtru mbibat cu solveni. Ca amestec de eluie se folosete sistemul benzen-aceton n raportul 4:1. Dup uscare, se expune placa la vapori de brom i dup 10-15 minute se spreiaz cu o soluie de clorur feric 0,1 %. Dup nc 15 minute se spreiaz cu o soluie de acid sulfosalicilic 1 %, cnd apar spoturi caracteristice alb-glbui pe fondul mov-lila al plcii. O alt posibilitate de a pune n eviden pesticidele organo-fosforice este urmtoarea: se elueaz placa cu un amestec de hexan:aceton n raport 4:1. Dup uscare, se pulverizeaz uniform cu o soluie de 0,2 % ester etilic de tetrabromfenolftalein. Placa devenit albastr se pulverizeaz apoi cu o soluie de azotat de argint 0,5 %. Dup alte 2 minute plcile se spreiaz cu o soluie de acid citric 5 %. Apar spoturi albastre sau purpurii pe fond galben. Un alt reactiv de culoare caracteristic pentru compuii organo-fosforici este 2,6dibromchinon-4-clorimid. Dup eluarea plcii cu hexan:aceton i uscare, aceasta se pulverizeaz cu o soluie de 2,6-dibromchinon-4-clorimid 1 % n alcool. Apar spoturi galbene, roii sau brune, caracteristice diverselor grupe de compui organo-fosforici. Pentru intensificarea culorii spoturilor placa se nclzete 5 minute la 110C. Limita de detecie este de 1 g.

IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO - MERCURICE PRIN CROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE (7.72.)

Metoda se aplic la determinarea pesticidelor organo - mercurice din semine tratate.

Principiul metodei
Reziduurile de fungicide organo - mercurice se izoleaz din proba de analizat prin extracie n soluie de ditizon n eter etilic, se concentreaz i se spoteaz pe placa cromatografic unde sunt evideniate cu reactivi de culoare specifici.

Materiale necesare
Reactivi
- alcool izopropilic - clorhidrat de cistein - amoniac 25 % - sulfat de sodiu - eter etilic - ditizon - hexan - aceton - eter de petrol - cloroform - sulfat de cupru - iodur de potasiu - sulfit de sodiu - silicagel 60 G - amidon - acid clorhidric 1 N

Sticlrie
- pahare Berzelius x 150 ml - plnii de separare x 250; 1000ml - plnii de sticl = 50 mm - pahare Erlenmayer x 150 ml - cilindri gradai x 50, 100, 1000ml - pipete 5, 10 ml - baghete de sticl - plci de sticl 20 x 20 cm

Aparatur
- echipament pentru cromatografie n strat subire - balan tehnic

- baie de ap - etuv termoreglabil - pulverizatoare

Modul de lucru
Se iau n lucru 5 -10 g prob care se spal de dou ori cu amestec de 10 ml alcool izopropilic i 5 ml clorhidrat de cistein alcalin (1 % n soluie amoniacal, pH 8). Soluia se separ prin decantarei se centrifugheaz 5 minute la 2500 rotaii/minut. Supernatantul se trece ntr-o plnie de separare care conine 700 ml soluie 4 % sulfat de sodiu i se spal cu 3 x 50 ml eter etilic, reinnd soluia apoas. Din aceasta compuii organo -mercurici se extrag cu 3 x 25 ml soluie de 0,005 % ditizon n eter etilic. Extractul eteric se concentreaz pe baie de ap la 2 -3 ml. Pentru cromatografie se folosesc plci acoperite cu silicagel G (grosime 0,50 mm), activate n prealabil la 1100 C timp de o or. Probele de analizat se spoteaz pe placa cromatografic n paralel cu substane standard. Ca sisteme de eluie se pot folosi: - hexan : aceton 9 : 1 - eter de petrol : aceton 9 : 1 Placa se usuc la temperatura camerei. Revelarea spoturilor se realizeaz prin: 1) Pulverizare cu o soluie de ditizon 0,05 % n cloroform. 2) Pulverizare cu o soluie de sulfat de cupru anhidru 20 % n acid clorhidric 1 N, urmat de o nou spreiere a plcii cu un amestec de 5 g iodur de potasiu i 20 g sulfit de sodiu dizolvat n 100 ml ap distilat. Apar spoturi roii pe fondul alb al plcii. Limita de detecie este de 3 g.

IDENTIFICAREA PESTICIDELOR ORGANO-CLORURATE PRIN CROMATOGRAFIE N STRAT SUBIRE (7.76.)

Metoda se utilizeaz pentru identificarea pesticidelor organo-clorurate din ap, furaje, plante verzi, coninut gastric, albine.

Principiul metodei
Pesticidele organo-clorurate sunt extrase din proba de analizat cu eter de petrol, dup care extractele obinute se purific pe coloan cu florisil, se concentreaz i se spoteaz pe placa cromatografic, unde compuii organo-clorurai sunt pui n eviden cu ajutorul unui reactiv de culoare specific.

Materiale necesare
Reactivi
- eter de petrol - eter etilic - acetonitril pentru cromatografie, saturat cu eter de petrol - florisil (60-80 mesh), activat 2 ore la 650C - silicagel 60 G - amidon - sulfat de sodiu anhidru - amestec de eluie: 6 % eter etilic n eter de petrol; 15 % eter etilic n eter de petrol - etaloane de pesticide organo-clorurate - alcool etilic - difenilamin

Sticlrie
- plnii de separare 100,500 ml - plnii de filtrare - pahare Erlenmayer 200 ml - pahare Berzelius 200 ml - coloane cromatografice (lungime 300 mm, = 20-25 mm) - pipete Pasteur - cilindri gradai 25, 50, 100, 250 ml - baloane cotate 100 ml - exicator

Aparatur
- echipament pentru cromatografie n strat subire - baie de ap termoreglabil - balan tehnic - balan analitic - rotavapor

- etuv termoreglabil - lamp UV

Modul de lucru
A) Extracia i purificarea probelor Ap: se iau pentru analiz 200-500 ml ap; aceasta se extrage n plnie de separare, de dou ori cu cte 20 ml eter de petrol, apoi nc o dat cu 10 ml. Extractul eteric se usuc trecndu-se pe o coloan de Na2SO4 anhidru, dup care se concentreaz la un evaporator rotativ la volum de 1-5 ml. n cazul extractelor de ape curgtoare sau de lacuri, n general nu este necesar o purificare. Dac acestea conin totui substane organice ce ar putea stnjeni determinarea, se poate face o purificare pe coloan cu florisil sau celit. Furaje, coninut gastric: 20-25 g prob de analizat se extrag cu cca. 100 ml eter de petrol timp de 4-5 ore, agitnd din cnd n cnd energic. Extractul se filtreaz i se concentreaz la cca. 20 ml, dup care se supune partiiei cu acetonitril. B) Partiia cu acetonitril Extractul concentrat de la punctul A) se trece ntr-o plnie de separare de 100 ml, transferul efectundu-se cu eter de petrol, astfel ca volumul final s fie de cca. 25 ml. Se adaug 25 ml acetonitril saturat cu eter de petrol, se agit energic i apoi se las n repaus s se separe straturile. Partiia acetonitril-eter de petrol permite separarea reziduurilor de pesticide (care trec n acetonitril) de grsimi (care rmn n eter de petrol). Extracia cu acetonitril se repet, iar extractele reunite se trec ntr-o plnie de separare de 500 ml care conine 300 ml soluie apoas de sulfat de sodiu 2 %. Plnia de 500 ml (care conine faza apoas i organic) se agit puternic 1 minut i se las n repaus cel puin 30 minute. Dup separare, stratul organic care conine pesticidele se purific pe o coloan cu florisil. C) Purificare pe colana cu florisil: Coloana de sticl cu o lungime de 300 mm i cu un diametru de 20-25 mm, prevzut cu o frit sau cu un dop de vat, se umple cu un strat de 10 cm florisil activat care se acoper cu un alt strat de 1 cm de sulfat de sodiu anhidru. Coloana se umecteaz cu 50 ml eter de petrol, reglndu-se viteza de curgere a lichidului prin coloan la 5 ml/minut, dup care se introduce extractul eteric al reziduurilor de pesticide. Eluarea coloanei se face cu 200 ml amestec 6 % eter etilic n eter de petrol. Eluatul astfel obinut se concentreaz la 5-10 ml. Acest eluat conine n general toate reziduurile de pesticide organo-clorurate cu excepia dieldrinului si endrinului. Dup colectarea primului eluat se mai poate face o eluie a coloanei cu 200 ml 15 % eter etilic n eter de petrol. Acest din urm eluat conine dieldrin i endrin i se reunete cu primul eluat. Plante, furaje verzi, albine: se introduc 20-25 g prob mrunit ntr-un mixer peste care se adaug 350 ml amestec de 35 % ap n acetonitril. Se omogenizeaz timp de 5 minute, se iau 250 ml filtrat i se introduc ntr-o plnie de separare. Peste extractul apos se adaug 100 ml eter de petrol. Se agit amestecul 2 minute. Se adaug 10 ml soluie saturat de clorur de sodiu i 600 ml ap, agitndu-se energic, dup care se las s se separe straturile. Se scurge apa, iar stratul de solvent se spal de dou ori cu cte 100 ml ap. Faza eteric se trece ntr-un pahar

Erlenmayer de 100 ml cu dop. Se adaug 15 g Na 2SO4 anhidru i se agit. Nu se las mai mult de o or cu Na2SO4 deoarece poate avea loc o adsorbie a reziduurilor de insecticide organoclorurate pe acesta. Extractul se filtreaz i se concentreaz la un volum de civa ml. Observaie: dac extractul este colorat, se poate purifica pe o coloan cu florisil. D. Separarea cromatografic Extractele obinute sunt supuse separrilor cromatografice pe cromatoplci cu dimensiuni de 20 x 20 cm, acoperite cu silicagel G sau alumin. Grosimea stratului de adsorbant este cuprins ntre 0,25-0,50 mm. Plcile se activeaz la 110C timp de o or. Spoturile se aplic la 1,5 cm de marginea inferioar a plcii. Distana de migrare este de aprox. 17 cm, n care interval se obine o separare convenabil. Pentru o apreciere calitativ aplicarea spoturilor se face cu o pipet Pasteur bine efilat i uscarea consecutiv a depozitului spotat, pentru a mpiedica mprtierea solventului pe o suprafa mai mare de 0,5 cm diametru, chiar dac aplicaia se repet (cazul extractelor foarte diluate). Alturi de spoturile probei de analizat se pun spoturi dintr-o soluie etalon de insecticide individuale sau n mixtur. Cromatografia se execut n sistem ascendent n tancuri etane care se satureaz n prealabil pentru echilibrare, prin cptuire cu hrtie de filtru mbibat cu solveni. Ca amestec de eluie se folosete sistemul eter de petrol : eter etilic n raportul 2 : 1. Dup eluie plcile se usuc la temperatura camerei. Revelarea se face prin stropirea plcilor cu o soluie alcoolic 0,5 % de difenilamin, urmat de iradiere n ultraviolet timp de cteva minute. Limita de detecie este de 0,5 g.