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NUEVOS CIDOS GRASOS OMEGA-3 ENZIMTICOS

AC TUALIZACIN CIENTFICA

El objetivo principal de esta presentacin es mostrarles nuestra experiencia en el uso de cidos grasos omega-3

En este sentido conviene inicialmente situar el concepto omega-3 como valor nutricional y teraputico. Es un hecho admitido por la comunidad cientfica que la ingesta de cidos grasos poliinsaturados (PUFAs) omega-3 representa un beneficio para la salud en general. Una gran cantidad de estudios con cidos grasos omega-3 han demostrado su importancia en la dieta, aun cuando estos microalimentos no se consideran esenciales ya que son sintetizados, pero en cantidades excesivamente bajas, para cubrir las necesidades del cuerpo. Diversos estudios bsicos, clnicos y epidemiolgicos han reportado ventajas importantes en la ingesta de cidos grasos omega-3 en campos tan diversos como cardiologa, neurologa, oncologa, patologas inflamatorias crnicas, oftalmologa... Adems, es un componente crtico para el desarrollo y funcionalidad del cerebro.

BENEFICIOS NUTRICIONALES Y TERAPUTICOS DE LOS OMEGA-3

ESPECIALIDAD MDICA
Cardiologa Dermatologa Gastroenterologa Inmunologa/Enfermedades infecciosas/Nefrologa Neurologa Obstetricia/Ginecologa/ Pediatra Oncologa Oftalmologa Ortopedia Psiquiatra Reumatologa Ciruga Urologa

REDUCCIN EN EL RIESGO O IMPACTO


Toda causa de mortalidad, muerte sbita cardaca, isquemia, infarto cerebral, reduccin de triglicridos (especialmente con DHA), aumento de las HDL, pero generalmente no modifica los niveles de lpidos a dosis bajas, presin arterial y reduccin de taquicardias. Soriasis, melanoma. Cncer de Colon, enfermedad inflamatoria intestinal (Enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa). Asma, hepatitis, nefropatas. Enfermedad del Alzheimer (especialmente DHA), demencia, autismo, desorden de falta de atencin-hiperactividad Salud maternal e infantil (especialmente DHA), cognoscitiva (aumento del coeficiente intelectual) y la agudeza visual en recin nacidos y adolescentes, mejora la duracin del embarazo y el peso del feto, y una gran variedad de otros sntomas, como por ejemplo la depresin post-parto. Cncer de mama, colorectal, de endometrio, leucemia, melanoma, de ovario, de pncreas, de prstata, renal... Puede mejorar el ndice teraputico de los citostticos (5-fluorouracilo, ciclofosfamida) e inhibe la caquexia asociada al tumor (reduce prdida de peso). Degeneracin Macular asociada a la edad, Renitis Pigmentosa. Osteoporosis/fracturas, inflamaciones de las articulaciones (artritis). Depresin, desorden bipolar, esquizofrenia, desorden de falta de atencin-hiperactividad. Artritis reumatoide, osteoartritis, osteoporosis. Mejora la recuperacin en el post-operatorio, pero hay que tener precauciones en su administracin a altas dosis (> 10 g/g) conjuntamente con anticoagulantes. Cncer de prstata, prostatitis, hiperplasia prosttica benigna.

DESVENTAJAS

SIN EMBARGO

Un reciente meta-anlisis realizado por Hooper et al. ha concluido que no se ha podido documentar, de manera objetiva y estadsticamente significativa, un efecto beneficioso en el consumo de PUFAs omega-3 en la mortalidad relacionada con eventos cardiovasculares o cncer 1. Tampoco se ha documentado, de manera objetiva y estadsticamente significativa, el efecto de los omega-3 en la reduccin del riesgo de desarrollar cncer2.

Los estudios anteriormente citados presentaban diferentes deficiencias en su planteamiento relacionadas con la no separacin de las intervenciones realizadas con los diferentes cidos omega-3 o mezclas de los mismos en forma de aceite de pescado o suplementos alimenticios enriquecidos. Tambin se ha observado una falta de homogeneidad en cuanto a la duracin y las dosis en cada tratamiento. As como tampoco se ha valorado la importancia de la estructura qumica en la que se ha administrado el cido omega-3: triglicrido (TG), ster etlico (EE) o cido graso libre (FA).

Hooper L. et al. Risks and benefits of omega 3 fats for mortality, cardiovascular disease and cancer: systematic review. BMJ 2006; 332:752-760; Balk E.M. et al. Effects of omega-3 fatty acids on serum markers of cardiovascular disease risk: A systematic review. Atherosclerosis 2006; 189:19-30. 2 MacLean CH et al. Effects of omega-3 fatty acids on cancer risk: a systematic review. JAMA 2006; 295:403-15)

RECOMENDACIONES

Teniendo en cuenta esta controversia, la opinin de diferentes expertos es que deberan mantenerse las actuales recomendaciones en el consumo de cidos grasos omega-3 pero teniendo en cuenta una serie de criterios que deberan cumplir los cidos grasos omega-3 para su aplicacin nutricional y teraputica, como son: Manufacturar los PUFAs omega-3 siguiendo los criterios similares a los estndares farmacuticos que incluyen controles de calidad en todas las etapas de produccin para asegurar su pureza y calidad. Utilizar compuestos con un contenido mnimo de 60% en PUFA omega-3 de todos los cidos grasos. La relacin omega-3/omega-6 debe ser mayor de 50:1. Estas recomendaciones estn de acuerdo con las conclusiones de un workshop sobre cidos grasos omega-3 recientemente publicadas en la revista Journal American Clinical Nutrition, que adems destaca como punto importante la necesidad de realizar ms ensayos clnicos que permitan calibrar el potencial real de los cidos grasos omega-3 tanto a nivel preventivo como teraputico.

QU CIDO GRASO OMEGA-3?

De acuerdo con estos criterios el primer punto a resolver es la eleccin del PUFA omega-3 ms adecuado para un determinado tratamiento. Los tres ci25 20 g/100 g 15 10 5 0
i Ad R po

dos grasos de la serie 3 ms importantes, fisiolgicamente hablando, son: El alfa-linolnico (ALA) El eicosapentaenoico (EPA) El docosahexaenoico (DHA) El DHA es el cido graso omega-3 ms abundante en las membranas y est presente en todos los rganos. Es particularmente el ms abundante en el sistema nervioso central, en el esperma y en la retina, adems del ms variable
se ep e ith liu m Ch e ek He a rt M us cle er Liv Sp le en R BC co al r b x rte Sp em Re ti na

entre los rganos. Slo pequeas cantidades de ALA y de EPA estn presentes en los tejidos, y el contenido en DHA es habitualmente entre 5-30 veces superior al del EPA en la mayora de los rganos. Adems, el DHA es unas 100 veces ms abundante que el EPA en el cerebro y la retina.

t ec

al

r Ce

ALA EPA DHA

Estudio transversal del contenido en cidos grasos en tejidos de adultos de Estados Unidos, Canad, Australia y Europa.

QU CIDO GRASO OMEGA-3?

Aunque los tres cidos grasos estn relacionados metablicamente, diversos estudios han demostrado que la administracin de ALA no genera las cantidades fisiolgicas necesarias de DHA y de EPA. En cuanto a la administracin de DHA o EPA, las ltimas recomendaciones sugieren que la va ms eficiente para el incremento de las concentraciones de un cido omega-3 es la administracin de dicho cido especfi-

-Linolenic acid (18:3n-3)

Stearidonic (18:4n-3)

camente. De todas maneras en un planteamiento ms general la administracin de DHA garantiza una concentracin bsica de EPA, mientras que la administracin exclusiva de este ltimo disminuye la concentracin de DHA. En humanos, la capacidad endgena de convertir ALA en DHA o EPA es muy baja

(20:4n-3)

EPA (20:5n-3)

o inexistente, por esta razn, el consumo de DHA en la dieta puede ser crtico para mantener la concentracin adecuada de DHA en las membranas celulares. BrJ Nutr2002; 88:355363. Retroconversin de DHA-EPA: en el grupo de DHA, su concentracin aumento un

DPA (22:5n-3)

DHA (22:6n-3)

69% y la del EPA un 29%. En el grupo de EPA, este creci un 297% mientras que el DHA decreci un 15%. AmJ ClinNutr1997; 66:649-59/ AmJ ClinNutr2000; 71:108594/ Am J Clin Nutr 2004;79:76573.

QU CIDO GRASO OMEGA-3?

El DHA es el cido graso n-3 en el sistema nervioso central. Por otra parte desde un punto de vista nutricional, cuyo objetivo es el de recuperar los depsitos de cidos grasos omega-3, la administracin de DHA garantiza una intervencin en el sistema nervioso central ya que la concentracin de EPA en este tejido es puramente testimonial. Dietas que contienen un 9,5% de DHA, inhiben completamente la degeneracin de la retina inducida por la N-Metil-N-nitrosourea, en cambio las dietas que contienen un 4,75% de DHA (grupo EPA+DHA) o slo EPA no tuvieron un efecto protector. Exp Eye Res 2003; 77:167173. El DHA es el precursor de los docosatrienos y las resolvinas de la serie D que regulan los procesos asociados a la inflamacin y su resolucin final. J Biol Chem 2003; 278:1467714687. El DHA hidrolizado de los fosfolpidos de membrana es el precursor endgeno de la respuesta neuroprotectiva frente reperfusin isqumica. J Biol Chem 2003; 278: 4380743817. La sntesis del 10,17S-docosatrieno, neuroprotectina D1, protege a las clulas de la retina de la apoptosis inducida por estrs oxidativo, de una manera similar se sugiere que proteger a las neuronas. Proc Natl Acad Sci USA 2004; 101: 84918496.

BIODISPONIBILIDAD

Otro aspecto interesante que puede condicionar la eficacia de un determinado tratamiento es la biodisponibilidad de los cidos omega-3. Existen numeTIPO DE ACEITE
Aceite de pescado steres etlicos cidos grasos libres Triglicridos Re-esterificados

CONTENIDO EN PUFA N-3 (%)


25-30% >85% >65%

rosos estudios en animales que han demostrado que los glicridos son los
BIODISPONIBILIDAD*
74-100% 21-57% 51%

transportadores ms eficaces para los cidos grasos. Adems los glicridos se consideran la forma qumica ms favorable desde un punto de vista alimentario, superior a los steres etlicos de cidos grasos insaturados los cuales presentan una absorcin intestinal deteriorada de los cidos grasos n-3 observados como se ha demostrado en animales de laboratorio. Tambin se ha demostrado que los steres etlicos de cidos grasos no saturados se hidrolizan a una velocidad ms lenta que los glicridos correspondientes. Un estudio en humanos realizado por la empresa farmacutica SIGMA-TAU

min 70-75%

98%

En un estudio In vivo en 24 personas sanas comparando una sola toma oral de PUFAs n-3 en estructuras qumicas diferentes, se demostr un mayor nivel plasmtico de PUFAs n-3 en el grupo tratado con aceite re-esterificado. *Extrado de una publicacin de la empresa SIGMA-TAU.

demostr que los triglicridos obtenidos por reesterificacin presentan una biodisponibilidad similar al aceite de pescado natural y muy superior a la de los cidos grasos libres; que adems generan problemas digestivos; y tambin superior a la de los steres etlicos, cuya nica ventaja es la pureza que se puede alcanzar pero por contra generan etanol que puede ser txico a dosis elevadas.

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BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD

DHA TG QUMICO

ALGATRIUM PLUS

La sntesis industrial de triglicridos se puede realizar qumicamente o por va enzimtica. Las diferencias en las condiciones de reaccin entre un proceso de sntesis qumico y uno enzimtico determinarn las calidades finales para cada producto. El uso de mtodos tradicionales qumicos (separacin cromatogrfica, destilacin molecular, etc.) para producir concentrados de PUFAs omega-3 implican el uso de pHs extremos y de altas temperaturas, que pueden destruir parcialmente la estructura de los dobles enlaces todos cis del PUFA omega-3 natural por oxidacin, isomerizacin o migracin. Por otra parte, las condiciones suaves (temperatura menor de 50C, pH 6-8, y menos productos qumicos) usadas en la hidrlisis enzimtica proporcionan

pH extremos Temperaturas altas (destilacin) Reactivos qumicos

pH fisiolgico Temperaturas bajas Sin reactivos qumicos

Nivel bajo de triglicridos Productos de reaccin secundarios Purificacin cromatogrfica

Nivel alto de triglicridos Sin productos secundarios No necesita ms purificacin

Migracin de dobles enlaces Oxidacin de dobles enlaces Isomerizaciones Cis/Trans

Preservacin de dobles enlaces No oxidacin de dobles enlaces No isomerizaciones Cis/ Trans

un alternativa prometedora que podra tambin ahorrar energa y aumentar la selectividad del producto. La preservacin de los enlaces dobles, conferir a la molcula una mayor bioactividad.

ALGATRIUM PLUS

ESPECIFICACIN
Acidez Contenido antioxidante Densidad a 20C cido graso DHA (C22 :6n3) cido graso DPA (C22 :5n3) cido graso EPA (C20 :5n3) cidos grasos Omega-3 ndice de Perxidos Residuo seco

UNIDADES
mg KOH/g g/100g Kg/l %FA %FA %FA %FA meq O2/Kg g/100g

LMITES
3.0 mx. 1.0 - 1.1 0.930 - 0.940 70 mn. 8 mx. 10 mx. 85 mn. 5.0 mx. 0.10 mx.

Muchos estudios demuestran que la bioactividad de los aceites omega-3, y principalmente del DHA, est relacionada directamente con su contenido respecto a los cidos grasos totales, los cules pueden competir con los omega-3 en un metabolismo concreto. Para obtener el mximo nivel de bioactividad, Brudy ha dirigido sus esfuerzos en dos objetivos bsicos: Tener el mximo contenido de DHA en el triglicrido. Reducir al mximo el contenido de EPA. Adems, este aceite cumple todos los requisitos legales en cuanto a ndice de perxidos, acidez, contenido antioxidante, nivel de metales pesados

Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios.

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ALGATRIUM PLUS

90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
P M HSO DHA 50CHEM ALGATRIUM PLUS

De todos los aceites que hay en el mercado, Algatrium Plus (DHA 70e) es el aceite enriquecido con un contenido en omega-3 global y en DHA ms alto.

DPA EPA Algatrium Plus OMEGA-3

Comparativa de diferentes aceites omega-3 en el mercado.

ALGATRIUM PLUS

OMEGA-3 % OMEGA-3
A. PLUS FISH DHA DHA 70 20 50 50

SNTESIS
ENZIMTICO ATN QUMICO QUMICOPURIFICADO

INSA
0,5 4,7 2,7 2,1

MG
n.d. n.d. 4,3 n.d.

DG
7,1 2,2 10,3 18,8

CHOL
n.d. 4,2 3,5 n.d.

PLM
n.d. n.d. 22,8 n.d.

TG
86,5 88,9 40,1 66,4

EE
5,9 n.d. 14,0 5,2

GTOTAL
93,6 91,1 53,2 85,2

Especificaciones del aceite omega-3 utilizado en estos estudios.

La biodisponibilidad del aceite es directamente proporcional al tipo de molculas que lo compongan, concretamente a su composicin lipdica. Los aceites naturales contienen ms del 90% de materia en forma de glicrido, que proporciona una biodisponibilidad mxima. Algatrium Plus es muy similar a un aceite natural (la composicin lipdica incluye un

90% de glicridos totales, con un 85% en forma de triglicridos y sin monoglicridos). El DHA obtenido qumicamente tiene un nivel bajo de triglicridos (<50%), un mayor nivel de steres etlicos y un alto contenido de polmeros (15-20%), que no son absorbibles y que se deben eliminar por cromatografa en columna (QUMICO-PURIFICADO).

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LEGISLACIN

100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0
INS. MG DG PLM FA TG EE GTotal

Solamente los aceites de pescado o de algas naturales que no se han reesterificado satisfacen la legislacin alimentaria en cuanto a su composicin, y por lo tanto son un alimento. El DHA obtenido qumicamente no satisface los requisitos de la farmacopea europea, sobretodo relacionado con el nivel de triglicridos, glicridos totales y en el contenido en compuestos polimricos. Es necesaria una purificacin por cromatografa en columna para que el producto cumpla los requisitos de la legislacin europea. Algatrium Plus tiene la misma composicin que los aceites naturales y por lo tanto se consideran un alimento.

Composicin estructural.

Algatrium Plus Farmacopea DHA 50% QUMICO DHA 50% QUMICO-PURIFICADO

ACTIVIDAD ANTITUMORAL

COMPOSICIN
ESTRUCTURA
FA EE TG (Algatrium Plus) TG (Qumico) TG (Pescado)

IC50 (M)
CLULAS SANAS PIEL
123,1 9,0 566,3 53,9 716,7 41,9 1956,0 27,8 2267,6 27,9

CLULAS TUMORALES HeLa


72,2 5,8 71,0 9,7 58,6 8,8 564,0 69,6 1379,4 286,4

%DHA
70 70 70 50 20

RENAL
n.d. 72,6 8,3 392,7 37,5 413,6 25,6 3116,0 158,2

RELACIN DE SEGURIDAD
1,7 7,98 -1,02 12,23 -6,70 3,47 -0,73 1,64 -2,26

Efectos del contenido en DHA y de la estructura qumica. Toxicidad celular.

Para valorar la actividad de Algatrium Plus, nuestro primer objetivo fue determinar su capacidad citotxica antitumoral. En este sentido realizamos un estudio comparativo usando clulas tumorales (HeLa) y clulas sanas como control (renales y de piel). Hemos realizado estudios dosis-respuesta para determinar el valor de IC50 como criterio de toxicidad (es la concentracin que mata al 50% de las clulas). Hemos analizado dos variables, el efecto de la estructura del lpido y del contenido en DHA. Para un contenido en DHA del 70% de todos los cidos grasos, se obtuvo la misma toxicidad en clulas tumorales con el ster etlico (EE), el cido graso libre (FA) o
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el triglicrido (TG). Pero, en clulas renales sanas, el EE tiene la misma toxicidad que en las clulas tumorales y en las clulas de piel, el FA demuestran una gran toxicidad, siendo los TG, la forma con un mejor cociente de seguridad. Para una misma estructura qumica, el TG, una disminucin del contenido en DHA a 50 o al 20% (este ltimo es la concentracin en el aceite de pescado), disminuye de forma dramtica el efecto citotxico en las clulas del tumor. Estos resultados demuestran que la forma ptima es el triglicrido con un alto contenido en DHA (Algatrium Plus).

ACTIVIDAD COMO ADYUVANTE ANTITUMORAL

LNEA CELULAR

SISTEMA DE ADICIN
Control

ALGATRIUM PLUS M
0 1 5 10 5 0 1 5 10 5

IC50 (M)
295,3 31,6 (n=8) 30,1 5,4 (n=8) 28,7 6,7 (n=8) 37,0 4,4 (n=6) 184,3 16,2 (n=4) 23.30 3.68 (n=12) 2.80 1.10 (n=7) 2.38 1.01 (n=4) 3.80 1.42 (n=6) 14.80 8.01 (n=6)

CONTENIDO EN DHA
Control DHA Algatrium Plus DHA TG 50 Qumico DHA TG 20 Pescado

DHA (M)
0 5 10 5 10 5 10 295,3 31,6 28,7 6,7 37,0 4,4 130,9 15,6 106,3 20,7 257,4 29,6 236,5 15,7

IC50 (nM) CLULA TUMORAL CLULA SANA


1158,6 369,9 1046,6 230,4 1080,5 174,2 1163,3 156,9 980,1 270,9 1157,5 124,9 1530,3 481,3

HeLa-Epitelial (Dox) Pre-incorporado Simultneo Control HT-29-Colon (5-FU) Pre-incorporado Simultneo

Efecto del DHA sobre la actividad antitumoral de la Doxorrubicina o del 5-fluoroacilo. Toxicidad celular.

Efecto del contenido en dha sobre la actividad antitumoral de la doxorrubicina. Toxicidad celular.

Otra actividad interesante de los PUFAs omega-3 en cncer, es su uso como adyuvantes en la quimioterapia convencional. En este sentido, determinamos los efectos de Algatrium Plus a concentraciones subtxicas sobre la toxicidad de la Doxorrubicina y del 5-fluoroacilo. La exposicin simultnea de las clulas tumorales al DHA y a la droga aumenta la toxicidad de la misma dos veces (disminuye el valor de la IC50). Por otra parte, si Algatrium Plus se ha incorporado previamente a la membrana celular, este efecto potenciador aumenta hasta 10 veces.

Este efecto potenciador depende del contenido en DHA, ya que con el uso de un aceite qumico (50% en DHA) o de aceite de pescado (20% en DHA), se pierde progresivamente dicho efecto potenciador. Tambin es significativo que este efecto no incrementa la toxicidad de los citostticos en clulas sanas.

BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD

ACTIVIDAD PRO-O ANTIOXIDANTE?

En los sistemas qumicos puros, las molculas ms susceptibles al ataque de los radicales libres son los cidos grasos poliinsaturados (PUFAs) como el cido docosahexaenoico (DHA, 22:6 n-3) y, en general, esta susceptibilidad aumenta con el nmero de dobles enlaces. In vivo, se supone el mismo comportamiento. Entonces, por qu el DHA, una diana molecular de los radiaciones libres, es el cido graso ms abundante en tejidos expuestos a un potencial estrs oxidativo como la retina o en tejidos con un sistema antioxidante celular deficiente como el sistema nervioso central?

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BIOACTIVIDAD - SEGURIDAD

En este contexto, hemos estudiado la influencia de la presencia del DHA enzimtico en la membrana celular, sobre la generacin intracelular de radicales libres utilizando como sistema experimental dos lneas celulares humanas sanas, fibroblastos de piel (Foreskin, ATC CRL 2076) y clulas epiteliales pigmentarias de la retina (ARPE-19, ATCC CRL 2302). La cuantificacin de los radicales libres generados se ha realizado mediante metodologas fluorescentes usando sondas moleculares como el H2DCF-DA, DHR y DHE. Como inductores exgenos de estrs oxidativo se ha utilizado el AAPH y el sistema xantina/xantin oxidasa, y como inductores endgenos, la rotenona y la antimicina A.

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

CLULAS DE RETINA

CLULAS DE PIEL

Fluorescencia (UA)

-49%

Fluorescencia (UA)

-42%

Como se muestra en la figura, la presencia de Algatrium Plus en la membrana celular disminuye la generacin intracelular de radicales libres despus de estar sometidas las clulas a un estrs oxidativo. Este comportamiento es independiente de la clula en estudio (piel o retina) y del marcador utilizado (H2DCF-DA o DHR), lo cual nos indica la activacin de un mecanismo general. El nivel de proteccin observado tambin es similar frente al mismo estmulo oxidativo.

H2DCF-DA

50

100 150 200 Tiempo (min.)

250

50

100 150 Tiempo (min.)

200

Fluorescencia (UA)

Fluorescencia (UA)

-56%

-50%
Control Algatrium Plus

DHR

50

100 150 200 Tiempo (min.)

250

50

100 150 200 Tiempo (min.)

250

20

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

INDEPENDIENTE DEL INDUCTOR


60 % Proteccin 50 40 30 20 10 0 AAPH ROT ANT A X/XO

Para determinar que la proteccin antioxidante de Algatrium Plus era un proceso general, cambiamos el inductor de estrs oxidativo de un producto qumico (el AAPH) a un sistema enzimtico (sistema X/XO) o inductores endgenos (ROT y ANT A). Se ha observado el mismo comportamiento en todos los casos.

CLULAS DE RETINA

EFECTO ADITIVO

-49%

Incremento% Proteccin

Fluorescencia (UA)

2,1 1,8 1,5 1,2 0,9 0,6 0,3 0 0,5 Algatrium Plus 5

El efecto antioxidante de Algatrium Plus depende de la dosis, mostrando un comportamiento dosis-dependiente a la inversa. El mayor efecto se ha observado en una concentracin baja de DHA, mientras que a altas concentraciones, el efecto antioxidante disminuye independientemente de la potencia del estrs oxidativo. Tambin, el efecto antioxidante de Algatrium Plus presenta un efecto aditivo con la frecuencia de la administracin. La administracin de una dosis diaria inrementa el efecto antioxidante respecto a una sola administracin.

50

100 150 200 Tiempo (min.)

250

DEPENDENCIA DE LA DOSIS
60 % Proteccin 50 40 30 20 10 0 0,5 5 Algatrium Plus 50

Dosis diaria Una dosis

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

CONTROL

ALGATRIUM PLUS 0,5 M

T= 0 min.

La generacin intracelular de radicales libres se confirm mediante microscopia de fluorescencia confocal. Las micrografas muestran una acumulacin progresiva en el tiempo de radicales libres en las clulas
T= 15 min.

control sin DHA, mientras que en las que han incorporado Algatrium Plus en su membrana, el nivel intracelular de radicales libres no ha aumentado.

T= 30 min.

CLULAS DE PIEL
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ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

60 40 % PROTECCIN 20 0 -20 -40

A nivel celular, la generacin de radicales libres parece ser dependiente de la composicin en cidos grasos de la clula, pero la influencia especfica de cada clase de cido graso no ha sido estudiada. Por otra parte, a nivel industrial, el mtodo de sntesis usado para obtener el aceite enriquecido en DHA puede ser muy importante en la calidad final del producto. En este sentido hemos estudiado la importancia del contenido de DHA y del origen sinttico en el efecto antioxidante.
ACEITE DE PESCADO DHA TG50 QUMICO ALGATRIUM PLUS

CLULAS DE PIEL

Como se puede observar en la figura, una disminucin del contenido en DHA al 50% (origen qumico) o al 20% (aceite de pescado) de los cidos grasos totales, induce una disminucin del efecto antioxidante en las clulas de retina, aunque en ningn caso llega a ser pro-oxidante. Sin embargo, en clulas de piel, esta reduccin es tan acusada que slo Algatrium Plus es antioxidante, siendo los otros dos pro-oxidantes.
0,5 M

60

% PROTECCIN

40

CLULAS DE RETINA

20

5 M 50 M

Dado el carcter multifactorial de un tratamiento nutricional, no es aconsejable administrar un producto que presente actividades divergentes en funcin del tejido al que se incorpore.

ACEITE DE PESCADO
DHA qumico vs. Algatrium Plus.

DHA TG50 QUMICO

ALGATRIUM PLUS

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

CLULAS DE RETINA
60 50 % PROTECCIN 40 30 20 10 0 -10

Si la baja actividad del aceite de origen qumico (50% en DHA), pudiera estar relacionado con la presencia de estructuras polimricas, su eliminacin por cromatografa en columna debera permitir recuperar su actividad antioxidante. Como se puede observar en la figura, una manipulacin excesiva del producto original para eliminar contaminantes o para mejorar sus caractersticas organolpticas se traduce en una prdida de bioactividad.

ALGATRIUM PLUS

DHA TG50 QUMICO

DHA TG50 QUMICO PURIFICADO

0,5 M 5 M 50 M

(DHA)
DHA qumico vs. Algatrium Plus.

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ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

CLULAS DE RETINA
70 60 50 % PROTECCIN 40 30 20 10 0

La actividad antioxidante del Algatrium Plus, tambin esta relacionada con su mayor biodisponibilidad ya que un ster etlico o un cido graso libre con el mismo contenido en DHA, presenta una actividad antioxidante como mximo la mitad de la de Algatrium Plus.

0,5 M

5 M

FA-BSA Algatrium Plus TG 50 CHEM

FA: cido graso libre EE: ster etlico TG: Triglicrido

(DHA)
Efecto de la estructura qumica Fa vs. Ee vs. Tg

EE 70

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

60 50 % PROTECCIN 40 30 20 10 0

CLULAS DE RETINA

Comparado con los antioxidantes normalmente utilizados en tratamientos oculares a las concentraciones ptimas descritas, Algatrium Plus presenta a todas las dosis estudiadas un efecto superior.

g Al

ri at

um

u Pl

s C NA

s1 Cy

M Co Q 10

M t Vi

0 E1

M t Vi C

10

Algatrium Plus vs. antioxidantes

26

ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE CELULAR

60 50 40 30 20 10 0

CLULAS DE RETINA

Incluso si estos antioxidantes se combinan o se incrementa su concentracin 10 100 veces.

% PROTECCIN

Al

tri ga

um

u Pl

AN

T1 AN

T1

x1

0 AN T1

0 x1

AN

T2

Algatrium Plus vs. antioxidantes

BIOACTIVIDAD

En este punto, la cuestin es: Cul es el mecanismo por el cual el Algatrium Plus ejerce este efecto antioxidante tan potente? Los Omega-3 pueden actuar a diferentes niveles en la fisiologa celular. La defensa antioxidante celular se basa en la actividad de un nmero de enzimas antioxidantes, junto con otros antioxidantes qumicos; conjuntamente previenen la peroxidacin lipdica, la proteca y el dao en DNA. Hemos estudiado el efecto de Algatrium Plus en diversos aspectos del sistema antioxidante celular: Generacin del anin superxido (O2-) La actividad superxido dismutasa (SOD) y de la glutatin peroxidasa (GPx) La concentracin intracelular de glutatin (GSH) La peroxidacin lipdica. Y el dao en DNA.

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BIOACTIVIDAD

1.
Oxidative Burst

Cellular Respiration

2. SOD

O2-

t Ca H2O2

s ala

H2O + O2 GPx H2O GSSG GRed

3.

GSH
Environmental Factors

OH 4. DNA Damage

Protein Peroxidation

Lipid Peroxidation

Mecanismo de actividad antioxidante.

BIOACTIVIDAD

1.
Oxidative Burst

Cellular Respiration

2. SOD

O2-

t Ca H2O2

s ala

H2O + O2 GPx = H2O

3.

GSH +
Environmental Factors

GSSG GRed

OH 4. DNA Damage

Protein Peroxidation

Lipid Peroxidation

Mecanismo de actividad antioxidante.

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BIOACTIVIDAD

Hemos encontrado que la incorporacin de Algatrium Plus en las clulas disminuye la generacin del anin superxido, la peroxidacin lipdica de una manera dosis-dependiente inversa y el dao en DNA. Los niveles inferiores del anin superxido bajo estrs oxidativo en clulas tratadas con Algatrium Plus puede ser debido a la actividad ms alta de la SOD respecto al control. Por otra parte, la actividad de la GPx en las clulas tratadas no era diferente de las clulas control con o sin estrs oxidativo. El cambio ms significativo fue el incremento (300%) de la concentracin intracelular de GSH, relacionado con un incremento de la sntesis de novo. Estos resultados nos indican que Algatrium Plus ejerce su efecto antioxidante mediante un incremento de la actividad del sistema antioxidante celular, sin una participacin directa en el mismo que lo diferencia de los antioxidantes qumicos convencionales. Esto sugiere que las clulas toleran cantidades pequeas de DHA y que ste acta a modo de estmulo para evitar cualquier acumulacin de radicales libres, la incorporacin de Algatrium Plus en las biomembranes provoca una respuesta celular antioxidante adaptativa.

ESTUDIOS IN VIVO

Para dar credibilidad a los resultados obtenidos in vitro es necesario una constatacin de los mismos in vivo. En este sentido se ha desarrollado un ensayo clnico, controlado cruzadov de 4 meses de duracin (N = 40 deportistas), a una dosis de 2 g/da de Algatrium Plus. Las variables a estudiar fueron el dao en DNA y parmetros antioxidantes sricos.

Para valorar la accin de Algatrium Plus, se utiliz como modelo de estrs oxidativo el inducido por el ejercicio fsico aerobio. Se someti a deportistas a un esfuerzo continuado al 75% de su consumo mximo de oxgeno durante 90 minutos, lo cual supone una produccin suficiente de radicales libres y estrs oxidativo como para conocer la capacidad antioxidante de cualquier manipulacin diettica.

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ESTUDIOS IN VIVO

CAPACIDAD ANTIOXIDANTE TOTAL


2,00 1,90 H2O2 (nmol/L min.) 1,80 1.70

Se observ un aumento estadsticamente significativo en la capacidad antioxidante total del serum (p<0,05) antes y despus de la realizacin de las pruebas rectangulares en los deportistas que haban ingerido Algatrium Plus durante un periodo de tres semanas a cuatro meses.

Algatrium Plus
1,60

Control
1,50

BASAL

20 DAS

4 MESES

Parmetros antioxidantes in vivo.

ESTUDIOS IN VIVO

PEROXIDACIN LIPDICA
60 50 40 MDA (nmol/L) 30 20 10 0 -10

El nivel plasmtico de MDA como ndice de peroxidacin lipdica fue aumentando durante la realizacin de todas las pruebas de esfuerzo (p<0,035). Despus de la ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas, el dao oxidativo a nivel lipdico en las mismas condiciones disminuye prcticamente a nivel basal (p<0,05); observndose a los 4 meses de tratamiento un efecto protector en esta variable.

BASAL

20 DAS

4 MESES

Parmetros antioxidantes in vivo.

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ESTUDIOS IN VIVO

DAO MOLECULAR EN EL DNA


900 800 8-oxo-dG (pmol/Kgx24h.) 700 600 500 400 300 200 100 0

Hay un aumento en el dao oxidativo del DNA durante la realizacin de las pruebas rectangulares del esfuerzo medidas como el nivel de 8-oxodG en la orina (p<0,011). La ingesta de Algatrium Plus durante 3 semanas y hasta 4 meses protege el DNA del dao oxidativo inducido por el esfuerzo de una manera significativa (p<0,035).

BASAL

20 DAS

4 MESES

Parmetros antioxidantes in vivo.

ESTUDIOS IN VIVO

VARIACIN EN LA CONCENTRACIN DE GLUCOSA


4

2 0

Como efectos colaterales en el rendimiento deportivo se ha observado que los niveles de glicemia disminuyen durante la realizacin de la prueba rectangular de esfuerzo (p<0,0009). Esta reduccin en la glicemia era menor despus de 3 semanas de ingesta de Algatrium Plus se traduca en un aumento del nivel de glicemia a los 4 meses de tratamiento con Algatrium Plus.

mg/dL

-2

-4

-6

-8

BASAL

3 SEMANAS

4 MESES

Variables fisiolgicas de rendimiento deportivo.

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ESTUDIOS IN VIVO

CONSUMO DE OXGENO
2900 2850 2800 mL/min. 2750 2700 2650 2600 2550

Tambin se ha observado un aumento significativo del consumo absoluto (p<0,019) y relativo (p<0,036) de oxgeno determinado en el umbral del esfuerzo triangular con la ingesta de Algatrium Plus hasta 4 meses. Estos resultados parecen indicar que la ingesta de Algatrium PLus puede incrementar el rendimiento deportivo.

BASAL

3 SEMANAS

4 MESES

Variables fisiolgicas de rendimiento deportivo.

CONCLUSIONES

Los cidos grasos omega-3 son un concepto vigente tanto desde un punto de vista nutricional como teraputico con un alto potencial de desarrollo. La aplicacin de los cidos grasos omega-3 en estos campos requiere de productos manufacturados de acuerdo con los estndares que se aplican a productos farmacuticos que incluyen controles de calidad para asegurar su pureza y calidad estructural que condiciona su bioactividad. Como estndar es exigible una riqueza mnima superior al 65% en una estructura qumica muy biodisponible como un triglicrido. La incorporacin de Algatrium Plus en las membranas celulares no slo no promueve la peroxidacin lipdica sino que acta como un activador del sistema antioxidante celular probablemente como consecuencia de una respuesta adaptativa de la clula.

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INFORMACIN LEGAL

ALGATRIUM es una Marca Internacional propiedad de BRUDY TECHNOLOGY. El uso de DHA de alta concentracin para el tratamiento de enfermedades tumorales est protegido por la Patente Internacional n200501141 Propiedad de BRUDY TECHNOLOGY. La comercializacin y el uso de Omega-3 Antioxidantes est protegido por la Patente Internacional n200503202 propiedad de BRUDY TECHNOLOGY.

Dr. Joan C. Domingo Pedrol - Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular - Universidad de Barcelona - Telf. 934 021 214 - e-mail: jcdomingo@ub.edu

Fabricado en Espaa por: Brudy Technology - C/Riera de Sant Miquel, 3 - 2 4 - 08006 Barcelona - Tel. 93 217 03 66

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