Sunteți pe pagina 1din 21

Diagnostic de laborator in neuroviroze

2 aspecte clinice
Meningite Encefalite

virale virale

1. SUSPICIUNEA CLINICA

Definitie de caz meningita virala

Febra 38.5 C asociata cu minim un simptom dintre:


Cefalee severa i persistenta; Redoare de ceafa

Durere de ceafa asociata cu minim 2 din urmatoarele: Fotofobie Greata Varsaturi Faringita exudativa Dureri abdominale La sugari si copiii mici semnele principale sunt febra 38.5 C asociata cu iritabilitate si pulsarea fontanelei

ETIOLOGIE POSIBILA
SINDROM ETIOLOGIE POSIBILA

80%-90% Enterovirusuri
MENINGITA ASEPTICA Polio Cocsackie A si B E.C.H.O.
10 - 20%

alte virusuri:
VZV V. URLIAN HSV CMV V. PARAGRIPALE

V. Poliomielitice

Paralizie flasca Distala Asimetrica Sensibilitate pastrata

Subgenul Polio Coxsackie A Coxsackie B

Serotip Boala asociata 1-3 1-24 1-6 Paralizii Meningite, faringite, exantem, herpangina Miocardita, pancreatite, pericardite,boala Bornholm Exanteme, IACRS, conjuctivite Hepatita virala VHA

ECHO

1-33

Heparnavirus

72

Boala mana picior gura Coxsackie A

Algoritm de diagnostic virusologic meningite virale


ETIOLOGIE POSIBILA
Produs Patolog

IZOLARE

Dg. DIRECT =detectie directa


NU

Dg. INDIRECT =serologie

80%-90% Enterovirusuri

Polio Cocsackie A si B E.C.H.O.

MF SNF LCR

De electie Culturi celulare Animal de laborator

DA

Produse patologice Materiile fecale(MF)

Recoltare. Materiile fecale pot fi recoltate ca atare in cantitate de 4-8 grame sau corespunzator volumului extremitatii falangei distale a indexului de adult. De asemenea, se pot recolta intr-o solutie 1 M de Mg SO4 (stabilizeaza infectivitatea enterovirusurilor) Precizari. Este important de notat ca enterovirusurile se excreta saptamani la rand, dar sansele de izolare scad. Se recomanda recoltarea a 2 - 3 probe de la pacient la interval de 24-48 ore. Stocare si transport. Produsele patologice sunt transportate si stocate la 2-4 C. Prelucrare. In vederea izolarii de virus suspensia de materii fecale se prepara amestecand proba recoltata cu 15 ml de solutie Hanks si bile de sticla sterile intr-un tub de centrifuga inchis. Se agita puternic, se centrifugheaza , si se recolteaza supernatantul.

Produse patologice
Lichid cefalorahidian (LCR)

Recoltare. Se realizeaza prin punctie la nivelul L4-L5, cat mai rapid posibil de la debutul simptomatologiei, inainte de inceperea tratamentului antibiotic, respectand strict masurile de asepsie. 1 ml de LCR este suficient pentru investigatii virusologice. Cantitatea recoltata nu trebuie sa depaseasca 5-6 ml in 3 tuburi sterile. Se determina numarul de celule, proteine totale, glicorahia si presiunea LCR. Sansa de izolare din acest produs creste cnd participarea meningiana este evidenta. Acest lucru se traduce prin pleiocitoza (cresterea numarului de celule limfo-monocitare in LCR). Stocarea. Se pastreaza la 2-4 C, fara adaos de mediu de transport viral. Transportul. Se realizeaza cat mai rapid posibil. Daca se depaseste 1 ora de la recoltare transportul se face obligatoriu pe gheata sau la -70 C.

Exsudat faringian/SNF

IZOLAREA ENTEROVIRUSURILOR IN CULTURI DE CELULE


ECP PICNOTIC LITIC

ECP picnotic litic

Identificarea enterovirusurilor:
REACTIA DE SERONEUTRALIZARE
IDENTIFICAREA VIRUSURILOR = VIRUS NEUTRALIZARE TITRAREA ANTICORPILOR = REACTIA DE SERONEUTRALIZARE

VIRUSNEUTRALIZARE

VIRUS NECUNOSCUT ANTICORPI CUNOSCUTI=SER IMUN DE REFERINTA

SERONEUTRALIZARE

TITRU DE ANTICORPI NECUNOSCUT VIRUS CUNOSCUT = TULPINA DE REFERINTA

ETAPE RSN
1.

TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE


BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

2.

3.

1.

TITRAREA INFECTIVITATII VIRALE metoda plajelor


Dilutii seriale ale virusului

Insamantare pe celule susceptibile dupa adsorbtie, 1h la 37, se acopera cu agar Restrictia raspandirii virusului determina liza focalizata a monostratului celular vizibila sub forma plajelor, PFU

Metoda plajelor

Caractere ale plajelor la titrarea virusurilor PR8 (H1N1) cu gena NS1 integra sau defectiva pe substraturi celulare cu sistem interferon tip I activ (MDCK) sau ineficient (Vero) Dilutie: 104 105 106

PR8-salbatic MDCK

PR8-delNS1 Vero

2. BLOCAREA INFECTIVITATII VIRALE

3. DEMONSTRAREA NEUTRALIZARII INFECTIVITATII VIRALE

= Repetarea etapei 1 cu amestecurile antigen-anticorp

Identificarea enterovirusurilor dupa metoda Tabla de sah

Lim - Benyesh Melnick

ENCEFALITE Algoritm de diagnostic virusologic


SINDROM ETIOLOGIE POSIBILA Prod. Patologic IZOLARE Dg. DIRECT =detect. directa
PCR IF

Dg. INDIRECT =serologie


NU

HERPES VIRUSURI:
HSV1 HSV2 VZV,EBV,CMV

Lichid vezicular LCR Biopsie cerebrala

Culturi celulare Animal de laborator

ENCEFALITA ACUTA MENINGOENCEFALITA ENCEFALOMIELITA

V. RABIC

Saliva,
Amprente dermice,

corneene, Biopsie cerebrala

Culturi celulare Animal de laborator

PCR IF
De electie pt. ARBO VIRUSURI

ARBOVIRUSURI
TOGAVIRUSURI FLAVIVIRUSURI BUNYAVIRUSURI POSTINFECTIOASE V. RUJEOLOS V. URLIAN V. GRIPALE VZV LCR SANGE

SALIVA, BIOPSIE CEREBRALA LCR

Culturi celulare

PCR IF

NU