Abstracto

Los papilomavirus (PV) son agentes de los cnceres humanos y de los animales establecidas. Se infectan epitelios cutnea y mucosa. Alto riesgo (HR) de los valores humanos (VPH) se asocian consistentemente con el cncer de cuello uterino, pero tambin estn implicados en la etiopatogenia de otros tipos de cncer. Los primeros oncoprotenas de PV: E5, E6 y E7 se sabe que contribuyen a la progresin del tumor. Mientras que las actividades oncognicas de E6 y E7 estn bien caracterizados, el papel de E5 es todava bastante impreciso. La asociacin causal generalizada de PV con cncer hace que su estudio que vale la pena no slo en seres humanos sino tambin en sistemas de modelos animales. El sistema de PV bovino (BPV) ha sido el modelo animal ms til en la comprensin de la potencial oncognico de PVs debido a la funcin esencial de su oncoprotena E5 en la transformacin celular. En esta revisin se destacan las diferencias entre el VPH-16 E5 (16E5) y E5 de otros PVs, principalmente de BPV. Se debatir sobre la focalizacin de E5 como un posible agente teraputico.

Palabras clave:
Transformacin celular, los receptores del factor de crecimiento; Inmune fuga; Oncogene; papilomavirus; E5 oncognica, los modelos animales

Introduccin
PV son agentes de los cnceres humanos y animales establecieron [ 1 ]. Se infectan epitelios cutnea y mucosa inducir tumores benignos que suelen disminuir. Ocasionalmente, los tumores progresan a la malignidad. Ms de 120 tipos de virus del papiloma humano se han identificado hasta el momento y entre stos 15 se han definido como los VPH de recursos humanos. Estos estn asociados consistentemente con el cncer. VPH genitales se transmiten por va sexual y de recursos humanos VPH genitales son un factor necesario en el desarrollo de casi todos los casos de cncer cervical. VPH-16 y -18 son los virus ms frecuentemente asociados con el cncer de cuello uterino (CxCa)[ 2 ]. CxCa es el segundo cncer ms comn en mujeres en todo el mundo matando a alrededor de 0,25 millones de mujeres por ao. Sin embargo, en los pases econmicamente desarrollados la tasa de CxCa se reduce drsticamente debido al programa de cribado basado en la citologa cervical exfoliativa (frotis PAP). Vacunas para prevenir la infeccin por VPH de AR estn disponibles, aunque su uso se debe implementar, junto con los programas de cribado para reducir an ms la incidencia de cncer de tales[ 3 ]. Los VPH de recursos humanos tambin estn implicados en la etiopatogenia de otro tipo de cncer anogenital[ 4 ]. Adems el VPH, particularmente HR HPV-16 est fuertemente asociada con el carcinoma de clulas escamosas oral y otras lesiones bucales potencialmente malignas[ 5 ]. La creciente evidencia tambin sugiere que la HR HPV-16 est implicada en la etiopatogenia de la cabeza y el cuello carcinomas de clulas escamosas, lo que sugiere que las vacunas contra el VPH deben ser tambin considerados para la prevencin de este tipo de cncer[ 5 , 6 ]. Adems, los VPH pueden estar implicados en la etiopatogenia de otros tipos de cncer, incluyendo tumores del tracto respiratorio superior, los ojos, el esfago, el cncer de pulmn no de clulas pequeas[ 7 - 10 ]. La presencia de VPH-16 Se ha informado tambin en el carcinoma colorrectal[ 11 ], cncer de mama[ 12 ] y carcinoma de vejiga urinaria[ 13 ]. Recientemente, el ADN del VPH tambin se ha asociado con tumores prostticos[ 14 ]. La asociacin causal generalizada de PV con cncer hace que su estudio que vale la pena no slo en seres humanos sino tambin en sistemas de modelos animales que a menudo proporcionan nuevos y rentable vas de investigacin[ 15 ]. El sistema de BPV ha sido uno de los modelos animales ms tiles en la comprensin de la potencial oncognico de PV. Adems, los mecanismos por los cuales BPV induce tumores son un modelo excelente para comprender mejor la patognesis de otros tipos de cncer. La importancia del papel del VPH en la etiologa y el desarrollo del cncer ha sido reconocido por la asignacin del Premio Nobel de Medicina 2008 al profesor Harald zur Hausen, que en primer lugar, observ que la infeccin por VPH es responsable del desarrollo CxCa. El genoma de PV es un ADN circular de doble hebra ms o menos dividido en tres partes: la regin E de codificacin para las protenas tempranas (E1-E7) responsables de la patogenicidad del virus; la regin L de codificacin para las protenas estructurales tardas (L1, L2) y una regin de no codificacin que contiene los elementos cis necesarios para la replicacin y la transcripcin del genoma viral. Tanto in vivo y en estudios in vitro han sealado a E6 y E7 como los principales oncogenes de HPV, mientras que E5 es el principal oncogn de BPV. La oncoprotena E6 interacta con el tumor supresor p53 celular[ 16 ] y dirige su degradacin[ 17 ].El objetivo principal de la oncoprotena E7 son las protenas de retinoblastoma (Rb), la inactivacin de lo que lleva a la progresin del tumor[ 18 ]. Ambos E6 y E7 tambin interactuar con muchos otros factores celulares inducir inestabilidad genmica, la progresin tumoral y la evasin inmune[18 ]. Mientras que las actividades oncognicas de E6 y E7 estn bien caracterizados, el papel de E5 es todava bastante impreciso. Sin embargo, estudios recientes han puesto de relieve la importancia del papel de esta oncoprotena en la transformacin celular, la gnesis tumoral y la modulacin inmune, lo que plantea E5 en los pasos fundamentales de la carcinognesis. Debido al papel

cada vez ms percibida de E5 en el establecimiento de la infeccin y en la transformacin celular, vale la pena considerar las caractersticas ms sobresalientes de la oncoprotena. Esta revisin se centrar en las actividades de E5, en particular de HPV-16, ya partir de BPV. Orientacin E5 como un posible agente teraputico tambin ser discutida brevemente.

HPV E5
E5 y la evolucin del virus del papiloma humano
Los VPH se han clasificado en cinco gneros (-, alfa-, beta-, gamma-Mu y Nu-PV), pero no todos VPH cdigo de gneros para una protena E5 [ 19 ]. Por ejemplo HPVs codifican y expresan E5 pero VPH no. Un anlisis filogentico de los tipos de VPH genitales conocidos (derivado utilizando una metodologa bayesiana, con la notacin de los niveles de riesgo cancergeno asignados por el gran estudio de casos y controles realizado por la Agencia Internacional para la Investigacin sobre el Cncer[ 20 ]), sugiri que al menos 3 papilomavirus ancestrales son responsables de la actual grupo heterogneo de virus del papiloma humano genital. Los tres grupos principales que surgieron incluyen especies de virus del papiloma alfa y curiosamente todos los tipos cancergenos derivan de un ancestro comn y pueden codificar para una protena E5, mientras que los otros virus del papiloma humano o bien carecen de una definible E5 ORF (marco de lectura abierto) o un codn de inicio de la traduccin para E5 . Como excepciones notables, los 10 tipos que causan verrugas venreas benignos tambin pueden codificar una protena E5. Adems, las variantes de 16E5 con la mayor actividad mitognica in vitro[ 21 ] se detectan con mayor frecuencia en la poblacin y ms comnmente asociado con lesiones cervicales. El VPH E5 s ORF se ha clasificado en cuatro grupos diferentes: alfa, beta, gamma y delta [ 22 ], que se correlacionan con diferentes manifestaciones clnicas, en particular, con potencial oncognico[ 23 ]. Por lo tanto, la protena E5-alfa se codifica por HR HPV, mientras que las protenas E5-gamma y E5-delta son codificadas por los virus del papiloma humano genital de bajo riesgo[ 24 ]. El anlisis filogentico sugiere que E5 debe dar alguna ventaja para el virus que expresa y variantes de esta protena parece aumentar la probabilidad de transformacin oncognica despus de las infecciones persistentes. Sin embargo, la ORF E5 est ausente en el genoma de muchos HPV, tales como beta-, gamma-y mu-VPH, lo que indica que la protena no es esencial para el ciclo vital de estos virus, sino ms bien puede dar un valor aadido a la infeccin por favor y la transformacin (Figura1 ). El VPH E5 ORF se expresa durante las primeras fases del ciclo de vida viral, pero slo como las cuarta ORFs en polycistronic transcripciones. Dado que los VPH se cree que utilizar un mecanismo de ribosoma-fugas de escaneo para traducir protenas de polycistronic mRNAs, es probable que sea sintetizado a partir de estas transcripciones poco de protena E5. En contraste, en la diferenciacin de clulas epiteliales, E5 se expresa como los segundos finales de los ORFs de transcripciones. Por lo tanto, es probable que E5 se sintetiza altamente en la diferenciacin de las clulas epiteliales suprabasales[ 25 ] (Figura1 ). De acuerdo, la protena E5 de BPV-1 se detect en un nivel bajo y uniforme en las capas basales y en un nivel superior en las capas superiores de epitelio escamoso estratificado en papilomas replicar productivamente BPV-1[ 26 ]. Adems, E5 Tambin se demostr que se expresa en las capas basales y suprabasales de BPV4 inducida por papilomas[ 27 ] y de HPV-16 inducidas por lesiones del cuello uterino[ 28 ].

Figura 1. E5 puede mejorar la actividad del VPH mediante la alteracin de los factores del husped que controlan la replicacin viral / persistencia . Una vista esquemtica del ciclo de vida del virus del papiloma destacando la expresin de los genes de VPH, que est estrechamente regulada y estrictamente ligadas a la diferenciacin epitelial. E5 podra contribuir a un xito de la infeccin mediante la induccin de la prdida de la superficie de la expresin de MHC I en las clulas basales infectadas prevencin de presentacin de antgenos virales a clulas T efectoras y por lo tanto, adems de otros mecanismos de evasin inmune, tales como la falta de la inflamacin, lo que contribuye a evasin de la vigilancia inmune. Expresin de E5 en las capas basales / suprabasal del epitelio dara lugar a la proliferacin de clulas sostenida para favorecer las clulas infectadas por virus, pero la extincin de su expresin en las capas ms superficiales permitira la diferenciacin celular y la produccin de viriones. Si avanza ms all de la expresin E5 etapas tempranas lesional, la diferenciacin de queratinocitos y la eliminacin inmunolgica de las clulas infectadas no se llevar a cabo y la lesin podra

estar en mayor riesgo de progresin neoplsica. Se indican las acciones E5 sobre los factores del husped que controlan la replicacin viral / persistencia. Discontinuas puntos indican los bajos niveles de expresin de genes E5. En contraste con el altamente transformacin de BPV-1 E5, las protenas E5 VPH muestran una dbil actividad transformadora in vitro (Tabla1 ). Los experimentos con el VPH-6 proporcionan la primera evidencia de que una protena E5 HPV haba transformar la actividad en las clulas de mamferos, como expresin de HPV-6 E5 en fibroblastos murinos establecidos conducir a un crecimiento independiente del anclaje[ 29 ]. Ms tarde se demostr que tambin 16E5 induce la independencia de anclaje, el crecimiento ms eficiente en la transformacin bajo suero y tumorignico de los queratinocitos y los fibroblastos murinos [ 30 32 ]. Adems, la expresin aguda de 16E5 estimula la sntesis de ADN celular en los queratinocitos humanos primarios, y en cooperacin con E7, induce la proliferacin de las clulas primarias de roedor[ 33 - 36 ]. La actividad transformadora de E5 de VPH-59 y rhesus virus del papiloma se ha demostrado en diversos tipos de clulas y ensayos[ 37 , 38 ]. Tabla 1. Comparacin de la funcin de las protenas VPH E5 con protenas E5 de BPV.

Estructura y la interaccin de clulas

16E5 es de 83 aminocidos de longitud. La deteccin de esta protena ha demostrado ser muy difcil dada su extrema hidrofobicidad, localizacin en la membrana y muy bajos niveles de expresin. Por estas razones la expresin de E5 a menudo se infiere de la presencia de ARNm E5.16E5 ha sido detectada por inmunohistoqumica por Chang et al.[ 28 ] en las lesiones intraepiteliales escamosas de bajo grado (LSIL), en lesiones intraepiteliales escamosas de alto grado, CIN (neoplasia intraepitelial cervical) y, paradjicamente, en las lesiones cancerosas, aunque a menudo este gen se elimina durante la integracin viral en el genoma del husped.Anlisis de la secuencia de aminocidos de 16E5 sugieren que comprende 3-ancla como -hlices (residuos 8-30, 37-52 y 58-76), con slo el primero de ser lo suficientemente largo para abarcar una bicapa lipdica. Cuando sobre-expresado, 16E5 est presente en el retculo endoplasmtico (ER), en la envoltura nuclear y en el aparato de Golgi (GA) [ 39 ], mientras que a un nivel ms fisiolgico de la expresin, tal como se muestra en los queratinocitos de prepucio humano primarios, se localiza casi exclusivamente a la sala de emergencia y, en menor grado en el GA y endosomas temprano[40 ]. Recientemente, se inform de que en las clulas HaCaT aproximadamente el 10% de total de 16E5 puede localizar a la membrana plasmtica con el extremo amino-terminal intracelular y extracelular carboxilo-terminal. Esta observacin sugiere un papel fusognica de 16E5 con la induccin de la fusin clula-clula y la formacin de clulas HaCaT binucleadas[ 41 - 43 ]. Por el contrario, otros autores informan de la presencia de la protena 16E5 slo en el ER de clulas COS y ectocervicales en la orientacin opuesta: intraluminal amino-terminal y carboxilo-terminal citoplasmtica[ 44 ]. La localizacin citoplsmica de la terminal C se ve reforzada por la interaccin reportado de 10 aminocidos en el extremo C terminal de 16E5 con karyopherin 3 (KN3) [ 45 ], una protena celular abundante localiza principalmente en el citoplasma[ 46 , 47 ].Una explicacin para estos datos de contraste es la posible presencia de 16E5 en la membrana plasmtica como consecuencia de la sobre-expresin de 16E5 por el sistema de vector de adenovirus utilizado en clulas HaCaT. De acuerdo, cuando BPV-1 E5 se expresa a niveles muy altos, como en las clulas infectadas con baculovirus, es detectable en la membrana plasmtica, adems de la ER y GA[ 48 ]. 16E5 auto-asociados in vitro[ 49 ] y en vivo[ 40 , 50 ] y esto oligomerizacin participa principalmente por interaccin hidrofbica. El disulfuro de unin informado[ 40 ] parece menos probable porque los modelos de topologa de la membrana 16E5 predecir la localizacin de los seis residuos de cistena dentro de la bicapa lipdica[ 21 , 51 ] Representacin cistena dimerizacin ms difcil.

E5 y la transformacin celular
E5 interacta con un nmero de protenas celulares y estas interacciones se consideran importantes para la actividad biolgica de la protena en la transformacin celular y la evasin de la respuesta inmune. Por lo tanto el primer dominio transmembrana de 16E5 y 31E5 VPH-interacta directamente con el componente de la cadena pesada de la I del MHC (Complejo Mayor de Histocompatibilidad de clase I) a travs de los pares presentes en esta regin de leucina; curiosamente este mismo dominio transmembrana interacta con una chaperona de MHC I , Bap31[ 52 , 53 ]. Una regin dentro de la segunda hlice (residuos 4154) puede ser el sitio de unin para el 16 kDa de poro sub-unidad de vacuolar-ATPasa (V-ATPasa)[ 54 ], aunque otros afirman que esto se encuentra entre los residuos 54-78[ 55 ]. E5 es una protena de la transformacin de dbil in vitro y sus efectos se ven mejor cuando en cooperacin con las otras oncoprotenas virales: 16E5 junto con E6 puede inducir la formacin de coilocitos, clulas grandes con citoplasma despejado y

ncleos picnticos con nucleolos poco visible, un pozo conocido marcador morfolgico de la infeccin por VPH[ 56 ]. El desarrollo de vacuolas coiloctica puede estar vinculado a la relocalizacin de calpactin I de la regin perinuclear promover la fusin de membrana perinuclear E5-inducida[ 57 ]. Hu et al.[ 43 ] Los informes anteriores confirmaron que describen la capacidad oncognica de 16E5[ 30 , 58 ] y ofreci ideas mecanicistas de cmo la expresin E5 provoca cambios morfolgicos en el epitelio cervical.Adems, mediante la identificacin de endoreplicacin como el mecanismo por el cual la forma aberrante ncleos y el aumento de la sntesis de ADN surge, existe ahora un proceso biolgico que puede ser dirigido a inhibir la oncognesis[ 43 ]. Fusognicos 16E5 se expresa en la membrana plasmtica de las clulas y las dos clulas debe expresar E5 para la fusin clula-clula que se produzca, lo que indica que E5 no puede inducir la fusin clula-clula a travs de una interaccin con otra protena (receptor) en una clula vecina, sino que forma dmeros E5-E5 o complejos que contienen al menos dos molculas de 16E5. Estos resultados proporcionan una importante visin de cmo es mediado el proceso fusogenic [ 41 ]. E5 de VPH HR por s mismo puede inducir cambios morfolgicos y cromosmica que con frecuencia acompaan a la progresin de las clulas normales a clulas cancerosas. El aumento de tamao, mayor contenido de ADN nuclear y tetraploida son caractersticos de LSIL[ 59 , 60 ].Todos estos cambios morfolgicos se han detectado en 16E5 clula que expresa y, en particular, la formacin de ncleos aberrante parece ser debido a endoreplicacin ms que una consecuencia de la fusin clula-clula y no citocinesis[ 43 ]. Muchos de estos cambios son los criterios utilizados en la deteccin clnica de los precursores del cncer cervicouterino en las pruebas de Papanicolaou[ 61 ]. Otros cambios morfolgicos, tales como la presencia de clulas binucleadas, el aumento de contenido de ADN y la poliploida[ 62 ], no se utilizan en el diagnstico de lesiones precancerosas a pesar de ser menos subjetiva, ya que requieren grandes cantidades de material, tiempo y gastos.

VPH E5 interaccin con la clula husped

VPH infectan epitelios estratificados, y su ciclo de vida est indisolublemente vinculada a la diferenciacin de los queratinocitos y, con el fin de establecer una infeccin persistente, los VPH se han desarrollado para superar muchos "obstculos": a) El epitelio estratificado se asocia con la rotacin continua celular y descamacin de los queratinocitos diferenciados terminalmente, por lo tanto el mantenimiento del virus del papiloma dentro del tejido requiere la infeccin de las clulas epiteliales basales y la propagacin de estas clulas infectadas. b) Los virus del papiloma utilizan la maquinaria celular para su replicacin y la necesidad de mantener la divisin celular junto con una diferenciacin retardada pero no completamente inhibido. VPH queratinocitos infectados con desequilibrada sntesis de ADN / diferenciacin se ven obligados a la apoptosis por el mecanismo de control celular. c) Para establecer la infeccin persistente por el VPH debe luchar o evadir la vigilancia inmune. Es claro que la expresin dependiente de la diferenciacin epitelial y oportuna de todas las protenas E es esencial para favorecer la replicacin viral y a su vez para superar los obstculos mencionados anteriormente. El "E5 valor aadido" se destac en los siguientes prrafos.

E5, factores de crecimiento y ciclo celular

Infeccin por VPH se cree que llevar a cabo cuando las clulas epiteliales basales estn directamente expuestos al virus durante microlesiones [ 63 ]. La infeccin de las clulas madre epiteliales, las cuales tienen la capacidad de auto-renovacin, se puede garantizar el mantenimiento a largo plazo del genoma viral. Durante la etapa productiva del ciclo de vida del VPH, las protenas virales tempranas se expresan, el mantenimiento de 50-100 copias de ADN episomal por clula por la replicacin sncrona con el ADN de la clula husped[ 64 - 66 ]. La capacidad demostrada de 16E5 para mejorar la activacin ligando-dependiente del EGFR [ 56 , 58- 60 ] (Figura2 ) y para estimular la proliferacin dependiente de EGF de los queratinocitos humanos cultivados[ 33 , 35 , 58 ] sugiere que 16 E5 puede jugar un papel importante en la expansin de poblaciones de queratinocitos basales VPH-16-infectadas in vivo mediante la mejora de ligando-dependiente de la activacin de EGF-R. La confirmacin de esta actividad E5 viene de un estudio en ratones transgnicos que muestran que 16E5 funcional de EGF-R se requiere para la induccin de hiperplasia epidrmica y la formacin de tumores espontneos de la piel[ 67 ].Oncoprotena 16E5 se une e inhibe la actividad de la subunidad de 16 kDa de V-ATPasa, la alteracin de la acidificacin del endosoma y la degradacin de EGFR[ 34 , 68 ] mejorando as su reciclado a la membrana plasmtica. 16E5 tambin puede retrasar la degradacin de EGF-R al interferir con el trfico de membrana y la fusin de los principios y finales de los endosomas [ 69]. Recientemente, 16E5 se muestra para formar un complejo con KN3 que se localiza principalmente en el citoplasma, cerca de la envoltura nuclear[ 45 ]. Se ha sugerido que un complejo KN3/16E5 juega un papel importante en el trfico de vesculas, lo que refuerza la hiptesis de que E5 tiene un papel central en la alteracin de trfico de protenas dentro de la clula. La va de sealizacin del EGF-R se puede activar por 16E5 a travs de cualquiera de los procesos dependientes de EGF o EGF-independiente. Activa 16E5 quinasa activada por mitgenos protena (MAPK) p38 y ERK1 / 2 en los queratinocitos humanos de una manera EGF-

independiente[70 ]. Dos vas diferentes, un receptor de tirosina quinasa mediada por una protena quinasa C (PKC) dependen de la va, estn involucrados en la activacin de MAPK[ 71 , 72 ], que aumenta la transcripcin de c-fos y c-jun[ 33 , 73 , 74 ], forzando a las clulas a travs del ciclo celular y estimular la transcripcin de los oncogenes virales E6 y E7. En contraste con los datos de EGF-R, menos se sabe sobre el papel de la interaccin de 16E5 con otros miembros de la familia ErbB, tales como receptor de ErbB2 o ErbB4 [ 28 , 75 - 77 ].

Figura 2. VPH 16 E5 mejora del factor de crecimiento vas de sealizacin . La activacin de EGF-R y la corriente abajo de Ras-Raf-MAP quinasa o PI3K-Akt va conduce a la proliferacin celular alterada, angiognesis, y antiapoptosis. Las dos ltimas funciones se han mejorado an ms con la regulacin al alza de la COX-2 de expresin E5inducida. Expresin COX-2 inhibe la apoptosis inducida por perxido de hidrgeno e induce la secrecin de PGE2 que activa el receptor EP4. Esto, a su vez, hace que la produccin de AMPc, la activacin de PKA; PKA contribuye a la expresin E5inducida de EP4 mediante la mejora de CREB unin a CRE variante del promotor EP4. PKA influye tambin la apoptosis a travs de la degradacin de la ubiquitina-proteasoma de BAX. Por ltimo, la protena E5 mejora la proliferacin celular a travs de regulacin a la baja de p21/p27 supresores de tumores y a travs de la regulacin de T del receptor acoplado a la protena endotelina (ET A ) / ET1 bucle autocrino. Punteadas ejes de la flecha indican caminos inciertos. La cruz-habla posible entre ETAR y la va EGFR travs protena Src tambin est indicado. 16E5 tambin es capaz de interactuar con, y la mejora de la sealizacin de, diferentes clases de receptores de factores de crecimiento como el receptor de la endotelina acoplado a la protena G (ET Una )[ 36 ]. En factor de crecimiento de queratinocitos-16E5 hambrientos de potencia la actividad mitognica de la endotelina-1 (ET-1) el ligando especfico de la ET A (figura2 ).Curiosamente se inform de que la actividad mitognica de ET-1 puede conducir a la estimulacin crnica de la proliferacin de queratinocitos observado en la psoriasis, un trastorno inflamatorio / proliferativa de la piel, lo que sugiere un papel importante para la ET-1 en la proliferacin epitelial[ 78 ]. Adems cruzada hablar entre ET A EGF-R vas R y tendra un efecto amplificador sobre la proliferacin celular[ 79 ]. En contraste con la activacin de EGF-R, 16E5 puede abajo-modular el receptor de factor de crecimiento de queratinocitos / de crecimiento de fibroblastos receptor del factor de 2b (KGF-R/FGF-R2b), a travs de la reduccin de las transcripciones y protenas con alteracin del trfico del receptor endoctica. Esto provoca una disminucin en la respuesta de crecimiento a los ligandos del receptor, lo que sugiere que 16E5 podran tener un papel en la infeccin por VPH por perturbar el comportamiento fisiolgico KGFR-mediada de queratinocitos confluentes cometidos a la diferenciacin[ 80 ]. Por lo tanto, 16E5 podra ejercer dos efectos opuestos, ambos relacionados con la replicacin del virus: (a) incrementar el crecimiento de las clulas indiferenciadas ms basales hasta en la regulacin de la va de EGF-R y (b) la disminucin de la proliferacin fisiolgica / diferenciacin de los queratinocitos suprabasales por abajo de la modulacin de la expresin KGFR y sealizacin. 16E5 puede tambin regular a la baja la expresin del supresor de tumores p21 y p27, ambos de los cuales son inhibidores de la protena quinasa dependientes de ciclina (CKI), causando as la progresin del ciclo celular y la sntesis de ADN (fase S) (figura 2 ). La p21 wafl / Sdil / CIPL baja regulacin es a nivel transcripcional[ 81 ] mientras que la de p27 Kip1 , uno de los ms abundantes CKI, es a travs de la reduccin de la vida media de p27 Kip1 protenas[ 82 ]. Otras actividades biolgicas de 16E5 contribuyen a la proliferacin de las clulas infectadas, tales como la interferencia con la comunicacin de clula a clula y la alteracin de la adhesin y la motilidad celular. La capacidad de 16E5 para inhibir la brecha de comunicacin mediada por unin entre las clulas epiteliales en monocapa[ 83 ], y en cultivos suspendidos[ 84 ] al interferir con conexina 43 puede hacer que las clulas transformadas ms insensibles a las seales de control del crecimiento homeosttico de las clulas normales adyacentes.

E5 y la apoptosis

Debido a la integracin del genoma del VPH HR durante la progresin maligna, el gen E5 no se expresa en tumores de cuello uterino, pero tanto 16/18 E5 ARNm y protenas se han detectado en LSIL anogenital [ 85 , 86 ] apoyar la posibilidad de que E5 juega un papel en las primeras etapas de la infeccin por VPH para proteger a las clulas infectadas de la apoptosis. En efecto, se ha propuesto que la inhibicin de la muerte mediada por el receptor apoptosis en queratinocitos humanos, necesario para prevenir la apoptosis en las primeras etapas de la infeccin viral, es una funcin primaria de la protena VPH de AR E5. Perjudica 16E5 ligando factor de necrosis tumoral (FasL) y tumor relacionado con el factor ligando inductor de apoptosis de necrosis (TRAIL) mediada por la apoptosis en las clulas HaCaT por: (a) downregulating la cantidad total de receptor de Fas y la reduccin de localizacin de superficie de Fas, y (b) la alteracin de la formacin del complejo de sealizacin inductor de muerte (DISC) provocada por TRAIL[ 87 ].Culturas balsa de queratinocitos 16E5-expresan estaban completamente protegidos contra la muerte celular FasL-o inducida por TRAIL[ 88 ]. Del mismo modo, cuando se utiliza la radiacin UV para inducir el estrs, E5expresin de los queratinocitos humanos estaban protegidos frente a la apoptosis[ 89 ]. Por el contrario, 16E5 sensibiliza queratinocitos humanos a la apoptosis inducida por el estrs osmtico, tal vez debido a modificaciones de la membrana celular causados por esta molcula fuertemente hidrfobo[ 90 ].

E5 y va de estrs ER
La presencia de las protenas virales puede activar mecanismos de defensa celular y, en particular, la respuesta de estrs ER. 16E5 puede suprimir tres protenas clave de la va de estrs ER: la ciclooxigenasa-2 (COX-2), XBP-1 y IRE1a. Como se sugiri en otros virus, la baja regulacin de estas protenas puede favorecer la persistencia viral[ 91 ], que es un factor importante que contribuye al desarrollo del cncer por VPH de alto riesgo [ 92 ]. La inhibicin de la va por el estrs ER E5 parece estar limitado a los tipos de alto riesgo (Tabla1 ), HPV-6b E5 es incapaz de alterar XBP-1[ 93 ] y se inform de aumento de los niveles de la COX-2 en la papilomatosis respiratoria recurrente (RRP) lesiones causadas por el VPH de bajo riesgo de tipo 6b y 11[ 94 , 95 ]. 16E5 tambin es capaz de reducir la expresin de la COX-2 en las clulas co-expresin de E6/E7, lo que sugiere que podra ejercer una actividad similar durante la replicacin viral. Sin embargo, en diferentes sistemas de clulas y condiciones clnicas los mismos principios de los genes virales parecen ejercer efectos opuestos, tales como la induccin de la COX-2 expresin en HaCaT inmortalizada espontneamente y las lneas de cncer cervical C33A y SiHa [ 96 , 97 ]. Es posible que el diferente origen celular, la inmortalizacin y transformacin de estado, y la expresin relativa de la cuenta de protenas temprana de VPH para estos datos contrastantes. Sin embargo, el comunicado coherente baja regulacin de ER genes de respuesta al estrs por 16E5 en queratinocitos genital primario conduce a la especulacin de que este estrs ER inhibicin de la va es un hecho favorable para la replicacin viral y la persistencia[ 98 ]. Por ltimo, 16E5 puede inducir la expresin de uno de la prostaglandina E2 (PGE 2 ) receptor en clulas de cncer cervical mediante la estimulacin de la unin de CREB a un sitio CRE variante en el promotor del gen EP4[ 99 ] (Figura2 ). EP4 va activa la protena-quinasa A, que interviene en la degradacin de Bax ubiquitina-proteasoma mediada por la induccin de efectos antiapoptticos. La activacin de EP4 por 16E5 aumenta la formacin de colonias independiente del anclaje y el factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF), lo que lleva a la especulacin de que al menos en algunos tumores E5 est involucrada en el crecimiento tumoral, la angiognesis y la metstasis de clulas inflamatorias mediante la induccin de las vas de sealizacin.

HPV E5 y evasin inmune

De carcinognesis cervical es un proceso de mltiples pasos que comienza con la infeccin viral; uno de los pasos es la persistencia de la infeccin viral. Al menos tres factores pueden favorecer la persistencia del virus del papiloma: el ciclo de vida del virus se lleva a cabo fuera de las clulas inmunitarias drmicas[ 100 ], el virus no causa la lisis celular y la respuesta inflamatoria por lo tanto, ninguna o dbil [ 100 ], y, finalmente, las protenas virales luchar activamente la respuesta inmune[ 101 ]. Las protenas E6 y E7 juegan un papel importante en esta lucha, pero, una vez ms, la protena E5 parece aadir ayuda al virus por abajo de la regulacin de MHC / HLA de clase I MHC de clase I es mucho ms reducida en la superficie celular y se acumula en la Asamblea General de las clulas que expresan 16E5[ 102 ]. La detencin de MHC de clase I en el GA es debido a E5 inducida por alcalinizacin de los compartimentos endomembrane[ 103 ], siguiendo 16E5-16 k subunidad interaccin c, y para la interaccin directa de E5 con la cadena pesada de la clase I del MHC complejo[ 53 , 104 ]. Estos se han alcanzado conclusiones en las clulas HaCaT cultivadas y la lnea de clulas W12, y en vivo en el modelo bovino[ 105 ]. El efecto funcional de la disminucin de expresin de HLA es una reduccin del reconocimiento por CD8 + clulas T in vitro[106 ]. Por otra parte consistente con su papel en la alcalinizacin de endosomas, 16E5 pueden prevenir la descomposicin endosomal de la cadena invariante, una chaperona importante en la maduracin de HLA de clase II, lo que lleva a la inhibicin de la expresin de la superficie de HLA de clase II [ 107 ].

La inhibicin de HLA de clase I transporte por 16E5, en contraste a la inhibicin por BPV E5, es reversible mediante el tratamiento con interfern (IFN). IFN es suficiente para superar el efecto inhibidor sobre el transporte de MHC en presencia de bajos niveles de 16E5. Sin embargo, en infecciones oncognicas de VPH, E6 y E7 pueden inhibir la va de IFN tipo I[ 108 110 ], evitando as la liberacin mediada por IFN de bloqueo E5-inducida de trfico de HLA de clase I. Aunque un mecanismo eficiente para evitar los linfocitos T citotxicos (CTL) mediada por aclaramiento inmunitario, la reduccin o ausencia de MHC de clase I superficie renders clulas ms susceptibles a Natural Killer (NK) ataque de clulas. Clulas NK humanos expresan mltiples receptores que interactan con las molculas de HLA de clase I, incluyendo clulas asesinas receptores de tipo inmunoglobulina (KIR) que reconocen predominantemente clsica HLA de clase I, incluyendo HLA-C, y el tipo lectina superfamilia de receptores que interactan especficamente con la C clase I no clsica molcula HLAE. El reconocimiento de la molculas de clase I por sus receptores inhibitorios inhibe la lisis celular mediada por NK, lo que ocurrira en ausencia de HLA-C / E. As, para evadir con eficiencia inmunovigilancia, el VPH tiene que selectivamente downregula el HLA de clase I molculas. En efecto 16E5 inhibe selectivamente la expresin en superficie de HLA-A y HLA-B sin afectar a cualquiera de sntesis o transporte a la superficie celular de HLA-C / E[ 97 , 100 , 101 ]. De esta manera el VPH-16 es potencialmente capaz de evitar tanto CTL y muerte de las clulas NK. El puente de la respuesta inmune innata y adaptativa tambin puede verse afectada por E5 a travs de la inhibicin de la produccin de citocinas mediada por la molcula CD1d-que de lo contrario se produce la interaccin entre la molcula CD1d superficie de la clula y las clulas iNKT [ 111 ]. Se inform de que las interacciones entre 16E5 y calnexina interfieren con la modificacin de HLA de clase I HC y los resultados en la retencin de la cadena pesada en la sala de emergencias [ 51]. Dado que las vas de sntesis para CD1d y HLA clase I HC son similares, esta interaccin E5-calnexina puede alterar el trfico CD1d. En efecto, las interacciones entre 16E5 y calnexina no aparecen para interrumpir todas las funciones de calnexina, pero slo lo suficiente para cooptar la ruta proteoltica citoslica celular y degradar CD1d. As E5 inhibe las CD1d-mediada por las vas inmune innata y adaptativa a principios de la infeccin por VPH. Por ltimo, la novela asociacin informado de VPH-16 y VPH-31 E5 con Bap31 y A4 tambin puede tener un efecto sobre escape inmune [ 52 ]. Bap31 es una chaperona implicado en el control de calidad de, por ejemplo, molculas de MHC; A4 es una supuesta protena de canal inico del retculo endoplsmico. E5 y Bap31 interactan fsica y colocalise en estructuras perinuclear y se demostr que esto se correlaciona de unin con la capacidad de retener la capacidad de proliferacin de los queratinocitos infectados despus de la diferenciacin. E5 tambin se une y colocaliza con A4 independientemente de Bap31, sin embargo, el significado biolgico de esta interaccin queda por establecer. Curiosamente 16E5 primer dominio transmembrana que se une la cadena pesada de MHC presenta homologa con el tercer dominio transmembrana de Bap31[ 53]. Por lo tanto, es posible que unidas a la membrana desplaza 16E5 Bap31 de MHC I, tal vez aprovechando su propia interaccin con Bap31, y por lo tanto retiene I del MHC en el ER / GA. Por lo tanto escape inmune mediada por E5 parece ser un proceso complejo, tal vez evolucionado a impacto en las diferentes vas que regulan el trfico intracelular de molculas inmunovigilancia por mecanismos generales no-especficas, tales como alcalinizacin endosomal y los principios especficos, tales como la unin a MHC I pesada cadena y chaperonas tales como calnexina, la cadena invariante o Bap31. Queda por ver si la expresin E5 causa escape inmune tambin in vivo. Existe una correlacin inversa entre la expresin de 16E5 y la presencia de la superficie de MHC I en la lnea de queratinocitos W12 derivada de una biopsia de CIN I[ 106 ], y en un pequeo panel de origen natural lesiones CIN (Campo, observaciones no publicadas). Adems, de nuevo en un nmero limitado de muestras, se ha informado de una asociacin entre la disminucin de la inmunorreactividad CD1d y la progresin de las lesiones neoplsicas cervicales con significacin estadstica ( P = 0,0001)[ 111 ].

Transformacin de la clula vas alternativas para E5

Los beta-VPH no codifican para una protena E5. Teniendo en cuenta la presencia ubicua de los beta-VPH en la poblacin sana con casi no hay patologas asociadas, la falta de E5 ORF en estos VPH podra representar un factor que dificulta el ciclo de replicacin de estos virus completamente.Por otra parte, se detectan algunos beta-VPH junto con genotipos de VPH-3 o relacionados [ 112 ], y un compaero de deteccin tales con E5-codificacin de los VPH sugiere que se benefician de los VPH beta-E5 entregado por el VPH coinfectantes[ 113 ]. En patologa humana no es una rara genodermatosis recesiva, autosmica asociada con un alto riesgo de carcinoma de piel, Epidermodisplasia verruciforme (EV), que se caracteriza por la susceptibilidad anormal a la infeccin por VPH beta. El anlisis gentico condujo a la identificacin de dos genes adyacentes (EVER1 y EVER2), la mutacin de los cuales segrega con la enfermedad[ 114 ]. Este extraordinariamente alta sensibilidad a las infecciones por VPH cutneos beta en individuos por lo dems sanos-que llevan una mutacin en uno de los genes NUNCA sugiere que en

los seres humanos existe una barrera NUNCA basado natural, que protege al husped de PV. Las protenas EVER son cruciales para la integridad funcional del complejo EVER/ZnT-1[ 115 , 116 ] responsable de mantener un bajo nivel de zinc libre, modular la actividad de la AP-1 factores de transcripcin necesarios para la expresin del genoma viral. Se ha propuesto que un desequilibrio celular de zinc constituye un importante, quizs incluso un cruciales, paso en el ciclo de vida del VPH. Parece que la ruptura de la barrera para el equilibrio celular de zinc es un elemento importante de la patognesis de ambos alfa y beta-VPH, y la principal diferencia entre estos dos grupos sera un mecanismo empleado para lograr el mismo objetivo. Los beta-VPH son defectuosos de este desequilibrio zinc, un importante crecimiento de la promocin funcin realizada por E5 de la alfa-virus del papiloma humano, y la inactivacin de las protenas que nunca puede compensar la funcin viral falta[ 117 ]. En efecto, las protenas transmembrana virales EVER 16E5 y celular interactan tanto con el ZnT1 transportador de zinc, y es probable que modulan la homeostasis del zinc[ 115 , 117 ]. La interrupcin del complejo zinc-transporte celular logrado durante la coevolucin de VPH y la especie humana de largo por dos estrategias completamente ajenos subraya la importancia general del zinc celular (des) equilibrio en el ciclo de vida del virus del papiloma y el papel central desempeado por E5. En la ausencia de E5, beta-papilomavirus han desarrollado un mecanismo para escapar inmunovigilancia independiente de E5. De hecho las oncoprotenas E6 y E7 de VPH-38 cutnea interfieren con la va del interfern. La expresin de las dos protenas virales en queratinocitos HaCaT condujo a una disminucin de los niveles de MHC-I. Esta regulacin a la baja se asoci con una reduccin de la expresin de MHC de cadena pesada I, del TAP acompaante pptido y de los STAT-1 efector IRF-1[ 118 ]. Por lo tanto, al menos para algunos (alto riesgo?) Virus del papiloma beta otros mecanismos no relacionados E5toman parte en el proceso de la replicacin viral y la evitacin del control inmunitario.

HPV E5 y carcinognesis
Protenas E5 VPH no se cree que desempean un papel en los pasos posteriores de la progresin maligna debido a que en las infecciones por VPH de alto riesgo que el progreso de cncer de la ADN viral normalmente se integra en el genoma del husped a menudo resulta en la prdida de los genes E2 y E5 [ 65 ]. Sin embargo, en contraste con otros virus del papiloma humano de alto riesgo, el VPH-16 ADN puede existir en forma integrada, episomal o integrado y episomal en las lesiones malignas del cuello uterino. En un estudio sobre 60% de cncer cervical por VPH-16-positivo expresa la protena 16E5[ 28 ] y los informes recientes sugieren que estos tumores con episomal VPH-16 pueden tener un comportamiento ms agresivo (Venuti, datos no publicados).Sin embargo, el hecho de que una proporcin sustancial de los tumores no expresan E5 indica que la protena no es esencial para la progresin tumoral mediada por el VPH-16. Aunque 16E5 no puede contribuir a la progresin maligna, hay evidencia de que si el producto de expresin E5 lesionales ms all de las etapas tempranas, la diferenciacin de queratinocitos y la eliminacin inmunolgica de las clulas infectadas no se produce el aumento de la probabilidad de que la posterior transformacin oncognica. La presencia de un gen de E5 en todos los VPH HR [ 23 ] y la deteccin de variantes de E5 con un mayor uso de codones en lesiones de alto grado[ 119 ] apuntan a un papel importante en la patognesis de E5 PV-inducida. Esta suposicin se fortalecer an ms por los estudios sobre animales transgnicos: (a) ratones transgnicos que expresan slo el VPH-16 E6 y E7 oncogenes en el epitelio basal desarrollar menos tumores que los derivados en los ratones transgnicos que expresan el VPH-16 E5, E6 y E7 genes[ 120 ] (b) Los ratones transgnicos para 16E5 (sin HPV 16 E6 y E7) desarrollar tumores de piel de alta frecuencia[ 67 ]. Una o ms de las actividades biolgicas demostradas de 16E5 pueden ser responsables de eventos despus de la infeccin temprana mejoran la probabilidad posterior de la carcinognesis.En efecto persistencia viral se considera que es un factor importante en la progresin neoplsica de una lesin premaligna[ 65 ]. El 16E5-inducida por la regulacin de la MCH I[ 104 ] y MHC II[107 ], lo que resulta en la clula infectada inmunovigilancia evadir, puede aumentar la duracin y el tamao de la infeccin por el VPH el aumento de la probabilidad de que algunas clulas infectadas sern transformados. La expansin de las clulas infectadas tambin puede ser favorecida por la sntesis de ADN inducida por 16E5 en la diferenciacin de los queratinocitos[ 121] y por 16E5-mayor activacin dependiente de ligando de EGF-R[ 56 , 58 - 60 ]. Adems de la capacidad de 16E5 para inhibir la comunicacin intercelular brecha cruce mediada a travs de la interaccin conexina 43 puede hacer que las clulas infectadas ms insensibles a las seales de control del crecimiento homeosttico de las clulas adyacentes no infectadas[ 83 , 84 ]. 16E5 induccin de la fusin celular puede representar otro evento crtico en la etapa temprana de cncer de cuello uterino asociado al VPH[ 41 - 43 ]. Por lo tanto, HR HPV E5 es involucrado en la etapa muy temprana de la carcinognesis por la prolongacin de la vida y la ampliacin de la piscina de las clulas infectadas a partir de la cual puede surgir el cncer como un evento estocstico. Finalmente E5 se puede tambin implicado en la seleccin negativa de las clulas que albergan el virus episomal y a su vez favorece la seleccin de las clulas con virus de la integrado. Prdida de episoma, asociada con la induccin de genes de respuesta antivirales, podra ser un evento clave en la seleccin espontnea de

queratinocitos del cuello del tero que contienen HPV 16 integrado. Microarray anlisis mostr que la prdida de episoma estaba estrechamente asociado con la activacin endgena de los genes de la respuesta antiviral que tambin se inducible por va de IFN tipo I [ 122 ]. Recientemente se demostr esta activacin del estado antiviral ser inducida por 16E5 a travs de la estimulacin de IRF-1 e IFN-[ 123 ]. En este escenario la carcinognesis cervical requiere no slo la integracin HR HPV, sino tambin la prdida de la inhibicin (expresin E2) episomas por el establecimiento E5-inducida de un estado antiviral que puede acelerar el despacho episomal.

BPV E5
BPV E5 es el mejor caracterizado de las protenas E5 y ha proporcionado el modelo para las investigaciones sobre el VPH E5. E5 es el principal oncoprotena BPV, slo 44 aminocidos en BPV de tipo 1 (BPV-1) y 42 en BPV tipo 4 (BPV-4)[ 124 127 ]. Ambas protenas se pueden dividir en dos distintos de dominio: un dominio amino-terminal que constituye la mayor parte de la protena y se compone de ricos en leucina membrana-que abarca los residuos de aminocidos fuertemente hidrfobos con un solo aminocido hidrfilo en la posicin 17 (glutamina en BPV -1 E5 y asparagina en la BPV-4 E5) y un corto dominio carboxilo-terminal hidrfilo[ 125 , 128 ]. Ambas protenas E5 se localizan en los compartimentos endomembrane de la membrana GA, ER y plasma. Se ha sugerido por BPV-1 E5 que los contactos hidrfobos hlice-hlice dentro del dominio TM juegan un papel crtico en el montaje dmero funcional y que el motivo cistena que contienen funciones como la estabilizacin adicional dmero[ 129 - 131 ].

La transformacin de clulas por BPV E5

A pesar de su similitud estructural, BPV-1 y BPV-4 E5 difieren en las formas en que logran la transformacin celular, probablemente reflejando el diferente origen de las clulas de la celebracin de los dos virus. BPV-1 infecta a los fibroblastos y queratinocitos de la piel que dan lugar a fibropapilomas, mientras que BPV-4 nicamente infecta las clulas epiteliales del epitelio de la mucosa del tracto gastrointestinal superior[ 132 ]. Por lo tanto, mientras que la expresin de BPV-1 E5 por s misma es suficiente para transformar totalmente con el ratn y clulas de fibroblastos humanos primarios[ 133 , 134 ], BPV-4 E5 contribuye al fenotipo transformado de las clulas primarias al conferir crecimiento independiente del anclaje, el crecimiento en suero bajo, la formacin de focos y aumento de la motilidad celular, pero slo en presencia de las otras oncoprotenas virales, que se asemeja en este sentido 16E5 (Tabla1 )[ 127 , 135 , 136 ]. Para ambas protenas del dominio hidrofbico, los residuos hidroflicos en la posicin 17 y la hidrfila cola C-terminal son fundamentales para sus actividades de transformacin [ 135 , 137 ]. BPV-1 E5 induce la transformacin celular tumorignica por fuertemente y unirse especficamente a su diana celular, de crecimiento derivado de plaquetas receptor del factor de receptor (PDGF-R) tirosina quinasa de una manera independiente de ligando [ 138 - 141 ]. El PDGF-R es una protena transmembrana que normalmente se activa por la unin de su ligando PDGF. BPV-1 E5 se puede unir como un dmero de dos monmeros de la PDGF-R[ 140 , 142 , 143 ], la induccin de la dimerizacin del receptor que a su vez hace que trans-phosphyorylation de residuos especficos de tirosina quinasa en el dominio citoplsmico del receptor que resulta en la sealizacin mitognica[ 144 ]. Los estudios que utilizan inhibidores de PDGF-R quinasa muestran que el mantenimiento de la transformacin por BPV-1 E5 requiere la activacin PDGF-R sostenida[ 145 ,146 ]. BPV-1 E5 interacta con el PDGF-R a travs de su dominio de transmembrana [ 141 , 142 , 147 ], a diferencia de la de PDGF ligando natural que se une al receptor a travs de su dominio de unin a ligando caracterizacin extensiva de E5 demuestra que hay esencialmente cuatro residuos importantes para PDGF-R unin y activacin. Estos son la glutamina transmembrana (Gln17) importante tanto para la dimerizacin de E5 y por su interaccin con PDGF-R; el cido asprtico (Asp 33) de residuos en la regin de yuxtamembrana que proporciona una carga negativa requerida para la interaccin del receptor y dos residuos de cistena terminales ( Cys37, Cys39) esencial para homodimerizacin de E5[ 125 , 137 , 145 , 148 , 149 ]. Curiosamente, estos cuatro residuos se conservan entre las protenas E5 de fibropapillomaviruses [ 150 ], mientras que otros residuos dentro de la regin de transmembrana estn menos bien conservadas. Los estudios de mutagnesis han demostrado que el BPV-1 E5 puede tolerar un sorprendente nmero de mutaciones y que el mantenimiento de la naturaleza hidrfoba de E5 y los residuos conservados es suficiente para conferir actividad transformadora[ 151 - 155 ]. Anlisis mutacional del propio receptor han identificado los principales residuos importantes para la funcin. El PDGF-R es tan solo tipo tramo I receptor transmembrana con tres dominios: un dominio amino terminal que se une a su receptor, un corto membrana que abarca la regin y un dominio quinasa intracelular. Dos residuos parecen ser importantes para la interaccin E5 y actividad de transformacin: una treonina 513 en el dominio de transmembrana es necesaria para la unin con H Gln17 residuo de la protena E5 y lisina en 499 en la regin yuxtamembrana con Asp33 en la protena E5[ 156 - 158 ]. Una caracterstica

importante de BPV-1 E5 mediada por la activacin PDGF-R es que la activacin se produce con independencia de PDGF desde E5 puede activar constitutivamente PDGF-R mutantes de delecin que carecen del dominio de unin a ligando extracelular[ 141 , 159 ]. La interaccin entre el BPV-1 E5 y PDGF-R es altamente especfica. En los niveles fisiolgicos, E5 es capaz de interactuar con PDGF-R, pero no con otros receptores de tirosina quinasa, incluyendo los receptores de insulina, receptor del factor de crecimiento bsico de los fibroblastos o de los receptores de factores de crecimiento similares a la insulina, sin embargo a niveles ms altos E5 puede interactuar con receptores adicionales[ 140 , 144 ]. E5 no puede unirse al receptor del PDGF, un receptor estrechamente relacionada a la PDGF-R, mientras que ambos de estos receptores puede ser activado por PDGF[ 140 - 144 ]. Se cree que la especificidad como para ser conferida por el dominio de transmembrana[ 159 ]. La mayora de los estudios sobre BPV E5 y activacin PDGF-R se han realizado in vitro.Borzacchiello et al (2006) han demostrado que el BPV-2 E5 interacta con y activa el PDGF-R in vivo en los cnceres de la vejiga urinaria bovina (figura3 ). Por otra parte, la unin de E5 a PDGF-R induce la activacin de distintas vas de transduccin de seales: PDGF-R y fosfoinostido 3 quinasa (PI3K) interactan fsicamente al igual que PDGF-R y el complejo de Grb2-Sos. Seales de Grb2Sos-Ras PI3K-Akt y estn potenciados en el cncer, pero, como en in vitro en modelos, los niveles de protenas Erk y Mek no se sobreexpresa significativamente[ 160 -162 ] (Figura4 ). BPV E5 es capaz de activar c-src, un receptor Tyr quinasa no, pero no el c-Fyn y PI3K estrechamente relacionado[ 163 ]. La activacin de este ltimo es necesaria pero no suficiente para inducir la transformacin celular independiente de PDGF-R sealizacin[ 163 , 164]. A diferencia de BPV-1 E5, BPV-4 E5 induce la transformacin de clulas establecidas de forma independiente de la activacin constitutiva de receptores de crecimiento tirosina quinasa (Tabla1 )[165 ]. La transformacin de clulas por BPV-4 E5 (ya sea de clulas establecidos por s mismo o de clulas primarias en cooperacin con otras oncoprotenas virales) se logra a travs de la transactivacin del promotor del gen de la ciclina A, el aumento de la expresin de la ciclina A y ciclina A-actividad quinasa asociada, y la inhibicin del regulador negativo del ciclo celular, p27Kip1[ 135 , 166 - 168 ]. Anlisis mutacional de BPV-4 E5 han demostrar que, como es el caso de BPV-1 E5, el residuo en la posicin 17 y la hidrfilo cola C-terminal son crticos para sus actividades de transformacin[ 135 ]. As, tanto la mutacin de Asp 17 y delecin del dominio C-terminal hidrfilo anulan completamente la transformacin celular y la capacidad E5 para activar la ciclina A va[ 135 ].

Figura 3. BPV E5 y PDGF-receptor de co-precipitado y co-localizar en el carcinoma de vejiga urinaria bovina . A. Co-inmunoprecipitacin del receptor de PDGF-E5 con antisuero. Lisados de tejido se inmunoprecipitaron con el anticuerpo anti E5 y la inmunotransferencia se analizaron con el anticuerpo anti-receptor de PDGF-. Los carriles 1-3 son BPV-2 muestras de cncer de vejiga urinaria bovinos positivos, T1, T2, T3. Carril 4 es BPV-2 positivo de ADN bovino normal mucosa vesical, N1. B. coimmunoprecipitation de la oncoprotena E5 con el antisuero PDGF-receptor. La flecha indica la oncoprotena E5 y su peso kDa estimado. En una transferencia de tipo paralelo, la misma cantidad de lisado fue determinada con un anticuerpo para -actina para controlar por la cantidad de protena (panel inferior) C colocalizacin (amarillo) de PDGFreceptor (rojo) y E5 (verde) en bovinos urotelio neoplsico. Las flechas blancas indican la posicin juxtanuclear de E5 y PDGFreceptor (reproducido con permiso de Borzacchiello et al., Oncogene 2006).

Figura 4. Modelo de eventos celulares durante la transformacin celular mediada por BPV-1 E5 . E5 se une al dominio transmembrana de PDGF-R e induce la dimerizacin del receptor y autofosforilacin. El receptor activado puede reclutar p85-PI3K que activa la AKT y la va de JNK. PDGFR estimulacin de una PI3K-AKTpathway conduce a una mayor expresin de la ciclina D3. Contratacin de Sos1-GRB2 complejo p-PDGFR puede activar Ras, aunque la va MAPK aguas abajo no se activa, por lo que Ras puede activar la va de la PI3-K. El complejo SHP2-p66shc unido al activada PDGF-R puede ser reclutado e inactiva p190BRhoGAP, lo que resulta en la activacin de una familia GTPasa Rho, Rho A y la formacin de focos induccin ROCA efector corriente abajo. E5 es capaz de interactuar con c-src en tarde compartimiento endosomal y trans-Golgi, lo que resulta en c-src constitutivamente activacin. E5 interacta con el extremo C-terminal de la cadena pesada de MHC I y provoca la retencin de MHC I en el aparato de Golgi, evitando de este modo su transporte a la superficie celular. E5 perturba la actividad fisiolgica de la V-ATPasa mediante la inhibicin de la correcto montaje de V-ATPasa H + y de bombeo, lo que induce alcalinizacin persistente del aparato de Golgi y endosomas vescicles.

La regulacin de la expresin de MHC

La regulacin a la baja de la superficie de MHC I y la retencin del complejo de MHC I en el GA se muestra por primera vez en clulas que expresan BPV-4 E5 [ 169 ] y luego confirmado por otras protenas E5 tanto de BPV y HPV. BPV E5 interfiere con la biosntesis de MHC I en mltiples pasos: la inhibicin de la transcripcin del gen MHC de clase I de cadena pesada, la degradacin de la cadena pesada y la interaccin fsica con cualquier cadena pesada residual[ 169 , 170 ]. Slo la interaccin fsica con la cadena pesada se comparte con 16E5[ 99 ]. Por otra parte, en el caso de BPV-4 E5 la regulacin a la baja de la superficie de MHC I es irreversible, como el interfern no puede restaurar el transporte de la I del MHC complejo a la superficie celular [ 128 ], mientras que este no es el caso de 16E5. Esto puede reflejar el hecho de que es una protena E5 "fuerte" en BPV que en VPH. En cualquier caso, el hallazgo de MHC de regulacin a la baja por E5 ha demostrado ser de gran importancia ya que define una nueva actividad biolgica compartida tanto por BPV y HPV E5 (Tabla 1 ), que permite que la clula infectada no sea reconocido efectivamente por citotxica de CTL [ 106 ].

BPV E5: otras actividades biolgicas

BPV E5 interacta con la protena de 16 kDa, un componente de la V-ATPasa [ 147 , 171 ]. En el caso de BPV-1 E5, esta asociacin protena existe como un complejo de tres componentes, que contiene tambin molculas PDGF-R. Anlisis mutacional han demostrado que el cido glutmico 143 en el dominio transmembrana de la protena de 16 kDa y la glutamina 17 en el dominio transmembrana de BPV-1 E5 son esenciales para E5-16 kDa asociacin estable [ 172 ]. La unin de la E5 con 16 kDa perturba el correcto montaje de V-ATPasa H + y de bombeo, con alcalinizacin persistente de la GA y vesculas endosomal[ 103 ] y puede dar lugar, directa o indirectamente, a una marcada prdida de la comunicacin de clula a clula a travs de la baja regulacin de las uniones comunicantes (Tabla1 )[ 101 , 173 ], haciendo que las clulas transformadas ms insensibles a las seales de control del crecimiento homeostticos de las clulas normales adyacentes. Sin embargo, en el caso de VPH-16 inhibicin de la brecha de la salida la comunicacin intercelular se ha atribuido a la interaccin de E5 con conexina 43[ 84 ]. E5 tumores que expresan bovina vejiga urinaria muestran activa calpana 3, lo que sugiere una posible implicacin de esta protena en la carcinognesis urotelial[ 174 ].

Orientacin VPH-16 E5 para el tratamiento cervical

16E5 activa muchas diferentes vas celulares implicadas principalmente en la fase temprana de la carcinognesis cervical [ 175 ]. Diferentes estudios han sealado la posibilidad de E5 objetivo para la terapia CaCx. En estudios con animales, 16E5 entregados por un vector de adenovirus reduce el crecimiento de tumores y la vacuna induce una proteccin de E5 contra los tumores a travs de CD8 + clulas T citotxicas (CTL)[ 176 ]. El mismo grupo de investigacin ha demostrado, adems, que

el eptopo estimulante era un pptido E5 (aminocidos 25-33) y la vacunacin con este pptido llevar a oligonucletidos CpG redujeron el crecimiento del tumor[ 177 ]. 16E5 modula diferentes vas celulares y la focalizacin de estas vas pertinentes puede conducir en un futuro cercano para un enfoque teraputico posible. Adems, E5 se expresa ms consistente en la etapa temprana de la infeccin viral y en las lesiones precancerosas [ 178 ], y por lo tanto E5 E5 o alterados vas podran ser objeto de curar la infeccin y prevenir las lesiones precancerosas de progresar a cncer invasivo. 16E5 interacta con muchas vas diferentes, incluyendo la regulacin al alza del factor de crecimiento de sealizacin, la induccin de la sealizacin de clulas inflamatorias, la angiognesis y Antiapoptosis (figura2 ). Adems E5 participa en la transformacin maligna, completndolo (valor aadido) las funciones de E6 y E7. Todas estas vas de sealizacin E5-inducidas (Figura2 ) o en s E5 se puede tratar por las terapias ya utilizados en contra de los otros oncogenes de HPV tales como radioinmunoterapia, adenovirus oncolticos[ 179 ], el silenciamiento gnico mediante ARN corto de interferencia (siRNA)[ 180 ] y otros, que se han utilizado originalmente para apuntar las vas E5-upregulated. EGF-R, la COX-2 o ET1 inhibidores deben ser tiles en el control de la actividad E5 en las lesiones precancerosas, as como otras molculas pequeas que interfieren con las molculas de aguas abajo. Por ltimo, E5 puede ser considerado como un viroporina, como el VP4 de SV40[ 181 ] y, por lo tanto, susceptibles de tratamiento por compuestos que afectan a estructuras similares producidos por otros virus. En efecto, los derivados de iminoazcar,-alquilo de cadena larga amilorida amantidina y nuevos compuestos parecen afectar, a diversos medida, la actividad de la protena de 16E5 in vitro (A. Macdonald, comunicacin personal, 11 Reunin de TV ADN, Trieste, Italia, 2011)

Conclusiones
Las principales actividades de E5 pueden resumirse como sigue: Aunque E6 y E7 proporcionan las actividades de transformacin primaria de HR VPH, E5 puede aumentar su funcin y contribuir a la progresin del tumor: Cuando se expresa solo, HPV E5 tiene una dbil actividad transformadora. En modelos de ratones transgnicos, la expresin 16E5 en la piel produce hiperproliferacin epitelial con la formacin espontnea de tumores, mientras que en los ratones tratados con estrgenos, la expresin de E5 por s sola puede inducir cnceres [ 182 ], lo que sugiere un papel para E5 como una verdadera oncoprotena. La presencia del VPH en tumores de cuello uterino de 16 positivos de episomas virales, adems de integrantes viral lleva a la hiptesis de que hay mltiples vas para acceder a la gnesis tumoral inducida por HPV ver arriba. Al lado de la hiptesis bsica de alto nivel de expresin de E6 y E7 consiguiente al de la supresin de los efectos represivos de E2 debido a la prdida del gen E2 durante la integracin, otra va puede estar activo en las clulas que todava mantienen episomas virales, en la que E5 aumentara la actividad de E6 y E7. La expresin de E5 se incrementa en la diferenciacin para promover la proliferacin de clulas diferenciadas y la replicacin viral productiva. La localizacin de VPH E5 al retculo endoplasmtico sugiere su actividad puede estar relacionada con el trfico de protenas de la membrana citoplsmica a travs de este compartimento celular, en particular, de los receptores de factores de crecimiento y de molculas implicadas en el control inmunolgico. Hay mltiples objetivos de unin intracelulares documentados para 16E5, tales como el miembro de la familia del receptor de EGF ErbB4 [ 77 ], la subunidad de 16 kDa de la vacuolar H + -ATPasa[39 , 55 ], la cadena pesada de tipo I HLA[ 104 ], calnexina[ 51 ], el transportador de zinc ZnT-1, la EVER1 y EVER2 protenas transmembrana canal-como [ 115 , 117 ], el miembro de la familia del receptor de la importacin nuclear KN3[ 45 ], Bap31 y A4[ 44 , 52 ] (Figura2 ). Sin embargo, el papel de 16E5 en la carcinognesis parece estar limitada a las primeras etapas de la carcinognesis cervical debido a que el gen E5 se elimina con frecuencia cuando el genoma del VPH se integra durante la progresin maligna [ 28 , 68 , 183 ]. Sin embargo, la expresin de 16E5 detectada por inmunohistoqumica, se inform en aproximadamente el 80, 90 y 60% de VPH 16-LSIL infectados, SIL de alto grado y carcinomas de cuello uterino, respectivamente[ 28 ]. Adems los datos de un nmero limitado de pacientes se presentaron en la 1 Taller Internacional sobre E5 Oncogene[ 184 ] lo que sugiere que la expresin E5 puede conducir a una peor respuesta al tratamiento con taxanos (Venuti, datos no publicados). Por lo tanto, la orientacin E5 que se expresa con frecuencia en las primeras etapas de la transformacin maligna puede ser un enfoque racional para la prevencin de lesiones premalignas progrese a cncer cervical invasivo[ 175 ]. El reciente xito en la erradicacin de los tumores inducidos por HPV en ratones por los anti-E5 vacunacin [ 176 ] indica que E5 se puede utilizar en inmunoterapia. La neutralizacin de E5 o de E5 inducidas por vas de sealizacin, por lo tanto, si inmunolgica o qumica, podra ser ventajoso en particular en infecciones por HPV y lesiones pre-cancerosas, donde no hay tratamientos disponibles.

Lista de abreviaturas utilizadas

HR: Alto Riesgo; PV: Virus del Papiloma; 16E5: VPH-16 E5; CxCa: cncer de cuello uterino, prueba de PAP: Prueba de Papanicolau, E: protenas tempranas; L: protenas estructurales finales; ORF: marco de lectura abierto; LSIL: bajo lesiones intraepiteliales escamosas de grado, CIN: neoplasia intraepitelial cervical; GA: aparato de Golgi, ER: retculo endoplasmtico; KN3: karyopherin 3; MHC I: mayor de histocompatibilidad clase I; MHC II: complejo mayor de histocompatibilidad de clase II, HLA: antgenos leucocitarios humanos; CTL: linfocitos T citotxicos, EGF-R: receptor del factor de crecimiento epidrmico; NK: natural killer; MAPK: la protena quinasa activada por mitgenos; PKC: protena quinasa C, ET A : receptor de endotelina, ET-1: la endotelina-1; CKI: inhibidores de la protena quinasa dependientes de ciclina; TRAIL: factor de necrosis tumoral relacionada con el ligando inductor de apoptosis; DISCO: induce a la muerte de sealizacin Complejo; FasL: miembro de factor de necrosis tumoral ligando superfamilia; COX-2: la ciclooxigenasa 2; PGE 2 : receptor de prostaglandina E2; XBP-1: X-protena de unin a caja 1; IRE: serina / treonina-protena quinasa / endorribonucleasa IRE1; IFN: interfern; CREB: AMP cclico elemento de respuesta de unin a protenas; PDGF-R: de crecimiento derivado de plaquetas receptor del factor de subunidad receptor; PI3K: phosphoinositide3 quinasa; V-ATPasa: vacuolar H +-ATPasa.

Conflicto de intereses
Los autores declaran que no tienen intereses en conflicto.

Autores de las contribuciones

Todos los autores han contribuido igualmente al papel. Todos los autores ledo y aprobado el manuscrito final.

Agradecimientos
MSC agradece Cancer Research del Reino Unido por su apoyo continuo a lo largo de su carrera.Este trabajo fue apoyado por el subsidio PRIN - Ministero dell'Istruzione, Universit e Ricerca Scientifica (MIUR) nmero de protocolo 2008LTY389. AV y FP gracias Lega Italiana Lotta Tumori (LILT) para apoyar sus investigaciones.

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