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Aspectos básicos del proceso analítico

Definiciones (que debemos saber)

Definiciones (que debemos saber) Parte representativa del material a analizar (agua, alimento, materias primas,

Parte representativa del material a analizar (agua, alimento, materias primas, efluentes, etc)

Analito: Especie química a determinar en el análisis.

Matriz: Entorno que contiene al analito.

Interferencia(s):

Método analítico:

Especies presentes en la matriz que causan resultados erróneos en la determinación del analito.

Secuencia fija de acciones que se llevan a cabo en un procedimiento analítico.

Ejemplo: determinación de Ca en leche

Composición de la leche (incompleta)

Matríz

leche Extracto seco total Agua (87%) (13%) Grasa (3,9%) Extracto seco no graso Minerales Hidratos
leche
Extracto seco total
Agua (87%)
(13%)
Grasa (3,9%)
Extracto
seco no graso
Minerales
Hidratos de
carbono (lactosa)
Proteínas
(0.7%)
(3.2%)
(4,6%)
Na
K
Ca
Caseínas
Proteínas del suero
P
fe
(2.6%)
(0.6%)

Analito

EL PROCESO ANALÍTICO

Definir el problema
Definir el problema
Elegir el método analítico
Elegir el método analítico
Toma y preparación de la muestra
Toma y preparación de la muestra
Recoger una muestra representativa
Recoger una muestra representativa
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Eliminar las interferencias
Eliminar las interferencias
Proceso de medida
Proceso de medida
Puesta a punto de la metodológica analítica
Puesta a punto de la metodológica analítica
Medición de las muestras
Medición de las muestras
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento estadístico de datos
Tratamiento estadístico de datos

Análisis estadístico – respuestas numéricas con límite de error

Definir el problema analítico

• 1. ¿Cual es el analito a determinar?

• 2. ¿Qué exactitud y precisión se requieren?

• 3. ¿De que metodologías analíticas se dispone para su determinación?

• 4. ¿Cuál es la muestra en que se encuentra el analito? ¿De cuanta muestra se dispone? ¿Cuál es el intervalo de concentraciones en que puede encontrarse del analito en la muestra? ¿Qué componentes de la muestra interferirán en la determinación? ¿Cuáles son las propiedades físicas y químicas de la matriz de la muestra?

• 6. ¿Cuántas muestras deben analizarse?

También debe considerarse:

muestras deben analizarse? También debe considerarse: •Costo y disponibilidad de equipos •Costo por muestra

•Costo y disponibilidad de equipos •Costo por muestra •Tiempo requerido para el análisis •Complejidad del método •Habilidad del operador

Selección metodológica analítica

Existen diversas formas de medir o cuantificar:

Métodos Químicos:

volumétricos, gravimétricos…

Métodos Instrumentales:

espectroscópicos, electroquímicos…

En un método (técnica) instrumental se mide una señal S:

S µµµµ C analito

Todos los métodos ofrecen características diferenciadas,

la

sensibilidad y selectividad requeridas en el problema de análisis.

por

lo

que

es

preciso

su

selección

en

función

de

Métodos Analíticos

Métodos químicos por vía húmeda Métodos instrumentales
Métodos químicos
por vía húmeda
Métodos instrumentales
químicos por vía húmeda Métodos instrumentales Análisis volumétrico Titulación Electroquímicos
químicos por vía húmeda Métodos instrumentales Análisis volumétrico Titulación Electroquímicos
Análisis volumétrico
Análisis
volumétrico
húmeda Métodos instrumentales Análisis volumétrico Titulación Electroquímicos Separación Electrólisis

Titulación

Electroquímicos
Electroquímicos
Análisis volumétrico Titulación Electroquímicos Separación Electrólisis Cromatografía Gravimetría
Separación

Separación

Separación
Separación
Separación
Separación

Electrólisis

Cromatografía

Gravimetría

Separación Electrólisis Cromatografía Gravimetría Opticos Emisión Precipitación Pesada conductimetría
Opticos
Opticos
Separación Electrólisis Cromatografía Gravimetría Opticos Emisión Precipitación Pesada conductimetría Absorción

Emisión

Precipitación

Pesada

conductimetría

Absorción

Método Estándar:

Expresa un procedimiento de análisis que incluye los pasos secuenciales (etapas) y técnicas a utilizar en el análisis de muestras específicas y que viene recogido por la normativa de organismos y agencias nacionales e internacionales, competentes en el tema. (Puede haber más de un método estándar aplicable para un mismo analito)

Si es de cumplimiento obligado, recibe el nombre de protocolo.

Ejemplos: técnicas AOAC (Association Official Analytical Chemistry) normas FIL (Federation International de Laiterie)

Cualquier diseño de métodos alternativos, requiere una validación comparativa de los resultados obtenidos en el nuevo método con el de otros métodos estándar. Por lo general se requieren muestras estándar (composición fija, conocida y estable) (Material de referencia certificado)

EL PROCESO ANALÍTICO

Definir el problema
Definir el problema
Elegir el método analítico
Elegir el método analítico
Toma y preparación de la muestra
Toma y preparación de la muestra
Recoger una muestra representativa
Recoger una muestra representativa
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Eliminar las interferencias
Eliminar las interferencias
Proceso de medida
Proceso de medida
Puesta a punto de la metodológica analítica
Puesta a punto de la metodológica analítica
Medición de las muestras
Medición de las muestras
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento estadístico de datos
Tratamiento estadístico de datos

Análisis estadístico – respuestas numéricas con límite de error

Muestreo

Toma de muestra

Objetivo:

Selección de una o varias porciones o alícuotas del material a ensayar, como primera parte de un procedimiento analítico. Por lo tanto, el método de muestreo y la preparación de la muestra están intimamente relacionados con el procedimiento analítico a realizar.

La estrategia se basa en el balance entre el número de muestras a analizar y los costos que esto implica, es decir: se debe compatibilizar el máximo nivel de exactitud y precisión deseadas, minimizando el número de muestras a tomar .

Definimos como Plan de Muestreo a la estrategia a seguir para garantizar que los resultados obtenidos reflejen la realidad del material analizado.

Debe distinguirse entre dos tipos de materiales: • En "pilas" con contenidos sin subdivisiones o
Debe
distinguirse
entre
dos
tipos
de
materiales:
En
"pilas"
con
contenidos
sin
subdivisiones
o
unidades.
En
“lotes”
que
pueden
ser
especificados
como
unidades
de
muestreo.
sin subdivisiones o unidades. • En “lotes” que pueden ser especificados como unidades de muestreo.

Muestreo

• Una muestra adecuada debe ser representativa del material a analizar.

• Además

la

muestra

a

analizar

debe

ser

homogénea,

lo

que

significa

que

debe

ser

igual en todas sus partes.

• En la medida que esto se logra el error de muestreo se reduce.

• Muchas

veces

el

muestreo

es

el

factor

limitante en la precisión y

en

resultados obtenidos.

los

la

exactitud

de

Muestra
Muestra

REPRESENTATIVA

HOMOGÉNEA
HOMOGÉNEA

Heterogeneidad

• La problemática principal del muestreo se origina en la heterogeneidad del material a analizar.

• La heterogeneidad siempre existe y podemos considerarla como espacial, temporal o ambas.

HeterogeneidadHeterogeneidad Espacial Temporal Espacial/Temporal
HeterogeneidadHeterogeneidad
Espacial
Temporal
Espacial/Temporal

Heterogeneidad

Espacial:

en

extención, profundidad, etc.

Ej: una lámina de acero, una pila de un mineral extraído de una mina o un contenedor colmado de cereales.

significa

que

el

material

es

diferente

Temporal:

el material presenta cambios a lo largo del

tiempo. Pueden ser continuos o discontinuos.

Ej: el incremento de una especie en particular en un reactor industrial o cambios accidentales que se producen en el tiempo, son ejemplos de cambios continuos. Tabletas farmacéuticas en una cinta de producción/embalaje es un ejemplo de cambios discontinuos.

Espacial/Temporal:

varía

simultáneamente en espacio y tiempo.

Ej: un río cambia desde su nacimiento hasta su desembocadura y además en las distintas épocas del año.

es

cuando

el

material

Al Azar Regular Intuitivo Estadístico Dirigido De protocolo
Al Azar
Regular
Intuitivo
Estadístico
Dirigido
De protocolo

Tipos de muestreo

Estratificado
Estratificado

Tipos de muestreo

Al azar: consiste en un procedimiento de muestreo para el análisis de materiales que se presentan como unidades uniformes, por ejemplo tabletas, botellas de agua mineral, etc. Las unidades para el análisis son escogidas totalmente al azar.

Muestreo regular: se eligen al azar un número determinado de unidades a analizar del total, donde cada una tiene la misma probabilidad de ser elegida.

Muestreo estratificado: se eligen dentro de las unidades de muestreo, estratos o subdivisiones del total y se toman aleatoriamente las unidades a analizar.

Intuitivo: se selecciona por decisión personal la porción del material a analizar, por ejemplo: debido a un cambio textural o cromático de la sustancia a analizar, o cuando se observa alguna alteración puntual en un proceso productivo, etc.

Estadístico: la selección se basa en reglas estadísticas. Se calcula el número mínimo de muestras suponiendo distribución gaussiana de la composición del material.

Dirigido: el problema analítico exige un tipo específico de información, por ejemplo el análisis de trazas de metales en las partículas en suspensión en un agua natural.

De protocolo: cuando se debe seguir un procedimiento de muestreo detallado en una norma, método estándar, publicación oficial, etc.

Tipos de muestras

Muestras aleatorias: Son aquellas que resultan de un muestreo regular al azar.

Muestras representativas: Son aquellas que resultan de un plan de muestreo estadístico.

Muestras selectivas: Son aquellas que resultan de un muestreo dirigido.

Muestra estratificadas: Son aquellas que resultan del muestreo al azar estratificado

Toma de muestra de materiales que se encuentran en gran cantidad:

La masa a muestrear depende críticamente del tamaño de las partículas, la heterogeneidad y el nivel de precisión exigido.

On-line: Se debe realizar a intervalos regulares y con un método fijo. Se analiza cada una por separado y se calcula el valor promedio.

Pila cónica: Se utiliza el método de conificación y división en cuartos.

Se toma la muestra de cada cuarto de la pila, norte, sur, este y oeste, se trituran y se forma con ella una pila cónica mas pequeña, se aplana y se divide en cuartos iguales, se eligen al azar dos cuartos opuestos y se mezclan, trituran y se forma otra pila. Se repite el procedimiento hasta obtener el tamaño de muestra necesario para las réplicas del análisis de laboratorio.

Cuando el material es sólido, se somete a tratamientos de trituración

pulverización

mezclados.

y

completamente

y/o

molienda

hasta

llegar

a

obtener

polvos

Es importante que contengan un gran número de partículas para minimizar la variación del contenido de las muestras individuales, de esta manera la muestra es más representativa del material original.

del contenido de las muestras individuales, de esta manera la muestra es más representativa del material
del contenido de las muestras individuales, de esta manera la muestra es más representativa del material

Cuantas muestras son necesarias?

• Si se supone una distribución gaussiana respecto de la composición del material analizado, puede caracterizarse por una desviación estándar de muestreo σm que define la dispersión. Estos errores pueden sumarse a otros errores en el proceso del análisis de la muestra.

• La varianza total (σt 2 ) de la determinación analítica será la suma de las varianzas aportadas por el muestreo (σm 2 ) y aquellas debidas al procedimiento analítico (σa 2 )

σt 2 = σm 2 + σa 2

• El peso estadistico de la varianza debida al muestreo en la varianza total puede llegar a ser muy notable (suele ser 5 a 10 veces mayor que las demás varianzas) demuestrando la trascendencia de esta etapa y la necesidad de su optimización.

Cuántas muestras son necesarias?

• El cálculo del límite de confianza (LC) relaciona la desviación estandar de un resultadoúnico (σ; error aleatorio promedio de cada experimento), con la desviación estándar del valor medio (σ N ; error de la media) y la relación entre ellas:

LC

ara

p

:

µ

=

X

± 1 96

,

     N 
N

N

Cuando no se conoce σ entonces

LC para : µ=

 t.s     N 
t.s
N

X ±

=

N
N

ara LC del: 95% =1 96

p

.

con t=1,96 para N=

• Necesito encontrar N para que según la s del método , el LC sea alguna fracción del como error máximo permisible que llamaremos R.

X

Cuántas muestras son necesarias?

t . s

N
N

= R X

.

N =

t

2

2

. s

R

2

. X

2

Como el valor de t depende de N es necesario iterar comenzando por N=∞ para LC:95% y t= 1.96

En el caso de tener materiales en forma de partículas de dos clases diferentes, según la teoría de la probabilidad podemos hallar la probabilidad que una muestra tomada al azar tenga la misma composición que la muestra total. En este caso la varianza de muestreo se conoce por la distribución binomial como :

σ m

=

n.p.q
n.p.q

Donde n es el número de partìculas que se toman al azar, p y q son las probabilidades de cada tipo de partículas respectivamente. Así conociendo el tamaño de las partículas y la densidad de las mismas se puede calcular como número de partículas o como masa la cantidad necesaria para que el muestreo sea representativo.

Algunos ejemplos de toma de muestra para análisis medioambientales:

•A. Muestras Gaseosas:

Un muestreador de partículas en suspensión y gases inorgánicos en aire, consta de un tubo que se conecta a una bomba de succión, por él pasa un determinado volúmen de aire que se controla mediante el caudal del sistema y la bomba.

Las partículas quedan retenidas en el filtro de teflón. Los gases como el SO

retenidos por el lecho de carbón impregnado de un reactivo que lo transforma en SO 4 2- que queda absorbido en el soporte activo.

B.Muestras Líquidas:

Se utilizan módulos automáticos para tomar muestras de agua de lagos, ríos o mares a diferentes profundidades y tiempos según el plan de muestreo. Consta de una sonda de longitud variable por donde se aspira la muestra, una bomba de succión, un distribuidor automático de las muestras, un automuestreador de 20 a 100 contenedores y un microprocesador de control del proceso. La única precaución es emplear contenedores adecuados para evitar pérdidas o ganacias de trazas indeseables durante la operación de transporte y conservación de la muestra.

•C. Muestras sólidas:

Por ejemplo en el estudio de la contaminación del suelo suele utilizarse un muestreo superficial y a distintas profundidades, o bien buscando una composición media de una zona entre la superficie y una profundidad dada. Se utilizan generalmente taladros de tornillos que se introducen verticalmente en el suelo manual o mecánicamente. Después se retiran verticalmente y en sus intersticios se encuentran las diferentes muestras del suelo para analizar.

2

son

EL PROCESO ANALÍTICO

Definir el problema
Definir el problema
Elegir el método analítico
Elegir el método analítico
Toma y preparación de la muestra
Toma y preparación de la muestra
Recoger una muestra representativa
Recoger una muestra representativa
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Eliminar las interferencias
Eliminar las interferencias
Proceso de medida
Proceso de medida
Puesta a punto de la metodológica analítica
Puesta a punto de la metodológica analítica
Medición de las muestras
Medición de las muestras
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento estadístico de datos
Tratamiento estadístico de datos

Análisis estadístico – respuestas numéricas con límite de error

Almacenamiento de muestras

La muestra puede estar sometida a los siguientes riesgos:

DESHIDRATACION

HIDRATACION

OXIDACION

EVAPORACION

CONTAMINACION

Los requisitos para un correcto almacenamiento de una muestra son:

ENVASE ADECUADO ETIQUETADO CORRECTO CONDICIONES ADECUADAS DE CONSERVACIÓN

( TEMPERATURA, HUMEDAD, EXPOSICÓN A LA LUZ)

Preparación y tratamiento de la muestra

Son escasos los problemas que se resuelven sin necesidad de tratamiento de la muestra.

Lo habitual, es que la muestra necesite algún tipo de tratamiento, con el fin de:

muestra necesite algún tipo de tratamiento, con el fin de: • Preparar la muestra en la
muestra necesite algún tipo de tratamiento, con el fin de: • Preparar la muestra en la
muestra necesite algún tipo de tratamiento, con el fin de: • Preparar la muestra en la
muestra necesite algún tipo de tratamiento, con el fin de: • Preparar la muestra en la

• Preparar la muestra en la forma, tamaño y concentración adecuada del analito(s), más conforme al método (técnica) seleccionado

Eliminar interferencias matriciales

Esto requiere que se deben tener en cuenta los cinco principios generales:

1) La preparación de la muestra debe llevarse a cabo sin la pérdida de analito(s) (máxima recuperación).

2) Se debe transformar el analito en la mejor forma química para el método de ensayo a utilizar.

3) Se debe incluir, si es necesario, la eliminación de interferencias de la matriz (mayor selectividad).

4) No se deben introducir nuevas interferencias (contaminación cruzada).

5) Debe considerar la dilución o concentración del analito, de manera que esté dentro del intervalo de concentraciones optimas del método seleccionado.

Tipos de tratamientos más frecuentes

Disolución simple con disolventes o asistida (ultrasonidos)

Digestión simple ácida, alcalina, oxidante, etc

•Disgregación

Extracción

•Vaporización

EL PROCESO ANALÍTICO

Definir el problema
Definir el problema
Elegir el método analítico
Elegir el método analítico
Toma y preparación de la muestra
Toma y preparación de la muestra
Recoger una muestra representativa
Recoger una muestra representativa
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Eliminar las interferencias
Eliminar las interferencias
Proceso de medida
Proceso de medida
Puesta a punto de la metodológica analítica
Puesta a punto de la metodológica analítica
Medición de las muestras
Medición de las muestras
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento estadístico de datos
Tratamiento estadístico de datos

Análisis estadístico – respuestas numéricas con límite de error

Proceso de medida MÉTODO ANALÍTICO

• Puesta a punto del método.

a Calibración instrumental

b Estandarización de la metodológica analítica

c Validación metodológica analítica

• Determinación analítica sobre la muestra – tratamiento de datos

• Control de calidad interno y externo.

Puesta a punto del método analítico

Calibración Instrumental

Es el proceso por el que se asegura que un sistema es apropiado para el uso que se desea darle y que se desempeña de acuerdo con las especificaciones dadas por el fabricante. Es decir, asegurarse de que el instrumento funciona correctamente.

Los distintos sistemas de calidad y/o requerimientos regulatorios requieren variados niveles y combinaciones de calificación, calibración, verificación y ensayos de adecuación del sistema.

Son ejemplos la determinación de la exactitud de la longitud de onda con filtros de oxido de holmio, o la calibración de una balanza analítica mediante el uso de pesas calibradas

Puesta a punto del método analítico

Calibración Metodológica Analítica

Consiste en determinar un factor de proporcionalidad o ecuación entre la señal (S) generada y la concentración del analito presente en una muestra patrón o estándar.

S µµµµ C analito

Los métodos de calibración más utilizados son:

1) Estándar Externo

2) Agregado de Estándar o patrón

3) Estándar Interno

1) Estándar Externo

Se construye una curva de calibración con patrones o estándares de concentración conocida. Se cuantifica la concentración del analito en la muestra por comparación de la señal obtenida con la de los estándares.

Todas las técnicas instrumentales requieren calibración

Todas las técnicas instrumentales requieren calibración C muestra S S 1 2 S ( C )

C muestra

S

S

1

2

S

(C)

analito

C2 estándar

C1 estándar

S = f (C) analito

Las Soluciones Patrón o patrones de calibración son soluciones preparadas a partir del analito a determinar. Solo sirven para realizar calibraciones ya que no se encuentran presentes los componentes de la matriz que acompañan al analito en las muestras.

2) Agregado de Patrón o Estándar

El estándar es agregado a las muestras a analizar, se relaciona la señal obtenida en muestras con patrón con aquellas a las que no fue agregado el estándar.

S

con aquellas a las que no fue agregado el estándar. S concentración Concentración de la muestra
concentración
concentración

Concentración de la muestra

Utilidad:

• Cuando la matriz de una muestra sea, o bien desconocida o tan compleja que no podría emplearse un estándar externo con suficiente garantía.

• Cuando el proceso de preparación de la muestra o la técnica de ensayo sea compleja o muy variable.

• Cuando la medida dependa de condiciones instrumentales muy precisas y difícilmente controlables

3) Estándar Interno

Se utiliza como estándar una sustancia distinta del analito y que frente al método analítico utilizado genera señales que pueden ser correlacionadas con la concentración y posteriormente referidas al analito en cuestión.

El patrón debe ser adicionado a la muestra y a la solución blanco.

Previo al empleo del método se debe demostrar que las respuestas del analito y del estándar interno están relacionadas. La mejor calibración tiene lugar cuando se relacionan según una proporción fija.

VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO

La puesta a punto de un método analítico se completa con la validación del mismo.

Validar implica demostrar experimental y formalmente que un proceso de medición química o una parte del proceso (por ej.muestreo) funciona como se espera de él y lo hace a lo largo del tiempo.

La validación tiene dos objetivos fundamentales:

1. Definir y asegurar la calidad de la información analítica generada. Una validación intrínseca que consiste en caracterizar un proceso de medición

química a través de mismo.

las propiedades o características de desempeño del

2. Garantizar la coherencia entre la información analítica generada y las necesidades informativas planteadas por la sociedad, industria, comercio, ciencia y tecnología, en un proceso denominado validación extrínseca del proceso analítico.

La validación intrínseca puede hacerse de 2 maneras generales:

• Validación por etapas. Se validan instrumento (calificación), muestreo, datos, etc.

• Validación global del proceso de medición química.

Validación intrínseca

Características de Desempeño de un Método Analítico

• Especificidad

• Exactitud

• Precisión Incertidumbre Repetitividad Reproducibilidad

• Límite de detección

• Límite de cuantificación

• Linealidad

• Rango

• Robustez

Existen procesos detallados de validación para cada caso en particular, pero lo que todos ellos tienen en común es la necesidad de referencias, porque validar implica básicamente comparar.

• Durante el proceso de validación, los estudios para determinar los parámetros de desempeño de un método deben realizarse con equipamiento debidamente calificado, es decir que cumplan con las especificaciones necesarias, que funcionen correctamente y estén correctamente calibrados.

• Los analistas deben estar entrenados y conocer adecuadamente la metodología en estudio.

• Deben utilizarse materiales de referencia bien caracterizados de pureza adecuada y debidamente documentada. Se recomienda la utilización de MRC de naturaleza similar a las muestras sobre las que se aplicará el ensayo.

• Todo el proceso de validación debe encontrarse documentado en protocolos e informes de validación.

Materiales de Referencia Certificados (CRM)

• Son muestras en las que los valores de una o más de sus propiedades están certificados, con sus incertidumbres específicas, obtenidos por procedimientos técnicamente válidos bajo la responsabilidad de un organismo competente e independiente; la certificación también implica una documentación detallada de su trazabilidad.

• En el mundo existen varios organismos reconocidos como Certificadores de materiales de referencia dentro de ellos se encuentran: NIST (NationaL Institute of Standars and Technology) de US, NRC (National Research Council de Canada, BRC (EU Standars , measurement & testing programe, Belgica).

• Su costo es demasiado elevado para permitir el uso diario y suelen ser reemplazados por Materiales de referencia secundarios con propiedades certificadas por el laboratorio usuario mediante el uso de un material de referencia certificado.

• Existen Normas Internacionales y Nacionales vinculadas a distintos aspectos acerca de los Materiales de referencia.

Características de desempeño de un método analítico

ESPECIFICIDAD – SELECTIVIDAD

Es la capacidad del método analítico para medir inequívocamente al analito en presencia de otros componentes que pueda esperarse que se encuentren presentes. Para estimarla puede recurrirse al análisis de blancos o muestras sin fortificar (placebo) y fortificadas (placebo cargado) con el analito de interés en un intervalo de concentraciones (prueba de recuperación) o analizar materiales de referencia certificados.

EXACTITUD

Grado de concordancia entre el resultado de una determinación (x ) o la media de n resultados y el valor verdadero del analito en la muestra en cuestión. Se caracteriza por el error sistemático que es una diferencia con un signo fijo; por exceso o por defecto. Puede expresarse en forma absoluta(E abs ) o relativa (Er % )

i

Características de desempeño de un método analítico

PRECISIÓN - INCERTIDUMBRE

Grado de concordancia entre un grupo de resultados obtenidos al aplicar repetitiva e independientemente el mismo método analítico a alícuotas de la misma muestra o dispersión de estos resultados entre sí y con su media. Se materializa en los errores aleatorios o indeterminados debidos al azar

Precisión de un resultado individual: diferencia entre el resultado y la media aritmética

Precisión de

un

conjunto

de resultados: se fundamenta en la

distribución normal. El desvío estándar es la distancia (izquierda o derecha) desde la media y el punto de inflexión de la campana de Gauss y la varianza es el cuadrado de la desviación estándar.

Es necesario contar con información completa de las condiciones experimentales debido a que cuanto más variadas sean estas, mayores serán las causas de variabilidad, mayor la dispersión del conjunto de resultados y menor la precisión

Características de desempeño de un método analítico

SENSIBILIDAD Límite de detección Es la concentración de analito C LD que corresponde a una señal X ld que pueda distinguirse estadísticamente de una señal blanco ( x B ) y que se concreta matemáticamente en la expresión:

X ld = x b + 3σ b Siendo x b la media de n > 30 blancos y σ b su desviación estándar. Límite de cuantificación Se define como la concentración del analito C ue ori ina una señal X ue

g puede considerarse el límite inferior del rango lineal. Su expresión matemática se basa en el estudio estadístico de blancos:

LC q

LD q

X lc = x b + 10σ b

señal

s S
s S

s

S

analitio

blanco

tiempo

S medida = S analito + S blanco

Características de desempeño de un método analítico

LINEALIDAD Capacidad del método de producir resultados que son directamente proporcionales a la concentración del analito en la muestra.

RANGO DINÁMICO LINEAL Intervalo entre las concentraciones máxima y mínima del analito para las que se ha demostrado que el método tiene niveles aceptables de precisión, exactitud y linealidad.

ROBUSTEZ Es una medida de la capacidad del método para no ser afectado por pequeños cambios deliberados en sus parámetros y provee una indicación de su confiabilidad durante su uso normal.

Características de desempeño de un método analítico

Señal(X)

XLC (10 σB)

XLD (3 σB)

XBlanco

analítico Señal(X) XLC (10 σB) XLD (3 σB) XBlanco M= ∆x ∆y RANGO DINAMICO LINEAL Ld
M= ∆x ∆y RANGO DINAMICO LINEAL Ld Lc concentración
M= ∆x
∆y
RANGO DINAMICO
LINEAL
Ld
Lc
concentración

EL PROCESO ANALÍTICO

Definir el problema
Definir el problema
Elegir el método analítico
Elegir el método analítico
Toma y preparación de la muestra
Toma y preparación de la muestra
Recoger una muestra representativa
Recoger una muestra representativa
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Preparar la muestra para que esté en forma correcta para el análisis.
Eliminar las interferencias
Eliminar las interferencias
Proceso de medida
Proceso de medida
Puesta a punto de la metodológica analítica
Puesta a punto de la metodológica analítica
Medición de las muestras
Medición de las muestras
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento de datos: Reducir los datos a una respuesta numérica
Tratamiento estadístico de datos
Tratamiento estadístico de datos

Análisis estadístico – respuestas numéricas con límite de error

Determinación analítica sobre la muestra – tratamiento de datos

La señal medida debe interpretarse de acuerdo con la relación de la misma con la concentración del analito:

S = f(C)

Los resultados numéricos siempre son objeto de un análisis estadístico, que tiene por objeto evaluar la calidad del análisis en términos de precisión y exactitud del análisis.

Formas de expresar la precisión y exactitud

Rara vez los resultados se refieren a un solo análisis de una sola toma de muestra

Lo habitual es que se analicen de 2 a 5 réplicas de la muestra, el resultado final es el promedio de los resultados hallados (media).

La precisión se estima en términos de desviación estándar absoluta o mejor relativa o en ocasiones mediante análisis de la varianza.

Los errores ( falta de exactitud) se estiman como absolutos o relativos

Los errores se clasifican en:

r e s s e c l a s i f i c a n e

* Determinados, sistemáticos

* Indeterminados, aleatorios

*Crasos, aberrantes

Causas de errores

Errores sistemáticos (determinados), presentan tres causas posibles:

 

1.

Errores instrumentales

 

2.

Errores de procedimiento

3.

Errores personales

 

Los

errores

de

procedimiento

se

estiman

analizando

muestras

estándar

Los errores indeterminados presentan fuentes de error más difícilmente evaluables debido a las variables implicadas en ellos.

Son frecuentes en la determinación de “trazas”, en las que se trabaja al límite de sensibilidad del instrumento

EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE UN LABORATORIO ANALÍTICO

La evaluación de la calidad debe realizarse de dos formas distintas e independientes mediante control de calidad interno y control de calidad externo.

Control de calidad interno

Es el conjunto de procedimientos llevados a cabo por el personal del laboratorio para controlar en forma continua la operación y los resultados de las mediciones a fin de decidir si los resultados son suficientemente confiables para ser emitidos.

Puede utilizarse un MRC o un material de referencia interno o secundario. Estos materiales deben ser en lo posible representativos de las muestras que se están ensayando en lo que respecta a composición de la matriz, el estado físico de preparación y el intervalo de concentración del analito.

Tanto los materiales de control como aquellos usados para calibraciones debieran ser trazables a materiales de referencia certificados o por lo menos a un método de referencia reconocido.

Procedimiento general:

Se somete rutinariamente la muestra control al análisis completo en condiciones de reproducibilidad y luego se evalúan estadísticamente los resultados obtenidos.

Se construyen diagramas de control que son trazos gráficos de los resultados de las pruebas con relación al tiempo o secuencia de las mediciones, se establecen límites estadísticos que pueden ser preventivos o de Peligro (±2σ) o límites de acción o rechazo (±3σ)

Diariamente, se somete una alícuota de la misma muestra del MRC o MRI al análisis y se representa en la carta de control. Existen varias reglas destinadas a interpretar diagramas de control, una de las mas conocidas son las reglas de Shewhart

Control de calidad externo

Un grupo de laboratorios participan de una ronda de análisis de un MRC o un MRI común, luego un organismo externo realiza las evaluaciones estadísticas de los resultados. De esta manera puede conocerse la exactitud de los resultados emitidos por un laboratorio respecto de los demás.

Puede realizarse con distintos fines:

• Acreditación de laboratorios

• Examinar el trabajo de los laboratorios: Proficiency Testing: doble comparación entre valores de los laboratorios participantes y con el valor certificado si es un MRC.

ACREDITACIÓN DE LABORATORIOS

Es el reconocimiento formal, por una organización independiente con bases científicas, de que un laboratorio es competente para realizar pruebas específicas. Por lo general la acreditación es específica para probar sistemas, productos, componentes o materiales, para los cuales el laboratorio afirma ser competente.

En Colombia existen instituciones gubernamentales y privadas que poseen atribuciones legales o licencias internacionales para realizar acreditaciones. El INVIMA es el organismo oficial de acreditación de laboratorios para realizar determinaciones en medicamentos, cosméticos y alimentos. El Bureau Veritas, CGS, INCONTEC, poseen la licencia a nivel Nacional para acreditación de normas ISO. A su vez organismos internacionales que realizan sus propias acreditaciones como la FDA de US.

Acreditación vs. Certificación

Certificación: Una organización de terceros (o agencia)* declara que el producto, proceso o servicio concuerda con los requerimientos especificados. (Ejemplo: ISO

9000)

Acreditación: Una organización de terceros (o agencia)* con autoridad, reconoce formalmente la competencia de esa institución para desarrollar determinada(s) tarea(s). *totalmente independiente e imparcial.

Bibliografía

Principios de garantía de calidad para laboratorios analíticos. Frederick M Garfield. Ed. Española AOAC International. 1993

Principios de Química Analítica. M Valcarcel. Ed Springer-Verlag Ibérica. Barcelona

1999.

Draft EURACHEM/CITAC Guide Quantifying Uncertainty in Analytical Measuremant. Second Edition. Eurachem workshop, Helsinsky 1999. Junio 1999.

Calidad en Laboratorios de Alimentos. Liliana Castro. Programa de metrología en Química. INTI. Congreso Internacional de Ciencia y Tecnolgía de Alimentos. Cordoba. Arg. Nov. 2004.

Análisis Instrumental. Kenneth Rubinson and Judith F Rubinson. Editorial Prentice Hall.

2001

Quality in the analytical chemistry laboratory

Analytical Chemistry by Open Learning.

Neil T Crosby, John A Day y otros. Published on behalf of ACOL (University of Greenwich). ISBN 0-471-95470-5