Revista Brasileira de Farmacognosia Brazilian Journal of Pharmacognosy 17(3): 384-387, Jul./Set.

2007

Recebido em 02/01/06. Aceito em 30/04/07

Artigo

Atividade antioxidante de tinturas vegetais, vendidas em farmcias com manipulao e indicadas para diversos tipos de doenas pela metodologia do DPPH
Amanda R. R. Vicentino, Fbio de Sousa Menezes*
Departamento de Produtos Naturais e Alimentos, Faculdade de Farmcia, Centro de Cincias da Sade, Universidade Federal do Rio de Janeiro, 21941-590, Rio de Janeiro, RJ, Brasil
RESUMO: O presente trabalho descreve a avaliao da atividade antioxidante pela metodologia do radical livre DPPH de tinturas comerciais obtidas de farmcias com manipulao indicadas para os mais variados tipos de doena que apresentam em maior ou menor grau, alguma etiologia fundamentada em excesso de radicais livres. Foi interessante notar uma sincronia entre a famlia a que a planta de determinada tintura pertence, com suas substncias qumicas e a atividade antioxidante esperada. Para os casos em que isso no ocorreu, pode-se vericar atravs de mtodos cromatogrcos que as tinturas no haviam sido preparadas de forma adequada ou se tratava de falsicaes. Unitermos: Atividade antioxidante, tinturas comercias, composio qumica, falsicaes. ABSTRACT: Antioxidant activity of plant tinctures, commonly sold in pharmacies and indicated for several types of diseases, using the DPPH methodology. This work describes the antioxidant evaluation through the DPPH free radical methodology of commercial available tinctures indicated for different diseases and purchased in commercial pharmacies. All of those diseases have always being caused by excess or accumulation of free radicals. It was noteworthy the coherence between the botany family in which the plant of each tincture is inserted as well as its chemical composition with the antioxidant activity observed. In the cases where this statement could not be shown, it was proved by chromatographic methods that the tinctures were not properly prepared or even it constituted a case of adulteration. Keywords: Antioxidant activity, commercial tinctures, chemical compositions, adulterations.

INTRODUO Exceto em microrganismos anaerbicos, em todos os sistemas biolgicos, desde os mais simples, como os procariontes at os mais especializados como os mamferos e plantas (Sorg, 2004) as espcies reativas de oxignio (ERO) so produzidas nas mitocndrias como um subproduto do metabolismo normal (Fridivitch, 1999) durante a produo de energia (Sorg, 2004). As ERO exercem aes na traduo, na transcrio gnica e na regulao da atividade da guanilato ciclase nas clulas (Zheng; Storz, 2000). Os exemplos de ERO mais comuns so os radicais superxido (O2-), hidroxila (OH.), peroxila (RO2), alkoxila (RO) e hidroperoxila (HO2). O xido ntrico (NO) e o dixido de nitrognio (NO2) so espcies reativas de nitrognio (Souza et al., 2007). Outras molculas como o perxido de hidrognio (H2O2) e o peroxinitrato (ONOO) no so radicais livres, mas podem conduzir formao deles atravs de reaes qumicas (Evans; Halliwell, 2001). O estresse oxidativo (EO) corresponde a um desequilbrio entre a taxa de produo de agentes 384
* E-mail: desouzaf@tcd.ie, Tel. +35318962851, Fax +35318962810

oxidantes e sua degradao (Sies, 1991). Ocorre quando a produo de ERO est acelerada ou quando os mecanismos envolvidos na proteo contra as ERO encontram-se deteriorados (Giasson et al., 2002). Predisposio gentica, fatores ambientais como radiao UV e propriedades intrnsecas especcas de grupos celulares podem exacerbar o dano oxidativo ou diminuir a capacidade das clulas de degradar estes agentes agressores (Giasson et al., 2002). A peroxidao lipdica a principal conseqncia do estresse oxidativo resultando na danicao das membranas causada pela oxidao acarretando em aumento da uidez da membrana, comprometimento da sua integridade e inativao da interao entre membrana/receptor e membrana/enzima (Halliwell; Gutterridge, 1986). Acredita-se que as doenas degenerativas crnicas como doena de Alzheimer, doena de Parkinson, aterosclerose, complicaes da Diabetes mellitus, o envelhecimento precoce e outras estejam relacionadas com o estresse oxidativo (Sorg, 2004). Os antioxidantes so um grupo de substncias que, quando presentes em concentraes ideais em
ISSN 0102-695X

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relao aos substratos oxidveis, inibem ou atrasam signicativamente os processos oxidativos podendo ser divididos em enzimticos, solveis, nutricionais e seqestradores de metais de transio (Vaya; Aviram, 2001). Esse trabalho prope dosar a atividade antioxidante pela metodologia do radical livre estvel DPPH, das tinturas-mes comercializadas por farmcias de manipulao e farmcias homeopticas com o intuito de vericar se as mesmas possuem alguma atividade antioxidante, o que poderia caracterizar um dos mecanismos de ao que explicariam as suas diferentes utilizaes, uma vez que se sabe que cerca de 95% das doenas degenerativas crnicas so induzidas por estresse oxidativo e muitas dessas tinturas seriam utilizadas diretamente para combater essas doenas ou indiretamente como preventivo das mesmas. MATERIAL E MTODOS Material vegetal As tinturas-mes de Camomila (Matricaria chamomilla L.), Castanha-da-ndia (Aesculus hippocastanum L.), Centela asitica (Hydrocotile asiatica L.), Erva cidreira (Melissa ofcinalis L.), Ginkgo (Ginkgo biloba L.), Goiabeira (Psidium guajava L.), Guaco (Mikania glomerata), Hamamelis (Hamamelis virginiana L.), Jaborandi (Pilocarpus jaborandi Hulmes), Mulungu (Erythrina velutina Wild), Passiora (Passiora coerulea L.), Pimento (Capsicum annuum L.), Poejo (Mentha pulegium L.) e Valeriana (Valeriana ofcinallis L.), alm de Prpolis foram adquiridas de uma farmcia homeoptica e evaporadas sob presso reduzida temperatura inferior a 50C a m de se obter o material seco para cada espcie. Dosagem da atividade antioxidante A dosagem de atividade antioxidante foi realizada pelo mtodo fotocolorimtrico in vitro do radical livre estvel DPPH (2,2-difenil-1-picrilidrazila) obtido da SIGMA. Nesse mtodo preparada uma soluo 0,3 mM de DPPH em etanol. As amostras so preparadas adicionando-se 1mL desta soluo de DPPH a 2,5 mL de solues dos extratos diludos em etanol a concentraes de 5, 10, 25, 50, 125 e 250 g/mL. Nos brancos, ao invs do DPPH, adiciona-se apenas 1 mL de etanol aos extratos diludos nas mesmas concentraes das amostras. O controle negativo preparado apenas com 1 mL de DPPH e 2,5 mL de etanol. Como controle positivo foi utilizado o extrato padronizado de Ginkgo biloba, EGb 761, que possui alta capacidade antioxidante. A soluo de DPPH possui uma colorao roxa intensa e a ao antioxidante de um extrato pode ser visualizada pelo progressivo descoloramento da

soluo, ao nal do qual a mesma torna-se amarelada. Trinta minutos aps a adio de DPPH s amostras, feita a leitura em um espectrofotmetro de Ultravioleta UV-vis Shimadzu UV 1601 em 518nm. Todas as leituras foram realizadas em triplicata e, com a mdia dos dados obtidos foi calculada a diferena de absorbncia entre a amostra e o branco e as atividades antioxidantes percentuais foram obtidas por regresso linear, logartmica ou exponencial para cada extrato, chegandose assim concentrao necessria para se obter 50% do efeito antioxidante mximo estimado de 100% (CE50) (Mensor et al., 2001). RESULTADOS E DISCUSSO A anlise dos resultados desse trabalho considera como valor de referncia a CE50 do Ginkgo biloba (38,91 g/mL) para comparar a atividade antioxidante das outras espcies estudadas. Foi escolhida a planta G. biloba como parmetro porque ela uma das plantas consideradas com alta atividade antioxidante (Mensor et al., 2001). A partir dos resultados apresentados na Tabela 1 pode-se observar que a tintura de Hamamelis virginiana quando comparada com a da G. biloba possui uma CE50 igual a 0,13 g/mL, isso indica que esta planta possui uma atividade antioxidante (AAO) cerca de 300 vezes maior que a apresentada pelo padro G. biloba. Esse fato se deve provavelmente ao alto teor de taninos presentes nessa espcie, com variados tipos estruturais (Pereira da Silva et al., 2000). As tinturas de Psidium guajava e de G. biloba apresentam praticamente a mesma CE50 com o mesmo potencial de AAO. Isso pode ser explicado devido s altas concentraes de taninos presentes na P. guajava que pertencente famlia Myrtaceae, provavelmente com diferenas estruturais em relao aos taninos presentes na tintura de Hamamelis virginiana (Rahmat et al., 2004). A tintura de prpolis tambm apresentou uma AAO bem prxima da tintura de G. biloba. Isso se deve ao fato de que a prpolis, material resinoso elaborado pelas abelhas a partir de brotos, cascas e outras partes do tecido vegetal de rvores e plantas, de um modo geral, constituda principalmente por avonides, cidos aromticos e seus derivados (Russo et al., 2004; Sousa et al., 2007). A tintura de Matricaria chamomilla apresentou uma CE50 igual a 78,22 g/mL representando tambm uma boa AAO apesar de ser duas vezes menos potente que a tintura de G. biloba. A Camomila pertence famlia Asteraceae e nela esto presentes substncias como lactonas sesquiterpnicas, avonides e alguns taninos que contribuem para o carter antioxidante observado (Avallone et al., 2000). A tintura de Hydrocotile asiatica apresentou uma CE50 igual a 87,61 g/mL sendo aproximadamente,
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sua AAO duas vezes menor que a tintura de G. biloba. Essa AAO observada se deve a presena de avonides em sua constituio (Jaswir, 2004). As tinturas de Mentha pullegium e Aesculus hippocastanum apresentaram respectivamente uma CE50 igual a 155,04 e 165,0 g/mL demonstrando ainda alguma AAO apesar de serem aproximadamente quatro vezes menor que a apresentada pela tintura de G. biloba. Isso se deve a baixa concentrao de avonides na composio qumica de M. pullegium (Mensor et al., 2001). No caso da tintura de A. hippocastanum, esse valor no foi satisfatrio quando se sabe que a constituio qumica da planta de taninos catquicos, heterosdeos cumarnicos e derivados avnicos, sugerindo que o mtodo fotocolorimtrico do DPPH nesse caso no pode ser ecaz porque depende da estrutura conformacional da substncia para doar hidrognio molcula de DPPH e talvez as substncias da Castanha-da-ndia no tenham boa conformao capaz de estabilizar o radical (Nishizawa et al., 2005; Martins; Brando, 2006). A tintura de Erythrina velutina j demonstra baixa AAO quando comparado com a tintura de G. biloba, cerca de cinco vezes. A tintura de Passiora apresentou uma CE50 igual a 245,84 g/mL o que representa uma AAO seis vezes menor que a tintura de G. biloba. A tintura de Pilocarpus jaborandi demonstrou AAO cerca de onze vezes menor que a da G. biloba. A tintura de Melissa ofcinallis apresentou AAO baixa. Sua CE50 igual a 463,29 g/mL e isso indica que a tintura de G. biloba aproximadamente doze vezes mais

potente que a tintura de Melissa. A tintura de Capsicum annum apresentou cerca de vinte e trs vezes menos atividade antioxidante que a tintura de G. biloba, ou seja, praticamente nenhuma AAO nesse modelo assim como a tintura de Mikania glomerata que apresentou AAO cerca de trinta e trs vezes menor que a da G. biloba. Essas espcies apresentam baixa ou nenhuma concentrao de substncias com potencial antioxidante (Mensor et al., 2001; (Taleb-Contini et al., 2006) A realizao de procedimentos cromatogrcos indicou que as tinturas dessas espcies foram preparadas de forma no adequada. CONCLUSO Nesse trabalho, as tinturas de Hamamelis virginiana, Psidium guajava, Prpolis, Matricaria chamomilla e Hydrocotile asiatica apresentaram alta atividade antioxidante pelo mtodo fotocolorimtrico do DPPH. As demais tinturas que no apresentaram boa atividade antioxidante por esse mtodo devero sofrer outros testes para avaliar suas atividades antioxidantes tais como testes bioqumicos como o de peroxidao lipdica, o de captura de radical anin superxido, o de danos desoxirribose dentre outros para comprovar as atividades antioxidantes. Alm disso, cou comprovado por mtodos cromatogrcos que algumas tinturas foram preparadas de forma inadequada ou se tratava realmente de falsicaes, pois no foi observada a presena de substncias caractersticas da planta, como por exemplo,

Tabela 1. Atividade antioxidante (%)* das espcies vegetais e prpolis testadas pela metodologia do radical livre estvel DPPH e determinao da CE50.
Espcies Estudadas Controle H. virginiana P. guajava Prpolis M. chamomilla H. asiatica M. pullegium A. hippocastanum E. velutina P. coerula V. officinalis P. jaborandi M. officinalis C. annum M. glomerata
*

5g/mL 4,571,51 60,691,79 0,520,85 3,271,17 22,761,60 0,454,05 0,013,85 2,720,24 0,173,44 3,431,30 0,231,02 1,900,71 0,390,98 0,410,82 5,921,36

10g/mL 10,033,25 84,630,22 14,285,07 8,600,66 25,951,79 1,254,87 0,681,43 3,660,94 4,321,07 5,891,09 1,550,72 1,920,21 0,512,04, 0,520,83 6,771,16

25g/mL 28,141,37 85,880,34 46,262,89 21,021,47 34,931,50 8,243,91 6,562,50 8,670,95 7,710,68 8,221,94 4,940,90 6,931,33 1,237,68 3,180,81 6,590,68

50g/mL 57,020,55 88,360,07 82,990,52 39,551,53 45,100,63 24,092,76 11,431,11 16,830,74 15,321,72 12,061,41 9,352,15 8,330,42 5,731,62 4,401,81 8,711,41

125g/mL 90,070,82 91,690,63 92,20,62 74,511,48 77,521,86 62,922,04 29,520,42 39,491,91 35,180,88 26,021,69 24,861,50 16,921,10 13,741,29 8,531,58 11,061,63

250g/mL 95,230,43 94,070,36 97,350,41 90,760,07 92,490,51 82,992,43 88,317,03 73,821,84 57,571,72 51,263,82 42,742,19 29,711,14 25,860,30 13,572,17 14,371,59

CE50** 38,91 0,13 33,57 40,16 78,22 87,61 155,04 165,80 207,15 245,84 283,63 429,30 463,29 906,08 1283,88

Controle positivo: extrato padronizado de Ginkgo biloba (EGb 761) nas mesmas concentraes que os extratos. % de atividade antioxidante para cada uma das concentraes aps a mdia de trs anlises e aplicao da seguinte frmula: % Atividade Antioxidante (%AA) = 100 (ABS x 100)/ABScont onde: ABS a diferena de absorbncia entre a amostra e o branco e ABScont o valor de absorbncia encontrado para o controle ** Concentrao efetiva 50% calculada atravs de regresso linear, logartmica ou exponencial do grco obtido com os valores encontrados de %AA para cada concentrao. 386
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a capsaicina no caso da tintura de Capsicum. Esse estudo colabora, portanto, para o conhecimento da atividade antioxidante pelo mtodo do DPPH de algumas espcies vegetais que de forma popular no Brasil so muito utilizadas no tratamento de diversas doenas com etiologia em distrbios oxidativos, sem nenhuma comprovao cientca. REFERNCIAS Avallone R, Zanoli P, Puia G, Kleinschnitz M, Schereier P, Baraldi M 2000. Pharmacological prole of apigenin, a avonoid isolates from Matricaria
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