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A cincia que estuda as clulas esfoliadas, natural ou artificialmente denominada Citologia. Este estudo pode ser utilizado como mtodo para avaliarmos a normalidade ou o estado patolgico de um rgo ou tecido (Citopatologia). A citopatologia abrange os exames de citologia oncologica (oncotica ou papanicolaou) e citologia hormonal (endcrina ou funcional) Em 1943, Dr. George Nicholas Papanicolaou e outros colaboradores publicaram nos Estados Unidos, um trabalho cientfico, onde observaram a presena de clulas cancerosas ou malignas em esfregaos obtidos de amostras do colo uterino com tumores malignos, sendo que algumas destas pacientes no apresentavam qualquer suspeita clnica. Desta forma o exame ou teste foi consagrado com um instrumento adequado na deteco e preveno do cncer. Objetivos da citologia oncologica: Triagem (screening) populacional (negativo, suspeito, positivo para clulas neoplasicas malignas), Objetivos de diagnostico, Objetivos de monitoramento terapeuticos (radio e quimioterapia, cauterizao) Objetivos da citologia hormonal: Avaliao indireta qualitativa e semi-quantitativa da funo ovariana e/ou dos hormnios esterides atravs de ndices citolgicos que so obtidos de um estudo citomorfolgico de clulas epiteliais descamadas de epitlios hormonio-dependentes. A citologia oncologica ou exame de preveno ou papanicolaou ou exame citolgico ou colpocitologico pode ser realizada em qualquer tipo de material biolgico que contenha clulas epiteliais descamadas de forma natural (derrames) ou artificial (esfoliao, lavado, escovado e puno) de um tecido e com a sua morfologia conservada (fixada).

I - TIPOS DE AMOSTRA OU DE MATERIAIS BIOLGICOS PARA O EXAME DE CITOLOGIA ONCOLGICA

1) Esfoliao de tecidos cervico-vaginais - Material da Vagina e/ou Colo uterino (ectocervix e endocervix) 2) Esfoliao de tecido das mamas (Secreo Mamria ou Puno de Ndulos) 3) Esfoliao de tecidos do trato urinrio (Urina ou Lavado Vesical) 4) Derrames cavitrios (Liquido Pleural, Asctico e Sinovial). 5) Esfoliao, Lavado e Escovado de tecidos do trato respiratrio (Escarro, Lavado e/ou Escovado Brnquico). 6) Lavado e escovado de tecidos do trato digestivo (Suco gstrico, Lavado ou escovado gstrico, esofgico e colonico). 7) Liquor 8)Puno de Tireide 9) Puno de Cistos

II - IMPORTNCIA DOS DADOS CLNICOS

DADO CLINICO
IDADE D.U.M. /MENOPAUSA/ GESTAO/LACTAO (MARCAR O PERODO) CIRURGIAS GINECOLGICAS (HISTERECTOMIA TOTAL OU PARCIAL) USO DE MEDICAO HORMONAL E/OU TERAPIA DE REPOSIO HORMONAL (TRH) DATA DO ULTIMO EXAME DE C.O.

IMPORTNCIA PARA O EXAME DE CITOLOGIA ONCOLOGICA

Demonstra os graus de risco de uma paciente com relao a infeces e cncer e o possvel perfil hormonal (reprodutivo ou menopausa) Demonstra o perfil hormonal da paciente e sua relao com os tipos celulares a serem visualizados no exame Demonstra possveis cirurgias pr tumores malignos ou benignos e controle de tratamento, tipos celulares que podero estar ausentes e ajuda muito durante a coleta do material. Demonstra possveis alteraes nos tipos celulares com relao condio clinica da paciente e o uso destas medicaes

Demonstra possveis exames para controle teraputico de infeces, leses suspeitas ou cncer. Este material pode ser reproduzido, deste que citado a sua fonte.

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III - PREPARO PRVIO DA PACIENTE PARA AS COLETAS DE CITOLOGIA ONCOLGICA CERVICO-VAGINAL

Este preparo necessrio para que a colheita no sofra interferncias na sua qualidade e quantidade do material colhido, refletindo diretamente na qualidade do diagnostico citomorfolgico. 1)PACIENTE NO DEVE COLHER O EXAME DURANTE O SEU PERIODO MENSTRUAL Um material excessivamente hemorrgico dificulta uma boa visualizao do quadro citomorfolgico. Deve-se tomar o cuidado para no confundir com quadros de metrorragias, onde neste caso a colheita deve ser realizada. 2) NO DIA ANTERIOR AO EXAME PACIENTE NO PODE FAZER USO DE DUCHAS VAGINAIS OU QUALQUER TIPO DE HIGIENE INTMA. Estes procedimentos dificulta o diagnstico de possveis agentes infecciosos, devido a sua retirada temporria. 3) NO USAR MEDICAMENTOS VAGINAIS (VULOS, CREMES OU SUPOSITRIOS) DURANTE NO MINIMO 48 HORAS ANTES DO EXAME. Estas medicaes interferem na colorao dos esfregaos, criando artefatos tcnicos e diminuem a flora vaginal, principalmente os agentes infecciosos. 4) ABSTINNCIA SEXUAL (COITO VAGINAL) NO MINMO 24 HORAS ANTES DO EXAME . Interferncia do smen (liquido seminal + espermatozides) na colorao e no contedo esfregao, e a paciente geralmente aps um ato sexual ir realizar uma higiene intima.

IV - COLHEITA DO MATERIAL CRVICO-VAGINAL

Na sala de colheita devemos ter os seguintes materiais: espculos de tamanhos variados e esterilizados (metal), esptula de ayre, escova endobrush, lminas, fixador (liquido ou spray), gazes, recipientes para o transporte das lminas, luvas (ltex ou plstico), mesa ginecolgica, foco e papel lenol. Deve-se conseguir um relaxamento da paciente com bons dilogos e ser o mais delicado possvel com a mesma, principalmente durante a colocao do especulo e coleta. Explicar a paciente cada etapa do exame e comunicar o que ela poder vir a sentir (desconforto, dor, vergonha). Confirmar dados clnicos mnimos para um bom exame citolgico: idade e data da ltima menstruao (d.u.m.). Questionar a paciente se possuem atividade sexual, ou se j realizou algum tipo de cirurgia ginecolgica (histerectomia ou perneo), dados importantes antes da colocao do especulo. A)POSICIONAMENTO DA PACIENTE NA MESA GINECOLOGICA: Paciente deve ser colocada na posio ginecolgica ( posio litotomica): coxas acentuadamente fletidas sobre a bacia, os joelhos afastados, enquanto os ps ou as dobras dos joelhos apiam-se em suportes especiais existentes na mesa. Tomar o cuidado de deitar a paciente de forma que a borda das ndegas se situe ligeiramente para fora da mesa; para facilitar o acesso ao canal vaginal.Cobrir com lenol as coxas e joelhos da paciente. Os braos devem ficar estendidos do lado de fora ou cruzados sobre o trax, nunca sobre a cabea (contrao de msculos abdominais). Focalizar a iluminao do foco para a pbis da paciente B) COLOCAO DO ESPCULO Vestir as luvas antes de iniciar este procedimento Utiliza-se geralmente o especulo de duas valvas ou lminas (especulo de collin), os quais podem ser de metal ou plstico (descartveis).Convm sempre se familiarizar com a maneira de abrir e fechar as lminas do especulo. Escolha um especulo de tamanho apropriado, geralmente podemos utilizar especulo de tamanho
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pequeno para as pacientes nulparas ou que no tiveram parto vaginal (normal), ou em mulheres muito magras ou em menopausadas, e especulo grande para as pacientes multparas ou obesas. A colocao de um especulo no mximo pode ser desconfortvel para a paciente, no caso de sensao de dor ou de muito ardor pode significar um processo inflamatrio nas paredes vaginais. Os grandes e pequenos lbios, juntamente com os plos pubianos devem ser afastados com a mo esquerda, expondo a abertura vaginal. Evitando-se que o especulo puxe os plos pubianos ou belisque os lbios O especulo com as laminas fechadas e com a borboleta ou parafuso voltado para a direita e lateralmente (posio vertical) deve ser introduzido em um ngulo de 45 graus para baixo, com uma presso exercida em direo a parede vaginal posterior. Aps o especulo ter penetrado no canal vaginal, rodar as laminas para uma posio horizontal, borboletas voltadas para a esquerda e para baixo e comear abri-lo de forma lenta, separando as paredes vaginais, expondo o colo uterino (cervix uterina). Caso haja dificuldade em visualizar o colo, retirar o especulo ligeiramente e posicion-lo de modo mais anterior.

C) COLHEITA DO MATERIAL Caso no colo uterino haja uma grande quantidade de secreo, tirar o excesso com o auxilio de gazes, evitando-se um esfregao muito espesso e com grande quantidade de exsudato inflamatrio (leuccitos).

- COLETA ECTOCERVICAL ----> a extremidade chanfrada da esptula de ayre deve ser encaixada no orifcio do colo e fazer um giro completo de 360 graus, raspando toda regio da juno escamocolunar (j.e.c.).A presena de feridas (ectropico ou zona de transformao) pode originar pequenos sangramentos durante a coleta
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- COLETA VAGINAL -----> com a extremidade arredondada da esptula de ayre raspar as paredes vaginais ou coletar do fundo de saco vaginal posterior A coleta ectocervical e vaginal em casos muito excepcional pode ser realizada com auxilio de um abaixador de lngua, mas no e o indicado. - COLETA ENDOCERVICAL -----> a escova endobrush de ser introduzida no orifcio do colo uterino, atingindo desta forma o canal endocervical, atravs de movimentos rotatrios obter o material. Pode haver um pequeno sangramento (epitlio colunar simples). O uso de swab com extremidades de algodo, no e aconselhado por dois motivos: escassez na celularidade e contaminao do esfregao com fibras de algodo. RETIRADA DO ESPCULO VAGINAL Fecha-se as laminas do especulo e faz-se a sua retirada do canal vaginal, ESTE PROCESSO SOMENTE DEVERA SER REALIZADO AO FINAL DA FIXAO DOS ESFREGAOS

V - CONFECO DO ESFREGAO
O material colhido destas regies (ecto, endocervix e vagina) devem ser delicada e de forma homogeneamente espalhados sobre a superfcie de uma lmina em reas diferentes, em sentido longitudinal. Evitando-se os movimentos de vai e vem ou rotatrios. Deve tambm ser evitado material em grande quantidade espalhado em pequenas reas (esfregaos espessos), e material escasso, difusamente espalhado pela lamina (esfregaos ralos). O esfregao ideal apresenta uma camada de material algo transparente, homogeneamente distribudo, evitando conglomerado de clulas em reas diferentes. Em pacientes menopausadas (epitlio atrofico), podemos utilizar uma esptula umedecida com soluo fisiolgica que facilita e aumenta a esfoliao das clulas.

VI - FIXAO E IDENTIFICAO DO MATERIAL

Os bons fixadores so aqueles que preservam fielmente os componentes celulares, penetrando no interior das clulas aumentando a sua corabilidade (desidratao e desnaturao do protoplasma). Os fixadores utilizados nos esfregaos cervico-vaginais so: lcool 95% , fixadores de camada (polietileno glicol + lcool etlico------> spray).
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A fixao deve ser imediata, aps no mnimo 15 minutos o material j esta pronto para ser corado. Os materiais que so fixados no ar iro prejudicar em muito a anlise citomorfologica, devido degenerao nuclear e citoplasmtica, com perda da diferenciao nuclear e citoplasmtica. O material apos a sua fixao deve ser identificado com o nome da paciente, nmero de registro, idade e d.u.m.

Falhas mais freqentes de coleta cervico-vaginal

Colo uterino no visualizado durante a coleta Raspagem cervical insuficiente Zona Transformao ou Juno escamo colunar no raspada Espalhamento muito espesso ou pobre em celulas Esfregao hemorragico Esfregao purulento Esfregao ressecado antes da fixao M fixao Esfregaos contaminados por um lubrificante ou creme vaginal

VII - COLHEITA DO MATERIAL PARA O EXAME DE CITOLOGIA HORMONAL, CITOLOGIA ENDCRINA, INDICE DE MATURAO OU DE FROST, CITOLOGIA HORMONAL SERIADA (C.H.S.)
A avaliao citohormonal pode ser realizada atravs de uma amostra isolada (citologia hormonal isolada ou ndice de maturao) ou atravs de amostras seriadas no ciclo menstrual da paciente.No caso da amostra isolada verificar a data da coleta solicitada pelo mdico, dentro do ciclo menstrual da paciente, nas amostras seriadas deve ser realizado as coletas nos seguintes perodos: 7 dia do ciclo menstrual, mesmo a paciente estando menstruada. 14 dia do ciclo menstrual 21 dia do ciclo menstrual 28 dia do ciclo menstrual As datas determinadas para estas coletas podem variar no mximo 2 dias para menos ou para mais, devendo sempre o citologista ser informado sobre tais mudanas. As pacientes que tiverem menstruao a partir da segunda coleta deve ser cancelado as demais coletas, e informar o citologista sobre o trmino das coletas devido ao inicio de um novo ciclo menstrual ou cancelamento das coletas pela paciente. As avaliaes citohormonais devem conter os seguintes dados clnicos: idade, d.u.m. e uso de medicao hormonal. As coletas devem ser sempre realizadas nas paredes vaginais.Sugere-se que as pacientes antes da coleta tenha as mesmas precaues que so solicitadas na citologia oncologica.

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VIII - COLETA DE SECREES MAMRIAS

Aplicao da superfcie de uma lamina diretamente sobre a gota de secrees no mamilo obtida por expresso manual das mamas A lamina deve ser movida sempre no sentido lateral, da direita para a esquerda ou vice-versa, espalhando-se a secreo sobre a lamina. Verificar quando a solicitao for bilateral, coletar amostras em laminas diferentes e identificar como mama direita e mama esquerda respectivamente. As pacientes que apresentarem grandes quantidades de secreo, pode ser colhido duas amostras. Fixar imediatamente em lcool ou fixadores de camada e identificar a paciente

Area para um laboratorio que processa 50.000 exames/ano: aproximadamente 100m2 Recepo 6 m2, Processamento tecnico 24 m2, Diagnostico 16 m2 ou 9 m2 (bem iluminada, ventilada e evitando-se o barulho de equipamentos e restringindo o fluxo de pessoas), Administrao 9 , Secretaria m2, Arquivo de laminas 9 m2 , Sanitarios 9 m2 Bancadas, pisos e paredes de revestimentos impermeaveis, lavveis, de cores claras e neutras. Material permanente: Microscopio biocular, Centrifuga convencional e/ou citocentrifuga, Capela de exausto (NR-32) RECEPO DAS AMOSTRAS: atendimento do paciente, quando da realizao da colheita no proprio laboratorio, Esfregaos preparados pelo clinico, Material liquido (liquidos cavitarios, lavados, urina) e pastoso (escarro e secrees de fistula ou abscessos) REGISTRO DO EXAME NO LABORATORIO Amostras citologicas e requisio medica Cadastro em sistemas eletronicos ou manuais SISCOLO (Datasus) ou Sistemas de informatica particulares (Ex: Worklab) PROCESSAMENTO TECNICO Centrifugao Especimes liquidas ou secrees) Confeco de Esfregaos: Mtodo do Deslizamento (T. Lowhagen) Qualquer tipo de material Mtodo do Esmagamento Especimes mucoides FIXAO DOS ESFREGAOS Preservar as caracteristicas citomorfologicas e reter certos elementos citoquimicos, essenciais na etapa de colorao Os fixadores citologicos devem apresentar as seguintes caracteristicas: Penetrar rapidamente nas clulas, Minimizar a retrao e a distoro da celula, substituindo a agua celular; Preservar a morfologia celular, Inativar enzimas autoliticas, Tornar a membrana celulares permeaveis aos corantes, Facilitar a adeso celular a lamina TIPOS DE FIXAO mida Imerso imediata do esfregao ainda mido na soluo fixadora, as celulas no so expostas a fixao pelo ar Fixadores utilizado: Alcool 95% Desnatura as proteinas e os acidos nucleicos, tornado-os insoluveis e estaveis Agente desidratante Retrao celular 2) Fixadores de Cobertura Fixam as celulas e quando secam promovem a formao de uma pelicula protetora sobre o esfregao
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IX LABORATORIO DE CITOPATOLOGIA

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Fixadores utilizados: Carbowax 4000 (polietileno glicol) 3)Fixadores a seco - Deixar secar a temperatura ambiente Recomendado para coloraes que utilizam corantes derivados de Romanoviski

IX - CONCEITOS GERAIS DE COLORAO

A colorao torna possvel o estudo e a visualizao das caractersticas fsicas e das reaes dos tecidos e outros constituintes celulares, porque os tecidos diferentes e tambm os componentes celulares, exibem afinidades diferentes para a maioria dos corantes ou tintas, devido as variaes da estrutura fsico-qumica e na composio das clulas e tecidos. As coloraes podem ser especificas (histoqumica), diretas(ao de solues simples de corantes) e indiretas (ao do corante intensificada pr um outro agente mordente). O mordente pode ser incorporado na soluo corante ou pode ser usado separadamente e, geralmente, tem o efeito de formar uma ligao entre a molcula do corante e o elemento tecidual. . As reaes qumicas podem ser relativamente no especificas, pr exemplo colorao de nucleoprotenas acidas pr corantes bsicos, ou pr grupos especficos (Ex. PAS) ou altamente especificas (Ex. Azul da Prssia para on ferro). A adsoro envolve a atrao e a fixao na superfcie, de pequenas molculas pr grandes molculas. Sabe-se que a grande maioria dos corantes tem cor, porque a sua configurao molecular apresenta geralmente ou um anel paraquinonoide ou ento um ou mais grupamentos azo. Estas estruturas apresentam uma configurao eletrnica que leva a uma absoro de certos comprimentos de onda de luz. Estes grupamentos responsveis pela cor na maioria dos corantes receberam o nome genrico de cromforos (cromo=cor e foros=transportador) e, de regra, quanto maior o nmero de grupamentos cromforos em um corante mais intensa a sua cor. A introduo de um grupo cromforo numa molcula no corada transformala- em corada, passando a ser chamada de cromgeno, a qual corada, mas no um corante. O processo das reaes qumicas dos corantes para se ligarem aos tecidos ou clulas ocorre devido presena de radicais ionizveis na molcula dos corantes, o quais podem ser catinicos ou aninicos, sendo tambm chamados de auxocromos (auxo=auxiliar e cromo = cor). Os radicais aninicos so geralmente o cloreto, sulfato, o sulfnico e carboxila. O principal grupo catinico o aminico = NH2+, estes corantes so chamados de corantes bsicos, quando formado pr grupos auxocromos aninicos so chamados de corantes cidos. Existe tambm o corante neutro que consiste na mistura de corantes cidos e bsicos (Ex. Corantes de Romanowski). Os corantes cidos ou bsicos se prendem pr interao eletrosttica aos radicais de sinal oposto presentes nos componentes tissulares. Os principais componentes cidos das clulas e tecidos (substancias basofilas, devido afinidade paro os corantes bsicos) so os cidos nuclicos (DNA-devido aos radicais fosfato), os polissacardeos cidos e as protenas acidas. As protenas podem ser acidas ou bsicas, de acordo como a predominncia de aminocidos cidos ou bsicos. Os principais componentes bsicos dos tecidos (substancias acidfilas, devido afinidade para os corantes cidos) so as protenas ricas em aminocidos bsicos, as protenas dos grnulos eosinofilos dos leuccitos e as protenas mitocndrias. As coloraes podem ser progressivas, onde o processo deve ser mantido ate que a intensidade de colorao desejada nos diferentes elementos teciduais ou celulares sejam obtidos. As coloraes podem ser regressivas, os tecidos ou clulas so supercorados e o excesso de corante depois removido seletivamente at que seja obtida a intensidade desejada, ou seja, o excesso de corante removido, ele clareado ou retirado de certos constituintes celulares antes dos outros, ou enquanto outras estruturas celulares permanecem ainda fortemente coradas. Este processo de remoo seletiva do excesso de corante denominado diferenciao.
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A) BATERIA DE COLORAO DE PAPANICOLAOU (1954).

Esta colorao idealizada pr George Nicholas Papanicolaou e Stockard em 1942 universalmente utilizada em citopatologia. O mtodo de Papanicolaou consiste na colorao citoplasmtica e nuclear com corantes especficos, e segundo o autor, visa trs objetivos: a) definio dos detalhes nucleares, proporcionando perfeita analise das alteraes inflamatrias e neoplasicas. b) transparncia citoplasmtica, de particular importncia devida s espessuras celulares diferentes e freqente superposio celular na amostra. c) diferenciao das clulas, ou seja, utilizao da capacidade das clulas de fixar corantes cidos ou alcalinos permitindo tonalidades diferentes de cores, que facilitam o diagnostico citolgico. A qualidade da colorao depende da qualidade da preservao celular e fixao do espcime, dos reagentes/solues usadas, protocolo de colorao e da montagem e tambm da eficcia da iluminao microscpica. Deve ser chamado a ateno para as reaes de cor que no so estveis e so afetadas pr alteraes no ph, alteraes inflamatrias e mesmo pela espessura dos agrupamentos celulares. Alm da colorao de Papanicolaou, podem-se empregar nos esfregaos coloraes especiais ou impregnaes metlicas para melhor esclarecimento diagnostico. Dentre a mais usadas, destacam-se as de May Gruenwald-Giemsa, Ziehl Neelsen, Acido Peridico de Schiff (PAS), Prata Metenamina de Grocott, Mucicarmim de Best e Gram. Desde a sua introduo, o mtodo sofreu varias modificaes atravs de diversos autores, o prprio Papanicolaou publicou duas delas em 1954 ( Tcnica regressiva de colorao) e 1960(Tcnica progressiva de colorao). So usados trs corantes no mtodo: Hematoxilina, Eosina-Alcool (EA) e Orange G, no geral a hematoxilina tem a funo de corar os ncleos e os outros os citoplasma das clulas. Os banhos que se seguem antes dos corantes so realizados no solvente do corante, ou seja, a hematoxilina aquosa, as laminas so lavadas em gua, seguindo o Orange e o EA, as laminas so lavadas em lcool. A gua utilizada depois da hematoxilina tem a funo de remover a hematoxilina no ligada. A gua que vem depois do diferenciador tem a finalidade de interromper a ao do acido clordrico. Os banhos de lcool 95% apos a colorao pelo Orange e EA-36 tem a finalidade de remover a soluo de Orange que no esta ligado ao citoplasma. Os ltimos banhos com lcool absoluto tem a funo de remover totalmente a gua dos esfregaos (desidratao). Esta etapa prepara o esfregao para a imerso posterior em xilol, o passo final da colorao que o clareamento ou diafinizao do esfregao, que determina a transparncia celular. O xilol usado como soluo de clareamento porque no corado, quimicamente no reativo, alm de ter um ndice de refrao de
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1,494 (aproximadamente o do vidro em torno de 1,515). Desta forma o ndice de refrao do esfregao aumenta, tornando-o transparente. O primeiro banho com xilol tem a funo de remover o lcool e o segundo banho com xilol possibilita o aumento da transparncia da preparao citolgica, preparando-a para a fase final que a montagem. Fatores que influenciam na colorao de Papanicolaou: Tipo de Fixador utilizado, Tipo da Formula da hematoxilina e dos corantes Citoplasmaticos, Durao do tempo nos corantes, Numero de esfregaos em cada corante, ph e conteudo quimico da agua corrente usada, ph das solues e corantes, idade dos corantes usados, presena de particulas de corantes em solues no filtradas, tecnica de colorao inconsistente e possivel contaminao de solues desidratantes Os corantes utilizados na bateria de colorao podem ser comprados comercialmente prontos ou preparados no laboratrio a partir de sais primrios (abaixo segue instrues). O alcool etlico absoluto P.A., pode ser substitudo pelo lcool etlico absoluto comercial. 1) PRINCIPIOS DA COLORAO PELA HEMATOXILINA A hematoxilina um corante natural extrado do cerne da arvore chamada Haematoxylon campechianum, nativa do Mxico, mas atualmente produzida comercialmente na Jamaica. O extrato natural obtido dos pedaos de toras cortados desta arvore o hematoxilo, o qual no um corante ativo, necessrio ser inicialmente oxidado ao principio ativo a Hemateina. A oxidao espontnea ocorre muito lentamente em soluo aquosa ou alcolica, levando trs a quatro meses. O processo de oxidao conhecido como amadurecimento e pode ser efetuado quase que instantaneamente pr oxidantes qumicos, tais como xido de mercrio, iodato de sdio, permanganato de potssio, perxido de hidrognio e hipoclorito de clcio. A colorao pr uma pela hematoxilina madura uma mistura de hematoxilina, hemateina, produtos de oxidao ativa da hemateina e do hematoxilo. Sem um mordente, a hemateina um corante mbar fraco, os mordentes so essenciais para a colorao de hematoxilina, pois so responsveis pela induo da cor do corante. O mordente forma uma ligao da hemateina com os cidos nuclicos e protenas nucleares, revelando a cromatina nuclear. Os mordentes so geralmente representados pr ons metlicos geralmente sulfato de alumnio e potssio ou simplesmente almen, sulfato de amnio frrico e sulfato de amnia e alumnio. Estes sais se combinam como hidrxidos ao corante, deslocando um tomo de hidrognio do mesmo e suas valncias remanescentes servem para ligar o complexo mordente-corante aos componentes da clula ou tecido, principalmente aos grupos fosfato dos cidos nuclicos. A colorao pela hematoxilina do tipo regressivo, a remoo da hematoxilina do citoplasma feita pela aplicao de acido clordrico (HCl), cujas concentraes recomendadas variam (0,2%, 1%, 0,25% e 0,5%). A aplicao do HCl retm o corante apenas no ncleo, depois desta fase o citoplasma das clulas ficam totalmente descorados. A gua destilada que vem a seguir tem a finalidade de interromper a ao do acido clordrico. Existem varias preparaes possveis e aceitveis para a hematoxilina, cujas diversas variaes acabaram recebendo o nome de seus autores. A mais difundida no mtodo de Papanicolaou a de Harris, cujo preparao segue logo abaixo, mas existem outras bastante utilizadas, como a de Carazzi (no usado etapa da diferenciao), Mayer, Lillie-Mayer e Gill. PREPARO DA HEMATOXILINA DE HARRIS Dissolver em balo volumtrico, 100 g de Almen de Potssio em 1.000 ml de gua destilada sobre Bico de Bunsen. Dissolver 5 g de hematoxilina em 50 ml de lcool etlico absoluto. Juntar as duas misturas. Levar chama at ferver. Juntar 2,5 g de xido de mercrio(oxidao artificial) lentamente, fora da chama.
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Levar a chama ate que a soluo assuma uma cor prpura escuro. Resfriar rapidamente. Filtrar logo em seguida, impedindo que o oxido de mercrio continue oxidando, ou toda vez que usar. Alguns autores orientam a colocar 20 a 40 ml de acido actico glacial para garantir a seletividade do material nuclear e ajuda a prevenir a oxidao do corante, tambm sugerido acrescentar de 50 ml de lcool etlico soluo final, pois ajuda a impedir a formao de grumos. Possiveis Problemas com a Colorao Hematoxilina: Nucleo Cora fracamente (plido) Nucleo Cora Fortemente Depositos de Hematoxilina no esfregao PREPARO DO DIFERENCIADOR Diluir em proveta, 10 mL de cido clordrico em 990 mL de lcool 70 %. 2) PRINCIPIOS DA COLORAO PELO ORANGE G OU ALARANJADO G Consiste de uma soluo alcolica do corante aninico Orange G e acido fosfotungstico, este atuando como mordente. O Orange G apresenta-se sob a forma de uma pequena molcula que capaz de penetrar nas hemcias e nas clulas com queratina ou precursores de queratina, dando uma colorao laranja intenso e brilhante. Evidencia tambm os grnulos de querato-hialina das clulas superficiais. PREPARO DO CORANTE ORANGE G (ALARANJADO G) 1)Soluo Estoque 10 g de Orange G 100 mL de gua destilada Agitar e usar depois de uma semana. 2) Soluo do Corante Orange G para uso Medir na proveta, 50 mL da soluo estoque, e diluir em balo volumtrico ou Becker com 900mL de lcool etlico a 95 %. Pesar 1,5 g de cido fosfotungstico, diluir em balo volumtrico ou Becker em 50 mL de lcool etlico a 95 % e juntar as duas solues. Pronto para uso depois de filtrado. 3) PRINCIPIOS DA COLORAO PELO E.A. (EOSINA ALCOOL). um corante policromico composto pela eosina, lighe green (verde luz) e pardo de Bismarck, associados ao acido fosfotungstico. A formula original do corante desenvolvido por Papanicolaou, conhecido por um cdigo numrico, o EA-36. Existem duas formulas de EA, 50 e 65. Estas modificaes interferem na intensidade da cor verde da colorao. O EA-65 tem metade do light green do EA-36, enquanto o quantidade de eosina e pardo permanecem idnticas. Qualquer formula pode ser usada para os diferentes espcimes citolgicos, dependendo da preferncia pessoal. O EA capaz de corar as estruturas da maioria das clulas metabolicamente ativas, em rosa pela ao da Eosina coram clulas superficiais, nuclolos, eritrcitos e clios, ou em verde (cianofilia) ou azul pela ao do light green as clulas parabasais, intermediarias, colunares, e trichomonas. Inicialmente acreditava-se que o cido fosfotungstico atuasse como mordente na reao de colorao, mas esta viso foi modificada e hoje o pensamento que atue como um corante de competio que ajuda na colorao pelo light green.
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Hoje alguns autores discutem a ao do pardo de Bismarck, alguns acham que este corante no adiciona nenhuma cor caracterstica ao citoplasma, desta forma tem sido eliminado na elaborao de algumas formulas. Outros autores acham que este corante deve ser includo como um corante de fundo. Outra duvida em relao ao uso de uma soluo saturada de carbonato de ltio que adicionada soluo de uso do EA. Vrios fatores, entretanto, tais como a secagem ao ar, o pH da secreo e a espessura do esfregao podero alterar as reaes da colorao do citoplasma. Possiveis Problemas com a Colorao Citoplasmatica Citoplasma muito plido No h colorao diferencial do Citoplasma PREPARO DO CORANTE E.A. -36 (CLASSICO). 1)Solues Estoque do EA -36 Estoque A - verde luz 10 g gua destilada 100 mL Estoque B - pardo Bismarck 10 g gua destilada 100 mL Estoque C - eosina amarelada 10 g gua destilada 100 mL Preparo do Corante EA-36 para uso Pipetar 4,5 mL de Soluo Estoque A = Diluir em balo volumtrico ou Becker com 250 mL de lcool etlico 95 % Pipetar 5,0 mL de soluo Estoque B = Diluir em balo volumtrico ou Becker com 250 mL de lcool etlico 95 % Pipetar 22,5 mL de Soluo Estoque C = Diluir em balo volumtrico ou Becker com 250 mL de lcool etlico 95 % Pesar 2 g de cido fosfotungstico, diluir em balo volumtrico ou Becker em 250 mL de lcool etlico a 95 %. Juntar todas as solues em um s frasco Pronto para uso depois de filtrado

4) CLAREAMENTO OU DIAFINIZAO DOS ESFREGAOS E a fase final da colorao que determina a transparncia celular, e a etapa entre a desidratao e a montagem. A soluo usada deve ser compatvel tanto com o lcool como com o meio de montagem, tornando as clulas transparentes. O xilol, solvente orgnico, usado com freqncia. No corado e quimicamente no reativo, alm de ter um ndice de refrao aproximado do vidro, aumentando o ndice de refrao do esfregao, tornando-o transparente. O primeiro banho com xilol tem a funo de remover o lcool e o segundo banho com xilol possibilita o aumento da transparncia da preparao citolgica, preparando-a para a fase final que a montagem. O xilol quando contaminado com gua, desenvolve uma reao qumica que lhe d uma aparncia leitosa, as laminas que estiverem em contato com este xilol hidratado ficaram opacas, para evitar esta perda de qualidade dos esfregaos, estes laminas devem voltar para as cubas de lcool absoluto.
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O xilol hidratado deve ser trocado assim como a cuba de lcool absoluto anterior a deste xilol, as laminas devem passar novamente pelo processo de desidratao e clareamento.

5) MONTAGEM DA LAMINA CORADA Quando um esfregao corado, no montado e for examinado ao microscpio, muito poucos detalhes podem ser observados devido a grande diferena entre o ndice de refrao da lamina de vidro e os componentes das clulas e o ar, para uma melhor visualizao das estruturas celulares, estas devem estar impregnadas por um meio transparente que tenha o ndice de refrao prximo ao do vidro. O meio de montagem necessrio tambm para proteger os esfregaos corados de danos fsicos e do descoramento ou deteriorao da colorao como resultado da oxidao e tambm da dessecao do material. O meio de montagem ideal deve Ter um ndice de refrao prximo ao do vidro, deve ser miscvel com o xilol, no ser reativo e no mudara sua cor em ph, tornar-se- duro sem formar grnulos ou rachaduras. Os meios de montagem representados por uma resina sinttica geralmente usadas, so o Balsamo do Canad e o Entellan. Alguns utilizam verniz como meio de montagem. Durante a montagem deve ser evitar a formao de bolhas, aparecimento de pigmentos marrons (cornflakes) sobre a superfcie celular (evaporao do xilol e aprisionamento de ar entre a lamina e lamnula) e de reas turvas (excesso de umidade desidratao no foi adequada). Possiveis Problemas na montagem: Excesso de Resina Montagem muito Lenta - Cornflakes (pigmentos marrons)

B)COLORAO DE SHORR
O corante nuclear desta colorao o Biebrich Escarlate, tendo uma afinidade por protenas desnaturadas, por isto o ncleos picnticos tem uma afinidade forte corando-se de vermelho e os vesiculosos de pardo. Este corante no indicado para a colorao de ncleos neoplsicos. Os citoplasmas das clulas coram-se de verde, e as superficiais eosinfilas de alaranjado, igualmente na tcnica de PAPANICOLAOU . PREPARAO DO CORANTE DE SHORR Etanol 50% -100 ml Biebrich escarlate -50 mg Fast Green -75 mg Orange G -250 mg cido Fosfotungstico -500 mg
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cido Fosfomolibdico -500 mg cido Actico Glacial -1 ml

X- MANUTENO DA BATERIA DE COLORAO DE PAPANICOLAOU

Troca dos corantes aps a colorao de 2000 laminas ou depois de um perodo de tempo de 6 a 8 semanas (corantes preparados no laboratrio) ou quando durante a microscopia for observado falhas na colorao citoplasmtica e nuclear Manter os corantes em recepientes e cubas escuras Manter vedadas as cubas da bateria de colorao Filtrao regular dos corantes e solues Trocar periodicamente a soluo diferenciadora Trocar diariamente os lcoois usados para limpeza aps os corantes Observar diariamente a precipitao que pode ocorrer na hematolixina e retirar com auxilio de um papel filtro este material

Profissional Medico

PROFISSIONAIS QUE ATUAM NA CITOPATOLOGIA Habilitao Especializao Responsabilidade Formao bsica Residncia medica em -SBP 1) Leitura e assinatura dos Terceiro grau
anatomia patolgica (histopatologia\necropsia\ citopatologia) conselho federal ou regional de medicina Conselho federal ou regional de farmcia -SBCP - IAC exames anatomopatolgicos 2) Leitura dos casos suspeitos e/ou positivos e assinatura dos exames citopatologicos negativo, suspeito e positivo Leitura e assinatura dos exames citopatologicos negativos, suspeitos e positivos Leitura e assinatura dos exames citopatologicos negativos, suspeitos e positivos Leitura e seleo para o

Farmacutico

Terceiro grau

Biomdico

Terceiro grau

Citotcnico

Segundo grau ou

- Sbac/Sbcc - Iac (citotecninologista) - Sbcp(citotcnico) - Aperfeioamento de no - Sbac/ Sbcc minino 500 hrs em - Abbm entidade educacional: - Iac (citotecnologista) - Habilitao pelo conselho - Sbcp (citotecnico) federal ou regional Formao terica e pratica - Sbpc

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terceiro grau

de no mnimo 1 ano : - Iac - Adolfo lutz - Servidor publico estadual - Fund. Onconcentro

patologista dos casos suspeitos e positivos, no pode assinar laudos

OBSERVAO: S.B.P Sociedade Brasileira de Patologia S.B.C.P. Sociedade Brasileira de Citopatologia S.B.A.C. Sociedade Brasileira de Analises Clinicas S.B.C.C. Sociedade Brasileira de Citologia Clinica I.A.C. Academia Internacional de Citologia A.B.B.M Associao Brasileira de Biomedicina

REFERENCIAS BIBIOGRAFICAS 1.Lima, Conceio Queiroz , O laboratrio de Citopatologia Aspectos Tcnicos e Operacionais EDUFA 2000 2. KOSS, Leopold G., Diagnostic Cytology and its Histopathologic Base, Philadelphia, J.B. Lippincott Company, 1990 3.TAKAHASHI, Masayoshi, Atlas Colorido de Citologia do Cncer, So Paulo, Ed. Manole, 1982 4.KOSS, Leopold G., Citologia Ginecolgica e suas bases Anatomoclnicas, So Paulo, Ed. Manole, 1997 5.CARVALHO, Grimaldo, Citologia Oncolgica, So Paulo, Livraria Atheneu, 1993 6.MCKEE, Grace T.; Citopatologia, Rio de Janeiro, Ed. Artes Mdicas, 1997

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