BIODEGRADACIN DEL DIBENZOTIOFENO POR BACTERIAS Pseudomonas AISLADAS DE CAMPO BOSCN Daisy Isea, Lenn Herrera, Carmen Crdenas,

Avismelsi Prieto, Jos Delgado, Beltrn Briceo Universidad del Zulia, Facultad de Ingeniera. Centro de Investigacin del Agua-INPELUZ, Maracaibo- Venezuela fax: 061596206. e-mail: DISEA@ ica.luz.ve Apartado Postal 98

Palabras claves: Dibenzotiofeno (DBT), Pseudomonas, biodegradacin

OBJETIVOS. Aislar y adaptar las bacterias Pseudomonas de Campo Boscn a un medio de cultivo con dibenzotiofeno (DBT) como nica fuente de azufre y establecer la capacidad de transformacin que tienen estas bacterias degradadoras de hidrocarburos. Identificar y cuantificar los metabolitos producto de la degradacin microbiana del dibenzotiofeno mediante cromatografa de gases

METODOLOGA Las cepas aisladas, codificadas como AE9-1-1 y AE9-2-7, se adaptaron a un medio mineral ptimo para su crecimiento formado por NH4NO3, CaCl22H2O, FeCl36H2O, Na2HPO4, MgCl26H2O, KH2PO4 y agua deionizada. Se ensayaron 3 fuentes de carbono: glutamato, tetradecano y mezcla de alcanos (tetradecano, hexadecano y heptano) y como nica fuente de azufre el DBT. Para cada ensayo se prepar una muestra similar sin inocular. Las muestras junto con el control se incubaron a 37C para distintos tiempos: 0, 1, 3, 6, 9, 12, 15 das. Los metabolitos se extrajeron con diclorometano y se analizaron por cromatografa de gases con un detector de ionizacin a la llama utilizando una columna capilar DB-5 (20mx0.53mm) y como gas de arrastre nitrgeno. Se procedi a la cuantificacin de los metabolitos mediante la elaboracin de curvas de calibracin utilizando patrones certificados. Los resultados fueron sometidos a un anlisis de varianza factorial con una significancia del 1%.

RESULTADOS Y DISCUSIN. La figura 1 muestra los cromatogramas resultantes para la cepa AE9-2-7 y los controles para los tiempos 0 y 15 das, en la cual se observa que el DBT no sufre ninguna transformacin sin intervencin de las cepas bacterianas, por el contrario en presencia de la bacteria Pseudomonas se manifiesta su degradacin. Similar comportamiento se presenta con la otra cepa en estudio. Cuando se utiliz la cepa AE9-1-1 los metabolitos identificados fueron: cido benzoico y DBT-sulfona mientras que con la cepa AE9-2-7, adems de los anteriores, se confirm la presencia del 2-fenilfenol, esto sugiere que el mecanismo de degradacin del DBT es distinto para cada cepa. En ambos casos se obtuvo otros picos cromatogrficos no identificados. En las tablas 1 y 2 se observa que los porcentajes de degradacin obtenidos varan dependiendo del medio utilizado, lo cual, se justifica por la influencia que tiene el medio de cultivo sobre la actividad microbiana de la cepa en estudio, y por ende, en la eficiencia para la degradacin del DBT o de cualquier otro hidrocarburo azufrado. Cuando se utiliz el glutamato como fuente de carbono, se obtuvo un mayor rendimiento en la degradacin del DBT, alcanzndose el mejor resultado con la cepa AE9-2-7 (69%), esto se corresponde con lo obtenido por otros investigadores [1,2]. En todos los casos, el producto

obtenido en mayor cantidad fue el cido benzoico incrementando su concentracin con el tiempo. Para el metabolito DBT-sulfona se observa la presencia de un mximo de concentracin con ambas cepas, este comportamiento ha sido publicado en otros estudios [2-5].

CONCLUSIONES Se encontr que las cepas bacterianas del gnero Pseudomonas aisladas de Campo Boscn degradan el DBT y esta degradacin as como la cantidad y tipos de metabolitos obtenidos depende de la cepa bacteriana utilizada y del medio de cultivo empleado. Entre las cepas bacterianas estudiadas, la codificada como AE9-2-7 mostr mayor eficiencia en la degradacin del DBT (69%) cuando se utiliz como fuente alterna de carbono el glutamato. En todos los ensayos el producto obtenido en mayor proporcin fue el cido benzoico.

REFERENCIAS BIBLIOGRFICA 1. Fogh, T. M., Fedorak, P. M., Gray, M., Westlake, D. W.: Microbial Desulphurization of Petroleum, p. 379-407. In: C. Brierly, J. Brierly and H. Ehrlich (ed.), Microbial Mineral Recovery. Mc Graw-Hill. New York, 1989. 2. Bhadra, A., Scharer, J. M., Moo-Young, M.: Microbial Desulphurization of Heavy Oils and Bitumen. Biotech. Adv., 5: 1-27, 1987 3. Afferden Van, M Schacht, S., Klein, J., Trper, G.: Degradation of Dibenzothiophene by Brevibacterium Sp.DO. Arch. Microbiology. 153: 324328, 1990 4. Omori, T., Monna, L., Saiki, Y., Kodama, T.: Desulphurization of dibenzothiophene by Corynebacterium Sp. Strain SY1. Appl. Environ. Microbiol., 58: 911-915,1992. 5. Laborde, A., Gibson, D.: Metabolism of dibenzothiophene by Beijerinckia species. Appl. Environ. Microbiol. 34: 783-790, 1977. 6. Con bacterias sacaran azufre del petroleo pesado. Ciencias. Universidad del Zulia, Facultad Experimental de Ciencias. Maracaibo, abril de 1993. 7. Izumi, Y., Ohshiro, T., Ogino, H., Hine, Y, Shimao, M.: Selective desulfurization of dibenzothiophene by Rhodococus erythropolis D-1. Appl. Environ. Microbiol. 60: 223-226. 1994. 8. Kropp, K., Goncalves, J., Andersson, J., Fedorak, P.:Bacterial Transformations of Benzothiophene and Methylbenzothiophenes.Environ. Sci. Tech. 28. 13481356, 1994. 9. Kropp, K., Goncalves, J., Andersson, J., Fedorak, P.: Microbially Mediated Formation of Benzonaphthothiophenes fron Benzo[b]thiophenes. Appl. Environ. Microbiol. 60: 3624-3631, 1994.

Figura 1: Separaciones obtenidas para la Cepa AE9-2-7 en el medio de cultivo con glutamato (Control, t (0) y t (15)).

Tabla 1: Cepa AE9-1-1, concentracin en porcentaje de los metabolitos formados y del DBT residual en tres medios de cultivos durante 15 das de incubacin.
Medio / Tiempo Glutamato DBT Mezcla Tetradecano cido Glutamato Benzoico Mezcla Tetradecano Glutamato DBT-Sulfona Mezcla Tetradecano Metabolito t(0) 100,00 100,00 100,00 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. t(1) 95,28 98,09 98,07 0,58 0,33 0,24 0,67 0,01 0,05 t(3) 92,92 97,30 97,47 0,67 0,40 0,33 0,81 0,48 0,35 t(6) 90,09 97,03 96,16 0,71 0,45 0,69 0,87 0,53 0,87 t(9) 86,05 96,91 95,83 0,73 0,46 0,77 4,26 0,51 0,56 t(12) 82,52 96,83 95,00 0,82 0,51 1,06 6,66 0,34 0,38 t(15) 79,39 96,14 93,23 3,45 0,76 1,37 0,65 0,13 0,01

Tabla 2: Cepa AE9-2-7, concentracin en porcentaje de los metabolitos formados y del DBT residual en tres medios de cultivos durante 15 das de incubacin.
Metabolito Medio / Tiempo Glutamato DBT Mezcla Tetradecano cido Glutamato Benzoico Mezcla Tetradecano Glutamato 2-Fenilfenol Mezcla Tetradecano Glutamato DBT-Sulfona Mezcla Tetradecano t(0) 100 100 100 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. t(1) 99,32 99,76 99,95 0,30 N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. N.D. t(3) 95,34 97,51 96,93 3,53 0,27 1,47 N.D. 0,02 N.D. 0,13 0,01 N.D. t(6) 82,02 96,52 96,27 15,94 0,32 1,54 0,01 0,03 N.D. 0,31 0,08 N.D. t(9) 65,25 94,20 96,07 32,06 0,40 1,68 0,07 0,04 N.D. 0,57 0,02 N.D. t(12) 59,33 93,05 95,75 37,23 0,60 1,80 0,12 0,05 N.D. 0,54 N.D. N.D. t(15) 31,11 90,29 95,31 64,61 0,74 1,89 0,18 0,07 N.D. 0,02 N.D. N.D.

RESUMEN Se estudi la biodegradacin del dibenzotiofeno (DBT) por cepas bacterianas del gnero pseudomonas aisladas de Campo Boscan de la costa Noroccidental del Lago de Maracaibo, Venezuela,. Las cepas aisladas, codificadas como AE9-1-1 y AE9-2-7, se incubaron a 37C durante 15 das utilizando como fuente de carbono glutamato, tetradecano y mezcla de hidrocarburos por separado. El seguimiento por anlisis qumico en la disminucin de la concentracin del DBT y la aparicin de los metabolitos se realiz por cromatografa gaseosa empleando un detector de ionizacin a llama. Los resultados indican que el DBT es degradado generando metabolitos orgnicos como el cido benzoico, 2-fenil fenol y DBT sulfona y trazas de productos no identificados. La degradacin mostr dependencia de la cepa bacteriana y del medio de cultivo empleado, resultando ser ms efectiva la cepa bacteriana AE9-2-7y obteniendose un mayor rendimiento de conversin cuando se emple glutamato en el medio de cultivo.