Qumica sangunea

INTRODUCCIN: Es un grupo de exmenes de sangre que suministran informacin acerca del metabolismo del cuerpo. El examen se denomina comnmente anlisis metablico bsico. Tambin llamado CHEM20 es un grupo de 20 pruebas qumicas realizadas en el suero, la porcin de la sangre sin clulas. Estas pruebas abarcan colesterol total, protena total y diversos electrolitos en el cuerpo, como sodio, potasio, cloro y muchos otros. El resto de las pruebas examina los qumicos que ayudan a que el hgado y el rin descompongan diversas sustancias. Significado de los valores anormales: Los resultados anormales pueden deberse a una variedad de afecciones diferentes, incluyendo insuficiencia renal, problemas respiratorios y complicaciones relacionadas con la diabetes. Parmetros a estudiar Glucosa Urea Creatinina cido rico Colesterol Triglicridos Bilirrubina total y directa Fosfatasa alcalina y acida Asparto aminotransferasa (GOT) Alanina aminotransferasa (GPT)

GLUCOSA

INTRODUCCIN: La glucosa es una fuente importante de energa para la mayora de las clulas del cuerpo, incluyendo las del cerebro. Los carbohidratos se encuentran en las frutas, los cereales, el pan, la pasta y el arroz. Estos se transforman rpidamente en glucosa en el cuerpo, lo que eleva el nivel de dicho azcar en la sangre. FUNDAMENTO DEL MTODO: La glucosa presente en la muestra origina, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra.
Glucosa oxidasa

Glucosa + O2 + H2O 2 H2O2 + 4 Aminoantipirina + Fenol COMPOSICIN

Glucnico + H2O2
Peroxidasa

Quinonaimina + 4 H2O

A. Reactivo: 10 x 50 mL. Fosfatos 100 mmol/L, fenol 5 mmol/L, glucosa oxidasa > 10 U/mL., peroxidasa > 1 U/mL., 4-aminoantipirina 0,4 mmol/L, pH 7,5 S. Patrn de Glucosa/Urea/Creatinina. Glucosa 100 mg/dL (5,55 mol/L), urea 50 mg/dL, Creatinina 2 mg/dL. Patrn primario acuoso. MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. El suero o plasma deben separarse de los elementos celulares lo antes posible para evitar la glucolisis. La adicin de fluoruro sdico a la muestra de sangre previene la glucolisis. La glucosa en suero o plasma es estable 5 das a 2-8C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren. MATERIAL Bao mara. Espectrofotmetro. Pipetas automtica 10 1000L Puntillas amarillas y azules.

 Cubetas para espectrofotmetro. Tubos de ensayo. PROCEDIMIENTO 1. Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente.

Cronometro.

2. Pipetear: Patrn (S) Muestra Reactivo (A) Blanco. 1 mL. Patrn. 10 L. 1 mL. Muestra. 10 L. 1 mL.

3. Agitar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C.

4. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 500 nm frente al Blanco. El color es estable durante al menos 2 horas.

CLCULOS La concentracin de glucosa en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general:

A Muestra A Patrn

x C Patrn = C Muestra

Si se utiliza para calibrar el Patrn de Glucosa suministrado. A Muestra A Patrn X 100 = mg/dL. Glucosa. X 5.55 = mmol/L. Glucosa.

VALORES DE REFERENCIA Suero y plasma: Neonato, prematuro Neonato, a termino Nios, adultos. 25-80 mg/dL. = 1.39-4.44 mmol/L. 30-90 mg/dL. = 1.67-5.00 mmol/L. 70-105 mg/dL. = 3.89-5.83 mmol/L.

Estos valores se dan nicamente a ttulo orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia. Segn el National Diabetes Data Group (US), valores de glucosa plasmtica en ayunas superiores a 140 mg/dL (7,77 mmol/L) obtenidos en ms de una ocasin, permiten el diagnstico de diabetes mellitus. CARACTERSTICAS METROLGICAS Lmite de deteccin: 0,23 mg/dL = 0,0126 mmol/L. Lmite de linealidad: 500 mg/dL = 27,5 mmol/L. Cuando se obtengan valores superiores, diluir la muestra 1/4 con agua destilada y repetir la medicin. Repetibilidad (intraserie): Concentracin media. 88 mg/dL. =4.84mmol/L. 326 mg/dL. =17.93mmol/L. CV 1.2% 0.9% n 20 20

Reproducibilidad (interserie): Concentracin media. 88 mg/dL. =4.84mmol/L. 326 mg/dL. =17.93mmol/L CV 2.7% 1.9% n 25 25

Sensibilidad: 4 mAdL/mg = 0,22 mAL/mmol Veracidad: Los resultados obtenidos con estos reactivos no muestran diferencias sistemticas significativas al ser comparados con reactivos de referencia (Nota 2). Los detalles del estudio comparativo estn disponibles bajo solicitud.

 Interferencias: la hemoglobina (> 3 g/L), la lipemia (triglicridos >1,25 g/L) y la bilirrubina (10 mg/dL) interfieren. Otros medicamentos y sustancias pueden interferir4. Estos datos han sido obtenidos utilizando un analizador. Los resultados pueden variar al cambiar de instrumento o realizar el procedimiento manualmente. CARACTERSTICAS DIAGNSTICAS La glucosa es la principal fuente de energa del organismo. La insulina, producida en las clulas de los islotes del pncreas, facilita la entrada de glucosa en las clulas de los tejidos. Una deficiencia de insulina o una disminucin de su actividad ocasionan un aumento de la glucosa en sangre. Se encuentran concentraciones elevadas de glucosa en suero o plasma en pacientes con diabetes mellitus (dependiente de insulina o no dependiente de insulina) y con otras condiciones o sndromes. La hipoglucemia puede darse como respuesta al ayuno, o bien puede ser debida a frmacos, venenos, errores congnitos del metabolismo o gastrectoma previa. El diagnstico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio. NOTAS 1. Estos reactivos pueden utilizarse en la mayora de analizadores automticos. Solicite informacin a su distribuidor. 2. La calibracin con el patrn acuoso suministrado puede causar sesgos, especialmente en algunos analizadores. En estos casos, se recomienda calibrar usando un patrn de base srica (Calibrador Bioqumica, cd. 18011 y 18044).

UREA /BUN COLOR

Fundamento del mtodo: La urea presente en la muestra origina, segn las reacciones descritas a continuacin un indofenol coloreado que se cuantifica espectrofotomtricamente. Urea + H20 ureasa 2NH4 + CO2 NH4 + Salicilato + NaCIO nitropusiato Indofenol Composicin: A1. Reactivo: Salicilato sdico 62mmol/L, nitropusiato sdico 3.4mmol/L, tampn fosfatos 20 mmol/L, pH6.9. A2. Reactivo: ureasa > 500U/mL. A3. Reactivo: hipoclorito sdico 7mmol/L, hidrxido sdico 150mmol/L. Preparacin de los reactivos: Reactivo (B) y patrn (S): estn listos para su uso. Reactivo (A): Vaciar el contenido de un vial de reactivo A2 en un frasco de reactivo A1 (nota 1) homogenizar. Si se desea preparar otros volmenes, mezclar en la proporcin: 1mL de reactivo A2 + 24mL reactivo A1. Estable dos meses de 2-8C (nota 2). Equipo adicional: Bao de agua a 37C. Analizador, espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 600 20nm.

Muestras: Suero u plasma recogidos mediante procedimientos estndar. Diluir la orina 1/50 con agua destilada antes del ensayo. La urea en suero o plasma es estable 7 das de 2-8C. Se recomienda la heparina como anticoagulante. A urea en orina es estable 3 das a temperatura ambiente si no se produce crecimiento bacteriano. Procedimiento: 1. Atemperar los reactivos a temperatura ambiente.

2. Pipetear en tubos de ensayo: Blanco 1.0mL Patrn 10L 1.0mL Muestra 10L 1.0mL

Patrn de urea (S) Muestra Reactivo (A)

3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C.

4. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 600nm frente al blanco. El color es estable durante al menos de 2 horas.

Clculos: La concentracin de urea en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general:

Si se utiliza para calibrar el Patrn de Urea suministrado (Nota 3): Suero o plasma x 50 = mg/dL urea x 23.3 =mg/dL BUN x 8.3 = mmol/L urea Orina x 2500 = mg/dL urea x 1165 =mg/dL BUN x 415 = mmol/L acido rico

Valores de referencia: Suero y plasma: 15-39mg/dL urea = 7-18mg/dL BUN = 2.5-6.5mmol/L urea. En el periodo neonatal las concentraciones son inferiores mientras que en personas mayores de 60 aos se encuentran valores superiores en hombre que mujeres.

Orina: 26-43g/24h urea =12-20g/24h BUN = 428-714mmol/24h urea.

Estos valores se dan nicamente a ttulo orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.

Caractersticas diagnosticas: La urea se sintetiza en el hgado como un producto en la desaminacin de los aminocidos. Su eliminacin en la orina representa la principal va de excrecin de nitrgeno. Se encuentran concentraciones elevadas de urea en plasma como consecuencia de una dieta hiperproteica, aumento del catabolismo proteico, despus de una hemorragia gastrointestinal, ligera deshidratacin, shock e insuficiencia cardiaca o tratamiento de glucocorticoides (uremia prerrenal). La uremia postrenal est causada por condiciones que obstruyen el flujo urinario: nefrolitiasis, tumor o hipertrofia prosttica. La utilidad de la urea como indicador de la funcin renal est

limitada por la variabilidad de su concentracin plasmtica como consecuencia de factores no renales. El diagnostico clnico debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio. Notas: 1. Es conveniente lavar bien el vial de reactivo (A2) con una pequea cantidad de la mezcla preparada, con el fin de arrastrar los restos que mojan las paredes del frasco. 2. El reactivo A liquido es muy sensible a la temperatura, por lo que se recomienda consrvalo estrictamente a 2-8C. La estabilidad indica que se reduce si se mantiene durante periodos prolongados a temperatura ambiente. 3. La calibracin con el patrn acuoso suministrado puede causar sesgos, especialmente en algunos analizadores. En estos casos, se recomienda calibrar usando un patrn de base srica (Calibrador Bioqumica, cod. 18011 y 18044).

CREATININA

FUNDAMENTO DEL METODO La creatinina presente en la muestra reacciona con el picrato en el medio ralcalino originando un complejo coloreado. Se mide la velocidad de formacin de dicho complejo en periodos iniciales cortos, evitndose as la interferencia de otros compuestos. PREPARACION DEL REACTIVO Patrn (S): Esta listo para su uso Reactivo de trabajo: Mezclar volmenes iguales de reactivo A y de reactivo B homogenizar. Estable un mes a 2 8C. MUESTRAS Suero, plasma y orina, recogidos por los mtodos estndar. Diluir la orina fresca 1/50 con agua destilada antes de medir. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren. La creatinina en las muestras es estable 24 hrs a 2 8C

PROCEDIMIENTO 1. Precalentar el reactivo de trabajo e instrumento a 37C

2. Pipetear en una cubeta Reactivo de trabajo Patrn (S) o muestra 1.0ml 0.5um

3. Incubar durante 5 minutos a 37 C una vez pasado este tiempo inmediatamente colocar 0.5um de la muestra problema

4. Inmediatamente insertar la cubeta en el fotmetro. Poner el cronometro en marcha. Leer la absorbancia a 500nm despus de 30 seg. (A1) y de 90 seg (A2).

CALCULOS La concentracin de creatinina en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula: (A2 A1) muestra (A2 A1) patrn X C patrn X Factor de dilucin muestra = C muestra

Si se utiliza para calibrar el patrn de cratinina suministrado (A2 A1) muestra (A2 A1) patrn Suero y plasma X 2=mg/dl X 177= mmol/L Orina X 100= mg/dl X 8840=mmol/L

VALORES DE REFERENCIA Suero y plasma Hombres: 0.9 1.3 mg/dl Mujeres: 0.6 1.1 mg/dl Orina Hombres: 14 26 mg/kg/24 -h Mujeres: 11 20 mg/kg/24 - h

ACIDO URICO

Fundamento del mtodo: El acido rico presente en la muestra origina, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra. Acido rico + O2 + 2H2O uricasa Alatoina + CO2 + H2O2 Quinoaimina

2H2O2 + 4 Aminoantipirina + DCFS peroxidasa

Composicin: A. Reactivo: fosfatos 100mmol/L, detergente 1,5g/L, diclorofenolsulfonato 4mmol/L, uricasa >0,12 U/mL, ascorbato oxidasa >5 U/mL, peroxidasa > 1 U/mL, 4Aminoantipirina 0,5mmol/L, pH 7,8. S. Patrn de cido rico: cido rico 6 mg/dL (357 mol/L). Patrn primario acuoso Preparacin de los reactivos: Tanto el reactivo como el Patrn estn listos para su uso. Equipo adicional: Bao de agua a 37C. Analizador, espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 520 20nm. Muestras: Suero, plasma u orina recogidos mediante procedimientos estndar. Diluir la orina 1/10 con agua destilada antes del ensayo. El acido rico en suero plasma es estable 7 das a 2-8C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren. El acido rico en orina es estable 4 das a temperatura ambiente si se ajusta el pH >8 con NaOH. No refrigerar. Procedimiento: 1. Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente.

2.

Pipetear: (Nota 1) Blanco 25L _ _ 1,0mL Patrn _ 25L _ 1,0mL Muestra _ _ 25L 1,0mL

Agua Destilada Patrn Acido rico(S) Muestra Reactivo (A)

3.

Agitar bien e incubar durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C.

4. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la muestra a 520nm frente al blanco. El color es estable durante 30 minutos.

Clculos La concentracin de acid rico en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general:

Si se utiliza para calibrar el Patrn de Acido rico suministrado (Nota 2). Suero o plasma x 6 = mg/dL acido rico x 357 = mol/L acido rico Valores de referencia Suero y plasma: Hombre: 3.5-7.2mg/dL = 210-420mol/L Mujeres: 2.6-6.0mg/dL = 150-350mol/L orina x 60 = mg/dL acido rico x 3570 = mol/L acido rico

Orina: 250-750mg/24 horas = 1.5-4.5mmol/24 horas Estos valores se dan nicamente a ttulo orientativo; es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios intervalos de referencia.

Caractersticas diagnosticas: En el hombre el acido rico, es el principal producto de catabolismo de las bases puricas, las cuales se obtienen en la parte de la dieta y en la parte de la sntesis in vivo. Concentraciones elevadas de acido rico en suero u orina pueden ser atribuibles a una sobre produccin de urato (sntesis incrementada de purinas) o una eliminacin defectuosa de urato. La hiperuricemia se asocia generalmente con la gota, disminucin de la funcin renal, deshidratacin, alteraciones mieloproliferativas y otras condiciones en las que no se conoce bien la causa. El diagnostico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio.

Notas 1. Estos reactivos pueden utilizarse en la mayora de analizadores automticos. Solicite informacin a su distribuidor. 2. La calibracin con el patrn acuoso suministrado pude causar sesgos, especialmente en algunos analizadores. En estos casos, se recomienda calibrar usando un patrn de base srica (Calibrador Bioqumica cod. 18011 y 18044).

COLESTEROL

FUNDAMENTO DEL METODO Tanto el colesterol libre como el esterificado presente en la muestra originan, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra. Indicaciones de deterioro Reactivo: Presencia de partculas, turbidez, absorbencia del blanco superior a 0,200 a 500 nm. Patrn: Presencia de partculas o turbidez. PREPARACION DE LOS REACTIVOS Tanto el Reactivo como el Patrn estn listos para su uso. EQUIPO ADICIONAL Bao de agua a 37C. Analizador, espectrofotmetro o fotmetro para lecturas a 500 20 nm. MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. El colesterol en suero o plasma es estable 7 das a 2-8C. Pueden utilizarse como anticoagulantes la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro.

PROCEDIMIENTO

1.

Atemperar el Reactivo a temperatura ambiente.

2. Pipetear: (Nota 1). BLANCO --1,0 ml PATRN 10 l -1,0 ml MUESTRA -10 l 1,0 ml

Patrn Colesterol(S) Muestra Reactivo (A)

3. Agitar bien e incubar los tubos durante 10 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C.

4. Leer la absorbancia (A) del Patrn y de la Muestra a 500 nm frente al Blanco. El color es estable durante al menos 2 horas.

CALCULOS La concentracin de colesterol en la muestra se calcula a partir de la siguiente frmula general:

Si se utiliza para calibrar el Patrn de Colesterol suministrado (Nota 2).

X 200 = mg/dl colesterol X 5,18 = mmol/l colesterol.

VALORES DE REFERENCIA Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por la US National Cholesterol Education Program y tambin aceptados en otros pases para la evaluacin del riesgo de enfermedad de las arterias coronarias.

Hasta 200 mg/dl = 5,2 mmol/l 200-239 mg/dl = 5,2-6,21 mmol/l >240 mg/dl = >6,24 mmol/l

Optimo Moderado Elevado

CARACTERISTICAS DIAGNOSTICAS

El colesterol es un esteroide de alto peso molecular que contiene una estructura ciclopentanofenantreno. El colesterol se transporta en el plasma en las lipoprotenas, Se excreta a la bilis como tal o tras su transformacin en cidos biliares. Las concentraciones elevadas de colesterol se asocian con un riesgo progresivamente creciente de ateroesclerosis y enfermedad de las arterias coronarias. El diagnostico clnico no debe realizarse teniendo en cuenta el resultado de un nico ensayo, sino que debe integrar los datos clnicos y de laboratorio. NOTAS 1. Este reactivo puede utilizarse en la mayora de analizadores automticos. 2. La calibracin con el Patrn acuoso suministrado puede causar sesgos, especialmente en algunos analizadores. En estos casos, se recomienda calibrar usando un patrn de base srica.

TRIGLICERIDOS

FUNDAMENTO DEL METODO Los triglicridos presentes en la muestra original, segn las reacciones acopladas descritas a continuacin, un complejo coloreado que se cuantifica por espectrofotometra. Triglicridos + H2o---lipasa-------- Glicerol + cidos grasos Glicerol + ATP --------glicerol quinasa--- Glicerol -3-P + ADP Glicerol -3-P + O2 --G-3-P-oxidasa--- Dihidroxiacetona P + H2O2 2H2O2 + 4-Aminoantipirina + 4-Clorofenol----peroxidasa-- Quinoaimina + 4 H2O MUESTRAS Suero o plasma recogidos mediante procedimientos estndar. Los triglicridos en suero o plasma son estables 5 das a 2-8 C. Los anticoagulantes como la heparina, EDTA, oxalato o fluoruro no interfieren. MATERIAL Bao mara Espectrofotmetro Pipetas automtica 10 100 l Pipetas automticas 100 1000 l Puntillas Cubetas para espectrofotmetro Tubos de ensayo Cronometro. PROCEDIMIENTO 1. Atemperar el reactivo a temperatura ambiente.

2. Pipetear: Patrn triglicridos (S) Muestra Reactivo (A) Blanco ------1,0 ml Patrn 10 l ---1,0 ml Muestra ---10 l 1,0 ml

3. Agitar bien e incubar durante 15 minutos a temperatura ambiente (16-25C) o durante 5 minutos a 37C.

4. Leer la absorbancia (A) del patrn y de la muestra a 500 nm frente al blanco. El color es estable durante al menos 2 horas.

CALCULOS La concentracin de triglicridos en la muestra se calcula a partir de la siguiente formula general: A Muestra A Patrn x C Patrn = C Muestra A Muestra A Patrn X 200 = mg/dl triglicridos.

VALORES DE REFERENCIA Los siguientes valores discriminantes universales han sido establecidos por el US National Institutes of Health y tambin aceptados en otros pases para la evaluacin del riesgo. Hasta 150 mg/dl = 1,7 mmol/l 150 199 mg/dl = 1,70 2,25 mmol/l 200 499 mg/dl = 2,26 5,64 mmol/l > 500 mg/dl = > 5,65 mmol/l Bajo Dudoso Alto Muy alto