Etapas del Ciclo de Krebs

Reaccin 1: Citrato sintasa (De oxalacetato a citrato) El sitio activo de la enzima, activa el acetil-CoA para hacerlo afn a un centro carbonoso del oxalacetato. Como consecuencia de la unin entre las dos molculas, el grupo tioster (CoA) se hidroliza, formando as la molcula de citrato. La reaccin es sumamente exoergnica (G'=-31.4 kJ/mol), motivo por el cual este paso es irreversible. El citrato producido por la enzima, adems, es capaz de inhibir competitivamente la actividad de la enzima. Incluso estando la reaccin muy favorecida (porque es exoergnica), la citrato sintasa puede ser perfectamente regulada. Este aspecto tiene una notable importancia biolgica, puesto que permite una completa regulacin del ciclo de Krebs completo, convirtiendo a la enzima en una especie de marcapasos del ciclo.

Reaccin 2: Aconitasa (De citrato a isocitrato) La aconitasa cataliza la isomerizacin del citrato a isocitrato, por la formacin de cis-aconitato. La enzima cataliza tambin la reaccin inversa, pero en el ciclo de Krebs tal reaccin es unidireccional a causa de la ley de accin de masa: las concentraciones (en condiciones estndar) de citrato (91%), del intermediario cis-aconitato (3%) y de isocitrato (6%), empujan decididamente la reaccin hacia la produccin de isocitrato. En el sitio activo de la enzima est presente un clster hierro-azufre que, junto a algunos residuos de aminocidos polares, liga el sustrato. En concreto, la unin al sustrato se asegura por la presencia de un resto de serina, de arginina, de histidina y de aspartato, que permiten slo la unin estereospecifica del citrato 1R,2S, rechazando la forma opuesta.

Reaccin 3: Isocitrato deshidrogenasa (De isocitrato a oxoglutarato) La isocitrato deshidrogenasa mitocondrial es una enzima dependiente de la presencia de NAD+ y de Mn2+ o Mg2+. Inicialmente, la enzima cataliza la oxidacin del isocitrato a oxalsuccinato, lo que genera una molcula de NADH a partir de NAD+. Sucesivamente, la presencia de un in bivalente, que forma un complejo con los oxgenos del grupo carboxilo en posicin alfa, aumenta la electronegatividad de esa regin molecular. Esto genera una reorganizacin de los electrones en la molcula, con la consiguiente rotura de la unin entre el carbono en posicin gamma y el grupo carboxilo adyacente. De este modo se tiene una descarboxilacin, es decir, la salida de una molcula de CO2, que conduce a la formacin de -cetoglutarato, caracterizado por dos carboxilos en las extremidades y una cetona en posicin alfa con respecto de uno de los dos grupos carboxilo. Reaccin 4: -cetoglutarato deshidrogenasa (De oxoglutarato a Succinil-CoA) Despus de la conversin del isocitrato en -cetoglutarato se produce una segunda reaccin de descarboxilacin oxidativa, que lleva a la formacin de succinil CoA. La descarboxilacin oxidativa del -chetoglutarato es muy parecida a la del piruvato, otro -cetocido. Ambas reacciones incluyen la descarboxilacin de un -cetocido y la consiguiente produccin de una unin tioster a alta energa con la coenzima A. Los complejos que catalizan tales reacciones son parecidos entre ellos. La -cetoglutarato deshidrogenasa (o, ms correctamente, oxoglutarato deshidrogenasa), est compuesta de tres enzimas diferentes:

* Subunidad E1: las dos cetoglutarato deshidrogenasas. * Subunidad E2: la transuccinilasa. (La subunidad E1 y E2 presentan una gran homologa con las de la piruvato deshidrogenasa.) * Subunidad E3: la dihidrolipoamida deshidrogenasa, que es el mismo polipptido presente en el otro complejo enzimtico.

Reaccin 5: Succinil-CoA sintetasa (De Succinil-CoA a succinato) El succinil-CoA es un tioster a alta energa (su G de hidrlisis est en unos -33.5 kJ mol-1, parecido al del ATP que es de -30.5 kJ mol-1). La citrato sintasa se sirve de un intermediario con tal unin a alta energa para llevar a cabo la fusin entre una molcula con dos tomos de carbono (acetil-CoA) y una con cuatro (oxalacetato). La enzima succinil-CoA sintetasa se sirve de tal energa para fosforilar un nuclesido difosfato purinico como el GDP. La energa procedente del tioster viene convertida en energa ligada a una unin fosfato. El primer paso de la reaccin genera un nuevo intermediario a alta energa, conocido como succinil fosfato. Sucesivamente, una histidina presente en el sitio cataltico remueve el fosfato de la molcula glucdica, generando el producto succinato y una molcula de fosfohistidina, que dona velozmente el fosfato a un nuclesido difosfato, recargndolo a trifosfato. Se trata del nico paso del ciclo de Krebs en el que se produce una fosforilacin a nivel de sustrato. El GTP est implicado principalmente en las rutas de transduccin de seales, pero su papel en un proceso energtico como el ciclo de Krebs es, en cambio, esencialmente trasladar grupos fosfato hacia el ATP, en una reaccin catalizada por la enzima nuclesido difosfoquinasa.

Reaccin 6: Succinato deshidrogenasa (De succinato a fumarato) La parte final del ciclo consiste en la reorganizacin de molculas a cuatro tomos de carbono hasta la regeneracin del oxalacetato. Para que eso sea posible, el grupo metilo presente en el succinato tiene que convertirse en un carbonilo. Como ocurre en otras rutas, por ejemplo en la beta oxidacin de los cidos grasos, tal conversin ocurre mediante tres pasos: una primera oxidacin, una hidratacin y una segunda oxidacin. Estos tres pasos, adems de regenerar oxalacetato, permiten la extraccin ulterior de energa mediante la formacin de FADH2 y NADH. La primera reaccin de oxidacin es catalizada por el complejo enzimtico de la succinato deshidrogenasa, la nica enzima del ciclo que tiene como aceptor de hidrgeno al FAD en vez de al NAD+. El FAD es enlazado de modo covalente a la enzima por un residuo de histidina. La enzima se vale del FAD ya que la energa asociada a la reaccin no es suficiente para reducir el NAD+. El complejo enzimtico tambin es el nico del ciclo que pasa dentro de la membrana mitocondrial. Tal posicin se debe a la implicacin de la enzima en la cadena de transporte de los electrones. Los electrones pasados sobre el FAD se introducen directamente en la cadena gracias a la unin estable entre la enzima y el cofactor mismo.

Reaccin 7: Fumarasa (De fumarato a L-malato) La fumarasa cataliza la adicin en trans de un protn y un grupo OHprocedentes de una molcula de agua. La hidratacin del fumarato produce Lmalato.

Reaccin 8: Malato deshidrogenasa (De L-malato a oxalacetato) La ltima reaccin del ciclo de Krebs consiste en la oxidacin del malato a oxalacetato. La reaccin, catalizada por la malato deshidrogenasa, utiliza otra molcula de NAD+ como aceptor de hidrgeno, produciendo NADH. La energa libre de Gibbs asociada con esta ltima reaccin es decididamente positiva, a diferencia de las otras del ciclo. La actividad de la enzima es remolcada por el consumo de oxalacetato por parte de la citrato sintasa, y de NADH por parte de la cadena de transporte de electrones. La Mitocondria y el Sistema transportador de electrones Las reacciones se llevan a cabo dentro de la mitocondria. Recuerde que este orgnulo de doble membrana presenta una matriz fluida rodeada por una membrana con crestas y un espacio intermembrana limitado por la memb. interna y otra externa.

Microfotografa electrnica de una mitocondria Paso 1: Oxidacin del piruvato

Es el lazo entre la gluclisis y la respiracin celular Es un complejo de reacciones catalizado por un sistema de enzimas localizado en la membrana mitocondrial interna. Resumen de los eventos: El piruvato difunde hasta la matriz de la mitocondria, cruzando ambas membranas. Cada c. pirvico reacciona con la coenzima-A, desdoblndose en CO2 y un grupo acetilo de dos carbonos que se une inmediatamente a la coenzima-A formndo acetil coenzima-A (acetilCoA) que entrar al ciclo de los c. tricarboxlicos. En esta reaccin se forma un NAD + H2

Nota: La Acetil-CoA puede tambin producirse a partir de lpidos ( por beta oxidacin) o del metabolismo de ciertos aminocidos. Su formacin es un nodo importante del metabolismo central. Paso 2: Ciclo de los cidos tricarboxlicos Este ciclo, tambin conocido como Ciclo de Krebs o Ciclo del c. ctrico tiene esencialmente la funcin de completar el metabolismo del piruvato derivado de la gliclisis. Las enzimas del ciclo de los cidos tricarboxlicos (Krebs) estn localizadas en la matriz de la mitocondria (unas pocas de estas enzimas estn la membrana interna de la mitocondria). Su punto de partida es el Acetil-CoA, obtenindose CO2 y transportadores de electrones reducidos.

Detalles y animacin del Ciclo de los cidos Tricarboxlicos Para empezar el ciclo: Acetil-CoA (2-C) + oxalacetato (4-C) -------> + cido ctrico (6-C, tres grupos cidos ) 1. 2. 3. 4. Isomerizacin del citrato a isocitrato (6-C, tres grupos cidos ) Oxidacin -------> alfa-cetoglutrico (5-C) + CO2 + NADH Oxidacin -------> succinil-CoA (4-C) + CO2 + NADH Fosforilacin a nivel de sustrato succinil-CoA (4-C) + GDP -------> succinato (4-C) + GTP (Note: GTP con ADP se puede interconvertir en ATP)

5. La oxidacin -------> fumarato (4-C) + FADH2 6. convierte el fumarato en maleato, una nueva oxidacin -------> oxalacetato (4-C) + NADH Etapas siguientes: Balance de un ciclo: Acetil-CoA (2-C) + 3 NAD+ + FAD -------> 2 CO2 + 3NADH + FADH2 + ATP Balance para una molcula de glucosa que se convierte en 2 piruvatos, luego en 2 Acetil-CoA y luego a CO2 en la va el ciclo de los cidos tricarboxlicos , con todo el NADH y el FADH convertidos en ATP por la respiracin: 1 glucosa + 38 ADP + 38 Pi -------> 6 CO2 + 38 ATP Nota: 2 de los NADH son formados en el citoplasma durante la gliclisis. Para ser transportados a la matriz mitocondrial para ser posteriormente oxidado por la cadena transportadora de electrones, tienen que pasar por medio de transporte activo al interior de la mitocondria , Esto "cuesta" 1 ATP per NADH. Por lo tanto el balance final resulta en 36 ATP por glucosa y no 38 ATP. Sencillo resumen del metabolismo Balance del Ciclo de los cidos Tricarboxlicos El ciclo de los cidos tricarboxlicos completa la oxidacin del carbono del piruvato a su forma ms oxidada (CO2); los electrones originalmente en los enlaces C-H pasan por los portadores NADH y FADH para ser usados en la respiracin. La eficiencia de la respiracin llega casi al 40%. de la energa presente inicialmente en la molcula de glucosa, y es conservada en forma de ATP; el resto se libera como calor Si bien las clulas pueden transferir electrones directamente desde el NADH al oxgeno, esto producira directamente la liberacin de la energa como calor. Si los electrones se transfieren directamente al oxgeno: NADH + O2 -------> NAD + H2O Go' = - 52 kcal/mol Si el NADH tiene ~52 kcal de energa, y solo son necesarias 7,3 kcal para hacer un ATP, se puede calcular en 52/7,3 = ~ 7 ATP por NADH si la conversin de energa fuese de un 100% de eficiencia. En la prctica las clulas han desarrollado sistemas que le permiten obtener hasta un 40% de eficiencia (~3 ATP/NADH) bajo condiciones ptimas. Continuacin: cadena respiratoria--> En este punto la clula ha ganado solo 4 ATP, 2 en la gluclisis y dos en el ciclo de Krebs, sin embargo ha capturado electrones energticos en 10 NADH2 y 2 FADH2. estos transportadores depositan sus electrones en el sistema de transporte de electrones localizado en la membrana interna de la mitocondria.

Metabolismo celular

En un sentido amplio, metabolismo es el conjunto de todas las reacciones qumicas que se producen en el interior de las clulas de un organismo. Mediante esas reacciones se transforman las molculas nutritivas que, digeridas y transportadas por la sangre, llegan a ellas. El metabolismo tiene principalmente dos finalidades:

Obtener energa qumica utilizable por la clula, que se almacena en forma de ATP (adenosn trifostato). Esta energa se obtiene por degradacin de los nutrientes que se toman directamente del exterior o bien por degradacin de otros compuestos que se han fabricado con esos nutrientes y que se almacenan como reserva. Fabricar sus propios compuestos a partir de los nutrientes, que sern utilizados para crear sus estructuras o para almacenarlos como reserva. Al producirse en las clulas de un organismo, se dice que existe un metabolismo celular permanente en todos los seres vivos, y que en ellos se produce una continua reaccin qumica.