Tema 8.

Vas del IPP

Metabolitos derivados de la Va del mevalonato. Terpenos y esteroides Bibliogafa Paul M. Dewick. 1997. Medicinal Natural Products. John Wiley & Sons, Nueva York. Kurt B. G. Torssell. 1997. Natural Products Chemistry. Apotekarsocieteten, Swedish Pharmaceutical Society, Swedish Pharmaceutical Press, Estocolmo

Introduccin
Significado y distribucin de los terpenos Sntesis de terpenos a partir de dos precursores universales de naturaleza isoprenoide (IPP y DMAPP) Comparacin de las rutas para la biosntesis de terpenos en plantas: -clsica del mevalonato -xilulosa-5-fosfato (no mevalonato) Significado del descubrimiento de la ruta no mevalonato Investigacin de los mecanismos propuestos para los diferentes pasos en la ruta de la xilulosa-5-fosfato (ruta no mevalonato)

La familia de los terpenos

DMAPP Monoterpenes
IPP

Geranyl PP C10

IPP

Sesquiterpenes Steroids

Farnesyl PP C15
FPP

Triterpenes C30 Diterpenes

IPP

Geranylgeranyl PP C20
GGPP

Carotenoids

Phytoenes C40

IPP

Sesterterpenes Ubiquinone side chain

C25 PP
4-5 IPP

Solanesyl PP C45-50 Dolichols

7-12 IPP

C85-110 PP
n IPP

Rubber

Diversidad en terpenos
Carotenoids Diterpenes
AcO O Ph N H Ph O O OH HO H OBz OAc O O OH

Carotene Monoterpenes Pinene Sesquiterpenes

Paclitaxel Steroids Isoprene

HO

Humulene Polymer

Cholesterol
O MeO MeO O

H
n

OH

Polyprenoids

Rubber

Ubiquinone Coenzyme Q

La sntesis de terpenos utiliza la qumica de los carbocationes

Las reacciones de alargamiento de cadena y ciclacin del metabolismo de los terpenos son alquilaciones electroflicas en las que se forma un nuevo enlace simple carbono-carbono por reaccin de un carbocatin altamente reactivo con un doble enlace carbono-carbono. Desde el punto devista qumico, el paso limitante es el de generacin de carbocationes. La naturaleza ha seleccionado 3 estrategias para catalizar este proceso: -ruptura del enlace carbono-oxgeno en un ster difosfato allico -protonacin de un doble enlace carbono-carbono -protonacin de un epxido

La sntesis de terpenos utiliza la qumica de los carbocationes

Una vez formados, los carbocationes pueden sufrir un rearreglo por migracin de protones o grupos alquilos y luego ciclarse por alquilacin en sitios cercanos a los dobles enlaces. Diferentes familias de estructuras terpnicas, generalmente formadas a partir del mismo sustrato por mecanismos enzimoespecficos, se producen por diferencias en: la forma en que el sustrato se pliega en el sitio activo la forma en que se estabilizan los intermediarios carbocatinicos para favorecer o no los rearreglos posteriores la forma en que la carga positiva se neutraliza cuando se forma el producto de reaccin.

Diversidad en los terpenos

Cmo un sustrato se pliega (encaja) en el sitio activo Cmo y qu tipo de rearreglos sufre el carbocatin (si ocurre) migracin (shift) de alquilo migracin (shift) de hidruro Cmo se neutraliza una carga positiva en el producto

O H SCoA Claisen SCoA O acetil-CoA

H O O
reaccin aldol estereoespecfica con hidrlisis de la unin ecetilo-enzima

Ruta del mevalonato

OH O SCoA HMG-CoA + EnzSH

SCoA

HO2C

EnzSH O

SEnz grupo acetilo enlace-enzima

HMG-CoA reductasa

NADPH
reduccin del tioster a aldehdo va tiohemiacetal

HO2C
2

OH
3 4

reduccin de aldehdo a alcohol 5

OH

NADPHHO C 2

OH O c. mevaldico HO2C

OH

OH

c. mevalnico (MVA)
fosforilacin secuencial del alcohol primario al difosfato

SCoA H tiohemiacetal del c. mevaldico

2 x ATP

O HO P O ADP OH
isomerizacin allica estereoespecfica: el equilibrio favorece a l DMAPP
1 2

O H O

OH OPP

-CO2

ATP H
4

isomerasa OPP OPP dimetilalil PP (DMAPP)

HR

HS

el ATP facilita la descarboxilacin-eliminacin (la fosforilacin previa del alcohol terciario para crear un mejor grupo saliente aparentemente no ocurre)

isopentenil PP (IPP)

reaccin SN1

OPP DMAPP H -H isopreno

catin allico estabilizado por resonancia

Ruta de la xilulosa-5P
CO2H O c. pirvico tiamina PP (TPP) R2 enamina derivada TPP/piruvato CO2 R1 N S H3C O C OH OP OH D-gliceraldehdo-3-P H H H3C R1 O C OH N S R2 OH OP O OH OH OP

1-deoxi-D-xilulosa-5-P R1

H O R O OH OP O H OH

anin TPP regenerado

O H OP OH O OH OH OP

R2 reduccin de aldehdo a alcohol; el aldehdo intermediario permanece unido a la enzima H NADPH OH OH OH OP

OH

2-C-metil-D-eritritol-4-P citidin trifosfato(CTP) NH2 N N O

pasos sin determinar -H2O OH NADPH OPP OH OPP

OPP OH O

NADPH OH OH

OPP

isomerasa? OPP isopentenil PP

dimetilalil PP (DMAPP)

(IPP) existe evidencia de que el DMAPP se podra formar independientemente y no por isomerizacion del IPP

La familia de los terpenos

Hormonas (giberelinas y cido abscsico) Pigmentos carotenoides (carotenos y xantofilas) Esteroles Derivados de los esteroles (glicsidos cardacos) Latex Aceites esenciales Citokininas y clorofilas tambin contienen cadenas laterales de naturaleza terpenoide

Hemiterpenos
Los terpenos son generalmente sustancias lipoflicas derivados de la unidad simple de 5-carbonos (isopreno) El isopreno puede ser sintetizado por las plantas mediante la enzima isopreno sintasa

CH3 CH2 CH CH CH2 isopreno

Biosntesis de terpenos Monoterpenos

OPP HR HS

OPP HR HS

OPP
prdida estereoespecfica del protn

OPP OPP geranil PP (GPP)

el enlace simple en LPP permite la rotacin

OPP E OPP

OPP

OPP Z OPP OPP

geranil PP (GPP)

linalil PP (LPP)

neril PP (NPP)

catin allico estabilizado por resonancia (catin geranilo)

catin allico estabilizado por resonancia (catin nerilo)

Ciclacin de monoterpenos
Limoneno Terpineno

H H

1,2 HH

shift Thujeno

Pineno

OH

Careno

Alcanfor Camfeno

Posicin del doble enlace en - y -pineno

OPP

- H+

-pineno

OPP

-pinene

-pineno
PPO

-pineno

GPP puede plegarse de 2 formas diferentes, generando molculas enantiomricas de LPP

OPP OPP PPO PPO

GPP

GPP

OPP

OPP

OPP

OPP

(-)-(3R)-LPP

(+)-(3S)-LPP

-H

-H

catin -terpinilo

(+)-(R)-limoneno

(-)-(S)-limoneno

catin -terpinilo

-H

-H

catin pinilo

(+)--pineno

(-)--pineno

catin pinilo

Los aceites esenciales son sintetizados en tricomas glandulares (hojas) o glndulas (cscaras)

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Funcin de los aceites esenciales en las plantas

polinizacin. Atrayentes de insectos (intervencin como semioqumicos) defensa contra depredadores (ej. irritantes) sustancias de reserva de la planta funcin protectora en procesos de cicatrizacin (resinas y blsamos) y actividad antimicrobiana regulacin de los procesos de evaporacin de agua deshechos del metabolismo vegetal mecanismo de defensa contra otros vegetales (alelopata)

Ubicacin de los aceites esenciales en vegetales

pelos glandulares, ej. Labiatae (menta, lavanda) clulas modificadas del parnquima, ej. Piperaceae (pimienta) tubos oleferos vitas , ej. Lauraceae (canela) tubos esquizgenos, ej. Umbelliferae (anis, hinojo) canales lisgenos, ej. Pinaceae (pinos) canales esquizgenos, ej. Rutaceae (ruda)

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rganos vegetales en los que se encuentran aceites esenciales

flores (rosa, jazmn) hojas (menta, eucalyptus) leos (alcanfor) races (lirio, vetiver) cortezas (canela) frutos (ans, ctricos) semillas (almendras)

Produccin de aceites esenciales por destilacin

Principales mtodos utilizados para obtener aceites esenciales por procesos de destilacin: destilacin en agua destilacin con agua y vapor destilacin con arrastre por vapor destilacin - maceracin destilacin por pirlisis o degradacin trmica

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Extraccin con fluidos supercrticos

Extraccin de sustancias de inters o remocin de materiales indeseables utilizando fluidos en estado supercrtico. Proceso de SFE: la etapa de extraccin y la etapa de separacin 1. En la etapa de extraccin el solvente fluye a travs de un lecho esttico formado por partculas slidas y disuelve los componentes extrables del slido. La concentracin de componentes en el extracto se incrementa en la direccin de flujo en el solvente supercrtico y en el material slido en extraccin

Extraccin con fluidos supercrticos

2. En la etapa de separacin, el soluto que se separa y es precipitado, se deposita en el fondo de la celda de separacin y el solvente retorna al proceso de extraccin. Otras consideraciones 1. tratamientos previos (control del tamao de partcula, forma y distribucin de las partculas) 2. forma del lecho 3. superficie de los poros

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Biosntesis de terpenos Sesquiterpenos

OPP geranil PP catin allico
adicin electroflica dando un catin terciario

OPP HR HS

OPP HS HR
prdida estereoespecfica de un protn

OPP farnesil PP (FPP)

E OPP

OPP

nerolidil PP

E E,Z-FPP

OPP

E E Z

ismeros del farnesilo

E,E-FPP

E,Z-FPP

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Ejemplos de sesquiterpenos
OH

H O
H H

OH

x. -bisabolol B
x. -bisabolol A

-cariofileno
H O O O H H O O artemisinina

O partenolido O

-santonina

-cadineno

Biosntesis de terpenos. Diterpenos

OPP farnesil PP (FPP) catin allico IPP
adicin electroflica resulta en un carbocaton terciario

OPP

OPP HR
prdida estereoespecfica de un protn

HS

OPP geranil geranil PP (C20) (GGPP) Diterpenos

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Ciclacin de diterpenos

A partir del geranilgeranil pirofosfato como sustrato, las ciclases pueden iniciar la formacin de enlaces siguiendo 2 rutas: Tipo A: el grupo Pirofosfato se disocia, con ataque subsecuente por el doble enlace Tipo B: el doble enlace es protonado, generando un catin que es atacado por otro doble enlace

Ciclaciones Tipo A
Ciclacin inicia con la ionizacin del difosfato

OPP

GGPP

Cembrene A

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Ciclaciones Tipo B
Ciclacin inicia con la protonacin del doble enlace 14,15

PPO

PPO

PPO

H Enz-H

Labdanes Clerodanes

GGPP

Ciclacin del esqueleto del taxano

:B-Enz Type A
OPP H

H-B+-Enz
H

Type B
H H

GGPP
AcO HO H H H H H H H H HO BzO AcO O O OH

Enz-B:

taxa-4,11-diene

Baccatin III

Ciclacin de diterpenos Tipo A seguida por ciclacin Tipo B

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Biosntesis de terpenos. Triterpenos

OPP FPP
escualeno sintasa 1' 3'

PPO
1

2'

FPP

* caton allico H*
adicin electroflica para dar un catin terciario

OPP

prdida de un protn con formacin de un anillo ciclopropano

Biosntesis de terpenos. Triterpenos

prdida de PP

OPP

con formacin de catin primario

*
H pre-escualen PP * *
neutralizacin del catin por ataque del hidruro W-M desplazamiento alqulico 1,3 ruptura del enlaceproduce un alqueno y un catin allico ms favorable

H
carbocatin 3 mas estable

H *

H *

H (NADPH)

escualeno

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escualeno O2 NADPH H

O H

xido de escualeno

silla-bote-silla-bote xido de escualeno

H
2 1 4 5 10 6 9 7 8 2 1 4 5 10 6

H
9 7 8

HO 3

H H

HO 3

H H

catin protosterilo

catin protosterilo

la prdida de H9 crea un doble enlace

H

H H H H H HO H

H HO H

formacin del anillo ciclopropano y prdida del protn del metilo en C10

HO H

HO

H H lanosterol (animales y hongos) HO

H cicloartenol (plantas)

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Esteroles en plantas
Funcin de los esteroles en plantas: aumento de la viscosidad y estabilidad de las membranas plasmticas Estigmasterol y sitosterol son los 2 esteroles ms abundantes en las plantas (>70%).

Esteroles en plantas. Fitosteroles

Si bien las plantas pueden presentar ms de 150 esteroles, el colesterol se encuentra slo en trazas Algunos fitosteroles cumplen un rol en el desarrollo de las plantas (ej. brasinolidos)

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Biosntesis del Colesterol

O O OPP HO

Acetate

IPP

Squalene

Cholesterol

Biosntesis de terpenos. Tetraterpenos

OPP geranil geranil PP (C20) (GGPP)

PPO GGPP
adicin electroflica da un catin terciario

catin allico H H

OPP

prdida de un protn con formacin de un anillo ciclopropano

OPP

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prdida de PP da un catin primario

excepto por la prdida final del protn, esta secuencia es anloga a la de la formacin del pre-escualeno

W-M desplazamineto 1,3-alquilo genera un nuevo anillo ciclopropanoy un catin terciario mas estable

H H
la prdida de un protn genera un alqueno ruptura del enlace forma un alqueno y un catin allico mas favorable

Z-fitoeno (C40)

secuencia de reacciones de desaturacin En plantas y hongos el doble enlace central tambin sufre isomerizacin Z E

licopeno (C40)

Degradacinde tetraterpenos
a b

la ruptura central genera 2 molculas de retinal

O2

-caroteno ruptura central a O

acortamientos de cadena oxidativos

O2 ruptura excntrica b

la ruptura excntrica genera 1 molcula de retinal

retinal NADH
desaturacin extiende la conjugacin

OH

OH

diterpeno formado en los mamferos a partir del metabolismo oxidativo de un tetraterpeno (-caroteno) en la mucosa intestinal

retinol (vitamina A1)

dihidroretinol (vitamina A2)

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11

E OH

retinol NADPH H
11

E O

ruptura hidroltica de la base de Schiff

H N H

opsina

retinal
isomerizacin enzimtica trans-cis del doble enlace 11,12 formacin de una base de Schiff (imina) con el grupo amino de una protena

absorcin de enererga luminosa restaura la configuracin trans del doble enlace 11,12

11

11

H2N-opsina

H 11-cis-retinal

impulso nervioso al cerebro h

opsina H rodopsina N H

retinol

retinal 11-cis-retinal

rodopsina H2N-opsina

Degradacin de los carotenoides en C9, C10, C11, C13-norisoprenoides

CHO O O

C9

C10

C11

C13

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Preniltransferasas
Prenilacin: adiciones secuenciales de unidades C5 al isopentenil pirofosfato (IPP), son catalizadas por preniltransferasas especiales (se nombran luego del nombre del producto formado) La prenilacin no se limita slo al alargamiento de cadena que involucra al IPP; puede ocurrir con tomos de C, O, N y S, en un amplio rango de compuestos no-terpenoides, incluyendo las protenas

Ejemplo de preniltransferasas
O n = 1-12 H n O O n = 3-10 H n

ubiquinonona -n (coenzima Qn)

R1

plastoquinonona -n
OH R2

R1 = R2 = Me, -tocoferol R1 = H, R2 = Me, -tocoferol R1 = Me, R2 = H, -tocoferol R1 = R2 = H, -tocoferol

H 3

(vitamina E)
O n = 1-13

H 3

H n

filoquinona (vitamina K1, fitomenadiona)

menaquinona-n (vitamina K2)

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Terpeno sintasas

Los productos de la prenilacin conducen a reacciones de las que se obtiene una amplia variedad de compuestos terpnicos Estas reacciones pueden estar relacionadas con ciclaciones, las que son catalizadas por terpeno sintasas

Mecanismo de reaccion de las monoterpeno sintasa

Las monoterpeno, sesquiterpeno, y diterpeno sintasas generalmente son llamadas ciclasas porque determinan las estructuras bsicas (cclicas y anillos multiples) de estos terpenos Las monoterpeno sintasas catalizan la formacin de monoterpenos comenzando com la ionizacin del GPP (geranil difosfato)

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Terpenos. Polmeros superiores

n = 103 - 105

n = 102- 104

cis (Z) goma Hevea brasiliensis (Euphorbiaceae)

n n

trans (E) gutta Palaquium gutta (Sapotaceae)

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