cido desoxirribonucleico

ADN redirige aqu. Para otras acepciones, vase ADN (desambiguacin). DNA redirige aqu. Para otras acepciones, vase DNA (desambiguacin).

Situacin del ADN dentro de una clula eucariota.

El cido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado comoADN, es un cido nucleico que contiene instrucciones genticasusadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los organismosvivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisinhereditaria. El papel principal de la molcula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de informacin. Muchas veces, el ADN es comparado con un plano o una receta, o un cdigo, ya que contiene las instrucciones necesarias para construir otros componentes de las clulas, como las protenas y las molculas deARN. Los segmentos de ADN que llevan esta informacin gentica son llamados genes, pero las otras secuencias de ADN tienen propsitos estructurales o toman parte en la regulacin del uso de esta informacin gentica. Desde el punto de vista qumico, el ADN es un polmero de nucletidos, es decir, un polinucletido. Un polmero es un compuesto formado por muchas unidades simples conectadas entre s, como si fuera un largo tren formado por vagones. En el ADN, cadavagn es un nucletido, y cada nucletido, a su vez, est formado por un azcar (la desoxirribosa), una base nitrogenada (que puede seradeninaA, timinaT, citosinaC o guaninaG) y un grupo fosfatoque acta como enganche de cada vagn con el siguiente. Lo que distingue a un vagn (nucletido) de otro es, entonces, la

base nitrogenada, y por ello la secuencia del ADN se especifica nombrando slo la secuencia de sus bases. La disposicin secuencial de estas cuatro bases a lo largo de la cadena (el ordenamiento de los cuatro tipos de vagones a lo largo de todo el tren) es la que codifica la informacin gentica: por ejemplo, una secuencia de ADN puede ser ATGCTAGATCGC... En los organismos vivos, el ADN se presenta como una doble cadena de nucletidos, en la que las dos hebras estn unidas entre s por unas conexiones denominadas puentes de hidrgeno.1 Para que la informacin que contiene el ADN pueda ser utilizada por la maquinaria celular, debe copiarse en primer lugar en unostrenes de nucletidos, ms cortos y con unas unidades diferentes, llamados ARN. Las molculas de ARN se copian exactamente del ADN mediante un proceso denominado transcripcin. Una vez procesadas en el ncleo celular, las molculas de ARN pueden salir alcitoplasma para su utilizacin posterior. La informacin contenida en el ARN se interpreta usando el cdigo gentico, que especifica la secuencia de los aminocidos de las protenas, segn una correspondencia de un triplete de nucletidos (codn) para cada aminocido. Esto es, la informacin gentica (esencialmente: qu protenas se van a producir en cada momento del ciclo de vida de una clula) se halla codificada en las secuencias de nucletidos del ADN y debe traducirse para poder funcionar. Tal traduccin se realiza usando el cdigo gentico a modo de diccionario. El diccionario "secuencia de nucletido-secuencia de aminocidos" permite el ensamblado de largas cadenas de aminocidos (las protenas) en el citoplasma de la clula. Por ejemplo, en el caso de la secuencia de ADN indicada antes (ATGCTAGATCGC...), la ARN polimerasa utilizara como molde la cadena complementaria de dicha secuencia de ADN (que sera TAC-GAT-CTA-GCG-...) para transcribir una molcula de ARNm que se leera AUG-CUA-GAU-CGC-... ; el ARNm resultante, utilizando el cdigo gentico, se traducira como la secuencia de aminocidos metionina-leucinacido asprtico-arginina-... Las secuencias de ADN que constituyen la unidad fundamental, fsica y funcional de la herencia se denominan genes. Cada gen contiene una parte que se transcribe a ARN y otra que se encarga de definir cundo y dnde deben expresarse. La informacin contenida en los genes (gentica) se emplea para generar ARN y protenas, que son los componentes bsicos de las clulas, los "ladrillos" que se utilizan para la construccin de los orgnulos u organelos celulares, entre otras funciones. Dentro de las clulas, el ADN est organizado en estructuras llamadas cromosomas que, durante el ciclo celular, se duplican antes de que la clula se divida. Los organismos eucariotas (por ejemplo, animales, plantas, y hongos) almacenan la mayor parte de su ADN dentro del ncleo celular y una mnima parte en elementos celulares llamados mitocondrias, y en los plastos y los centros organizadores de microtbulos o centrolos, en caso de tenerlos; los organismos procariotas (bacterias y arqueas) lo almacenan en elcitoplasma de la clula, y, por ltimo, los virus ADN lo hacen en el interior de la cpsida de naturaleza proteica. Existen multitud de protenas, como por ejemplo las histonas y los factores de transcripcin, que se unen al ADN dotndolo de una

estructura tridimensional determinada y regulando su expresin. Los factores de transcripcin reconocen secuencias reguladoras del ADN y especifican la pauta de transcripcin de los genes. El material gentico completo de una dotacin cromosmica se denomina genomay, con pequeas variaciones, es caracterstico de cada especie.

Historia de la gentica[editar editar fuente]

Artculo principal: Historia de la gentica.

Friedrich Miescher, bilogo y mdico suizo (1844-1895).

El ADN lo aisl por primera vez, durante el invierno de 1869, el mdico suizo Friedrich Miescher mientras trabajaba en la Universidad de Tubinga. Miescher realizaba experimentos acerca de la composicin qumica del pus de vendas quirrgicas desechadas cuando not un 2 3 precipitado de una sustancia desconocida que caracteriz qumicamente ms tarde. Lo 4 llam nuclena, debido a que lo haba extrado a partir de ncleos celulares. Se necesitaron casi 70 aos de investigacin para poder identificar los componentes y laestructura de los cidos nucleicos. En 1919 Phoebus Levene identific que un nucletido est formado por una base nitrogenada, 5 un azcar y un fosfato. Levene sugiri que el ADN generaba una estructura con forma de solenoide (muelle) con unidades de nucletidos unidos a travs de los grupos fosfato. En 1930 Levene y su maestro Albrecht Kossel probaron que la nuclena de Miescher es un cido desoxirribonucleico (ADN) formado por cuatro bases nitrogenadas (citosina (C),timina (T), adenina (A) y guanina (G)), el azcar desoxirribosa y un grupo fosfato, y que, en su estructura bsica, el nucletido est compuesto por un azcar unido a la base y al 6 fosfato. Sin embargo, Levene pensaba que la cadena era corta y que las bases se repetan en un orden fijo. En 1937 William Astbury produjo el primer patrn de difraccin de rayos Xque 7 mostraba que el ADN tena una estructura regular.

Maclyn McCarty con Francis Crick y James D Watson.

La funcin biolgica del ADN comenz a dilucidarse en 1928, con una serie bsica de experimentos de la gentica moderna realizados por Frederick Griffith, quien estaba trabajando con cepas "lisas" (S) o "rugosas" (R) de la bacteria Pneumococcus (causante de la neumona), segn la presencia (S) o no (R) de una cpsula azucarada, que es la que confiere virulencia (vase tambin experimento de Griffith). La inyeccin de neumococos S vivos en ratones produce la muerte de stos, y Griffith observ que, si inyectaba ratones con neumococos R vivos o con neumococos S muertos por calor, los ratones no moran. Sin embargo, si inyectaba a la vez neumococos R vivos y neumococos S muertos, los ratones moran, y en su sangre se podan aislar neumococos S vivos. Como las bacterias muertas no pudieron haberse multiplicado dentro del ratn, Griffith razon que deba producirse algn tipo de cambio o transformacin de un tipo bacteriano a otro por medio de una transferencia de alguna sustancia activa, que denomin principio transformante. Esta sustancia proporcionaba la capacidad a los neumococos R de producir una cpsula azucarada y transformarse as en virulentas. En los siguientes 15 aos, estos experimentos iniciales se replicaron mezclando distintos tipos de cepas bacterianas muertas por el calor con otras vivas, tanto en ratones ( in vivo) como en 8 tubos de ensayo (in vitro). La bsqueda del factor transformante que era capaz de hacer virulentas a cepas que inicialmente no lo eran continu hasta 1944, ao en el cual Oswald Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty realizaron un experimento hoy clsico. Estos investigadores extrajeron la fraccin activa (el factor transformante) y, mediante anlisis qumicos, enzimticos y serolgicos, observaron que no contena protenas, ni lpidos no ligados, ni polisacridos activos, sino que estaba constituido principalmente por "una forma viscosa de cido desoxirribonucleico altamente polimerizado", es decir, ADN. El ADN extrado de las cepas bacterianas S muertas por el calor lo mezclaron "in vitro" con cepas R vivas: el resultado fue que se formaron colonias bacterianas S, por lo que se concluy inequvocamente 9 que el factor o principio transformante era el ADN. A pesar de que la identificacin del ADN como principio transformante an tard varios aos en ser universalmente aceptada, este descubrimiento fue decisivo en el conocimiento de la base molecular de la herencia, y constituye el nacimiento de la gentica molecular. Finalmente, el papel exclusivo del ADN en la heredabilidad fue confirmado en 1952 mediante los experimentos de Alfred Hershey y Martha Chase, en los cuales comprobaron que el fago 10 T2 transmita su informacin gentica en su ADN, pero no en su protena (vase tambin experimento de Hershey y Chase). En cuanto a la caracterizacin qumica de la molcula, en 1940 Chargaff realiz algunos experimentos que le sirvieron para establecer las proporciones de las bases nitrogenadas en el ADN. Descubri que las proporciones de purinas eran idnticas a las de pirimidinas, la

"equimolecularidad" de las bases ([A]=[T], [G]=[C]) y el hecho de que la cantidad de G+C en una determinada molcula de ADN no siempre es igual a la cantidad de A+T y puede variar 6 desde el 36 hasta el 70 por ciento del contenido total. Con toda esta informacin y junto con los datos de difraccin de rayos X proporcionados por Rosalind Franklin, James Watson y Francis Crick propusieron en1953 el modelo de la doble hlice de ADN para 11 representar la estructura tridimensional del polmero. En una serie de cinco artculos en el mismo nmero de Nature se public la evidencia experimental que apoyaba el modelo de 12 Watson y Crick. De stos, el artculo de Franklin y Raymond Gosling fue la primera 13 14 publicacin con datos de difraccin de rayos X que apoyaba el modelo de Watson y Crick, y en ese mismo nmero de Nature tambin apareca un artculo sobre la estructura del ADN 15 de Maurice Wilkins y sus colaboradores. Watson, Crick y Wilkins recibieron conjuntamente, en 1962, despus de la muerte de Rosalind 16 Franklin, el Premio Nobel en Fisiologa o Medicina. Sin embargo, el debate contina sobre 17 quin debera recibir crdito por el descubrimiento.

Propiedades fsicas y qumicas[editar editar fuente]

Estructura qumica del ADN: dos cadenas de nucletidos conectadas mediante puentes de hidrgeno, que aparecen como lneas punteadas.

El ADN es un largo polmero formado por unidades repetitivas, losnucletidos. Una doble cadena de ADN mide de 22 a 26angstroms (2,2 a 2,6 nanmetros) de ancho, y una unidad (un 20 nucletido) mide 3,3 (0,33 nm) de largo. Aunque cada unidad individual que se repite es muy pequea, los polmeros de ADN pueden ser molculas enormes que contienen millones denucletidos. Por ejemplo, el cromosoma humano ms largo, elcromosoma nmero 1, tiene 21 aproximadamente 220 millones de pares de bases.

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En los organismos vivos, el ADN no suele existir como una molcula individual, sino como una pareja de molculas estrechamente asociadas. Las dos cadenas de ADN se enroscan sobre s mismas formando una especie de escalera de caracol, denominada doble hlice. El modelo de estructura en doble hlice fue propuesto en 1953por James Watson y Francis Crick (el artculo Molecular Structure of Nucleic Acids: A Structure for Deoxyribose Nucleic Acid fue publicado el 25 de abril de 1953 en Nature), despus de obtener una imagen de la estructura 22 de doble hlice gracias a la refraccin por rayos X hecha por Rosalind Franklin. El xito de este modelo radicaba en su consistencia con las propiedades fsicas y qumicas del ADN. El estudio mostraba adems que la complementariedad de bases poda ser relevante en su replicacin, y tambin la importancia de la secuencia de bases como portadora de 2324 25 informacin gentica. Cada unidad que se repite, el nucletido, contiene un segmento de la estructura de soporte (azcar + fosfato), que mantiene la cadena unida, y una base, que interacciona con la otra cadena de ADN en la hlice. En general, una base ligada a un azcar se denomina nuclesido y una base ligada a un azcar y a uno o ms grupos fosfatos recibe el nombre de nucletido. Cuando muchos nucletidos se encuentran unidos, como ocurre en el ADN, el polmero 26 resultante se denomina polinucletido.

Componentes[editar editar fuente]

Estructura de soporte: La estructura de soporte de una hebra de ADN est formada por 27 unidades alternas de grupos fosfato yazcar. El azcar en el ADN es una pentosa, concretamente, la desoxirribosa. cido fosfrico:

Enlace fosfodister. El grupo fosfato (PO43-) une el carbono 5' del azcar de un nuclesido con el carbono 3' del siguiente.

Su frmula qumica es H3PO4. Cada nucletido puede contener uno (monofosfato:AMP), dos (difosfato: ADP) o tres (trifosfato: ATP) grupos de cido fosfrico, aunque como monmeros constituyentes de los cidos nucleicos slo aparecen en forma de nuclesidos monofosfato. Desoxirribosa: Es un monosacrido de 5 tomos de carbono (una pentosa) derivado de la ribosa, que forma parte de la estructura de nucletidos del ADN. Su frmula es C5H10O4. Una de las principales diferencias entre el ADN y el ARN es el azcar, pues en el ARN la 2desoxirribosa del ADN es reemplazada por una pentosa alternativa, laribosa. Las molculas de azcar se unen entre s a travs de grupos fosfato, que formanenlaces fosfodister entre los tomos de carbono tercero (3, tres prima) y quinto (5, cinco prima) de dos anillos adyacentes de azcar. La formacin de enlacesasimtricos implica que cada hebra de ADN tiene una direccin. En una doble hlice, la direccin de los nucletidos en una hebra (3 5) es opuesta a la direccin en la otra hebra (5 3). Esta organizacin de las hebras de ADN se denomina antiparalela; son cadenas paralelas, pero con direcciones opuestas. De la misma manera, los extremos asimtricos de las hebras de ADN se denominanextremo 5 (cinco prima) y extremo 3 (tres prima), respectivamente. Bases nitrogenadas:
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Las cuatro bases nitrogenadas mayoritarias que se encuentran en el ADN son laadenina (A), la citosina (C), la guanina (G) y la timina (T). Cada una de estas cuatro bases est unida al armazn de azcar-fosfato a travs del azcar para formar el nucletido completo (base-azcar-fosfato). Las bases son compuestos heterocclicos y aromticos con dos o ms tomos de nitrgeno, y, dentro de las bases mayoritarias, se clasifican en dos grupos: las bases pricas o purinas(adenina y guanina), derivadas de la purina y formadas por dos anillos unidos entre s, y las bases pirimidnicas o bases pirimdicaso pirimidinas (citosina y timina), derivadas de la pirimidina y con un solo anillo.
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En los cidos nucleicos existe una quinta base

pirimidnica, denominada uracilo (U), que normalmente ocupa el lugar de la timina en el ARN y difiere de sta en que carece de un grupo metilo en su anillo. El uracilo no se encuentra habitualmente en el ADN, slo aparece raramente como un producto residual de la degradacin de la citosina por procesos de desaminacin oxidativa.

Timina: 2, 4-dioxo, 5-metilpirimidina.

Timina:

En el cdigo gentico se representa con la letra T. Es un derivado pirimidnico con un grupo oxoen las posiciones 2 y 4, y un grupo metil en la posicin 5. Forma el nuclesido timidina (siempre desoxitimidina, ya que slo aparece en el ADN) y el nucletido timidilato o timidina monofosfato (dTMP). En el ADN, la timina siempre se empareja con la adenina de la cadena complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, T=A. Su frmula qumica es C5H6N2O2 y su nomenclatura 2, 4-dioxo, 5metilpirimidina.

Citosina: 2-oxo, 4-aminopirimidina.

Citosina:

En el cdigo gentico se representa con la letra C. Es un derivado pirimidnico, con un grupo amino en posicin 4 y un grupo oxo en posicin 2. Forma el nuclesido citidina (desoxicitidina en el ADN) y elnucletido citidilato o (desoxi)citidina monofosfato (dCMP en el ADN, CMP en el ARN). La citosina siempre se empareja en el ADN con la guanina de la cadena complementaria mediante un triple enlace,CG. Su frmula qumica es C4H5N3O y su nomenclatura 2-oxo, 4 aminopirimidina. Su masa moleculares de 111,10 unidades de masa atmica. La citosina se descubri en 1894, al aislarla del tejido del timode carnero.

Adenina: 6-aminopurina.

Adenina:

En el cdigo gentico se representa con la letra A. Es un derivado de la purina con un grupo amino en la posicin 6. Forma el nuclesidoadenosina (desoxiadenosina en el ADN) y el nucletido adenilato o (desoxi)adenosina monofosfato (dAMP, AMP). En el ADN siempre se empareja con la timina de la cadena complementaria mediante 2 puentes de hidrgeno, A=T. Su frmula qumica es C5H5N5 y su nomenclatura 6aminopurina. La adenina, junto con la timina, fue descubierta en 1885 por el mdico alemn Albrecht Kossel.

Guanina: 6-oxo, 2-aminopurina.

Guanina:

En el cdigo gentico se representa con la letra G. Es un derivado prico con un grupo oxo en la posicin 6 y un grupo amino en la posicin 2. Forma el nuclesido (desoxi)guanosina y el nucletido guanilato o (desoxi)guanosina monofosfato (dGMP, GMP). La guanina siempre se empareja en el ADN con la citosina de la cadena complementaria mediante tres enlaces de hidrgeno, GC. Su frmula qumica es C5H5N5O y su nomenclatura 6-oxo, 2-aminopurina. Tambin existen otras bases nitrogenadas (las llamadas bases nitrogenadas minoritarias), derivadas de forma natural o sinttica de alguna otra base mayoritaria. Lo son por ejemplo la hipoxantina, relativamente abundante en el tRNA, o la cafena, ambas derivadas de la adenina; otras, como elaciclovir, derivadas de la guanina, son anlogos sintticos usados en terapia antiviral; otras, como una de las derivadas del uracilo, son antitumorales.

Las bases nitrogenadas tienen una serie de caractersticas que les confieren unas propiedades determinadas. Una caracterstica importante es su carcter aromtico, consecuencia de la presencia en el anillo de dobles enlaces en posicin conjugada. Ello les confiere la capacidad de absorber luz en la zona ultravioleta del espectro en torno a los 260 nm, lo cual puede aprovecharse para determinar el coeficiente de extincin del ADN y hallar la concentracin existente de los cidos nucleicos. Otra de sus caractersticas es que presentan tautomera o isomera de grupos funcionales, debido a que un tomo de hidrgeno unido a otro tomo puede migrar a una posicin vecina; en las bases nitrogenadas se dan dos tipos de tautomeras: tautomera lactama-lactima, donde el hidrgeno migra del nitrgeno al oxgeno del grupo oxo (forma lactama) y viceversa (forma lactima), y tautomera iminaamina primaria, donde el hidrgeno puede estar formando el grupo amina (forma amina primaria) o migrar al nitrgeno adyacente (forma imina). La adenina slo puede presentar tautomera amina-imina, la timina y el uracilo muestran tautomera doble lactama-lactima, y la guanina y citosina pueden presentar ambas. Por otro lado, y aunque se trate de molculas apolares, las bases nitrogenadas presentan suficiente carcterpolar como para establecer puentes de hidrgeno, ya que tienen tomos muy electronegativos (nitrgeno y oxgeno) que presentan carga parcial negativa, y tomos de hidrgeno con carga parcial positiva, de manera que se forman dipolos que permiten que se formen estos enlaces dbiles. Se estima que el genoma humano haploide tiene alrededor de 3.000 millones de pares de bases. Para indicar el tamao de las molculas de ADN se indica el nmero de pares de bases, y como derivados hay dos unidades de medida muy utilizadas, la kilobase(kb), que equivale a 1.000 pares de bases, y la megabase (Mb), que equivale a un milln de pares de bases.

Apareamiento de bases[editar editar fuente]

Vase tambin: Par de bases.

Un par de bases CG con tres puentes de hidrgeno.

Un par A=T con dos puentes de hidrgeno. Los puentes de hidrgeno se muestran como lneas discontinuas.

La dble hlice de ADN se mantiene estable mediante la formacin de puentes de hidrgenoentre las bases asociadas a cada una de las dos hebras. Para la formacin de un enlace de hidrgeno una de las bases debe presentar un "donador" de hidrgenos con un tomo de hidrgeno con carga parcial positiva (-NH2 o -NH) y la otra base debe presentar un grupo "aceptor" de hidrgenos con un tomo cargado electronegativamente (C=O o N). Los puentes de hidrgeno son uniones ms dbiles que los tpicos enlaces qumicos covalentes, como los que conectan los tomos en cada hebra de ADN, pero ms fuertes que interacciones hidrfobas individuales, enlaces de Van der Waals, etc. Como los puentes de hidrgeno no son enlaces covalentes, pueden romperse y formarse de nuevo de forma relativamente sencilla. Por esta razn, las dos hebras de la doble hlice pueden separarse como una cremallera, bien 28 por fuerza mecnica o por alta temperatura. La doble hlice se estabiliza adems por el efecto hidrofbico y el apilamiento, que no se ven influidos por la secuencia de 29 bases del ADN. Cada tipo de base en una hebra forma un enlace nicamente con un tipo de base en la otra hebra, lo que se denomina complementariedad de las bases. As, las purinas forman enlaces con las pirimidinas, de forma que A se enlaza slo con T, y C slo con G. La organizacin de dos nucletidos apareados a lo largo de la doble hlice se denominaapareamiento de bases. Este emparejamiento corresponde a la observacin ya realizada por Erwin 30 Chargaff (1905-2002), que mostr que la cantidad de adenina era muy similar a la cantidad de timina, y que la cantidad de citosina era igual a la cantidad de guanina en el ADN. Como resultado de esta complementariedad, toda la informacin contenida en la secuencia de doble hebra de la hlice de ADN est duplicada en cada hebra, lo cual es fundamental durante el proceso de replicacin del ADN. En efecto, esta interaccin reversible y especfica entre pares

de bases complementarias es crtica para todas las 18 funciones del ADN en los organismos vivos. Como se ha indicado anteriormente, los dos tipos de pares de bases forman un nmero diferente de enlaces de hidrgeno: A=T forman dos puentes de hidrgeno, y CG forman tres puentes de hidrgeno (ver imgenes). El par de bases GC es por tanto ms fuerte que el par de bases AT. Como consecuencia, tanto el porcentaje de pares de bases GC como la longitud total de la doble hlice de ADN determinan la fuerza de la asociacin entre las dos hebras de ADN. Las dobles hlices largas de ADN con alto contenido en GC tienen hebras que interaccionan ms fuertemente que las dobles hlices cortas con alto contenido 31 en AT. Por esta razn, las zonas de la doble hlice de ADN que necesitan separarse fcilmente tienden a tener un alto contenido en AT, como por ejemplo la secuencia TATAAT de 32 la caja de Pribnow de algunos promotores. En el laboratorio, la fuerza de esta interaccin puede medirse buscando la temperatura requerida para romper los puentes de hidrgeno, la temperatura de fusin (tambin denominado valor Tm, del inglsmelting temperature). Cuando todas las pares de bases en una doble hlice se funden, las hebras se separan en solucin en dos hebras completamente independientes. Estas molculas de ADN de hebra simple no tienen una nica forma comn, sino que algunas 33 conformaciones son ms estables que otras.

Otros tipos de pares de bases[editar editar fuente]

Par de bases A=T de tipo Watson-Crick. En azul el donador de hidrgenos y en rojo el aceptor.

Par de bases A=T de tipo Watson-Crick reverso. En azul el donador de hidrgenos y en rojo el aceptor. Ntese que la pirimidina ha sufrido un giro de 180 sobre el eje del carbono 6.

Existen diferentes tipos de pares de bases que se pueden formar segn el modo como se forman los puentes de hidrgeno. Los que se observan en la doble hlice de ADN son los llamados pares de bases Watson-Crick, pero tambin existen otros posibles pares de bases, como los denominadosHoogsteen y Wobble u oscilante, que pueden aparecer en circunstancias particulares. Adems, para cada tipo existe a su vez el mismo par reverso, es decir, el que se da si se gira la base pirimidnica 180 sobre su eje. Watson-Crick (pares de bases de la doble hlice): los grupos de la base prica que intervienen en el enlace de hidrgeno son los que corresponden a las posiciones 1 y 6 (N aceptor y -NH2 donador si la purina es una A) y los grupos de la base pirimidnica, los que se encuentran en las posiciones 3 y 4 (-NH donador y C=O aceptor si la pirimidina es una T). En el par de bases Watson-Crick reverso participaran los grupos de las posiciones 2 y 3 de la base pirimidnica (ver imgenes). Hoogsteen: en este caso cambian los grupos de la base prica, que ofrece una cara diferente (posiciones 6 y 7) y que forman enlaces con los grupos de las pirimidinas de las posiciones 3 y 4 (como en Watson-Crick). Tambin puede haber Hoogsteen reversos. Con este tipo de enlace pueden unirse A=U (Hoogsteen y Hoogsteen reverso) y A=C (Hoogsteen reverso). Wobble u oscilante: este tipo de enlace permite que se unan guanina y citosina con un doble enlace (G=T). La base prica (G) forma enlace con los grupos de las

posiciones 1 y 6 (como en Watson-Crick) y la pirimidina (T) con los grupos de las posiciones 2 y 3. Este tipo de enlace no funcionara con A=C, ya que quedaran enfrentados los 2 aceptores y los 2 donadores, y slo se podra dar en el caso inverso. Encontramos pares de bases de tipo oscilante en el ARN, durante el apareamiento de codn yanticodn. Con este tipo de enlace pueden unirse G=U (oscilante y oscilante reverso) y A=C (oscilante reverso). En total, en su forma tautomrica mayoritaria, existen 28 posibles pares de bases nitrogenadas: 10 posibles pares de bases purina-pirimidina (2 pares Watson-Crick y 2 Watson Crick reverso, 1 par Hoogsteen y 2 pares Hoogsteen reverso, 1 par oscilante y 2 pares oscilante reverso), 7 pares homo purina-purina (A=A, G=G), 4 pares A=G y 7 pares pirimidina-pirimidina. Esto sin contar con los pares de bases que pueden formarse si tambin tenemos en cuenta las otras formas tautomricas minoritarias de las bases nitrogenadas; stos, adems, pueden ser responsables de mutaciones puntuales por sustitucin de tipo transicin.

Estructura[editar editar fuente]

El ADN es una molcula bicatenaria, es decir, est formada por dos cadenas dispuestas de forma antiparalela y con las bases nitrogenadas enfrentadas. En su estructura 34 35 tridimensional, se distinguen distintos niveles: 1. Estructura primaria: Secuencia de nucletidos encadenados. Es en estas cadenas donde se encuentra la informacin gentica, y dado que el esqueleto es el mismo para todos, la diferencia de la informacin radica en la distinta secuencia de bases nitrogenadas. Esta secuencia presenta un cdigo, que determina una informacin u otra, segn el orden de las bases. 2. Estructura secundaria: Es una estructura en doble hlice. Permite explicar el almacenamiento de la informacin gentica y el mecanismo de duplicacin del ADN. Fue postulada por Watson y Crick, basndose en la difraccin de rayos X que haban realizado Franklin y Wilkins, y en la equivalencia de bases de Chargaff, segn la

cual la suma de adeninas ms guaninas es igual a la suma de timinas ms citosinas. Es una cadena doble, dextrgira o levgira, segn el tipo de ADN. Ambas cadenas son complementarias, pues la adenina y la guanina de una cadena se unen, respectivamente, a la timina y la citosina de la otra. Ambas cadenas son antiparalelas, pues el extremo 3 de una se enfrenta al extremo 5 de la homloga. Existen tres modelos de ADN. El ADN de tipo B es el ms abundante y es el que tiene la estructura descrita por Watson y Crick. 3. Estructura terciaria: Se refiere a cmo se almacena el ADN en un espacio reducido, para formar los cromosomas. Vara segn se trate de organismos procariotas o eucariotas: 2. En procariotas el ADN se pliega como una sper-hlice, generalmente en forma circular y asociada a una pequea cantidad de protenas. Lo mismo ocurre en orgnulos celulares como las mitocondrias y en los cloroplastos. 3. En eucariotas, dado que la cantidad de ADN de cada cromosoma es muy grande, el empaquetamiento ha de ser ms complejo y compacto; para ello se necesita la presencia de protenas, como las histonas y otras protenas de naturaleza no histnica (en los espermatozoides estas protenas son las protaminas). 4. Estructura cuaternaria: La cromatina presente en el ncleo tiene un grosor de 300 , pues la fibra de cromatina de 100 se enrolla formando una fibra de cromatina de 300 . El enrollamiento de los nucleosomas recibe el nombre de solenoide. Dichos solenoides se enrollan formando la cromatina del ncleo interfsico de la clula eucariota. Cuando la clula entra en divisin, el ADN se compacta ms, formando as los cromosomas.
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Estructuras en doble hlice[editar editar fuente]

De izquierda a derecha, las estructuras de ADN A, B y Z.

El ADN existe en muchas conformaciones. Sin embargo, en organismos vivos slo se han observado las conformaciones ADN-A, ADN-B y ADN-Z. La conformacin que adopta el ADN depende de su secuencia, la cantidad y direccin de superenrollamiento que presenta, la presencia de modificaciones qumicas en las bases y las condiciones de la solucin, tales como la concentracin 36 de iones de metales y poliaminas. De las tres conformaciones, la forma "B" es la ms comn en las 37 condiciones existentes en las clulas. Las dos dobles hlices alternativas del ADN difieren en su geometra y dimensiones. La forma "A" es una espiral que gira hacia la derecha, ms amplia que la "B", con una hendidura menor superficial y ms amplia, y una hendidura mayor ms estrecha y profunda. La forma "A" ocurre en condiciones no fisiolgicas en formas deshidratadas de ADN, mientras que en la clula puede producirse en apareamientos hbridos de hebras ADN-ARN, adems 3839 de en complejos enzima-ADN. Los segmentos de ADN en los que las bases han sido modificadas por metilacin pueden sufrir cambios conformacionales mayores y adoptar la forma "Z". En este caso, las hebras giran alrededor del eje de la hlice en una espiral que gira a mano izquierda, lo opuesto a la 40 forma "B" ms frecuente. Estas estructuras poco frecuentes pueden ser reconocidas por protenas especficas que se unen a ADN-Z y posiblemente estn 41 implicadas en la regulacin de la transcripcin.

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Estructuras en cudruplex[editar editar fuente]

Estructura de un ADN en cudruplex formada por repeticiones en los telmeros. La conformacin de la estructura de soporte del ADN difiere significativamente de la tpica estructura en hlice. 42

En los extremos de los cromosomas lineales existen regiones especializadas de ADN denominadas telmeros. La funcin principal de estas regiones es permitir a la clula replicar los extremos cromosmicos utilizando la enzimatelomerasa, puesto que las enzimas que replican el resto del ADN no pueden copiar los extremos 3' de los 43 cromosomas. Estas terminaciones cromosmicas especializadas tambin protegen los extremos del ADN, y evitan que los sistemas de reparacin del ADN en la clula los procesen como ADN daado que debe ser 44 corregido. En las clulas humanas, los telmeros son largas zonas de ADN de hebra sencilla que contienen algunos miles de repeticiones de una nica secuencia 45 TTAGGG. Estas secuencias ricas en guanina pueden estabilizar los extremos cromosmicos mediante la formacin de estructuras de juegos apilados de unidades de cuatro bases, en lugar de los pares de bases encontrados normalmente en otras estructuras de ADN. En este caso, cuatro bases guanina forman unidades con superficie plana que se apilan una sobre otra, para 46 formar una estructura cudruple-G estable. Estas estructuras se estabilizan formando puentes de hidrgeno entre los extremos de las bases y la quelatacin de un metal inico en el centro de cada 47 unidad de cuatro bases. Tambin se pueden formar otras estructuras, con el juego central de cuatro bases

procedente, o bien de una hebra sencilla plegada alrededor de las bases, o bien de varias hebras paralelas diferentes, de forma que cada una contribuye con una base a la estructura central. Adems de estas estructuras apiladas, los telmeros tambin forman largas estructuras en lazo, denominadas lazos telomricos o lazos-T (T-loops en ingls). En este caso, las hebras simples de ADN se enroscan sobre s mismas en un amplio crculo 48 estabilizado por protenas que se unen a telmeros. En el extremo del lazo T, el ADN telomrico de hebra sencilla se sujeta a una regin de ADN de doble hebra porque la hebra de ADN telomrico altera la doble hlice y se aparea a una de las dos hebras. Esta estructura de triple hebra se denomina lazo de desplazamiento o lazo 46 D (D-loop).

Hendiduras mayor y menor[editar editar

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Animacin de la estructura de una seccin de ADN. Las bases se encuentran horizontalmente entre las dos hebras en espiral. Versin ampliada49

Doble hlice: a) Dextrgira, b) Levgira.

La doble hlice es una espiraldextrgira, esto es, cada una de las cadenas de nucletidos gira a derechas; esto puede verificarse si nos fijamos, yendo de abajo a arriba, en la direccin que siguen los segmentos de las hebras que quedan en primer plano. Si las dos hebras giran a derechas se dice que la doble hlice es dextrgira, y si giran a izquierdas, levgira (esta forma puede aparecer en hlices alternativas debido a cambios conformacionales en el ADN). Pero en la conformacin ms comn que adopta el ADN, la doble hlice es dextrgira, girando cada par de bases respecto 50 al anterior unos 36. Cuando las dos hebras de ADN se enrollan una sobre la otra (sea a derechas o a izquierdas), se forman huecos o hendiduras entre una hebra y la otra, dejando expuestos los laterales de las bases nitrogenadas del interior (ver la animacin). En la conformacin ms comn que adopta el ADN aparecen, como consecuencia de los ngulos formados entre los azcares de ambas cadenas de cada par de bases nitrogenadas, dos tipos de hendiduras alrededor de la superficie de la doble hlice: una de ellas, la hendidura o surco mayor, que mide 22 (2,2 nm) de ancho, y la otra, la hendidura o surco menor, que mide 12 (1,2 51 nm) de ancho. Cada vuelta de hlice, que es cuando sta ha realizado un giro de 360 o lo que es lo mismo, de principio de hendidura mayor a final de hendidura menor, medir por tanto 34 , y en cada una de esas vueltas hay unos 10,5 pb.

Hendiduras mayor y menor de la doble hlice.

La anchura de la hendidura mayor implica que los extremos de las bases son ms accesibles en sta, de forma que la cantidad de grupos qumicos expuestos tambin es mayor lo cual facilita la diferenciacin entre los pares de bases A-T, T-A, C-G, G-C. Como consecuencia de ello, tambin se ver facilitado el reconocimiento de secuencias de ADN por parte de diferentes protenas sin la necesidad de abrir la doble hlice. As, protenas como los factores de transcripcin que pueden unirse a secuencias especficas, frecuentemente contactan con los laterales 52 de las bases expuestos en la hendidura mayor. Por el contrario, los grupos qumicos que quedan expuestos en la hendidura menor son similares, de forma que el reconocimiento de los pares de bases es ms difcil; por ello se dice que la hendidura mayor contiene ms 50 informacin que la hendidura menor.

Sentido y antisentido[editar editar fuente]

Artculo principal: Antisentido.

Una secuencia de ADN se denomina "sentido" (en ingls, sense) si su secuencia es la misma que la secuencia de un ARN mensajeroque se traduce en una protena. La secuencia de la hebra de ADN complementaria se denomina "antisentido" (antisense). En ambas hebras de ADN de la doble hlice pueden existir tanto secuencias sentido, que codifican ARNm, como antisentido, que no lo codifican. Es decir, las secuencias que codifican ARNm no estn todas presentes en una sola de las hebras, sino repartidas entre las dos hebras. Tanto en procariotas como en eucariotas se producen ARNs con secuencias antisentido, pero la funcin de esos ARNs 53 no est completamente clara. Se ha propuesto que los ARNs antisentido estn implicados en la regulacin de la expresin gnicamediante apareamiento ARN-ARN:

los ARNs antisentido se aparearan con los ARNm complementarios, bloqueando de esta forma 54 sutraduccin. En unas pocas secuencias de ADN en procariotas y eucariotas (este hecho es ms frecuente en plsmidos y virus), la distincin entre hebras sentido y antisentido es ms difusa, debido a que 55 presentan genes superpuestos. En estos casos, algunas secuencias de ADN tienen una funcin doble, codificando una protena cuando se lee a lo largo de una hebra, y una segunda protena cuando se lee en la direccin contraria a lo largo de la otra hebra. En bacterias, esta superposicin puede estar involucrada en la regulacin de latranscripcin del 56 gen, mientras que en virus los genes superpuestos aumentan la cantidad de informacin que puede 57 codificarse en sus diminutos genomas.

Superenrollamiento[editar editar fuente]

Estructura de molculas de ADN lineales con los extremos fijos y superenrolladas. Por claridad, se ha omitido la estructura en hlice del ADN.

El ADN puede retorcerse como una cuerda en un proceso que se denomina superenrollamiento del ADN(supercoiling, en ingls). Cuando el ADN est en un estado "relajado", una hebra normalmente gira alrededor del eje de la doble hlice una vez cada 10,4 pares de bases, pero si el ADN est retorcido las hebras pueden estar unidas ms estrechamente o ms 58 relajadamente. Si el ADN est retorcido en la direccin de la hlice, se dice que el superenrollamiento es positivo, y las bases se mantienen juntas de forma ms estrecha. Si el ADN se retuerce en la direccin opuesta, el superenrollamiento se llama negativo, y las bases se alejan. En la naturaleza, la mayor parte del ADN tiene un

ligero superenrollamiento negativo que es producido 59 por enzimas denominadas topoisomerasas. Estas enzimas tambin son necesarias para liberar las fuerzas de torsin introducidas en las hebras de ADN durante 60 procesos como la transcripcin y la replicacin.

Modificaciones qumicas[editar editar

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citosina

5-metil-citosina

timina

Estructura de la citosina con y sin el grupo metilo. Tras la desaminacin, la 5-metil-citosina tiene la misma estructura que la timina.

Modificaciones de bases del ADN[editar editar fuente]

Vase tambin: Metilacin.

La expresin de los genes est influenciada por la forma en la que el ADN est empaquetado en cromosomas, en una estructura denominada cromatina. Las modificaciones de bases pueden estar implicadas en el empaquetamiento del ADN: las regiones que presentan una expresin gnica baja o nula normalmente contienen niveles altos de metilacin de las bases citosina. Por ejemplo, la metilacin de citosina produce 5-metil-citosina, que es importante para la 61 inactivacin del cromosoma X. El nivel medio de metilacin vara entre organismos: el gusano Caenorhabditis elegans carece de metilacin de citosina, mientras que los vertebrados presentan un nivel alto - hasta 1% de su ADN contiene 5-metil62 citosina. A pesar de la importancia de la 5-metilcitosina, sta puede desaminarse para generar una base timina. Las citosinas metiladas son por tanto 63 particularmente sensibles a mutaciones. Otras modificaciones de bases incluyen la metilacin de adenina en bacterias y laglicosilacin de uracilo para 64 65 producir la "base-J" en kinetoplastos.

Dao del ADN[editar editar fuente]

Vase tambin: Mutacin.

Benzopireno, el mayor mutgeno deltabaco, unido al ADN.66

El ADN puede resultar daado por muchos tipos de mutgenos, que cambian la secuencia del ADN: agentes alquilantes, adems de radiacin electromagntica de alta energa, como luz ultravioleta y rayos X. El tipo de dao producido en el ADN depende del tipo de mutgeno. Por ejemplo, la luz UV puede daar al ADN produciendo dmeros de timina, que se forman por ligamiento cruzado entre 67 bases pirimidnicas. Por otro lado, oxidantes tales como radicales libres o el perxido de hidrgeno producen mltiples daos, incluyendo modificaciones de bases, sobre todo guanina, y roturas 68 de doble hebra (double-strand breaks). En una clula humana cualquiera, alrededor de 500 bases sufren dao 69 70 oxidativo cada da. De estas lesiones oxidativas, las ms peligrosas son las roturas de doble hebra, ya que son difciles de reparar y pueden producir mutaciones puntuales, insercionesy deleciones de la secuencia de 71 ADN, as como translocaciones cromosmicas. Muchos mutgenos se posicionan entre dos pares de bases adyacentes, por lo que se denominan agentes intercalantes. La mayora de los agentes intercalantes son molculasaromticas y planas, como el bromuro de etidio, la daunomicina, la doxorubicina y latalidomida. Para que un agente intercalante pueda integrarse entre dos pares de bases, stas deben separarse, distorsionando las hebras de ADN y abriendo la doble hlice. Esto inhibe la transcripcin y la replicacin del ADN, causando toxicidad y mutaciones. Por ello, los

agentes intercalantes del ADN son a menudo carcingenos: el benzopireno, lasacridinas, la aflatoxina y el bromuro de etidio son ejemplos bien 72 73 74 conocidos. Sin embargo, debido a su capacidad para inhibir la replicacin y la transcripcin del ADN, estas toxinas tambin se utilizan en quimioterapia para 75 inhibir el rpido crecimiento de las clulas cancerosas. El dao en el ADN inicia una respuesta que activa diferentes mecanismos de reparacin que reconocen lesiones especficas en el ADN, que son reparadas en el momento para recuperar la secuencia original del ADN. Asimismo, el dao en el ADN provoca una parada en el ciclo celular, que conlleva la alteracin de numerosos procesos fisiolgicos, que a su vez implica sntesis, transporte y degradacin de protenas (vase tambin Checkpoint de daos en el ADN). Alternativamente, si el dao genmico es demasiado grande para que pueda ser reparado, los mecanismos de control inducirn la activacin de una serie de rutas celulares que culminarn en la muerte celular.

Funciones biolgicas[editar editar fuente]

Las funciones biolgicas del ADN incluyen el almacenamiento de informacin (genes y genoma), la codificacin de protenas (transcripcin y traduccin) y su autoduplicacin (replicacin del ADN) para asegurar la transmisin de la informacin a las clulas hijas durante la divisin celular.

Genes y genoma[editar editar fuente]

Vanse tambin: Ncleo

celular, Cromatina, Cromosoma y Genoma. El ADN se puede considerar como un almacn cuyo contenido es la informacin (mensaje) necesaria para construir y sostener el organismo en el que reside, la cual se transmite de generacin en generacin. El conjunto de informacin que cumple esta funcin en un organismo dado se denomina genoma, y el ADN que lo constituye, ADN genmico. El ADN genmico (que se organiza en molculas de cromatina que a su vez se ensamblan en cromosomas) se encuentra en el ncleo celular de los eucariotas, adems de pequeas cantidades en las mitocondrias y cloroplastos. En procariotas, el ADN se encuentra en un cuerpo de forma irregular 76 denominado nucleoide.

El ADN codificante[editar editar fuente]

ARN polimerasa T7 (azul) produciendo un ARNm (verde) a partir de un molde de ADN (naranja).77 Vase tambin: Gen.

La informacin gentica de un genoma est contenida en los genes, y al conjunto de toda la informacin que corresponde a un organismo se le denomina su genotipo. Un gen es una unidad de herencia y es una regin de ADN que influye en una caracterstica particular de un organismo (como el color de los ojos, por ejemplo). Los genes contienen un "marco de lectura abierto" (open reading frame) que puede transcribirse, adems de secuencias reguladoras, tales como promotores y enhancers, que controlan la transcripcin del marco de lectura abierto. Desde este punto de vista, las obreras de este mecanismo son las protenas. Estas pueden ser estructurales, como las protenas de los msculos,cartlagos, pelo, etc., o funcionales, como la hemoglobina o las innumerablesenzimas del organismo. La funcin principal de la herencia es la especificacin de las protenas, siendo el ADN una especie de plano o recetapara producirlas. La mayor parte de las veces la modificacin del ADN provocar una disfuncin proteica que dar lugar a la aparicin de alguna enfermedad. Pero en determinadas ocasiones, las modificaciones podrn provocar cambios beneficiosos que darn lugar a individuos mejor adaptados a su entorno. Las aproximadamente treinta mil protenas diferentes en el cuerpo humano estn constituidas por veinte aminocidos diferentes, y una molcula de ADN debe especificar la secuencia en que se unen dichos aminocidos.

En el proceso de elaborar una protena, el ADN de un gen se lee y se transcribe a ARN. Este ARN sirve como mensajero entre el ADN y la maquinaria que elaborar las protenas y por eso recibe el nombre de ARN mensajero o ARNm. El ARN mensajero sirve de molde a la maquinaria que elabora las protenas, para que ensamble los aminocidos en el orden preciso para armar la protena. El dogma central de la biologa molecular estableca que el flujo de actividad y de informacin era: ADN ARN protena. No obstante, en la actualidad ha quedado demostrado que este "dogma" debe ser ampliado, pues se han encontrado otros flujos de informacin: en algunos organismos (virus de ARN) la informacin fluye de ARN a ADN; este proceso se conoce como "transcripcin inversa o reversa", tambin llamada "retrotranscripcin". Adems, se sabe que existen secuencias de ADN que se transcriben a ARN y son funcionales como tales, sin llegar a traducirse nunca a protena: son los ARN no codificantes, como es el 34 35 caso de los ARN interferentes.

El ADN no codificante[editar editar fuente]

El ADN del genoma de un organismo puede dividirse conceptualmente en dos: el que codifica las protenas (los genes) y el que no codifica. En muchas especies, slo una pequea fraccin del genoma codifica protenas. Por ejemplo, slo alrededor del 1,5% del genoma humano consiste en exones que codifican protenas (20.000 a 25.000 genes), mientras que ms 78 del 90% consiste en ADN no codificante. El ADN no codificante (tambin denominado ADN basura o junk DNA) corresponde a secuencias del genoma que no generan una protena (procedentes de transposiciones, duplicaciones, translocaciones y recombinaciones de virus, etc.), incluyendo los intrones. Hasta hace poco tiempo se pensaba que el ADN no codificante no tena utilidad alguna, pero estudios recientes indican que eso es inexacto. Entre otras funciones, se postula que el llamado "ADN basura" 79 regula la expresin diferencial de los genes. Por ejemplo, algunas secuencias tienen afinidad hacia protenas especiales que tienen la capacidad de unirse al ADN (como los homeodominios, los complejos receptores de hormonas esteroides, etc.), con un papel importante en el control de los mecanismos de trascripcin y replicacin. Estas secuencias se llaman frecuentemente "secuencias reguladoras", y los

investigadores suponen que slo se ha identificado una pequea fraccin de las que realmente existen. La presencia de tanto ADN no codificante en genomas eucariticos y las diferencias en tamao del genoma entre especies representan un misterio que es conocido 80 como el "enigma del valor de C". Recientemente, un grupo de investigadores de la Universidad de Yale ha descubierto una secuencia de ADN no codificante que sera la responsable de que los seres humanos hayan desarrollado la capacidad de agarrar y/o manipular 81 objetos o herramientas. Por otro lado, algunas secuencias de ADN desempean un papel estructural en los cromosomas: los telmeros y centrmeroscontienen pocos o ningn gen codificante de protenas, pero son importantes para estabilizar la estructura de los cromosomas. Algunos genes no codifican protenas, pero s se transcriben en ARN: ARN ribosmico, ARN de transferencia y ARN de interferencia(ARNi, que son ARN que bloquean la expresin de genes especficos). La estructura de intrones y exones de algunos genes (como los de inmunoglobulinas y protocadherinas) son importantes por permitir los cortes y empalmes alternativos del preARN mensajero que hacen posible la sntesis de diferentes protenas a partir de un mismo gen (sin esta capacidad no existira el sistema inmune, por ejemplo). Algunas secuencias de ADN no codificante representan pseudogenes que tienen valor evolutivo, ya que permiten la creacin de nuevos genes con nuevas 35 funciones. Otros ADN no codificantes proceden de la duplicacin de pequeas regiones del ADN; esto tiene mucha utilidad, ya que el rastreo de estas secuencias repetitivas permite estudios de filogenia.

Transcripcin y traduccin[editar editar

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Artculos principales: Transcripcin (gentica) y Traduccin

(gentica). En un gen, la secuencia de nucletidos a lo largo de una hebra de ADN se transcribe a un ARN mensajero (ARNm) y esta secuencia a su vez se traduce a una protena que un organismo es capaz de sintetizar o "expresar" en uno o varios momentos de su vida, usando la informacin de dicha secuencia. La relacin entre la secuencia de nucletidos y la secuencia de aminocidos de la protena viene determinada por el cdigo gentico, que se utiliza

durante el proceso de traduccin o sntesis de protenas. La unidad codificadora del cdigo gentico es un grupo de tres nucletidos (triplete), representado por las tres letras iniciales de las bases nitrogenadas (por ej., ACT, CAG, TTT). Los tripletes del ADN se transcriben en sus bases complementarias en el ARN mensajero, y en este caso los tripletes se denominan codones (para el ejemplo anterior, UGA, GUC, AAA). En el ribosoma cada codn del ARN mensajero interacciona con una molcula de ARN de transferencia (ARNt o tRNA) que contenga el triplete complementario, denominado anticodn. Cada ARNt porta el aminocido correspondiente al codn de acuerdo con el cdigo gentico, de modo que el ribosoma va uniendo los aminocidos para formar una nueva protena de acuerdo con las "instrucciones" de la secuencia del ARNm. Existen 64 codones posibles, por lo cual corresponde ms de uno para cada aminocido (por esta duplicidad de codones se dice que el cdigo gentico es un cdigo degenerado: no es unvoco); algunos codones indican la terminacin de la sntesis, el fin de la secuencia codificante; estos codones de terminacin ocodones de parada son UAA, UGA y UAG (en ingls, nonsense 34 codons o stop codons).

Replicacin del ADN[editar editar fuente]

Esquema representativo de la replicacin del ADN. Artculo principal: Replicacin de ADN.

La replicacin del ADN es el proceso por el cual se obtienen copias o rplicas idnticas de una molcula de ADN. La replicacin es fundamental para la transferencia de la informacin gentica de una generacin a la siguiente y, por ende, es la base de la herencia. El mecanismo consiste esencialmente en la separacin de las dos hebras de la doble hlice, las cuales sirven de molde para la posterior sntesis de

cadenas complementarias a cada una de ellas, que llevar por nombre ARNm. El resultado final son dos molculas idnticas a la original. Este tipo de replicacin se denomina semiconservativa debido a que cada una de las dos molculas resultantes de la duplicacin presenta una cadena procedente de la molcula "madre" y otra recin sintetizada.

Hiptesis sobre la duplicacin del ADN[editar editar fuente]

En un principio, se propusieron tres hiptesis: Semiconservativa: Segn esta hiptesis, formulada por Watson y Crick, cada hebra sirve de molde para que se forme una hebra nueva, mediante la complentariedad de bases, quedando al final dos dobles hlices formadas por una hebra antigua (molde) y una nueva hebra (copia). Conservativa: Tras la duplicacin quedaran las dos hebras antiguas juntas y, por otro lado, las dos hebras nuevas formando una doble hlice. Dispersiva: Segn esta hiptesis, las hebras resultantes estaran formadas por fragmentos en doble hlice ADN antiguo y ADN recin sintetizado.

Interacciones ADNprotena[editar editar fuente]

Todas las funciones del ADN dependen de sus interacciones con protenas. Estas interacciones pueden ser inespecficas, o bien la protena puede unirse de forma especfica a una nica secuencia de ADN. Tambin pueden unirse enzimas, entre las cuales son particularmente importantes las polimerasas, que copian las secuencia de bases del ADN durante la transcripcin y la replicacin.

Protenas que unen ADN[editar editar

fuente] Interacciones inespecficas[editar editar fuente]

Interaccin de ADN con histonas (en blanco, arriba). Los aminocidos bsicos de estas protenas (abajo a la izquierda, en azul) se unen a los grupos cidos de los fosfatos del ADN (abajo a la derecha, en rojo).

Las protenas estructurales que se unen al ADN son ejemplos bien conocidos de interacciones inespecficas ADN-protenas. En los cromosomas, el ADN se encuentra formando complejos con protenas estructurales. Estas protenas organizan el ADN en una estructura compacta denominada cromatina. En eucariotas esta estructura implica la unin del ADN a un complejo formado por pequeas protenas bsicas denominadas histonas, mientras que en procariotas estn involucradas una gran variedad de 82 83 protenas. Las histonas forman un complejo de forma cilndrica denominado nucleosoma, en torno al cual se enrollan casi dos vueltas de ADN de doble hlice. Estas interacciones inespecficas quedan determinadas por la existencia de residuos bsicos en las histonas, que forman enlaces inicos con el esqueleto de azcar-fosfato del ADN y, por tanto, son en gran parte independientes de la secuencia de 84 bases. Estos aminocidos bsicos experimentan modificaciones qumicas 85 demetilacin, fosforilacin y acetilacin, que alteran la fuerza de la interaccin entre el ADN y las histonas, haciendo al ADN ms o menos accesible a los factores de transcripcin y por tanto modificando la tasa de 86 transcripcin. Otras protenas que se unen a ADN de manera inespecfica en la cromatina incluyen las protenas del grupo de alta movilidad (HMG, High Mobility Group) 87 que se unen a ADN plegado o distorsionado. Estas protenas son importantes durante el plegamiento de los nucleosomas, organizndolos en estructuras ms 88 complejas para constituir los cromosomas durante el

proceso de condensacin cromosmica. Se ha propuesto que en este proceso tambin intervendran otras protenas, formando una especie de "andamio" sobre el cual se organiza la cromatina; los principales componentes de esta estructura seran la enzima topoisomerasa II (topoIIalpha) y 89 la condensina 13S. Sin embargo, el papel estructural de latopoIIalpha en la organizacin de los cromosomas an es discutido, ya que otros grupos argumentan que esta enzima se intercambia rpidamente tanto en los brazos cromosmicos como en los cinetocoros durante 90 la mitosis.

Interacciones especficas[editar editar fuente]

Un grupo bien definido de protenas que unen ADN es el conformado por las protenas que se unen especficamente a ADN monocatenario o ADN de hebra sencilla (ssDNA). En humanos, la protena A de replicacin es la mejor conocida de su familia y acta en procesos en los que la doble hlice se separa, como la replicacin del ADN, la recombinacin o la reparacin 91 del ADN. Estas protenas parecen estabilizar el ADN monocatenario, protegindolo para evitar que forme estructuras de tallo-lazo (stem-loop) o que sea degradado por nucleasas.

El factor de transcripcin represor del fago lambda unido a su ADN diana mediante un motivo hlice-giro-hlice (helix-turnhelix).92

Sin embargo, otras protenas han evolucionado para unirse especficamente a secuencias particulares de

ADN. La especificidad de la interaccin de las protenas con el ADN procede de los mltiples contactos con las bases de ADN, lo que les permite "leer" la secuencia del ADN. La mayora de esas interacciones con las bases ocurre en la hendidura mayor, donde las bases son ms 93 accesibles. Las protenas especficas estudiadas con mayor detalle son las encargadas de regular la transcripcin, denominadas por ello factores de transcripcin. Cada factor de transcripcin se une a una secuencia concreta de ADN y activa o inhibe la transcripcin de los genes que presentan estas secuencias prximas a sus promotores. Los factores de transcripcin pueden efectuar esto de dos formas: En primer lugar, pueden unirse a la polimerasa de ARN responsable de la transcripcin, bien directamente o a travs de otras protenas mediadoras. De esta forma. se estabiliza la unin entre la ARN polimerasa y el promotor, lo que 94 permite el inicio de la transcripcin. En segundo lugar, los factores de transcripcin pueden unirse a enzimas que modifican las histonas del promotor, lo que altera la accesibilidad del 95 molde de ADN a la ARN polimerasa.

Como los ADN diana pueden encontrarse por todo el genoma del organismo, los cambios en la actividad de un tipo de factor de transcripcin pueden afectar a miles 96 de genes. En consecuencia, estas protenas son frecuentemente las dianas de los procesos de transduccin de seales que controlan las respuestas a cambios ambientales o diferenciacin y desarrollo celular.

La enzima de restriccin EcoRV (verde) formando un complejo con su ADN diana.97

Enzimas que modifican el ADN[editar editar fuente]

Nucleasas y ligasas[editar editar fuente]
Las nucleasas son enzimas que cortan las hebras de ADN mediante la catlisis de lahidrlisis de los enlaces fosfodister. Las nucleasas que hidrolizan nucletidos a partir de los extremos de las hebras de ADN se denominan exonucleasas, mientras que lasendonucleasas cortan en el interior de las hebras. Las nucleasas que se utilizan con mayor frecuencia en biologa molecular son las enzimas de restriccin, endonucleasas que cortan el ADN por determinadas secuencias especficas. Por ejemplo, la enzima EcoRV, que se muestra a la izquierda, reconoce la secuencia de 6 bases 5-GAT|ATC-3, y hace un corte en ambas hebras en la lnea vertical indicada, generando dos molculas de ADN con los extremos romos. Otras enzimas de restriccin generan sin embargo extremos cohesivos, ya que cortan de forma diferente las dos hebras de ADN. En la naturaleza, estas enzimas protegen a las bacterias contra las infecciones de fagos, al digerir el ADN de dicho fago cuando entra a travs de la pared bacteriana, actuando como un mecanismo de 98 defensa. En biotecnologa, estas nucleasas especficas de la secuencias de ADN se utilizan en ingeniera gentica para clonar fragmentos de ADN y en la tcnica dehuella gentica. Las enzimas denominadas ADN ligasas pueden reunir 99 hebras de ADN cortadas o rotas. Las ligasas son particularmente importantes en la replicacin de la hebra que sufre replicacin discontinua en el ADN, ya que unen los fragmentos cortos de ADN generados en lahorquilla de replicacin para formar una copia completa del molde de ADN. Tambin se utilizan en la reparacin del ADN y en procesos de recombinacin 99 gentica.

Topoisomerasas y helicasas[editar editar fuente]

Las topoisomerasas son enzimas que poseen a la vez actividad nucleasa y ligasa. Estas protenas varan la cantidad de ADN superenrollado. Algunas de estas enzimas funcionan cortando la hlice de ADN y permitiendo que una seccin rote, de manera que reducen el grado de superenrollamiento. Una vez hecho esto, la enzima vuelve a unir los fragmentos de 59 ADN. Otros tipos de enzimas son capaces de cortar

una hlice de ADN y luego pasar la segunda hebra de ADN a travs de la rotura, antes de reunir las 100 hlices. Las topoisomerasas son necesarias para muchos procesos en los que interviene el ADN, como 60 la replicacin del ADN y latranscripcin. Las helicasas son unas protenas que pertenecen al grupo de los motores moleculares. Utilizan energa qumica almacenada en los nuclesidos trifosfatos, fundamentalmente ATP, para romper puentes de hidrgeno entre bases y separar la doble hlice de ADN 101 en hebras simples. Estas enzimas son esenciales para la mayora de los procesos en los que las enzimas necesitan acceder a las bases del ADN.

Polimerasas[editar editar fuente]

Las polimerasas son enzimas que sintetizan cadenas de nucletidos a partir de nuclesidos trifosfatos. La secuencia de sus productos son copias de cadenas de polinucletidos existentes, que se denominan moldes. Estas enzimas funcionan aadiendo nucletidos al grupo hidroxilo en 3' del nucletido previo en una hebra de ADN. En consecuencia, todas las polimerasas 102 funcionan en direccin 5 --> 3. En los sitios activos de estas enzimas, el nuclesido trifosfato que se incorpora aparea su base con la correspondiente en el molde: esto permite que la polimerasa sintentice de forma precisa la hebra complementaria al molde. Las polimerasas se clasifican de acuerdo al tipo de molde que utilizan: En la replicacin del ADN, una ADN polimerasa dependiente de ADN realiza una copia de ADN a partir de una secuencia de ADN. La precisin es vital en este proceso, por lo que muchas de estas polimerasas tienen una actividad de verificacin de la lectura (proofreading). Mediante esta actividad, la polimerasa reconoce errores ocasionales en la reaccin de sntesis, debido a la falta de apareamiente entre el nucletido errneo y el molde, lo que genera un desacoplamiento (mismatch). Si se detecta un desacoplamiento, se activa una actividad exonucleasa en direccin 3 --> 103 5 y la base incorrecta se elimina. En la mayora de los organismos las ADN polimerasas funcionan en un gran complejo denominado replisoma, que contiene mltiples unidades accesorias, 104 como helicasas.

Las ADN polimerasas dependientes de ARN son una clase especializada de polimerasas que copian la secuencia de una hebra de ARN en ADN. Incluyen la transcriptasa inversa, que es una enzima viral implicada en la infeccin de clulas por retrovirus, y latelomerasa, que es necesaria 105 43 para la replicacin de los telmeros. La telomerasa es una polimerasa inusual, porque contiene su propio molde de ARN como parte de su 44 estructura. La transcripcin se lleva a cabo por una ARN polimerasa dependiente de ADN que copia la secuencia de una de las hebras de ADN en ARN. Para empezar a transcribir un gen, la ARN polimerasa se une a una secuencia del ADN denominada promotor, y separa las hebras del ADN. Entonces copia la secuencia del gen en un transcrito de ARN mensajero hasta que alcanza una regin de ADN denomimada terminador, donde se detiene y se separa del ADN. Como ocurre con las ADN polimerasas dependientes de ADN en humanos, la ARN polimerasa II (la enzima que transcribe la mayora de los genes del genoma humano) funciona como un gran complejo multiproteico que contiene mltiples subunidades 106 reguladoras y accesorias.

Recombinacin gentica[editar editar

fuente]

Estructura de un intermedio en unin de Holliday en la recombinacin gentica. Las cuatro hebras de ADN separadas estn coloreadas en rojo, azul, verde y amarillo.
Artculo principal: Recombinacin gentica.
107

La recombinacin implica la rotura y reunin de dos cromosomas homlogos (M y F) para producir dos cromosomas nuevos reorganizados (C1 y C2).

Una hlice de ADN normalmente no interacciona con otros segmentos de ADN, y en las clulas humanas los diferentes cromosomas incluso ocupan reas separadas en el ncleo celular denominadas territorios 108 cromosmicos. La separacin fsica de los diferentes cromosomas es importante para que el ADN mantenga su capacidad de funcionar como un almacn estable de informacin. Uno de los pocos momentos en los que los cromosomas interaccionan es durante elsobrecruzamiento cromosmico(chromosomal crossover), durante el cual se recombinan. El sobrecruzamiento cromosmico ocurre cuando dos hlices de ADN se rompen, se intercambian y se unen de nuevo. La recombinacin permite a los cromosomas intercambiar informacin gentica y produce nuevas

combinaciones de genes, lo que aumenta la eficiencia de la seleccin natural y puede ser importante en la 109 evolucin rpida de nuevas protenas. Durante la profase I de la meiosis, una vez que los cromosomas homlogos estn perfectamente apareados formando estructuras llamadas bivalentes, se produce el fenmeno de sobrecruzamiento o entrecruzamiento (crossing-over), en el cual las cromtidas homlogas no hermanas (procedentes del padre y de la madre) intercambian material gentico. La recombinacin gentica resultante hace aumentar en gran medida la variacin gentica entre la descendencia de progenitores que se reproducen por va sexual. La recombinacin gentica tambin puede estar implicada en la reparacin del ADN, en particular en la respuesta celular a las roturas de doble hebra (double-strand 110 breaks). La forma ms frecuente de sobrecruzamiento cromosmico es la recombinacin homloga, en la que los dos cromosomas implicados comparten secuencias muy similares. La recombinacin no-homloga puede ser daina para las clulas, ya que puede producirtranslocaciones cromosmicas y anomalas genticas. La reaccin de recombinacin est catalizada por enzimas conocidas comorecombinasas, tales 111 como RAD51. El primer paso en el proceso de recombinacin es una rotura de doble hebra, causada bien por una endonucleasa o por dao en el 112 ADN. Posteriormente, una serie de pasos catalizados en parte por la recombinasa, conducen a la unin de las dos hlices formando al menos una unin de Holliday, en la que un segmento de una hebra simple es anillado con la hebra complementaria en la otra hlice. La unin de Holliday es una estructura de unin tetrahdrica que puede moverse a lo largo del par de cromosomas, intercambiando una hebra por otra. La reaccin de recombinacin se detiene por el corte de la unin y la 113 reunin de los segmentos de ADN liberados.

Evolucin del metabolismo de ADN[editar editar fuente]

Vase tambin: Hiptesis del mundo de ARN.

El ADN contiene la informacin gentica que permite a la mayora de los organismos vivientes funcionar, crecer y reproducirse. Sin embargo, no est claro durante cunto tiempo ha ejercido esta funcin en los ~3000 millones de aos de la historia de la vida, ya que se ha

propuesto que las formas de vida ms tempranas podran haber utilizado ARN como material 114 115 gentico. El ARN podra haber funcionado como la parte central de un metabolismo primigenio, ya que puede transmitir informacin gentica y simultneamente actuar como catalizador formando 116 parte de las ribozimas. Este antiguo Mundo de ARN donde los cidos nucleicos funcionaran como catalizadores y como almacenes de informacin gentica podra haber influido en la evolucin del cdigo gentico actual, basado en cuatro nucletidos. Esto se debera a que el nmero de bases nicas en un organismo es un compromiso entre un nmero pequeo de bases (lo que aumentara la precisin de la replicacin) y un nmero grande de bases (que a su vez 117 aumentara la eficiencia cataltica de las ribozimas). Desafortunadamente, no se cuenta con evidencia directa de los sistemas genticos ancestrales porque la recuperacin del ADN a partir de la mayor parte de los fsiles es imposible. Esto se debe a que el ADN es capaz de sobrevivir en el medio ambiente durante menos de un milln de aos, y luego empieza a degradarse lentamente en fragmentos de menor tamao 118 en solucin. Algunas investigaciones pretenden que se ha obtenido ADN ms antiguo, por ejemplo un informe sobre el aislamiento de una bacteria viable a partir de un cristal salino de 250 millones de aos de 119 120 121 antigedad, pero estos datos son controvertidos. Sin embargo, pueden utilizarse herramientas de evolucin molecular para inferir los genomas de organismos ancestrales a partir de organismos 122 123 contemporneos. En muchos casos, estas inferencias son suficientemente fiables, de manera que una biomolcula codificada en un genoma ancestral puede resucitarse en el laboratorio para ser estudiada 124 125 hoy. Una vez que la biomolcula ancestral se ha resucitado, sus propiedades pueden ofrecer inferencias sobre ambientes y estilos de vida primigenios. Este proceso se relaciona con el campo emergente de 126 la paleogentica experimental. A pesar de todo, el proceso de trabajo hacia atrs desde el presente tiene limitaciones inherentes, razn por la cual otros investigadores tratan de elucidar el mecanismo evolutivo trabajando desde el origen de la Tierra en adelante. Dada suficiente informacin sobre la qumica en el cosmos, la manera en la que las sustancias csmicas podran haberse depositado en la

Tierra, y las transformaciones que podran haber tenido lugar en la superficie terrestre primigenia, tal vez podramos ser capaces de aprender sobre los orgenes para desarrollar modelos de evolucin ulterior de la 127 informacin gentica (vase tambin el artculo sobre elorigen de la vida).

Tcnicas comunes[editar editar fuente]

El conocimiento de la estructura del ADN ha permitido el desarrollo de multitud de herramientas tecnolgicas que explotan sus propiedades fisicoqumicas para analizar su implicacin en problemas concretos: por ejemplo, desde anlisis filogeeticos para detectar similitudes entre diferentes taxones, a la caracterizacin de la variabilidad individual de un paciente en su respuesta a un determinado frmaco, pasando por un enfoque global, a nivel genmico, de cualquier caracterstica 128 especfica en un grupo de individuos de inters. Podemos clasificar las metodologas de anlisis del ADN en aquellas que buscan su multiplicacin, ya in vivo, como la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR), ya in vitro, como la clonacin, y aquellas que explotan las propiedades especficas de elementos concretos, o de genomas adecuadamente clonados. Es el caso de la secuenciacin de ADN y de la hibridacin con sondas especficas ("southern blot" y chips de ADN).

Tecnologa del ADN recombinante[editar editar fuente]

Artculo principal: ADN recombinante.

La tecnologa del ADN recombinante, piedra angular de la ingeniera gentica, permite propagar grandes cantidades de un fragmento de ADN de inters, el cual se dice que ha sido clonado. Para ello, debe introducirse dicho fragmento en otro elemento de ADN, generalmente un plsmido, que posee en su secuencia los elementos necesarios para que la maquinaria celular de un hospedador, normalmente Escherichia coli, lo replique. De este modo, una vez transformada la cepa bacteriana, el fragmento de ADN clonado se reproduce 129 cada vez que aquella se divide. Para clonar la secuencia de ADN de inters, se emplean enzimas como herramientas de corte y empalme del fragmento y del vector (el plsmido). Dichas enzimas corresponden a dos grupos: en primer lugar, las enzimas de restriccin, que poseen la capacidad de reconocer y cortar secuencias especficas;

en segundo lugar, la ADN ligasa, que establece un enlace covalente entre extremos de ADN 128 compatibles (ver seccin Nucleasas y ligasas).

Secuenciacin[editar editar fuente]

Artculo principal: Secuenciacin de ADN.

La secuenciacin del ADN consiste en dilucidar el orden de los nucletidos de un polmero de ADN de cualquier longitud, si bien suele dirigirse hacia la determinacin de genomas completos, debido a que las tcnicas actuales permiten realizar esta secuenciacin a gran velocidad, lo cual ha sido de gran importancia para proyectos de secuenciacin a gran escala como el Proyecto Genoma Humano. Otros proyectos relacionados, en ocasiones fruto de la colaboracin de cientficos a escala mundial, han establecido la secuencia completa del ADN de muchos genomas de animales, plantas y microorganism os. El mtodo de secuenciacin de Sanger ha sido el ms empleado durante el siglo XX. Se basa en la sntesis de ADN en presencia dedidesoxinuclesidos, compuestos que, a diferencia de los desoxinuclesidos normales (dNTPs), carecen de un grupo hidroxilo en su extremo 3'. Aunque los didesoxinucletidos trifosfatados (ddNTPs) pueden incorporarse a la cadena en sntesis, la carencia de un extremo 3'-OH imposibilita la generacin de un nuevo enlace fosfodister con el nuclesido siguiente; por tanto, provocan la terminacin de la sntesis. Por esta razn, el mtodo de secuenciacin tambin se denomina de terminacin de cadena. La reaccin se realiza usualmente preparando un tubo con el ADN molde, la polimerasa, un cebador, dNTPs convencionales y una pequea cantidad de ddNTPs marcados fluorescentemente en su base nitrogenada. De este modo, el ddTTP puede ir marcado en azul, el ddATP en rojo, etc. Durante la polimerizacin, se van truncando las cadenas crecientes, al azar, en distintas posiciones. Por tanto, se produce una serie de productos de distinto tamao, coincidiendo la posicin de la terminacin debido a la incorporacin del ddNTP correspondiente. Una vez terminada la reaccin, es posible correr la mezcla en una electroforesis capilar (que resuelve todos los fragmentos segn su longitud) en la cual se lee la fluorescencia para cada posicin del polmero. En nuestro ejemplo, la lectura 130 131 azul-rojo-azul-azul se traducira como TATT.

Reaccin en cadena de la polimerasa (PCR)[editar editar fuente]

Artculo principal: Reaccin en cadena de la polimerasa.

La reaccin en cadena de la polimerasa, habitualmente conocida como PCR por sus siglas en ingls, es una tcnica de biologa molecular descrita en 1986 por Kary 132 Mullis, cuyo objetivo es obtener un gran nmero de copias de un fragmento de ADN dado, partiendo de una escasa cantidad de aqul. Para ello, se emplea una ADN polimerasa termoestable que, en presencia de una mezcla de los cuatro desoxinucletidos, un tampn de la fuerza inica adecuada y los cationes precisos para la actividad de la enzima, dos oligonucletidos (denominados cebadores) complementarios a parte de la secuencia (situados a distancia suficiente y en sentido antiparalelo) y bajo unas condiciones de temperatura adecuadas, moduladas por un aparato denominado termociclador, generaexponencialmente nuevos fragmentos de ADN semejantes al original y acotados por los dos 129 cebadores. La PCR puede efectuarse como una tcnica de punto final, esto es, como una herramienta de generacin del ADN deseado, o como un mtodo continuo, en el que se evale dicha polimerizacin a tiempo real. Esta ltima 128 variante es comn en la PCR cuantitativa.

Southern blot[editar editar fuente]

Artculo principal: Southern blot.

El mtodo de hibridacin Southern o Southern blot (el nombre original en el idioma ingls) permite la deteccin de una secuencia de ADN en una muestra compleja o no del cido nucleico. Para ello, combina una separacin mediante masa y carga (efectuada mediante una electroforesis en gel) con una hibridacin con una sonda de cido nucleico marcada de algn modo (ya sea conradiactividad o con un compuesto qumico) que, tras varias reacciones, d lugar a la aparicin de una seal de color o fluorescencia. Dicha hibridacin se realiza tras la transferencia del ADN separado mediante la electroforesis a una membrana de filtro. Una tcnica semejante, pero en la cual no se produce la mencionada separacin electrofortica se denomina dot blot. El mtodo recibe su nombre en honor a su inventor, 133 el bilogo ingls Edwin Southern. Por analoga al mtodo Southern, se han desarrollado tcnicas

semejantes que permiten la deteccin de secuencias dadas de ARN (mtodo Northern, que emplea sondas 134 de ARN o ADN marcadas) o de protenas especficas 135 (tcnica Western, basada en el uso de anticuerpos).

Chips de ADN[editar editar fuente]

Artculo principal: Chip de ADN.

Microarray con 37.500 oligonucletidos especficos. Arriba a la izquierda se puede apreciar una regin ampliada del chip.

Los chips de ADN son colecciones de oligonucletidos de ADN complementario dispuestos en hileras fijadas sobre un soporte, frecuentemente de cristal. Se utilizan para el estudio de mutaciones de genes conocidos o para monitorizar la expresin gnica de una preparacin de ARN.

Aplicaciones[editar editar fuente]

Ingeniera gentica[editar editar fuente]
Vanse tambin: Ingeniera gentica y biologa molecular.

La investigacin sobre el ADN tiene un impacto significativo, especialmente en el mbito de la medicina, pero tambin en agricultura y ganadera (donde los objetivos son los mismos que con las tcnicas tradicionales que el hombre lleva utilizando desde hace milenios - la domesticacin, la seleccin y los cruces dirigidos - para obtener variedades de animales y plantas ms productivos). La moderna biologa y bioqumica hacen uso intensivo de latecnologa del ADN recombinante, introduciendo genes de inters en organismos, con el objetivo de expresar una protena recombinante concreta, que puede ser: aislada para su uso posterior: por ejemplo, se pueden transformar microorganismos para convertirlos en autnticas fbricas que producen grandes cantidades de sustancias tiles, como insulina o vacunas, que posteriormente se 136 137 138 aslan y se utilizan teraputicamente.

necesaria para reemplazar la expresin de un gen endgeno daado que ha dado lugar a una patologa, lo que permitira el restablecimiento de la actividad de la protena perdida y eventualmente la recuperacin del estado fisiolgico normal, no patolgico. Este es el objetivo de la terapia gnica, uno de los campos en los que se est trabajando activamente en medicina, analizando ventajas e inconvenientes de diferentes sistemas de administracin del gen (virales y no virales) y los mecanismos de seleccin del punto de integracin de los elementos genticos (distintos para los virus 139 y los transposones) en el genoma diana. En este caso, antes de plantearse la posibilidad de realizar una terapia gnica en una determinada patologa, es fundamental comprender el impacto del gen de inters en el desarrollo de dicha patologa, para lo cual es necesario el desarrollo de un modelo animal, eliminando o modificando dicho gen en un animal de laboratorio, mediante la tcnica 140 knockout. Slo en el caso de que los resultados en el modelo animal sean satisfactorios se procedera a analizar la posibilidad de restablecer el gen daado mediante terapia gnica. utilizada para enriquecer un alimento: por ejemplo, la composicin de la leche (una importante fuente de protenas para el consumo humano y animal) puede modificarse mediante transgnesis, aadiendo genes exgenos y desactivando genes endgenos para mejorar su valor nutricional, reducir infecciones en las glndulas mamarias, proporcionar a los consumidores protenas antipatgenas y preparar protenas recombinantes 141 142 para su uso farmacutico. til para mejorar la resistencia del organismo transformado: por ejemplo en plantas se pueden introducir genes que confieren resistencia a patgenos (virus, insectos, hongos), as como a agentes estresantes abiticos (salinidad, sequedad, 143 144 145 metales pesados).

Medicina forense[editar editar fuente]

Vase tambin: Huella gentica.

Los mdicos forenses pueden utilizar el ADN presente en la sangre, el semen, la piel, la saliva o el pelo en la escena de un crimen para identificar al responsable.

Esta tcnica se denomina huella gentica, o tambin "perfil de ADN". Al realizar la huella gentica, se compara la longitud de secciones altamente variables de ADN repetitivo, como los microsatlites, entre personas diferentes. Este mtodo es frecuentemente muy fiable 146 para identificar a un criminal. Sin embargo, la identificacin puede complicarse si la escena est 147 contaminada con ADN de personas diferentes. La tcnica de la huella gentica fue desarrollada en 1984 148 por el genetista britnico Sir Alec Jeffreys, y fue utilizada por primera vez en medicina forense para condenar a Colin Pitchfork por los asesinatos 149 deNarborough en 1983 y de Enderby en 1986. Se puede requerir a las personas acusadas de ciertos tipos de crmenes que proporcionen una muestra de ADN para introducirlos en una base de datos. Esto ha facilitado la labor de los investigadores en la resolucin de casos antiguos, donde slo se obtuvo una muestra de ADN de la escena del crimen, en algunos casos permitiendo exonerar a un convicto. La huella gentica tambin puede utilizarse para identificar vctimas de 150 accidentes en masa, o para realizar pruebas de 151 consanguinidad.

Bioinformtica[editar editar fuente]

Vase tambin: Bioinformtica.

La bioinformtica implica la manipulacin, bsqueda y extraccin de informacin de los datos de la secuencia del ADN. El desarrollo de las tcnicas para almacenar y buscar secuencias de ADN ha generado avances en el desarrollo de software de los ordenadores, para muchas aplicaciones, especialmente algoritmos de bsqueda de frases, aprendizaje automtico y teoras de bases de 152 datos. La bsqueda de frases o algoritmos de coincidencias, que buscan la ocurrencia de una secuencia de letras dentro de una secuencia de letras mayor, se desarroll para buscar secuencias especficas 153 de nucletidos. En otras aplicaciones como editores de textos, incluso algoritmos simples pueden funcionar, pero las secuencias de ADN pueden generar que estos algoritmos presenten un comportamiento de casi-elpeor-caso, debido al bajo nmero de caracteres. El problema relacionado del alineamiento de secuenciaspersigue identificar secuencias homlogas y localizar mutaciones especficas que las diferencian. Estas tcnicas, fundamentalmente el alineamiento mltiple de secuencias, se utilizan al estudiar las relaciones filogenticas y la funcin de las

protenas. Las colecciones de datos que representan secuencias de ADN del tamao de un genoma, tales como las producidas por el Proyecto Genoma Humano, son difciles de usar sin anotaciones, que marcan la localizacin de los genes y los elementos reguladores en cada cromosoma. Las regiones de ADN que tienen patrones asociados con genes que codifican protenas o ARN pueden identificarse por algoritmos de localizacin de genes, lo que permite a los investigadores predecir la presencia de productos gnicos especficos en un organismo incluso antes de 155 que haya sido aislado experimentalmente.

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Nanotecnologa de ADN[editar editar

fuente]

La estructura de ADN de la izquierda (mostrada de forma esquemtica) se auto-ensambla en la estructura visualizada por microscopa de fuerza atmica a la derecha. La nanotecnologa de ADN es el campo que busca disear estructuras a nanoescala utilizando las propiedades de reconocimiento molecular de las molculas de ADN. Imagen de Strong, 2004. Plantilla:Doi-inline Vase tambin: Nanotecnologa.

La nanotecnologa de ADN utiliza las propiedades nicas de reconocimiento molecular del ADN y otros cidos nucleicos para crear complejos ramificados autoensamblados con propiedades tiles. En este caso, el ADN se utiliza como un material estructural, ms que 156 como un portador de informacin biolgica. Esto ha conducido a la creacin de lminas peridicas de dos dimensiones (ambas basadas en azulejos, as como 157 usando el mtodo de ADN origami ), adems de estructuras en tres dimensiones con forma depoliedros.

Historia, antropologa y paleontologa[editar editar fuente]

Vanse tambin: Filogenia y Genealoga molecular.

A lo largo del tiempo, el ADN almacena mutaciones que se heredan y, por tanto, contiene informacin histrica, de manera que comparando secuencias de ADN, los genetistas pueden inferir la historia evolutiva de los 158 organismos, su filogenia. La investigacin filogentica es una herramienta fundamental en biologa evolutiva. Si se comparan las secuencias de ADN dentro de una especie, los genetistas de poblaciones pueden conocer la historia de poblaciones particulares. Esto se puede utilizar en una amplia variedad de estudios, desde ecologa hasta antropologa, como ilustra el anlisis de ADN llevado a cabo para identificar las Diez 159 160 Tribus Perdidas de Israel. Por otro lado, el ADN tambin se utiliza para estudiar relaciones familiares recientes. Igualmente en paleontologa (en la paleogentica) el ADN en algunos casos tambin se puede utilizar para estudiar a especies extintas (ADN fsil).