UNIVERSIDADE FEDERAL DE SANTA CATARINA DEPARTAMENTO DE QUIMICA QUIMICA ORGANICA EXPERIMENTAL I

CROMATOGRAFIA

Eloah Latocheski Handriela Hoff Janine Biesek

Florianpolis, dezembro de 2012.

RESUMO Cromatografia uma tcnica de separao de substncias muito utilizada na qumica. A tcnica consiste na passagem da substncia a ser purificada guiada por um solvente, a fase mvel, atravs de uma fase estacionria. Existem vrios estilos de cromatografia, entretanto este trabalho tratar de apenas duas: cromatografia em coluna e cromatografia em camada fina. Utilizou-se o mtodo de cromatografia em camada fina na anlise dos componentes de um analgsico e na separao dos pigmentos do extrato de pprica. Esse mtodo possui grande importncia em escala laboratorial por se tratar de um mtodo prtico, de relativamente baixo custo, cujo resultado pode ser obtido imediatamente.

1. INTRODUO A cromatografia uma tcnica de separao, analise e identificao de compostos muito utilizada, devido facilidade de manuseio e a confiabilidade na eficcia de seus resultados. A tcnica de cromatografia foi descoberta no sculo XX pelo botnico russo Mikhail Semyonovich Tsvet, que utilizava o mtodo em seus trabalhos sobre pigmentos de folhas extrados de plantas. Mas vrios outros pesquisadores efetuaram trabalhos em funo da cromatografia em meados do sculo XX, ento houve uma grande discusso sobre o inicio da to utilizao desta tcnica. Hoje, Mikhail Semyonovich Tsvet conhecido como o pai da cromatografia.1 A cromatografia absorvida, pela passagem de uma mistura, atravs de duas fases: uma estacionria e outra mvel. A absoro do composto depende das suas foras de interao. Conforme as caractersticas das duas fases tm-se mais de um tipo de cromatografia, como: - slido-lquido, identificao, separao, por coluna cromatogrfica, camada fina ou papel; - lquido-lquido; lquida com alta eficincia; - gs-lquido.2

As interaes dos componentes dependem, e so influenciadas, pelas solubilidades, ou das absortividades diferenciais das substncias a serem separadas em relao s duas fases entre as quais elas se particionam; das foras intermoleculares, entre elas inica, bipolar, apolar.

Cromatografia em coluna uma tcnica de partio slido-lquido que se baseia na absoro e solubilidade. A coluna cilndrica de vidro revestida com partculas finas de um slido, slido adequado para essa funo alumina ou slica gel que no podem ser solveis na fase lquida associada. Essa a fase estacionria. O solvente que passa na coluna a fase mvel, este lava o adsorvente. Os componentes presentes na mistura so adsorvidos pelas partculas do slido no topo da coluna, o solvente, em fluxo contnuo, lava os solutos do slido e os leva para baixo, na coluna. No decorrer que os solutos do slido

descem um novo equilbrio estabelecido entre o adsorvente, devido o encontro de slido limpo. Esse equilbrio faz com que os compostos diferentes se movam com velocidades diferentes. Como o solvente constantemente adicionado e por o slido estar bem empacotado, o equilbrio ocorre inmeras vezes. Ao comearem a separar-se, os componentes forma bandas, ento tem-se um nico componente, de acordo com a Figura 1.2

Figura 1: Cromatografia em coluna.3

Cromatografia em camada fina

Como na cromatografia de coluna, a de camada fina tambm uma tcnica de partio slido-lquido. A fase mvel a lquida que percorre de baixo para cima. Esse mtodo de separao realizado com a adio de uma pequena gota de uma mistura, e gotas dos compostos que podem fazer parte dessa mistura, numa placa fina, fase slida, acima da linha do eluente. Essa placa fina colocada verticalmente em um recipiente que contem um determinado solvente, ento pela placa de camada fina o solvente comea a subir. Quando o solvente atinge determinado ponto, se retira a placa do mesmo e ento se verifica se a necessidade de revelao, conforme a Figura 2. A revelao necessria quando as manchas so invisveis, ou seja, quando os compostos

so incolores. Geralmente utilizam-se vapores de iodo, pois reagem com muitos compostos orgnicos formando complexos de colorao marrom clara ou amarela.2

Figura 2: Representao da cromatografia em camada delgada.3

Um parmetro bastante utilizado na cromatografia o ndice de reteno (Rf) que a razo entre a distncia percorrida pelo componente da mistura e a distncia percorrida pelo eluente.4 As substncias menos polares avanam mais rapidamente que as substncias mais polares, e essa velocidade que resulta na separao dos componentes. Eluentes mais polares resultam num ndice de reteno maior, pois haver uma menor interao dos compostos com a fase estacionria interagindo ento com a fase mvel, sendo mais facilmente carregada pelo eluente. O ndice de reteno obtido utilizado para comparaes com os padres, substncias puras.

2. OBJETIVOS Anlise dos componentes de um analgsico; Separao dos pigmentos do extrato de pprica.

3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL 3.1. Cromatografia em coluna

Empacotamento da coluna Prepara-se uma coluna para cromatografia utilizando alumina bsica como fase fixa, da seguinte maneira: em um erlenmeyer, suspenda 15 a 20 g de alumina em clorofrmio (ou diclorometano), at obter uma pasta fluida, homognea e sem bolhas de ar includas. Enche-se a tera parte da coluna cromatogrfica com o mesmo solvente e derrama-se, ento, a pasta fluida de alumina, de modo que ela sedimente aos poucos e de forma homognea. Caso haja bolhas de ar oclusas na coluna, golpeie-as suavemente, de modo a expuls-las. Controla-se o nvel do solvente abrindo ocasionalmente a torneira da coluna. Ao fim da preparao, o nvel de solvente (eluente) deve estar 1 cm acima do topo da coluna de alumina.

Separao dos componentes de uma mistura Deve ser distribuido homogeneamente sobre o topo da coluna de alumina, com auxlio de uma pipeta ou conta-gotas, 1 a 3 mL de uma soluo etanlica de alaranjado de metila e azul de metileno. Aps a adsoro pela coluna, procede-se a eluio com etanol, vertendo cuidadosamente o solvente pelas paredes internas da coluna, tomando cuidado para no causar distrbios ou agitao na coluna. Ao mesmo tempo, abre-se a torneira para escoar o solvente. Eluir ento todo o azul de metileno com etanol. Eluir, primeiro com gua, o alaranjado de metila retido na coluna e em seguida com uma soluo aquosa de cido actico. Anlise dos componentes de um analgsico Utiliza-se 3 tubos de ensaio. No primeiro, deve ser colocado o comprimido da amostra. No segundo, coloca-se cido acetilsaliclico e no terceiro tubo coloca-se a cafena. Nos 3 tubos, adiciona-se 2,5 mL de metanol, macera-se o slido e deve ser agitado cada tubo por 3-5 minutos. Em seguida, filtra-se e despreza-se o slido. Com a ajuda de um tubo capilar, as trs solues devem ser aplicadasa uma distncia de 1 cm uma da outra em duas placas cromatogrficas distintas. Dependendo da concentrao desta soluo, duas ou trs aplicaes sero suficientes.

Prepararam-se dois sistemas de eluentes: i) acetona : clorofrmio 1:1 e ii) tolueno : clorofrmio : cido actico glacial : metanol 12:5:1,8:0,1. Prepara-se duas cubas cromatogrficas, uma para cada sistema de eluentes. Colocar cada placa cromatogrfica dentro de uma cuba. Aps a eluio, retira-se as placas da cuba. Deixa-se secar. Aps a secagem, coloca-se em uma atmosfera de iodo para revelar as manchas. Em 1-3 minutos, aparecero manchas amareladas sobre as placas. Remove-se ento as placas de dentro da cuba de iodo, contornando cada mancha com o tubo capilar. Calcula-se o Rf.

Separao dos pigmentos do extrato da pprica

A pprica um condimento de cor vermelha-intensa preparado a partir do pimento vermelho (Capsicum annuum) seco e modo, sendo utilizado tanto na culinria como na agroindstria. Os principais pigmentos isolados da pprica so o caroteno (cor laranja) e a capsantina (cor vermelha). Aplica-se o extrato de pprica em quatro (4) placas cromatogrficas e elui-se com os seguintes solventes : hexano; hexano:acetato de etila 7:3 (v/v); CH2Cl2 e EtOH. Como os compostos so coloridos, no necessrio efetuar a revelao. Calcula-se o valores de Rf .

4. RESULTADOS E DISCUSSO Primeiramente, foi nos apresentado a cromatografia em coluna, sendo que este no foi efetuado na prtica, mas pde ser observado seu funcionamento, atravs da mesma, foi separado uma mistura de alaranjado de metila e azul de metileno pela diferena de polaridade, a coluna foi preparada com alumina e diclorometano, tomandose cuidado para no haver bolhas, em seguida foi adicionada a mistura, e ao eluir com etanol,o azul de metileno foi o primeiro a sair da coluna, para retirar o alaranjado de metila, deve-se utilizar um solvente com maior polaridade. Seguindo procedimento experimental, foi realizada a separao por

cromatografia em camada fina dos componentes do analgsico e da pprica. Inicialmente foram preparadas as placas como uma soluo de slica e diclorometano, onde elas deviam ser mergulhadas nesta soluo para formar uma fina camada, sem falhas, sobre o vidro. O solvente deve ser voltil para que evapore rapidamente da placa, restando apenas slica que atuar como fase estacionria na cromatografia. Foi encontrada certa dificuldade para preparar as placas, pois as mesmas no ficaram com facilidade na forma ideal. Ao realizar a cromatografia com o analgsico, a cafena e o acido acetilsaliclico, foi observado que a mistura acetona: clorofrmio 1:1, foi o melhor eluente, pois ao revelar a placa em iodo as manchas foram observadas com mais facilidade do que com mistura tolueno : clorofrmio : cido actico glacial : metanol 12:5:1,8:0,1. Por comparao com as manchas de cafena e acido acetilsaliclico, chegou-se a concluso de que o medicamento no continha cafena, pois no foi observada a mancha da mesma no cromatograma. Os clculos de Rf sero apresentados a seguir: Solvente Substncia aplicada N de manchas Analgsico CCl3 + Acetona (1:1) Tolueno, CCl3, AcOEt, MeOH AAS Cafena Analgsico AAS Cafena 1 1 1 1 1 1 dc (cm) 2,6 2,6 1,5 2,2 2,2 1,0 ds (cm) 4,4 4,4 4,4 3,5 3,5 3,5 Rf 0,59 0,59 0,34 0,63 0,63 0,28

A preparao das placas cromatogrficas do extrato de pprica ocorreu de forma semelhante citada anteriormente para o analgsico, todavia como o intuito da prtica era somente a separao dos componentes e no a anlise e diferenciao das substncias, no houve a necessidade de aplicar as substncias de referencia para comparao. Ao aplicar o extrato de pprica observou-se uma mancha vermelha muito intensa, que permaneceu aps eluio, no sendo necessria a revelao com iodo ou qualquer outra substncia. Nos solventes mais polares, observou-se o deslocamento da mancha e no solvente apolar, hexano, observou-se que no houve nenhuma mudana na placa aps a eluio, o que indica uma maior interao com a fase fixa. As melhores observaes puderam ser feitas a partir das placas eludas em diclorometano e na mistura de hexano/acetato de etila, pois houve uma ntida separao entre as manchas. Esses solventes apresentaram polaridades intermedirias, o que foi constatado durante a prtica, uma vez que em solvente muito polar as manchas correram juntas e no solvente apolar elas no correram. Esperava-se que fosse possvel a identificao dos compostospresentes no extrato de pprica devido s suas coloraes diferentes: o -caroteno apresenta colorao laranja e a capsantina colorao vermelha. Entretanto no foi possvel a observao de diferentes coloraes, pois as manchas ficaram de cores muito semelhantes. Ainda assim, devido s estruturas das molculas e da interao com a slica, baseando se na mxima da cromatografia que diz que quanto mais polar a substncia, mais tempo ficar adsorvida na slica, acredita-se que a substncia na base da placa cromatogrfica seja a capsantina, pois mais polar que o -caroteno. Solvente Hexano Hexano/AcOEt(7:3) N de manchas 1 2 dc (cm) 0 3,0 0 CH2Cl2 2 3,0 0 EtOH 1 4,4 ds (cm) 4,5 3,5 3,5 4,5 4,5 4,8 Rf 0 0,86 0 0,67 0 1,09

5. CONCLUSO Cromatografia um dos mais importantes meios de separao, identificao, anlise e purificao utilizados na qumica. Na qumica orgnica principalmente, onde comum reaes com subprodutos, ou difcil determinar a converso de produtos em reagentes, a cromatografia surge como uma forma acessvel de se obter resultados imediatos e separar produtos de seus subprodutos e reagentes de partida. Na prtica, observou-se a extrema praticidade de se realizar uma cromatografia seja ela em coluna ou em camada delgada, deixando claro as diferenas e semelhanas entre as duas tcnicas. Os resultados obtidos foram satisfatrios do ponto de vista didtico, pois mostrou a versatilidade de uma prtica to utilizada na academia.

6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1- http://quimicanahistoria.blogspot.com.br/2010/07/historia-da-cromatografia.html Acessado em 16/12/2012 2 Donald L. Pavia; Qumica Orgnica Experimental - Segunda Edio pag. 675 a 696. 3 http://qmc.ufsc.br/organica/docs/QMC5230_Apostila2011_16Exp.pdf Acessado em 16/12/2012 4 - http://www.qmc.ufsc.br/organica/exp5/calculo_rf.html# Acessado em 16/12/2012