UNIVERSIDAD NACIONAL AUTNOMA DE MXICO Facultad de Estudios Superiores Cuautitln.

PRODUCTOS NATURALES 1551

GONZLEZ RODRGUEZ J. IVONNE

Cuestionario previo Anlisis fotoqumico preliminar.

FECHA DE ENTREGA 26 Agosto 2013

1.- Como se concentran los extractos vegetales? Toda vez que se ha realizado la etapa de extraccin y separacin, se procede a eliminar parte del solvente de extraccin para aumentar el contenido de slidos en el extracto. Al vacio: Utilizando un rota vapor. El vaco reduce la temperatura necesaria para evaporar el disolvente. Liofilizacion: Consiste en eliminar el solvente mediante una congelacin a temperatura bajas, seguido de una sublimacin del solvente, que pasa directamente del estado solido a vapor. Este mtodo se aplica principalmente en el caso de lquidos extractivos acuosos. Secado: Para preservar los componentes naturales presentes en los extractos de plantas, se emplean mtodos de secado para su obtencin en forma de polvos. Estos pueden ser secados por atomizacin y lecho fluidizado fundamentalmente. En estos procesos es muy importante evaluar las variables: concentracin de slidos, temperatura de secado, humedad, presin, flujo y velocidad de trabajo, as como la utilizacin de aditivos inertes como coadyuvantes del secado para favorecer el rendimiento

2.- Tcnicas para la separacin de extractos? Se pueden clasificar los extractos segn la concentracin de principio activo y segn su consistencia. EXTRACTOS FLUIDOS: concentracin de principio activosimilar a la concentracin de principio activo en la drogaoriginal. Consistencia lquida. EXTRACTOS BLANDOS: Concentracin de principio activosuperior a la de la droga original. Consistencia semislida.

EXTRACTOS SECOS: Se obtienen por evaporacin total delsolvente y tienen una consistencia slida.

La separacin slido-lquido se realiza con el objetivo de retirar el residuo de la droga despus de la extraccin. En la actualidad prcticamente en todos los procesos tecnolgicos relacionados con la industria qumica y mdicofarmacutica se incluyen etapas de separacin slido-lquido sobre los cuales recae una gran importancia tcnico-econmica. La seleccin de un separador con este fin es una tarea mucho ms compleja que la seleccin de otros equipamientos utilizados en los procesos tecnolgicos. En la industria se emplean procedimientos de sedimentacin, filtracin (filtro nutche, prensa) o centrifugacin. Para la seleccin del equipo de separacin adecuado hay que tener en cuenta el tipo de separacin, tamao de las partculas de los slidos suspendidos, contenido de slidos en la alimentacin, densidad relativa de los componentes, capacidad de procesamiento deseado y capacidad abrasiva, inflamable o explosiva 3.- Cuantos tipos de pruebas de identificacin qumica hay? Los metabolitos secundarios producidos por plantas constituye una fuente de sustancias bioactivas. Hoy en da los cientficos estn interesados en este tipo de metabolitos, adems que ha aumentado la bsqueda de nuevas drogas de origen vegetal. Las plantas de la familia Clusiaceae son conocidas como buenas fuentes de este tipo de compuestos. En Camern muchos metabolitos secundarios han sido aislados de numerosas plantas de la familia Clusiaceae, entre los cuales se pueden citar las xantonas, benzofenonas, cumarinas y flavonoides (Nkengfack et al. 2002; Ouahouo et al., 2004; Komguem et al.,2005). Determinacin de humedad: se entiende por humedad el agua libre que contiene el material vegetal. Para una buena conservacin, el contenido ha de ser inferior al 10%. En el material vegetal seleccionado (planta entera, hojas, raz, etc.) se determina la humedad siguiendo el mtodo elegido. Existen dos mtodos principalmente: Humedad (%) = [peso perdido (g)/peso inicial (g)] 100

El mtodo gravimtrico, o prdida de peso en estufa a 105 C hasta peso constante. Este es un mtodo orientativo, ya que en la calefaccin pueden perderse compuestos voltiles distintos del agua. El mtodo volumtrico, por arrastre del agua con un disolvente no miscible, como xileno o tolueno Contenido en cenizas: el trmino cenizas totales se refiere a el residuo que deja la combustin de la muestra y es una medida de el contenido mineral total. Se obtienen por calcinacin en mufla a 400 C durante 24h. Una vez enfriado se pesa. Adems, en las cenizas obtenidas se evaluar el contenido en elementos minerales disolvindolas en HCl (1:1). Cenizas (%) = [peso cenizas (g)/peso seco (g)] 100 Anlisis de elementos; Tras la combustin o digestin cida, se analiza cada uno de los micro o macronutrientes u otros elementos de inters. La calibracin se lleva a cabo mediante patrones a partir de disoluciones estndar. Se determinan macronutrientes (Na, K, Ca, Mg y Mn) y micronutrientes (Fe, Cu, Zn) analizndolos por Espectrofotometra de Absorcin Atmica. De esta forma, se conoce la cantidad de cada uno de ellos que la planta extrae del suelo en cada uno de sus estados fenolgicos. Componentes voltiles (Aceites esenciales): Los aceites esenciales constituyen la fraccin voltil de estudio en plantas aromticas y medicinales, compuesta por terpenos y derivados, derivados del benceno y otros. Se determinan por cromatografa de gases (CGL)y espectrometra de masas si es necesario, tras su obtencin por destilacin de arrastre de vapor a presin atmosfrica. Componentes no voltiles (Extractos): Para la determinacin de compuestos no voltiles se lleva a cabo una extraccin slido - lquido con disolventes orgnicos, que penetran en la materia vegetal y disuelven las sustancias, que son evaporadas y concentradas a baja temperatura. Despus, se elimina el disolvente, obteniendo la fraccin deseada. La seleccin del disolvente debe cumplir los siguientes requisitos:

Ser capaz de disolver rpidamente todos los principios activos. Disolver la menor cantidad de materia inerte. Tener un punto de ebullicin bajo y uniforme que permita eliminarlo rpidamente, pero evitando prdidas por evaporacin. Qumicamente inerte, para no reaccionar con los componentes a analizar. No inflamable y barato.

Este disolvente ideal no existe, y los ms empleados son el ter de petrleo, benceno y alcohol. Los componentes mayoritarios de los extractos son: cidos Fenlicos: Glico, 2,4,6 TOHB, protocatquico, gentsico, clorognico, vainlico, rutsido, isovainllico, OHcinmico, sirngico, sinpico, ferlico, 4 metoxifenilactico. Flavonoides: crysoeriol. Cada grupo se extrae y analiza por separado pero en ambos casos mediante Cromatografa Lquida de Alta Eficacia (HPLC) utilizando detector UV/VIS a 280 nm (cidos fenlicos) 254 nm (flavonoides). La identificacin se lleva a cabo comparando sus tiempos de retencin con los patrones puros, y con sus espectros UV cuando fuera necesario. Se identifican nicamente los componentes mayoritarios. La cuantificacin se realiza por el mtodo de patrn interno. Ensayos de control de calidad y pureza: Estos ensayos estn encaminados tanto a confirmar la identidad de materias primas vegetales como a valorar su calidad y pureza, con vistas a su normalizacin. La calidad y pureza requeridas para una sustancia o materia prima vegetal viene determinada por los patrones o estndares (valores numricos) dados en las farmacopeas y normas de calidad. Cuando las materias primas no renen los requisitos deben ser rechazadas. rutsido, naringina, luteolina, quercetina, apigenina,

4.-Pruebas coloridas para identificacin de:

Alcaloides Los alcaloides, junto a otras drogas bsicas de inters toxicolgico, tienen un comportamiento anlogo frente a un grupo de reactivos de precipitacin que permiten sospechar su presencia. en una pericia toxicolgica se hace uso de estas reacciones como primer paso de identificacin, y a que una reaccin positiva excluye la presencia de estos txicos, aunque una reaccin positiva no asegura su presencia. La reaccin con el Reactivo de Mayer (tetraiodo mercuriato de potasio) da lugar a la formacin de un precipitado amarillento amorfo o cristalino. El Reactivo de Draggendorf (yodo bismutato de potasio) forma precipitados de dolor rojo anaranjado y en general amorfos. El Reactivo de Bouchardat (triioduro) genera precipitados de color rojo pardo. El procedimiento para estos reactivos generales comienza con la evaporacin de 2 a 3 gotas del extracto etanlico en vidrio de reloj. Se agregan luego 2 a 3 gotas de cido clorhdrico 5% hasta solubilizar los residuos. A esta solucin se agrega una gota del reactivo correspondiente. Marcha sistemtica de Banford. Constituye una tcnica tradicional para la identificacin de alcaloides. Las reacciones qumicas que la componen tienen valor relativo y sus resultados no deben tomarse como concluyentes. Adems la presencia de impurezas puede inhibir o alterar los resultados.
Grupo I H2SO4 (c) Grupo II Reactivo de Marquis Reaccion de Oliver Fe3Cl 1% Tebaina Narcotina Morfeolicos (morfina, apomorfina, codeina) Sinteticos (diluadid, dionina, heroina) Morfina, heroina Morfina Heroina Grupo III Rojo sangre a anaranjado Amarillo limon violeta de tonalidad variable violeta de tonalidad variable rojo brillante azul no desarrolla color

HNO3 fumante

Brucina Eserina

rojo intenso rojo anaranjado violeta azulado

Ensayo de Vitali

Atropina, hiosciamina, escopolamina Grupo IV

H2SO4 + Cr2O7K2

Estricnina Yohimbina Curare

azul violaceo a rojo violaceo estrias azules , violetas y verdes rojo a violeta no da color azul marron no da color azul verdoso marrn azul violceo azul brillante violeta

Reactivo de Frhde

Estricnina Yohimbina Curare

Reactivo de Mecke

Estricnina Yohimbina Curare

Reactivo de Mandelin

Estricnina Yohimbina Curare Grupo V

Reactivo alcohlcido Novocana Nicotina, mezcalina Grupo VI Cl2 y vapores de NH3 Cafena Quinina Grupo VII Cocana, aconitina rojo, con vapores NH3prpura amarillo, con vapores NH3 verde. amarillo (en fro) rosado violceo (en caliente)

El procedimiento para las reacciones de la marcha de Bandford, es el mismo que el utilizado en las reacciones generales, en vidrio reloj, agregando directamente el reactivo correspondiente sobre el residuo seco.

Saponinas Las saponinas esteroides se pueden reconocer fcilmente en los anlisis fitoqumicos preliminares mediante los ensayos de la espuma, hemlisis de glbulos rojos, Liebermann-Burchard y ensayos para carbohidratos. a. Ensayo de la Espuma Al agitar una solucin acuosa de una muestra que sea o contenga saponinas, se forma una espuma estable como la obtenida al agitar la solucin acuosa de un jabn. Puesto que existen otras sustancias que pueden formar tambin espuma, se debe asumir este ensayo como una prueba presuntiva de la presencia de saponinas esteroides. b. Ensayo de Hemlisis Este ensayo es ms confiable que el de la espuma. A una suspensin de glbulos rojos en solucin salina diluida, se aade una solucin de la muestra que se presume que es o que contiene saponinas. Si los glbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume que la prueba es positiva. Este ensayo puede realizarse en tubo de ensayo49, en cajas de Petri con agar-sangre o en cajas de Petri con gelatina-sangre51. Cuando la muestra contiene taninos, deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren. Esto se logra por tratamiento repetido de la muestra con xido de magnesio, el cual forma complejos insolubles con los taninos, por lo cual es fcil eliminarlos por filtracin. Este ensayo, junto con el de la espuma, cuando ambos resultan positivos en una muestra vegetal (extracto, fraccin sustancia pura) permiten establecer que la muestra es contiene saponinas. La sola prueba de espuma positiva no es concluyente para determinar la presencia de saponinas. Adems hay sustancias que interfieren estas dos pruebas como son los taninos. Si la muestra contiene taninos, estos pueden eliminarse pues se absorben en MgO. c. Ensayo de Liebermann-Burchard Por la porcin esteroide que poseen las saponinas esteroides, este ensayo puede confirmar su presencia por ejemplo en muestras y extractos vegetales, tal como se indic anteriormente para los esteroles, pero debe tenerse en cuenta que al igual que en el caso de los esteroles -y los esteroides en general- solamente dan un resultado positivo los

que tengan grupos dienos conjugados reales o potenciales. Sin embargo otras saponinas como las triterpenoides tambin positiva la prueba. d. Ensayos para carbohidratos La presencia de carbohidratos ligados puede reconocerse fcilmente mediante ensayos como el de Molisch, el de la Antrona, etc., o media Triterpenos Debido a la diversidad de grupos funcionales que pueden estar presentes en los componentes mono- y sesquiterpnicos de un aceite esencial no existe una prueba especfica para su reconocimiento. Sin embargo existen unos pocos procedimientos experimentales que permiten reconocer algunos de ellos por su coloracin con diferentes reactivos, su absorcin de luz UV de 254 nm y su Rf en cromatografa en capa fina. Por ejemplo, el limoneno se reconoce en las placas de TLC porque no absorbe luz UV 254 nm, adiciona bromo, no forma un derivado 2,4-dinitrofenilhidrazona y produce color pardo con el cido sulfrico. Otros reactivos tiles para revelar monoterpenos y sesquiterpenos son anisaldehdo-cido sulfrico, vainillina-cido sulfrico y cido fosfomolbdico. En la destilacin por arrastre con vapor de agua, la muestra vegetal generalmente fresca y cortada en trozos pequeos, se coloca en una recipiente cerrado y sometida a una corriente de vapor de agua sobrecalentado, la esencia as arrastrada es posteriormente condensada, recolectada y separada de la fraccin acuosa. Esta tcnica es muy utilizada especialmente para esencias fluidas, especialmente las utilizadas para perfumera.. En el mtodo de extraccin con solventes voltiles, la muestra seca y molida se pone en contacto con solventes tales como alcohol, cloroformo, etc. Estos solventes solubilizan la esencia pero tambin solubilizan y extraen otras sustancias tales como grasas y ceras, obtenindose al final una esencia impura. Se utiliza a escala de laboratorio pues a nivel industrial resulta costoso por el valor comercial de los solventes, porque se

obtienen esencias impurificadas con otras sustancias, y adems por el riesgo de explosin e incendio caractersticos de muchos solventes orgnicos voltiles. En el mtodo de enflorado o enfleurage, el material vegetal (generalmente flores) es puesto en contacto con una grasa. La esencia es solubilizada en la grasa que acta como vehculo extractor. Se obtiene inicialmente una mezcla (concreto) de aceite esencial y grasa la cual es separada posteriormente por otro medios fisico-qumicos. En general se recurre al agregado de alcohol caliente a la mezcla y su posterior enfriamiento para separar la grasa (insoluble) y el extracto aromtico (absoluto). Esta tcnica es empleada para la obtencin de esencias florales (rosa, jazmn, azahar, etc.), pero su bajo rendimiento y la difcil separacin del aceite extractor la hacen costosa. El mtodo de extraccin con fluidos supercrticos, es de desarrollo ms reciente. El material vegetal cortado en trozos pequeos, licuado o molido, se empaca en una cmara de acero inoxidable y se hace circular a travs de la muestra un fluido en estado supercrtico (por ejemplo CO2), las esencias son as solubilizadas y arrastradas y el fluido supercrtico, que acta como solvente extractor, se elimina por descompresin progresiva hasta alcanzar la presin y temperatura ambiente, y finalmente se obtiene una esencia cuyo grado de pureza depende de las condiciones de extraccin. Aunque presenta varias ventajas como rendimiento alto, es ecolgicamente compatible, el solvente se elimina fcilmente e inclusive se puede reciclar, y las bajas temperaturas utilizadas para la extraccin no cambian qumicamente los componentes de la esencia, sin embargo el equipo requerido es relativamente costoso, ya que se requieren bombas de alta presin y sistemas de extraccin tambin resistentes a las altas presiones. Taninos

 Butanol-HCl (Butanlisis) (Porter at al, 1986) Depolimerizacin cida, oxidacin y deteccin. Es selectivo para taninos condensados, interferencias por agua y metales en la muestra Prussian Blue o Folin Ciocalteu (reacciones de oxidoreduccin). Los fenoles se oxidan no selectivamente Vainillina. Influenciada por T, [ ], tiempo, entre otros (Sun et al., 1998) DMACA (4-dimetilaminocinamaldehido) (Treutter, 1989)Detectan el producto coloreado de la reaccin tanino- aldehdo Flavonoides Los flavonoides poseen diversas actividades farmacologicas: contra la fragilidad capilar, contra los dinatadores arteriales, antiespasmoltica, antihepatotoxica, calefeties, estrogena, diurtica, antimierobiana, fungitowca, antiondantes, edulcorantes, entre atras. es se generan por la ruta metablica del shikimato y del acetatomalonato, la ruta del shikimato, origina los fenilpropanoides, los que atraves de la ruta del acetato malonato se transform a en flavonoides. Actualmente se conocen mas de 10 nudeos bsicos, para los navonoides, estos tienen un sistema ceca (34). Existen muchas tcnicas para la identificacin de los flavonoides entre elas se encuentran las reacciones de coloracin y predpitaan, espectrofotometria ultravioleta, Espectrofotometria infraroja, espectrofotometria de masas, difraccin de rayos X, y resonancia magntica nuclear. Las reacciones de coloracin pueden usarse tambin para evidenciar la presencia de flavano des, una de las ms especificas es de la Reaccin de Shinoda, de la que resultan coloraciones caracteristicas segun el tipo de ncleo de los flavonoides (35). Coloracin de los flavonoides frente a la reaccion de Shinoda.

Glucsidos cianogeneticos El mtodo en el presente guin aprovecha la reaccin, sensible y especfica de Guignard, la cual es ampliamente utilizada en pruebas cualitativas para la deteccin de HCN como de glucsidos cianognicos; sin embargo, con el uso de una curva estndar de cianuro alcalino, se podr realizar dicha prueba en formacuantitativa, expresndose en base al cido cianhdrico liberado.

Azucares Prueba de Molisch: normalmente la primera prueba realizada para la identificacin de los carbohidratos es la prueba de Molisch. Consiste en mezclar 2ml de la solucin a determinar la presencia de carbohidratos con 2 gotas del reactivo de Molisch (alfa naftol al 10%) recin preparado y 2ml de H2SO4 concentrado, el cual causa hidrlisis de los enlaces glucosdicos del disacariodo o polisacrido presente. La aparicin de un anillo de rojo violeta es indicativo de la presencia de carbohidratos en la muestra (Flores, 2002). Prueba de Lugol: permite distinguir Almidn, Glucgeno, Dextrinas y otros polisacridos.

Se agrega 1ml de la muestra problema, 3 gotas de HCl concentrado y luego 3 gotas del reactivo de Lugol, el cual esta constituido de yodo disuelto en yoduro de potasio, lo cual hace que se forme un complejo fsico de iones triyoduro (I3-), los cuales se sitan dentro de los espacios helicoidales que presenta la Amilosa o la Amilopectina (almidn) (Flores, 2002). Prueba de Fehling: los reactivos de Fehling, Tollons y Benedict, son agentes oxidantes moderados, oxidando a los grupos aldehdos al mismo tiempo que estos se reducen. A 1 ml de la muestra dada se adiciona 2 gotas del reactivo de Fehling, el cual consiste de dos partes: una parte esta constituida por una solucin de Sulfato Cprico, y la otra por Hidrxido de sodio y Tartrato de Sodio Potasio (Sal de Rochelle). Al mezclar cantidades iguales de estas dos soluciones, se forma un complejo soluble de Tartrato Cprico, de color oscuro, el cual proporciona una pequea concentracin de iones Cprico (Brewster, 1977). La presencia de carbohidratos reductores queda evidenciada, ya que el grupo aldehdo reduce la solucin de Fehling y forman un precipitado rojo ladrillo de xido Cuproso. Prueba de Seliwanoff: esta prueba se realiza para la identificacin de cetosas y aldosas. Se agregan 0,5 ml de la solucin problema y 2 ml del reactivo, el cual, para Flores (ob. cit), esta constituido por el compuesto fenlico Resorcinol (mdihidroxibenceno) disuelto en acido clorhdrico concentrado. Una tonalidad rojo cereza indica la presencia de cetosas. El cido clorhdrico deshidrata ms rpidamente las cetohexosas que las aldohexosas, ya que stas deben isomerizarse a aquellas, para formar el Hidroximetilfurfural por deshidratacin (Velzquez, 2008). Prueba de Bial: se emplea para diferenciar hexosas de pentosas. Se mezclan 2 o 3ml de la muestra a identificar caliente con 5ml del reactivo, el cual se encuentra constituido por el compuesto fenlico Orcinol (3,5-dihidroxitolueno), disuelto en HCl concentrado y cloruro ferrico. La aparicin de un color o precipitado verde, indica que existen pentosas en la muestra. Glucsido cardiotnicos

 Kedde Legal Raymond Liebermann-Burchard Ensayos para carbohidratos (Molisch, antrona, etc.) Keller-Kiliani: Para 2-deoxiazcares Bibliografa: http://es.scribd.com/doc/22022655/Extraccion-de-Principios-Activos http://es.scribd.com/doc/14172701/7-EXTRACCION-simple-multiple-yselectiva http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/extraccio_tip.html http://www.biol.unlp.edu.ar/toxicologia/seminarios/parte_2/alcaloides.html http://carbohidratosdaniel.blogspot.mx/ http://farmacia.udea.edu.co/~ff/saponinas2001.pdf

http://www.monografias.com/trabajos85/analisis-fitoquimica-metabolitossecundarios/analisis-fitoquimica-metabolitos-secundarios.shtml