Microbiologia

Microbiologia o ramo da biologia que estuda os microrganismos, incluindo eucariontes unicelulares e procariontes, como as bactrias, fungos e vrus. Atualmente, a maioria dos trabalhos em microbiologia feita com mtodos de bioqumica e gentica. Tambm relacionada com a patologia, j que muitos organismos so patognicos. Micrbios possuem caractersticas bsicas do fundo dos organismos sicrobaticos que os tornam os modelos de organismos ideais. Foi descoberta a origem das bactrias, tendo sido anterior a origem de outros corpos, tais como protozorios, eucariotes e vrus. Dentre os citados, o ltimo a se desenvolver foram os protozorios, por tratar-se de seres com uma complexidade maior:

So muito pequenos, ento eles no consomem muitos recursos Alguns possuem ciclos de vida bastante curtos (aprox. 30 minutos para E. coli, desde que esteja na presena das condies ptimas de crescimento) Clulas podem sobreviver facilmente em isolamento das outras clulas Eles podem-se reproduzir por diviso mittica, permitindo a propagao de clones idnticos em populaes Eles podem ser congelados por longos perodos de tempo. Mesmo se 90% das clulas so mortas pelo processo de congelamento, h milhes de clulas em um mililitro da cultura lquida.

Estes traos permitiram que Joshua e Esther Lederberg pudessem dirigir um elegante experimento em 1951 demonstrando que adaptaes evolutivas surgem melhor da preadaptao do que da mutao dirigida. Para isto, eles inventaram a replicao em placa, que permitiu que eles transferissem numerosas colnias de bactrias para locais especficos de uma placa de petri preenchida com gar-gar para regies anlogas em diversas outras placas de petri. Aps a replicao de uma placa com E. coli, eles expuseram cada uma das placas a fagos. Eles observaram que colnias resistentes aos fagos estavam presentes em partes anlogas de cada placa, possibilitando-os concluir que os traos de resistncia aos fagos existiam na colonia original, que nunca havia sido exposta aos fagos, ao invs de surgirem aps as bactrias terem sido expostas aos vrus.

A extensiva caracterizao dos micrbios tem nos permitido o uso deles como ferramentas em outras linhas da biologia:

Bactrias (especialmente Escherichia coli) podem ser usadas para reduplicar DNA na forma de um (plasmdeo). Este DNA frequentemente modificado quimicamente in vitro e ento inserido em bactrias para selecionar traos desejados e isolar o produto desejado de derivados da reao. Aps o crescimento da bactria e deste modo a replicao do DNA, o DNA pode ser adicionalmente modificado e inserido em outros organismos.

Bactrias podem tambm ser usadas para a produo de grandes quantidades de protenas usando genes codificados em um plasmdeo. Genes bacteriais tem sido inseridos em outros organismos como genes reprteres. O sistema de hibridao em levedura combina genes de bactrias com genes de outros organismos j estudados e os insere em uma clula de levedura para estudar interaes proticas em um ambiente celular. E tambm vista na area da computao.

A MICROBIOLOGIA MODERNA Atualmente, a microbiologia, como as demais reas das cincias mdicas, segue o caminho do DEVE-SE ESPECIALIZAR O MXIMO QUE SE PUDER. Assim, encontramos os bacteriologistas (especializados em bactrias), os virologistas (especializados em vrus), os micologistas (especializados em fungos), os ficologistas (especializados em algas microscpicas) etc. Muitos microbiologistas estudam a relao entre os micrbios e o homem, os animais e as plantas. Os microbiologistas mdicos pesquisam o papel dos microrganismos nas doenas humanas e buscam meios de prevenir e curar tais doenas. Os microbiologistas especializados em odontologia estudam os patgenos encontrados na boca, especialmente seu papel na crie dentria e outras doenas bucais. Em agricultura, os microbiologistas estudam as doenas das plantas, o papel dos microrganismos na fertilidade do solo, e os prejuzos que os microrganismos causam produo agrcola. Na indstria, os microbiologistas usam os microrganismos na fabricao de produtos tais como bebidas alcolicas, antibiticos, cido ctrico e vitamina C. Os

microbiologistas no especializados em um campo particular estudam os fatos bsicos dos microrganismos, inclusive suas relaes ecolgicas, genticas, Metablicas, Fisiolgicas e Morfolgicas. Os microrganismos tambm desempenham importante papel no tratamento de esgotos e no controle da poluio. Um novo ramo da microbiologia que vem se desenvolvendo rapidamente a microbiologia marinha, que dedica sua ateno ao vasto nmero de microrganismos dos oceanos. Certos microrganismos esto sendo cultivados e armazenados experimentalmente, para serem usados como alimento.

Morfologia e estrutura de Bacterias Morfologia As celulas bacteriana sao caracterizadas morfologicamente pelo seu tamanho, forma, arranjo e estruturas que apresentam. Tamanho As celulas bacterianas sao sempre de diametro microscopicas que vao desde 0,3 mm ate 10 por 25 mm. Forma As bacterias podem ser classificadas, quanto a forma, em tres grupos basico: Cocos: celulas esfericas; Bacilos ; celulas cilindricas, em forma de bastonetes; Espirilos ; celulas espiriliadas.

Arranjo Muitas bactrias podem ainda ser classificadas quanto ao arranjo que apresentam a disposio entre si. Cocos agrupados aos pares recebem o nome de diplococos. Quando o agrupamento constitui uma cadeia de cocos estes so denominados estreptococos. Cocos em grupos irregulares, lembrando cachos de uva, recebem a designao de estafilococos. Os bacilos e espirilos se apresentam em geral como clulas isoladas porem, ocasionalmente, pode-se observar bacilos aos pares ou em cadeias.

Estruturas bacterianas e suas funes

A clula bacteriana apresenta vrias estruturas. Algumas das quais esto presentes apenas em determinadas espcies, enquanto outras so essenciais e, portanto, encontradas em todas as bactrias. A Figura apresenta esquematicamente uma clula bacteriana tpica com as principais estruturas externas e internas membrana plasmtica.

Membrana citoplasmtica
A membrana plasmtica, membrana celular ou plasmalema a estrutura que delimita todas as clulas vivas, tanto as procariticas como as eucariticas. Ela estabelece a fronteira entre o meio intracelular, o citoplasma, e o ambiente extracelular, que pode ser a matriz dos diversos tecidos.

Estrutura qumica
Como a maioria das membranas biolgicas, a membrana das bactrias composta de protenas (60%) imersas em uma bicamada fofolipdica (40%). As propores dos componentes so variveis, dependendo da espcie bacteriana e das condies de cultivo. Os cidos Graxos dos lipdios so responsveis pela condio hidrofbica da poro interna da membrana enquanto a parte hidroflica dos mesmos fica exposta ao meio externo aquoso.

Alm das interaes como Mg2+ e Ca2+ so responsveis pela manuteno da integridade da membrana. A membrana dos procariotos difere quimicamente da membrana das clulas eucariticas, principalmente pela ausncia de esteris.

Funes:

Transporte de solutos Produo de energia por transporte de eltrons e fosforilao oxidativa Biossntese Duplicao do DNA

Mesossomo
A membrana citoplasmtica pode apresentar invaginaes mltiplas que formam estruturas especializadas denominadas mesossomos. Existem dois tipos: A) Septal, que desempenha importante papel na diviso celular, pois, aps a duplicao do DNA, ao qual se encontra ligado, atua como o fuso no processo de diviso da clula eucaritica, separando os dois cromossomos e conduzindo-os para os plos da clula. Alm disso, participa tambm da formao das paredes transversais B) Lateral, encontrada em determinadas bactrias, parece ter como funo concentrar enzimas envolvidas no transporte eletrnico, conferindo clula maior atividade respiratria ou fotossinttica.

Parede celular
Geralmente a presso osmtica do interior das bactrias (15 a 20 atmosferas) muitas vezes superior do meio externo, de maneira que a tendncia da clula a intumescer grande e, se no fosse presena da parede celular, as bactrias estourariam. A manuteno da forma bacteriana (bacilo, como, etc.) devida a esta estrutura. Alm disso, a parede desempenha um papel

importante na diviso celular como primer para sua prpria biossntese, dando origem ao septo que separa as duas novas clulas oriundas da diviso celular.

Estrutura das paredes celulares das bactrias Gram positivas e Gram negativas:

A parede das bactrias pode ser formada primariamente por uma espessa camada de peptoglicano. As bactrias com esse tipo de parede so camadas Gram positivas. Em outras bactrias a parede celular formada por uma camada delgada de peptoglicano e uma camada externa adicional, semelhante a uma segunda membrana plasmtica. Essas bactrias so chamadas de Gram negativas.

Bactrias com paredes de composio qumica ou sem parede

Arqueobactrias Peptidioglicanos tpicos com cido murmico e Daminocidos, caractersticos da eubactrias. Algumas possuem paredes exclusivamente de N-acetilglicosamina e outras apenas de protenas.

Micoplasmas No possuem parede celular e seu citoplasma limitado apenas por uma bicamada fosfolipdica associada a protenas e alta concentrao de esteris.

Formas L Clulas sem parede originadas de bactrias Gram positivas ou Gram negativas selecionadas pelo uso de agentes que destroem a parede (lisozima ou penicilina). Uma vez isoladas, podem ser estveis (permanecem sem parede na ausncia do agente) ou instveis (quando voltam a sintetizar a parede).

Flagelos
O flagelo bacteriano confere movimento clula e formado de uma estrutura basal, um gancho e um longo filamento externo membrana (Figura 7). O filamento composto de um nico tipo de protena chamado de flagelina.

O comprimento de um flagelo geralmente maior que o da clula, mas seu dimetro uma pequena frao do dimetro celular. Nem todas as bactrias possuem flagelos. Nas eubactrias, pode-se generalizar, afirmando que muitas espcies de bacilos apresentam flagelos, mas raramente eles ocorrem nos cocos. A localizao e o nmero de flagelos so usados na classificao de certos grupos taxonmicos. Os flagelos so muito finos e apenas com o aumento do seu dimetro por meio de coloraes especiais pode ser visualizado em microscpio ptico. Os flagelos movimentam-se em velocidades muito elevadas, causando deslocamento das bactrias ao longo de distncias muito superiores ao seu comprimento. A velocidade calculada de deslocamento da clula Spirilum serpens de 500 mm/s. Algumas bactrias movimentam-se por meios diferentes da atividade flagelar: Mixobacterales deslizam sobre a superfcie de um slido com movimentos sinuosos. A velocidade desta bactria de apenas alguns micrmetros por segundo. O movimento que algumas bactrias realizam, estimuladas por fatores fsicos ou qumicos, chamado taxia. Quando o agente estimulante a luz, trata-se de fototaxia; quando o agente qumico, quimiotaxia.

Pili ou fmbrias
Muitas bactrias Gram negativas so dotadas de apndices filamentosos proticos que no so flagelos, tais apndices chamaram fmbrias, so menores, mais curtos e mais numerosos que os flagelos e no formam ondas regulares. As fmbrias podem ser vistas apenas sob microscopia eletrnica. No desempenham nenhum papel relativo a mobilidade, pois so encontradas tanto em espcies mveis como em espcies imveis. H, contudo, vrias funes associadas com diferentes tipos de fmbrias. Um tipo, conhecido como fmbria F, serve como porta de entrada de material gentico durante a conjugao bacteriana. Outros tipos funcionam como stios receptores de bacterifagos e como estruturas de aderncia s clulas de mamferos e as outras superfcies. Esta propriedade de aderncia a superfcies atribuda s fmbrias pode ser importante para as bactrias em seu ambiente ecolgico natural, pois permite sua fixao de tecidos dos quais derivam seus nutrientes.

Nucleide
O nucleide procaritico ou DNA bacteriano, quando devidamente corado, pode ser visualizado com o auxlio do microscpio ptico. Micrografias eletrnica revelam a ausncia de uma membrana nuclear e de um aparelho mitico. A regio nuclear preenchida por fmbrias de DNA dupla hlice na forma de uma nica molcula de aproximadamente 1mm de comprimento (desdobrada) e peso molecular de 2 a 3 x 109 D. O DNA com carga negativa neutralizado, pelo menos parcialmente, por poliaminas pequenas e pelo on magnsio. Entretanto, recentemente foram descobertas protenas semelhantes s histonas de mamferos e, provavelmente, elas desempenham um papel semelhante ao das histonas na cromatina eucaritica.

Citoplasma
O citoplasma da clula bacteriana uma soluo aquosa limitada pela membrana plasmtica. Imersas no citoplasma existem partculas insolveis, algumas essenciais (ribossomos e nucleide) e outras encontradas apenas em alguns grupos de bactrias, nos quais exercem funes especializadas como os grnulos e os vacolos gasosos.

Ribossomos
Partculas citoplasmticas responsveis pela sntese protica, compostas de RNA (60%) e protena (40%). Em procariotos possuem coeficiente de sedimentao de 70S e so compostos de duas subunidades 30S e 50S. Embora a estrutura e a biossntese dos ribossomos sejam bastante diferentes entre procariotos e eucariotos, sua funo a mesma.

Capsula
As capsulas sao geralmente de natureza polissacarideo, apesar de existirem tambem capsulas constituidas por proteina. As capsulas de natureza polissacarideos estao compreendidas na definicao de glicocalice, que engloba todas as estruturas contendo polissacarideos que se acham situadas externamente a parede. O glicocalice e responsavel pela adesao de diversas bacterias aos locais onde estas se estabelecem, favorecendo a formacao de microcolonias.

Esporos
Algumas bacterias, notadamente as pertencentes aos generos Bacillus e Clostridium, sao capazes de dar origem a forma de resistencia denominados endosporos. O endosporo e uma celula, formada no interior da bacteria, altamente resistente ao calor, desecassao e outros agentes fisicos e quimicos, capaz de permanecer em estado latente por longos periodos e de germinar dando origem a uma nova celula vegetativa.

METABOLISMO BACTERIANO O termo metabolismo refere-se a todas as reaes qumicas que ocorrem na clula, incluindo tanto as reaes que produzem energia como as que utilizam para biossintese ou outras funes celulares. A clula transforma a energia em composto qumico ou luz, em energia til ao seu funcionamento, que e a energia qumica contida em determinados compostos, que apresentam ligaes ricas em energia, tais como ATP (adenosina trifosfato), GTP ( guanosina trifosfato ), acetil-Coa ( acetil-coensima A ) e outros. Pela quebra de ligaes altamente energticas destes compostos, a clula obtm energia para a realizao de tarefas que consomem energia, tais como a biossintese de molculas orgnicas complexas. A sntese de protenas, lipdeos, carboidratos e cidos nuclicos realizados a partir da suas respectivas subnidades, ocorrem constantemente na clula bacteriana, sendo esta uma das principais funes metablicas da clula. Bactrias heterotrficas sintetizam ATP a partir da energia liberada pela oxidao de compostos orgnicos que, transformados em molculas mais simples, so utilizados como fontes de carbono. Denomina-se respirao aerbica aos processos de obteno de energia caracterizados pela utilizao do oxignio como receptor final dos eltrons liberados na oxidao dos compostos que constituem a fonte de energia. Fermentao e o nome dado aos processos de obteno de energia onde compostos orgnicos funcionam como receptores finais dos eltrons liberados na oxidao de outros compostos orgnicos usados como fonte de energia.

Obteno de energia

Bactrias pratrficas: possuem metabolismo defeituoso. Ainda que oferecido carbono orgnico no consiga sintetizar todos os compostos. Portanto, s conseguem viver na clula hospedeira. Ex: clasmdeos e requtseas. Respirao aerbica Respirao anaerbica Quimiotrficas Fermentao No so processos exclusivos! No existem bactrias que s fermentam Todas quimiotrficas respiram Diferenas entre fermentao e respirao Na respirao: hidrognios e eltrons transportados por receptores inorgnicos. Se receptor for O2 aerbica, se no for anaerbica. No existe bactria que faz respirao aerbica e anaerbica

Na fermentao: com receptores orgnicos Produto final: Respirao aerbica: mais rentvel que a anerbica Fermentao: menos rentvel dos 3 processos composto inicial: piruvato Fermentao alcolica: produto final - lcool etlico; no to importante para as bactrias e sim para as leveduras Fermentao ltica: Streptococos - bactria de interesse mdico Fermentao propinica: produto final - cido propinico. Ex: Corinibacterium / Propionibacterium: fazem tambm respirao anaerbica Fermentao butrica: produto final - cido butrico, lcool butrico e cido B-hidroxibutrico: tambm realizam respirao anerbica. Fermentao butilenogliclica: Enterobacter / butilenoglicol Fermentao acidamista: os produtos finais so o cido actico, lcool etlico e cido succnico Nota: * hidrolases - molculas grandes se transformam em monmeros. * autolisinas esto normalmente inibidas: a penicilina destri inibidores das autolisinas, destruindo a parede.

Enzimas bacterianas Classificao: a . extracelulares b .ectocelulares c . endocelulares a. Enzimas extracelulares catalase: protege bactrias contra ao da H2O2 produzida na fagocitose coagulase: fibrinognio fibrina penicilase: age sobre penicilina b. Enzimas ectocelulares agem na membrana (permeabilidade seletiva) nos processos respiratrios e na sntese de parede c. Enzimas endocelulares fazem sntese de grnulos de reserva, enzimas envolvidas no catabolismo enzimas de constituio: produo permanente, reguladas pelo PH, concentrao do substrato, etc . . . enzimas de induo: s quando h necessidade ; reguladas pela sua sntese atravs do status do gene (se est ou no ativado). So ativados pelos operons. Produto final inibe ativador dos operons, "desligando" assim o gene.

Consumo de energia Biossntese Locomoo Transporte ativo Produo de calor Somente os processos de biossntese de parede e grnulos de reserva so diferentes das clulas eucariticas.

Necessidade da Cultura
Na maior parte das vezes, o estudo da morfologia, arranjo e a interpretao das propriedades de colorao so insuficientes para a identificao do agente bacteriano. Recorre-se ento cultura, para se conseguir um elevado nmero de microorganismos, para estudar as caractersticas culturais da bactria como a capacidade de crescer em meio selectivo e o aspecto das colnias. Atravs da cultura em meios slidos, pode-se tambm quantificar a presena bacteriana no material analisado (importante para diferenciar infeco de colonizao em determinadas situaes), obter colnias para a realizao de testes de identificao, bem como obter inculo para suspenso (em soluo salina)para a realizao de antibiograma.

Meio de Cultura
Assim, para a realizao de uma cultura bacteriana, precisamos de um inculo e de um meio de cultura. O meio de cultura uma substncia lquida ou gelificada, simples ou complexa, que permite a nutrio, o crescimento e a multiplicao dos microorganismos.

Com efeito, o meio de cultura deve oferecer condies o mais prximas possvel das condies naturais. As suas caractersticas fundamentais so:

Composio: normalmente contm 80% de gua, 0.9% de cloreto de sdio e o restante depende do microorganismo em questo (embora tenha que existir uma fonte de energia e carbono - habitualmente um acar).

Isotonia: a concentrao de cloreto de sdio deve ser idntica fisiolgica. As bactrias envolvidas nas patologias humanas geralmente no so haloflicas, apesar de o Staphylococcus aureus poder suportar elevadas concentraes salinas.

pH: entre 6.8 e 7.8, ou seja, prximo da neutralidade. Mas de lembrar que outras bactrias podem ter outros pH ptimos, diferentes da neutralidade (ex. Helicobacter e Lactobacillus que so acidfilas. J o Vibrio cholerae, agente causador da clera, apresenta um crescimento timo em pH entre 8 e 9,5).

Potencial redox: depende do seu tipo de respirao. Podem ser anaerbias estrictas (no possuem enzimas para degradar o perxido de hidrognio), anaerbias moderadas, anaerbias facultativas e aerbias estrictas.

Esterilidade: a esterilizao do meio de cultura efectuada aps a sua preparao, para assim eliminar os microorganismos contaminantes. Conseguido geralmente por esterilizao na autoclave.

Acondicionamento: tentando, a todo o custo, evitar a contaminao (recipientes rolhados ou placas de Petri). Temperatura: a incubao deve ser feita temperatura corporal.

Os meios de cultura podem ser classificados segundo o seu estado fsico, pela sua composio e a sua utilizao. No que respeita ao seu estado fsico, os meio podem ser lquidos, tambm designados por caldos, e a sua turvao o indicador de crescimento bacteriano. Os meios gelificados (geloses) permitem o crescimento das clulas formando colnias. As geloses so obtidas a partir de um

meio lquido ao qual adicionado uma substncia gelificante: inicialmente era a gelatina, mas como esta era usada pelos microorganismos, passou a ser usado o gar-gar (1.5%), que apenas promove a gelificao do meio. O gar-gar pode ainda ser usado em concentraes inferiores (0.5/0.7), em meios semi-gelificados (so utilizados para verificar a mobilidade das bactrias). Em relao composio do meio, podem ser classificados como naturais, cuja composio complexa e mal definida (ex. caldo de carne), sintticos (substncias qumicas perfeitamente conhecida - normalmente um p ao qual se adiciona gua) e semi-sintticos aos quais se adiciona uma substncia natural (ex. gelose de sangue). Finalmente, em relao sua prtica laboratorial, podemos considerar os meios de base, que contm os nutrientes mnimos essenciais ao crescimento e multiplicao bacterianas, os meios enriquecidos, meios aos quais foram adicionados produtos biolgicos (ex. sangue) e meios selectivos, quando h uma alterao de um ou mais factores fsico-qumicos ou se adicionam substncias com uma aco antibacteriana, que vo actuar como selectora de algumas bactrias

Isolamento bacteriano
Trata-se da obteno de culturas puras (apresenta s uma estirpe de bactrias) de bactrias a partir de culturas mistas (apresenta mais do que uma estirpe bacteriana). Pode ser efectuado por processos biolgicos, usando meios de cultura selectivos, ou por processos mecnicos, sendo a tcnica de esgotamento ou a tcnica das diluies as mais utilizadas.

A tcnica de esgotamento o mtodo das estrias.

aplicada em gelose e consiste em isolar a estirpe desejada por arrastamento sucessivo do inculo com a ala de platina, fazendo vrias estrias na superfcie do meio de cultura.

Na tcnica das diluies, vai-se diluindo sucessivamente o inculo em gua destilada estril ou soro fisiolgico.

Cultivo de bactrias
Cultivo das Bactrias O cultivo dos microrganismos, em condies laboratoriais, um pr-requisitopara seu estudo adequado. Para que isto possa ser realizado, necessrio o conhecimento de suas exigncias nutritivas e das condies fsicas requeridas. Tipos Nutritivos das Bactrias As bactrias podem ser divididas em grupos com base em suas exigncias nutritivas. A principal separao corresponde aos grupos fototrficos (organismos que utilizam a energia radiante como fonte de energia) e quimiotrficos (organismo sim capazes de utilizar a energia radiante; dependem da oxidao de compostos qumicos para a obteno de energia) . Fototrficos Existem bactrias que utilizam o CO2 como principal fonte de carbono; so as fotolitotrficas. Outras exigem um composto orgnico (alcois, cidos graxos, aminocidos) e so ditas fotorganotrficas.

Quimiotrficos: Bactrias que utilizam o CO2 como fonte de carbono e oxidam compostos inorgnicos (p.e., nitritos) ou elementos qumicos (p.e.,enxofre) para obteno da fonte de energia ,so chamadas quimiolitotrficas.As que utilizam compostos orgnicos para obter energia, so chamadas quimiorganotrficas.As comumente,como bactrias , fotolitotrficas ao passo e que quimiolitotrficas as espcies so conhecidas, e autotrficas fotorganotrficas

quimiorganotrficasso designadas heterotrficas.

As bactrias heterotrficas apresentam exigncias nutritivas mais simples. O fato de um organismo poder crescer e se reproduzir numa mistura de compostos qumicos simples indicam que ele possui uma grande capacidade de sntese. As bactrias heterotrficas foram estudadas mais profundamente porque, sob certo aspecto, demonstram um interesse mais imediato. Neste grupo se encontram todas as bactrias patognicas para o homem, para outros animais e para os vegetais, assim como a maior parte da populao microbiana do ambiente humano. As bactrias heterotrficas, embora constituam o principal grupo nutritivo, variam, consideravelmente, quanto aos nutrientes especficos exigidos para o crescimento (tabela 3). As heterotrficas podem ser Consumidoras, alimentando-se de outros organismos vivos; saprfitas , que se alimentam de matria orgnica morta. Outras podem ser simbiontes, ou seja, mantm uma relao estreita com um organismo de espcie diferente. Estas simbiontes podem ser comensais, que nem ajudam, nem prejudicam seu hospedeiro, ou podem ser parasitas, que causam dano ao hospedeiro (caso das bactrias patognicas). Meios Bacteriolgicos Para o cultivo rotineiro de microrganismos heterotrficos, utilizam-se certas matrias-primas complexas, tais como as peptonas, os extratos de carne e de levedura, da resultando um meio que promove o desenvolvimento de grande variedade de bactrias e de outros microrganismos. Quando se deseja um meio slido, adiciona-se o gar como agente solidificante. O caldo e o gar nutritivos so exemplos de meios lquidos e slidos, relativamente simples, indicados para a cultura de microrganismos heterotrficos comuns. Alguns microrganismos no se desenvolvem bem nestes meios, pois demonstram exigncias de nutrientes especficos, como vitaminas e

outras substncias estimulantes. Tais microrganismos so chamados de heterotrficos fastidiosos, e necessitam de meios especiais para seu cultivo, isolamento e reconhecimento. Os meios de cultura, de acordo com a sua aplicao ou funo, podem ser classificados, entre outros, como: Meios Enriquecidos: a adio de sangue, soro ou extratos de tecidos animais ou vegetais ao caldo ou gar nutritivos proporciona nutrientes acessrios, de modo que o meio possa permitir o crescimento de heterotrficos fastidiosos. Meios Seletivos: a adio de certas substncias qumicas especficas a o gar nutritivo previne o crescimento de um grupo de bactrias sem agir sobre outras. O cristal violeta, por exemplo, em uma dada concentrao, impede o crescimento de bactrias gram-positivas, sem afetar o desenvolvimento das bactrias gram-negativas. Meios Diferenciais: a incorporao de certos reagentes ou substncias qumicas no meio pode resultar num tipo de crescimento ou modificao, aps a inoculao e a incubao, que permite ao observador distinguir os tipos de bactrias. Por exemplo, inoculando-se uma mistura de bactrias num meio de gar sangue, algumas das bactrias podem hemolisar (destruir) as clulas vermelhas e outras no. A zona clara ao redor da colnia a evidncia de ter ocorrido a hemlise. Assim, pode-se estabelecera distino entre bactrias hemolticas e no-hemolticas, de acordo com o seu desenvolvimento. Extrato de carne Extrato aquoso de tecido muscular, concentrado sob a forma de pasta Contm as substncias solveis dos tecidos animais, incluindo carboidratos, compostos orgnicos de nitrognio, vitaminas hidrossolveis e sais Peptona Produto que resulta da digesto de materiais proticos como carne, casena e gelatina; a digesto protica realizada por meio de cido sou de enzimas; existem muitas peptonas diferentes (dependendo da protena usada e do mtodo de digesto) para uso em meios bacteriolgicos; as peptonas diferem em suas propriedades de promover o crescimento Principal fonte de nitrognio orgnico; pode conter algumas vitaminas e, s vezes, carboidrato, dependendo do tipo de material protico digerido gar Carboidrato complexo, obtido de certas algas marinhas; tratado para a remoo de substncias estranhas Usado como agente solidificante dos meios; o gar, dissolvido e solues aquosas, gelifica quando a temperatura reduzida a menos de45C; no considerado como fonte nutritiva para as bactrias Extrato de leve do Extrato aquoso de leveduras comercialmente apresentado sob a forma de p Fonte muito rica de vitaminas B,tambm contm compostos orgnicos de nitrognio e de carbono

Condies Fsicas Necessrias ao Crescimento Assim como as bactrias variam com relao s exigncias nutritivas, tambm demonstram respostas diversas s condies fsicas do ambiente. Temperatura: o crescimento bacteriano pode ter seu ritmo e quantidade determinados pela temperatura, uma vez que esta influencia as reaes qumicas doprocesso de crescimento. Cada espcie de bactria cresce sob temperaturas situadas em faixas caractersticas e, sendo assim, so classificadas nos seguintes grupos: 1. Bactrias psicrfilas: so capazes de crescer a 0 C ou menos, embora seu timo seja entre 15 C ou 20 C.2. Bactrias mesfilas: crescem melhor numa faixa de 25 a 40 C.3. Bactrias termfilas: crescem melhor a temperaturas de 45 a 60 C. A temperatura tima de crescimento a temperatura de incubao que possibilita o mais rpido crescimento, durante curto perodo de tempo (12 a 24 horas). Exigncias atmosfricas: os principais gases que afetam o crescimento bacteriano so o oxignio e o dixido de carbnico. Como as bactrias apresentam grande variedade de resposta ao oxignio livre, elas so divididas em: 1. Bactrias aerbias: crescem na presena de oxignio livre. 2. Bactrias anaerbias: crescem na ausncia de oxignio livre. 3. Bactrias anaerbias facultativas: crescem tanto na presena como na ausncia do oxignio livre. 4. Bactrias microaerfilas: crescem na presena de quantidades pequenas de oxignio livre. Acidez e alcalinidade (pH): para a maioria das bactrias, o pH timo decrescimento localiza-se entre 6,5 e 7,5. Embora poucos microrganismos possam desenvolver-se nos limites extremos de pH, as variaes mnimas e mximas, para a maior parte das espcies, esto entre pH 4 e pH 9