PRACTICA No.

4 RECUENTO DIFERENCIAL DE LEUCOCITOS OBJETIVO: Que el alumno aprenda a diferenciar la morfologa de los diferentes leucocitos realizando una tincin policromatfila de Wright. FUNDAMENTO: TINCION DE WRIGHT. El recuento diferencial es una parte importante de la valoracin hematolgica y consiste en reconocer las distintas variedades de glbulos blancos y las posibles anormalidades celulares en un frotis de sangre teido con el colorante de Wright. Debido a que el colorante de Wright se trata de una solucin de eosina y una mezcla de tiacinas que incluyen el azul de metileno, el citoplasma de las clulas se tien con el colorante cido (eosina) ya que en l, se encuentran los componentes bsicos de la clula, por otro lado, el ncleo de la clula se tie con los colorantes bsicos (azul de metileno) ya que en l se encuentran los componentes cidos de la clula. El incremento o la disminucin en el nmero total de leucocitos se pueden causar por alteraciones en todas las lneas celulares o por la modificacin de un tipo especfico de leucocitos. En el recuento diferencial de leucocitos se cuentan 100 clulas leucocitarias y los resultados se anotan en porcentajes de cada tipo encontrado. Para la obtencin de la frmula leucocitaria exige, en primer lugar, la realizacin de un buen frotis de sangre, es decir, que no sea excesivamente grueso ni delgado. As si el frotis es muy grueso, adems de dificultar la observacin de la morfologa eritrocitaria, resultar ms difcil distinguir los linfocitos de los monocitos. Por el contrario, si es muy delgado, la mayora de polinucleares y tambin monocitos se hallarn localizados en las reas perifricas. Lo que har difcil no solo realizar el recuento diferencial, sino tambin obtener una relacin correcta entre las clulas observadas (falsos aumentos de linfocitos o de monocitos). El principal defecto del frotis obtenido mediante la extensin manual de la gota de sangre sobre el portaobjetos reside en la irregular distribucin de los leucocitos, lo cual junto al escaso nmero de clulas normalmente analizadas y otros factores diversos constituyen causas de error que hay que tener siempre en cuenta al realizar el recuento diferencial leucocitario. La distribucin irregular de los leucocitos obedece al diferente tamao de las clulas, de forma que las pequeas (linfocitos) tienen tendencia a situarse hacia el centro de la extensin, y las de mayor tamao (monocitos), en las regiones ms perifricas. MATERIAL. 1Puente de tincin 2 Portaobjetos por equipo 1 Microscopio por equipo 1 Contador de clulas por seccin Agua destilada.

Aceite de inmersin. REACTIVOS. Colorante de Wright Buffer pH = 7.0 MTODOS PARA PREPARAR EXTENCIONES SANGUINEAS. 1.- Mtodo de los dos portaobjetos o de la cua. a) Colocar la gota de sangre de un tamao regular (2 a 3 mm de dimetro) aproximadamente a un centmetro del extremo de un portaobjetos. b) Tomar otro portaobjetos con el dedo ndice y pulgar de la mano derecha. c) Colocar el borde libre sobre la gota de sangre y dejar que esta se extienda a lo largo del borde libre. El segundo portaobjetos deber hacer un ngulo de 30 a 45 con el primer portaobjetos. Con movimiento suave pero firme y a velocidad constante desplazar el segundo portaobjetos a lo largo del primer portaobjetos. PROCEDIMIENTO

a) Realizar extraccin de sangre capilar, descartar primera gota y colocar la segunda gota en b) c) d) e) f) g) h) i)
portaobjetos. Realice un frotis sanguneo y se deja secar al aire sobre el puente de tincin. Cubra la extensin con un exceso de colorante de Wright durante 5 minutos, esto tiene como finalidad evitar la evaporacin del colorante y la formacin de precipitados. Transcurrido el tiempo, aada una cantidad igual de solucin amortiguadora. Soplar suavemente sobre la superficie de la mezcla con la finalidad de homogenizar. Se deja reposar exactamente 5 minutos. Sin tirar la mezcla, lave con agua destilada hasta que el agua que escurra no lleve colorante. Secar al aire y aadir una gota de aceite de inmersin para observar en el microscopio a inmersin. Para la frmula diferencial debe de contarse 100 clulas y deber hacerse la diferenciacin entre monocitos, linfocitos, basfilos, eosinfilos, neutrfilos, y simultneamente, ver el nmero de mielocitos, bandas, metamielocitos, y segmentados que existen entre neutrfilos, si hay otro tipo de clulas como por ejemplo blastos, debern incluirse en el total.