UADY

FACULTAD DE QUMICA Campus de Ciencias De la Salud

UNIVERSIDAD AUTNOMA DE YUCATN FACULTAD DE QUMICA

CURSO DE VERANO 2013

BACTERIOLOGA

Infecciones por micoplasma urogenitales: Mycoplasma genitalicum y Ureaplasma urealyticum

Elaborado por DAVID POOT PECH

Docente M. en C. Claribel Huchin Chan

FECHA DE ENTREGA

MRIDA, YUCATN A VIERNES 21 DE JUNIO DE 2013

NDICE Pgina I. Bacterias que carecen de pared celular Mycoplasma y Ureaplasma I.1. Introduccin...... I.2. Caractersticas generales de los Micoplasmas.. I.3. Morfologa e identificacin I.4. Recoleccin de muestra y transporte II. Mycoplasma genitalium. II.1. Generalidades... II.2. Patognesis y factores de virulencia.. II.2.1. Adherencia y entrada. II.2.2. Enzimas..... II.2.3. Evasin de la respuesta inmune del husped.. II.3. Identificacin de M. genitalicum.... II.4. Tratamiento...... III. Ureaplasma urealyticum.. III.1. III.2. III.3. III.4. IV. V. Generalidades... Factores de virulencia.... Identificacin de U. urealyticum... Tratamiento.................... 1 2 2 3 4 4 5 5 7 7 9 9 9 9 10 10 12 13 13

Prevencin... Apndices. Ureaplasma.

V.1. Apndice 1. Lamina de figuras: Identificacin de Mycoplasma y 14 15 Listado de referencias bibliogrficas...

VI.

I.

Bacterias que carecen de pared celular Micoplasma y Ureaplasma I.1. Introduccin

Los micoplasmas pertenecen a la clase Mollicutes. Los micoplasmas que colonizan o infectan a los seres humanos pertenecen a la familia Mycoplasmataceae: esta familia contiene dos gneros, Mycoplasma y Ureaplasma.1 Los microorganismos de Mycoplasma y Ureaplasma son las bacterias ms pequeas de vida libre. Son caractersticos debido a la ausencia de pared celular y a la presencia de esteroles en su membrana celular para su desarrollo y funciones.1, 2

La ausencia de pared celular confiere resistencia a los micoplasmas frente a las penicilinas, las cefalosporinas, vancomicina y a otros antibiticos que interfieren en la sntesis de la pared celular.2 Pero son inhibidas por tetraciclina o eritromicina.3

La mayora de los micoplasmas son aerobios y tienen requerimientos especiales de cultivo. Los micoplasmas forman parte de la biota normal humana y se encuentran sobre todo en la orofaringe, las vas respiratorias superiores y el aparato genitourinario.1 El grupo de microorganismos denominados micoplasmas genitales, por su localizacin en las mucosas del tracto urogenital, incluye las especies, M. hominis, Ureaplasma spp. (con sus dos biovariedades: U. parvum y U. urealyticum) y M. genitalium (vase Apndice 1 Figura 1). Otras especies que tambin se localizan en el tracto urogenital son spermatophilum y M. fermentans.4 M. penetrans, M.

I.2.

Caractersticas generales de los Micoplasmas Son altamente pleomorfos, pues carecen de una pared celular rgida, estos son desde cocos 0.2-0.3 m a bacilos de 0.1-0.2 m de ancho y 12 m de longitud.2, 3

Crecen en medios artificiales acelulares y contienen tanto cido ribonucleico (ARN) como cido desoxirribonucleico (ADN).2 Son anaerobios facultativos excepto Mycoplasma pneumoniae, que es aerobio estricto y necesitan esteroles exgenos que se aade al medio de crecimiento.2

Crecen lentamente con una velocidad de colonizacin de 1 a 6 horas. Los principales determinante antignicos son los glucolpidos y las protenas de membrana.2

I.3.

Morfologa e identificacin

Debido al pequeo tamao de las colonias de este microorganismo, no es posible su estudio por los mtodos bacteriolgicos ordinarios. La morfologa parece lquidos.3 diferente segn el mtodo de examen: campo oscuro,

inmunofluorescencia, frotis teidos por el mtodo Giemsa y medios slidos o

El crecimiento

en medios lquidos origina muchas formas diferentes, entre

ellas: anillos, cuerpos bacilares y espirales, filamentos y grnulos. El crecimiento en medios slidos consiste, principalmente, en masas

protoplsmicas plsticas de forma indefinida que se deforman con facilidad. Aunque los micoplasmas se clasifican desde el punto de vista taxonmico como bacterias gramnegativas, se tien poco debido a la ausencia de pared celular. 3

Para su identificacin es preciso considerar algunas caractersticas (vase Cuadro 1).

Cuadro 1. Caractersticas para la identificacin de especies de Mycoplasma y Ureaplasma 5 humanas. Utilizacin de Crecimiento en Tiempo Sitio de pH hasta la aislamiento Glucosa Arginina Urea Aerobiosis CO2 Anaerobiosis ptimo recuperacin Aparato genital Mycoplasma + 5.5-8 1-5 das 4+ 4+ 4+ hominis Ureaplasma urealyticum/ + 5.5-6.5 1-4 das 4+ 4+ 4+ U. parvum Mycoplasma + + 7 4-21 das 2+ 4+ fermentans Aparato respiratorio/genital Mycoplasma + 7 Lento 2 3-4+ 1+ genitalicum Acholeplasma + 6-8 1-5 das 4+ 4+ 4+ laidlawii +, positivo; -, negativo.

I.4.

Recoleccin de muestra y transporte

Los micoplasmas genitales pueden aislarse en diversas muestras, como exudado uretral, vaginal y cervical: secreciones prostticas; semen; orina; sangre, otros lquidos corporales (LCR, liquido amnitico, secreciones respiratorias, liquido sinovial, liquido pericrdico) y tejidos (lavados y biopsias endometriales, tejidos placentarios o amniticos, tejidos fetales o de aborto, biopsias de la trompa de Falopio, biopsias uterinas, biopsias de herida, tejidos rectales). Las muestras por hisopado deben obtenerse utilizando hisopos de DacronR, de alginato de calcio o de polister con tallos plsticos o de aluminio. No deben utilizarse hisopos con tallo de madera porque este material por si puede ser toxico para los ureaplasmas.5

Pueden emplearse varios medios de transporte para los cultivos de micoplasmas genitales como caldo que contiene tripticasa y soja con el agregado de albumina srica bovina al 0,5%, caldo 2SP o diversos tipos de medios de crecimiento para micoplasmas (SP-4, caldo de Shepard 10B). Por lo general se agregan antibiticos y antimicticos (penicilina, 100 000 U/mL; polimixina B. 5 000 g/mL; anfotericina B, 2 mg/mL, concentraciones finales)

para disminuir la contaminacin por otros microorganismos bacterianos y micticos. Las muestras deben ser transportadas al laboratorio de inmediato y se mantienen hasta 24 horas a 4 C antes de la siembra en los medios de crecimiento.5

II.

Mycoplasma genitalium II.1. Generalidades

La mayor parte de las caractersticas de M. genitalium son conocidos a travs de los resultados de su estudiado a fondo, genticamente pariente cercano, Mycoplasma pneumoniae. Mientras que M. genitalium puede causar

enfermedad del tracto genitourinario, M. pneumoniae es un patgeno establecido de las vas respiratorias y es una causa importante de neumona atpica.6

El microorganismo M. genitalium no se asocia con la presencia de otros micoplasmas y ureaplasmas. En las mujeres este microorganismo causa cervicitis y endometritis.1

A pesar de la pequea genoma posedo por los micoplasmas, que tienen la capacidad de auto-reproducirse. Mientras que otros micoplasmas pueden utilizar arginina (M. hominis) o urea (U. urealyticum), M. genitalium metaboliza la glucosa, lo que resulta en la produccin de cido. De acuerdo con los Mollicutes, el metabolismo de M. genitalium hace uso de sustrato (glucosa) en la fosforilacin que se asocia con las enzimas glucolticas quinasa, tales como gliceraldehdo-3-fosfato deshidrogenasa (GAPDH), la piruvato quinasa o quinasa fosfoglicerato para la sntesis de esencial nucleotriphosphates (PNT) de su genoma. M. genitalium hace uso exclusivamente de GAPDH, retenido en su genoma pequeo, durante el proceso de gliclisis, genera energa para el organismo.6

El microorganismo M. genitalium es la procariota autorreplicante existente ms pequeo con un genoma que consta de slo 580 kb (vase Apndice 1 Figura 2). Se ha demostrado que M. genitalium contiene algunos subconjuntos de complemento genmico de M. pneumoniae y que los genes que codifican en el M. genitalium genoma corresponde a ciertas secuencias del genoma de M. pneumoniae.6

En los ltimos aos M. genitalium ha generado gran inters cientfico como agente etiolgico de uretritis no gonoccica aguda y crnica, y otras diversas infecciones genitales.5

II.2.

Patognesis y factores de virulencia

M. genitalium tiene varios factores de virulencia que son responsables de su patogenicidad. Estos incluyen la capacidad de adherirse a las clulas husped epiteliales utilizando el polo terminal del orgnulo con sus adhesinas, la liberacin de enzimas y la capacidad para evadir la respuesta inmune del husped por la variacin antignica; se ha demostrado que se fija a diferentes tipos de clulas, incluyendo eritrocitos, clulas Vero, clulas de las trompas de Falopio, clulas de las vas respiratorias y los espermatozoides.6

II.2.1. Adherencia y entrada. Para todos los microorganismos patgenos intracelulares, la adhesin es un requisito previo para la colonizacin e infeccin. Desde micoplasmas carecen de paredes celulares y estructuras celulares pared-asociados, tales como fimbrias que normalmente se asocia con la adhesin, el proceso de adhesin est mediado por componentes de la clula unida a la membrana que conjunto se llaman adhesiones.6 en

El microorganismo M. genitalium utiliza el polo orgnulo terminal que es una estructura proteica compleja, mediadora de la adhesin. Se requiere este

complejo de protenas de anclaje de la membrana celular de ntima adhesin a las clulas diana del husped. Aunque expuesto en la superficie, estas adhesinas forman parte del citoesqueleto interno del polo de orgnulo.6

La principal adhesina en el complejo de protena de adhesin es la protena MgPa, y junto con la protena P32 (MG318), constituye el extremo orgnulo terminal. El MgPa codifica las protenas P140 (MG191) y P110 (MG192) citoadherentes (cytadhesins) en la zona polar. Estas protenas son

inmunognicas tanto en los animales inmunizados y en los seres humanos. La prdida de cualquiera (P140 o P110), dara lugar a la prdida de las propiedades de la motilidad y la adhesin y la integridad de la protena MgPa orgnulo accesoria. Se demostr que el 140 kDa P140 (MG191) se asemeja mucho a la protena principal de adhesin 170 kDa (P1) de M. pneumoniae, mientras que el 32 kDa de M. genitalium protena P32 (MG318) se asemeja a P30 de M. pneumoniae.6

Las protenas MG218 y MG317 del citoesqueleto demostraron desempear un papel en la organizacin orgnulo terminal, deslizndose por motilidad y citoadherencia. Mientras que la protena MG317 contribuye a anclar el ncleo electrodenso de la punta a la membrana celular.6

El M. genitalium penetra en las clulas epiteliales de hospedero despus de la unin de una manera similar como las especies M. penetrans y M. fermentans. La membrana de la clula diana a continuacin, se invagina en una manera similar al mecanismo de depresiones revestidas de clatrina de la endocitosis observado en C. trachomatis. La clatrina es una gran protena que ayuda en la formacin de un hoyo recubierto en la superficie interna de la membrana plasmtica de una clula. El hoyo ms tarde forma brotes en la clula para dar origen a una vacuola recubierta en el citoplasma de la clula a travs del cual la infeccin del organismo es transmitido en la clula. Tras la entrada en la clula

diana, el organismo parece residir en las vacuolas unidas a la membrana ms cerca del ncleo de la clula diana. Este proceso de localizacin internuclear se puede hacer presente 30 minutos despus de la infeccin.6

II.2.2. Enzimas. Adems del papel desempeado por las adhesinas, se ha encontrado que durante la va glucoltica mediada por enzima, que es la actividad de la enzima GAPDH en la gluclisis que provoca la unin de M. genitalium a la mucina vaginal y de cuello uterino humano en la enfermedades femeninas. Por lo tanto la GAPDH, acta como un ligando a los receptores de mucina y de la fibronectina, en particular en la enfermedad vaginal y de cuello uterino. 6

El M. genitalium tiene la capacidad de trasladar sus enzimas citoplasmticas a las superficies de las membranas celulares para mejorar la colonizacin del tejido husped. Adems de la GADPH, otra enzima como la metionina sulfxido reductasa (MsrA), puede ser liberada para mejorar la patogenicidad de su pequeo genoma. La MsrA es una enzima de reparacin del antioxidante de la bacteria. Se restaura protenas que han perdido su actividad biolgica debido a la oxidacin de sus metioninas, protegiendo de esta manera la estructura de la protena bacteriana causada por el dao oxidativo del husped.6

II.2.3. Evasin de la respuesta inmune del husped. La patognesis de micoplasmas depende de un contacto ntimo con la clula husped y por lo tanto tienen que ser capaces de evadir la respuesta inmune del husped, adaptarse al medio ambiente y el cambio fenotpico. Los principales determinantes antignicos de las Mollicutes son sus protenas de membrana que se expresan en la superficie. Ellos son capaces de generar una alta frecuencia de variacin intragenmica, en la secuencia de nucletidos o arreglo de ADN en los Loci cromosmicos seleccionados, y dar lugar a la promocin de la variacin fenotpica al azar como resultado de los cambios del

entorno constantemente. Mltiples copias de secuencias parciales de genes se han encontrado en la mayora de las bacterias patgenas, pero como los micoplasmas tienen genomas muy pequeos, el nmero de genes de micoplasmas implicados en la diversificacin los antgenos de superficie es notablemente alta.6

Los mecanismos bsicos observados en la variacin antignica son la regulacin de la expresin de factores de virulencia por las vas de transduccin de seal, o la generacin natural de nuevos fenotipos que son capaces de sobrevivir a la respuesta inmune del husped. Cuando hay muchos genes reguladores disponibles que podran servir como sensores a los estmulos del medio ambiente, o que pueden codificar factores de transcripcin, M. genitalium puede emplear la variacin antignica causada por el cambio molecular de los acontecimientos.6

Con el fin de escapar del ataque inmune del husped, las protenas P140 y P110 de la MgPa tienen la capacidad de someterse a la variacin antignica, alterando de este modo toda la secuencia gentica de la MgPa generando variantes que no son reconocidos por el sistema inmune del husped en encuentros posteriores. Otros mecanismos de supervivencia de este organismo pueden ser la capacidad de imitar antgenos de la clula husped y la ubicacin intracelular dentro de los macrfagos profesionales.6

El dao tisular visto en M. pneumoniae es debido a la respuesta de las clulas husped y esto puede reflejar lo que ocurre en la infeccin por M. genitalium. Se han encontrado micoplasmas que interactuan con muchos de los componentes del sistema inmune. Esto puede conducir a la produccin de citocinas y la activacin de los macrfagos. Algunos componentes de las clulas pueden actuar como superantgenos e inducir una respuesta autoinmune.6

II.3.

Identificacin de M. genitalicum

Los mtodos moleculares de deteccin de M. genitalium incluyen los ensayos de PCR convencionales y en tiempo real que amplifican el gen para la adhesina (MgPa) especifica de M. genitalium o regiones especficas de especie del gen rRNA 16S.7 El M. genitalium es extremadamente difcil de aislar por mtodos basados en cultivo. Se utiliza el medio de Friis, un medio de crecimiento complejo que contiene solucin salina tamponada de Hanks, caldo de infusion de cerebro y corazn, extracto de levadura casero y hasta un 20% (v/v) de suero de caballo. Los mtodos de PCR son esenciales para la deteccin inicial y la monitorizacin de los cultivos para el crecimiento.5

II.4.

Tratamiento

El perfil de sensibilidad a los antimicrobianos de M. genitalium parece ser similar al de M. pneumoniae, con sensibilidad a las tetraciclinas, a varios macrolidos (eritromicina, espiramicina, roxitromicina, azitromicina y

claritromicina) y fluoroquinolonas (ofloxacina, ciprofloxacina, lomefloxacina, esparfloxacina).5

III.

Ureaplasma urealyticum III.1. Generalidades

El microorganismo U. urealyticum es parte normal de la biota genital tanto de hombres como de mujeres, se encuentra en aproximadamente 70% de los humanos activos sexualmente. Tambin puede causar enfermedades,

incluyendo uretritis inespecfica, infertilidad, corioamnionitis, aborto, nacimiento prematuro y en el perodo perinatal, neumona o meningitis.7

El gnero Ureaplasma incluye los micoplasmas que especficamente pueden hidrolizar la urea. En la actualidad, el gnero contiene siete especies: U. urealyticum, U. parvum, U. diversum, U. gallorale, U. felinum, U. cati y U. canagenitalium.5

III.2.

Factores de virulencia

El microorganismo U. urealyticum tambin produce varios factores asociados con la virulencia. Las cepas aisladas de U. urealyticum producen tres enzimas fosfolipasas (Ap A2 y C) ubicadas en la membrana citoplasmtica. Estas enzimas hidrolizan fosfolpidos, con la liberacin de cido araquidnico. 5

La liberacin de cidos araquidnicos por las membranas amniticas conduzca a la produccin de prostaglandinas, que pueden activar un trabajo de parto prematuro. Tambin se ha visto que U. urealyticum induce la produccin de citocinas inflamatorias (factor de necrosis tumoral- [TNF-], interleucina-6 [IL6]) en lneas celulares de macrfagos humanos y de ratas, y estimula la liberacin de xido ntrico por macrfagos alveolares cultivados. La amplia liberacin de estas citocinas puede contribuir a la respuesta inflamatoria y a la patologa de la enfermedad pulmonar crnica observada en los recin nacidos prematuros de muy bajo peso al nacer.5

III.3.

Identificacin de U. urealyticum

Para el cultivo de M. hominis y U. urealyticum, las muestras adecuadas recibidas en medios de transporte se siembran en medios lquidos y slidos. En general, cerca de 0,2 mL de la muestra deben sembrarse por estra en medios con agar y en medios lquidos. Los caldos se incuban en aerobiosis a 35 C, pero las placas deben incubarse en estufa con CO2, o en una jarra de anaerobiosis por extincin con vela. Ambos microorganismos tambin pueden aislarse cuando se incuban en anaerobiosis.5

Las placas sembradas deben examinarse a diario con un aumento de 40x y luz oblicua para observar las colonias con forma de huevo frito de M. hominis o las colonias pequeas y densas de U. urealyticum. En el caso de los cultivos en caldo, cualquiera de los tubos que muestren el ms leve cambio de color alcalino o turbidez debe ser subcultivado en los medios solidos adecuados.5

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En el caldo U, para U. urealyticum tendera a producir un cambio leve de color al comienzo de la incubacin sin una turbidez distinta o evidente.5

La mayora de las cepas aisladas de U. urealyticum crecen en el transcurso de 5 a 7 das. Si despus de este tiempo no se observa proliferacin en las placas del cultivo primario o en los subcultivos en caldo, el cultivo puede informarse como negativo para micoplasmas genitales.5

Las colonias pequeas de U. urealyticum pueden ser difciles de distinguir de diversos artificios, como clulas de mamferos y detritos o materiales celulares presentes en el suero. Por estos problemas, la presuncin de que una proliferacin de colonias corresponda a U. urealyticum deben ser confirmada. Esto se realiza aprovechando la capacidad de U. urealyticum para hidrolizar la urea. Si el medio agar U contiene urea y rojo fenol, la colonia sospechosa de ser ureaplasma aparecer rodeada por un halo rojo; esta tcnica es similar a la prueba Mycofast Evolutio 3, (deteccin rpida, que se basa en concentraciones elevadas de sustratos necesarios para el metabolismo de micoplasmas [vase Apndice 1 Figura 3]).5, 7

La confirmacin de U. urealyticum en colonias sospechosas tambin pueden lograrse mediante la prueba de cloruro manganoso-urea (En esta prueba, la placa de agar que contiene la proliferacin de colonias se cubre con una solucin acuosa de urea (1%) y 0,8% (p/v) de cloruro manganoso. La hidrolisis de la urea por la ureasa libera grupos hidroxilos del agua y estos oxidan el cloruro manganoso a oxido de manganeso insoluble, lo que causa el depsito de un precipitado castao dorado en las colonias en el transcurso de unos minutos).5

Los medios de agar diferencial A7 de Shepard y sus modificaciones, los agares A7B y A8, tienen la urea y el reactivo para la deteccin de la hidrolisis de la urea

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incorporado ya en el medio, de modo que no se requiere cubrir la placa con cloruro manganoso.5 Las colonias de U. urealyticum producen colonias no hemolticas en cabeza de alfiler que no se tien con la tcnica de Gram; estas colonias se pueden visualizar con la tincin de Dienes o con naranja de acridina.1

Las colonias de U. urealyticum aparecen en el transcurso de 1 a 3 das y tienen de 15 a 50 pm de dimetro (de acuerdo con la cantidad de bacterias). Las colonias de U. urealyticum en los agares A7 y A7B son de color castao oscuro debido a la acumulacin de xido de manganeso, mientras que las colonias en el agar diferencial A8 son doradas a castao claro (vase Apndice 1, Figura 4).5

Tambin se puede usar otros ensayos como el PCR para U. urealyticum donde se emplean secuencias de rRNA 16S especificas del microorganismo, y las secuencias del gen para el antgeno MB (bandeo mltiple, variacin antignica) o las secuencias del gen para la ureasa para la deteccin y la identificacin de este microorganismo.5

III.4.

Tratamiento

Las cepas aisladas de M. hominis y U. urealyticum son sensibles a las tetraciclinas. Las cepas de M. hominis suelen ser sensibles a clindamicina y lincomicina, pero no a eritromicina y otros macrolidos (azitromicina,

claritromicina). Las cepas de U. urealyticum suelen ser sensibles a eritromicina y azitromicina, pero no a clindamicina y lincomicina. El crecimiento de M. hominis y U. urealyticum tambien es inhibido por cloranfenicol, estreptomicina y gentamicina, pero no por los agentes que actuan sobre la pared celular (cefalotina, ampicilina y vancomicina).5

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IV.

Prevencin

Como medidas de prevencin son apropiadas bien la abstinencia o el uso de barreras fsicas de proteccin; evitar realizar coito anal-vaginal sin proteccin; en el caso para homosexuales evitar acto sexual sin el uso de preservativo.5 V. Apndices V.1. Apndice 1: Lamina de figuras; Identificacin de Mycoplasma y Ureaplasma
Figura 1. Micrografa electrnica de transmisin de M. genitalium tie negativamente con molibdato de amonio. Se muestra la forma del frasco caracterstica y la parte truncada de terminal con pequeas proyecciones extracelulares. El tamao de un organismo se presenta en el texto (aumento original, 120 000).
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Figura 2. Genoma complete de Mycoplasma genitalicum 580.07 kbp

Figura 3. Lectura de los resultados Mycofast Evolution 3: Amarillo (Negativo); Rojo fusina (positivos).
7

Figura 4. Colonias de M. hominis y U. urealyticum que crece en el agar diferencial A7B de Shepard. Las colonias de M. hominis tienen la morfologa tpica en huevo frito, el color azul se debe a la tincin de Diene. Las colonias de U. urealyticum son ms pequeas y densas, y presentan una pigmentacin castaa (sealadas) debido a la precipitacin de xido de manganeso por la accin de la enzima ureasa de los microorganismos.
5

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VI.

Listado de referencias bibliogrficas 1. Forbes, B.; Sahm, D.; Weissfeld, A. Bailey & Scott Diagnstico microbiolgico. 12 edicin. Editorial. Mdica Panamericana, Buenos Aires, 2009; pp 525, 529. 2. Murray, P.; Rosenthal, K.; Pfaller, M. Micribiologa mdica. 6 Edicin. Editorial Elsevier, Barcelona, 2009, pp 421. 3. Llop, A.; Valds-Depena, M.; Zuazo, J. Microbiologa y parasitologa mdicas. Tomo 1, CIP editorial Ciencias Mdicas, La Habana, 2001, pp 420, 421. 4. Cercenado, E.; Cantn, R. Procedimientos en microbiologa clnica: Diagnostico microbiolgico de las infecciones por Mycoplasma spp. y Ureaplasma spp. SEIMC, 2011; Captulo 40, p 10. 5. Winn, W.; Allen, S.; Janda, W.; Koneman, E.; Procop, G.;

Schrekenberger, P.; Woods, G. Koneman diagnstico microbiolgico: texto y atlas en color. 6 edicin, Ed. Mdica Panamericana, Buenos Aires, 2008, pp 977, 979, 980, 986, 994; 998-1000. 6. Ie Roux, M.C.; Hoosen A.A. Mycoplasma genitalium: a brief review. South Afr. J. Epidemiol. Infect. 2010, 25, 4, 7-10. 7. Galvn Contreras, R. Diagnstico de Mycoplasma hominis y

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