Saccharomyces cerevisiae

Fisiologa:
Este microorganismo muestra 5 fases de crecimiento bien definidas cuando es cultivado en medios liquidos con glucosa como fuente de carbono: la fase lag, la fase logartmica, el cambio diauxico, la fase postdiuxica y la fase estacionaria. Las fase lag es un periodo de adaptacin en el cual la celula se prepara para dividirse. Durante la fase logartmica las clulas alcanzan su mxima velocidad de duplicacin y llevan a cabo un metabolismo fermentativo del que se produce etanol. Al disminuir la concentracin de glucosa, las clulas atraviesan por el cambio diuxico, un periodo breve de tiempo en el cual no hay divisin, y la celula cambia de un metabolismo fermentativo a uno respiratorio. En la fase postdiuxica las clulas usan como fuente de carbono el etanol producido durante la fase logartmica e incrementa su resistencia al estrs gradualmente. En tanto que la fase estacionaria se presenta cuando los nutrientes del medio se han agotado y no hay divisin celular. En esta fase, las clulas acumlan carbohidratos de reserva como trehalosa y glucgeno, alcanza el mximo nivel de resistencia a estrs y su pared celular se vuelve ms gruesa y resistente a la digestin por liticasa.

Morfologa:
Hongo levaduriforme que presenta clulas alargadas, globosas a elipsoidales con gemaciones o blastoconidios multilaterales (de 3-10 x 4,5-1 m). Ascos con hasta cuatro ascosporas esfricas o elipsoides y de pared lisa en su interior. Las colonias en agar glucosado de Sabouraud son cremosas, blandas y glabras como las formadas por Candida.
Gemacin: Es un tipo de reproduccin asexual. Es una divisin desigual, consiste en la formacin de prominencias sobre el individuo progenitor. Y que al crecer y desarrollarse origina nuevos seres que pueden separarse del organismo parental o quedar unidos a l, iniciando as una colonia. A nivel unicelular, es un proceso de mitosis asimtrica que se da en algunos seres unicelulares, como las levaduras. Blastoconidio: Es cuando algunas levaduras se reproducen bipolarmente y no se separan la clula hija (blastoconidio) y forman y un pseudomicelo. Ascos: Cada una de las clulas reproductoras de los hongos ascomicetes en el interior de las cuales se forman las esporas (ascosporas haploides)

Ruta que sigue:

Las levaduras como la saccharomyces cerevisiae, requieren, que la glucosa sea catabolizada mediante la glucolisis o ruta de Embden-Meyerhof, para obtener el piruvato al cual

posteriormente por la accin de enzimas especficas, se convierte en anaerbicamente en etanol y dixido de carbono. La glicolisis es una ruta catablica en la cual la glucosa es convertida en dos molculas de piruvato, las cuales dependiendo de las condiciones, pueden tomar rutas diferentes. Posteriormente el piruvato se descarboxila debido a la presencia de la enzima piruvato descarboxilasa que se encuentra en todos los organismos que metabolizan alcohol, para formar acetaldehdo el cual se reduce a etanol por la presencia de NADH como agente reductor, a travs de la accin de la enzima alcohol deshidrogenasa, la cual est en todos los organismos capaces de dar lugar a la fermentacin alcohlica. La conversin del piruvato a etanol.

Balance energtico:
Mediante el cultivo de la saccharomyces cerevisiae cepa VTT C-10883 en presencia de HMF y furfural, se encontr que las concentraciones intracelulares de los cofactores redox y los cargo de reduccin catablicos y anablicos fueron significativamente ms bajos en presencia de aldehdos de furano que en los cultivos sin inhibidores. La carga de la reduccin catablico desminuyo de 0,13( 0,005) a 0,08(0,002) y la tasa de reduccin de anablicos disminuyo de 0,46(0,11) a 0,27(0,02) en HMF y furfural estaban presentes. La concentracin de ATP intraceular fue menor cuando se aadieron los inhibidores, pero dio como resultado slo en una modesta disminucin en l carga de energa de 0,87(0,002) a 0,85(0,004) en comparacin con el control. Perfiles de transcriptoma seguido por el anlisis del enriquecimiento funcional MIPS de genes regulados revel que el grupo ms funcional de rescate celular, defensa y viruela fue excesivamente representados cuando se presente compararon inhibidores para controlar cultivos. La fermentacin alcohlica es un proceso anaerbico exotrmico (libera energa) y molculas de ATP necesarias para el funcionamiento metablico de las levaduras (seres unicelulares). Debido a las condiciones de ausencia de oxgeno durante el bioproceso, la respiracin celular de la cadena del ADP en ATP queda completamente bloqueada, siendo la nica fuente de energa para las levaduras la gliclisis de la glucosa con la formacin de molculas de ATP mediante la fosforilacin a nivel de sustrato. El balance a nivel molecular del proceso se puede decir que genera 2 molculas de ATP por cada molcula de glucosa. Si se compara este balance con el de la respiracin celular se ver que se generan 38 molculas de ATP. A pesar de ello parece ser suficiente energa para los organismos anaerbicos. La energa libre de Gibbs (entalpa libre) de la reaccin de fermentacin etlica muestra un valor de G de -234.6 kJ mol-1 (en un entorno de acidez neutra pH igual a 7) este valor negativo de la energa libre de Gibbs indica que: desde el punto de vista termodinmico la fermentacin etlica es un proceso qumico espontneo La determinacin de los factores que limitan la gluclisis fermentativa del etanol son complejos debido a la interrelacin existente y a la naturaleza de los parmetros intervinientes durante el

proceso de fermentacin. Algunos de ellos se deben tener en cuenta en la fermentacin alcohlica industrial. En las limitaciones que surgen durante el proceso se pueden enumerar algunos de los ms importantes como son:

Concentracin de etanol resultante - Una de las principales limitaciones del proceso, es la resistencia de las levaduras a las concentraciones de etanol (alcohol) que se llegan a producir durante la fermentacin, algunos microorganismos como el saccharomyces cerevisiae pueden llegar a soportar hasta el 20% de concentracin en volumen. En ingeniera bioqumica estos crecimientos se definen y se modelizan con las ecuaciones de crecimiento celular dadas por las ecuaciones de Tessier, Moser y de la ecuacin de Monod. Acidez del substrato - El pH es un factor limitante en el proceso de la fermentacin ya que las levaduras se encuentran afectadas claramente por el ambiente, bien sea alcalino o cido. Por regla general el funcionamiento de las levaduras est en un rango que va aproximadamente desde 3.5 a 5.5 pH. Los procesos industriales procuran mantener los niveles ptimos de acidez durante la fermentacin usualmente mediante el empleo de disoluciones tampn. Los cidos de algunas frutas (cido tartrico, mlico) limitan a veces este proceso. Concentracin de azcares - La concentracin excesiva de hidratos de carbono en forma de monosacridos y disacridos puede frenar la actividad bacteriana. De la misma forma la baja concentracin puede frenar el proceso. Las concentraciones lmite dependen del tipo de azcar as como de la levadura responsable de la fermentacin. Las concentraciones de azcares afectan a los procesos de osmosis dentro de la membrana celular. Contacto con el aire - Una intervencin de oxgeno (por mnima que sea) en el proceso lo detiene por completo (es el denominado Efecto Pasteur). Esta es la razn por la que los recipientes fermentadores se cierren hermticamente. La temperatura - El proceso de fermentacin es exotrmico, y las levaduras tienen un rgimen de funcionamiento en unos rangos de temperatura ptimos, se debe entender adems que las levaduras son seres mesfilos. Si se expone cualquier levadura a una temperatura cercana o superior a 55 C por un tiempo de 5 minutos se produce su muerte. La mayora cumple su misin a temperaturas de 30 C. Ritmo de crecimiento de las cepas - Durante la fermentacin las cepas crecen en nmero debido a las condiciones favorables que se presentan en el medio, esto hace que se incremente la concentracin de levaduras.

Medio de cultivo
En el gnero saccharomyces, la glucosa en es el principal sustrato regulatorio en condiciones aerobias. La represin de la respiracin por la glucosa en condiciones aerbicas, lleva a un decrecimiento en la velocidad especifica del consumo de oxgeno y consecuentemente en la comulacin de etanol. Este mecanismo es ampliamente conocido como efecto Crabtree o efecto glucosa y tambin como fermentacin aerbica (Suomalaine y Oura, 1971, Fietchter y

otros, 1981, Gadd, 1988). Poseen la capacidad de crecer en ausencia de aire (proceso fermentativo) o en su presencia (proceso oxidativo). Las caractersticas del crecimiento y produccin de productos depende de las condiciones de desarrollo. La formacin aerbica de etanol a partir de glucosa ha sido observada en diferentes tcnicas de cultivo: batch (cultivo discontinuo) semi-batch (discontinuo alimentado) y en cultivos continuos (Von Meyenburg, 1969, Hop Thi Bich y otros, 1998). En las primeras etapas de los cultivos batch, el azcar es consumido con produccin de concominante de etanol, seguido por una corta fase de latencia y restauracin del crecimiento a partir del etanol. Los proceso batch se caracterizan por una baja densidad celular debida ala inhibicin por el etanol. Las Cepas de S. cerevisiae var. Distaticus, tienen la capacidad de producir y secretar una enzima extracelular denominada glucomialasa que favorece en la produccin de etanol a partir del almidn. La misma difunde hacia el medio de cultivo hidrolizando a unidades de glucosa dese el extremo no reducido de la cadena de este polisacrido, y es capaz de fermentar dextrinas. Adems poseen la capacidad de fermentar maltotetralosa la cual no es fermentada por cepas de S. cerevisia y S. uvarum.

pH: Saccharomyces cerevisiae es una levadura y no se describe normalmente en trminos de su pH.

Dicho esto, el citoplasma de la levadura se mantiene normalmente a un pH entre 5,5 y 5,75. La levadura prefiere vivir en un ambiente ligeramente acido y crecimiento de la levadura produce una serie de acidos organicos que reduce el pH de su entorno.

Necesitars

Una botella esterilizada de 500 ml con tapa 5 gramos de extracto de levadura 10 gramos de peptona 10 gramos de dextrosa 500 ml de agua destilada Unos tubos de ensayo con tapas Unas pipetas Unos bucles de inoculacin Una placa de agitacin magntica (opcional) Un autoclave (opcional) Una incubadora de agitacin (opcional)

Minimizar

Instrucciones
1.

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Obtn la cepa de saccharomyces cerevisiae que necesitas para tu experimento. Si no necesitas una cepa especfica, puedes cultivar levadura de panadera o levadura de cerveza que puedes comprar en un almacn.

2.

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Prepara el medio de cultivo de la saccharomyces cerevisiae midiendo el agua destilada en el frasco estril y agregando los extractos de levadura, peptona y dextosa. Mezcla el medio de cultivo ya sea tapando la botella y sacudindola o utilizando una placa de agitacin magntica. Coloca el medio de cultivo en el autoclave utilizando un ciclo estndar si no lo utilizars inmediatamente.

3.

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Coloca con la pipeta aproximadamente 5 ml de medio de cultivo en cada tubo de ensayo. Utiliza una pipeta nueva y esterilizada para cada tubo.

4.

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Inocula cada tubo de ensayo con la saccharomyces cerevisiae. Utiliza un bucle de inoculacin para transferir las colonias de una cepa comprada o un cultivo que ya est creciendo; quema el bucle despus de cada transferencia o utiliza bucles descartables. Si utilizas levadura de panadera o de cerveza, coloca un poco de levadura del paquete en el tubo de ensayo utilizando un bucle de laboratorio estril.

5.

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Tapa los tubos de ensayo.

6.

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Incuba los tubos de ensayo en una incubadora de agitacin de 12 a 24 horas a 30 grados C. Si no tienes acceso a una incubadora de agitacin, puedes incubar los tubos a temperatura ambiente y ocasionalmente sacudirlos con cuidado a mano.