Sunteți pe pagina 1din 9

UNIVERSITATEA DE MEDICINA SI FARMACIE CAROL DAVILA BUCURESTI FACULTATEA DE MEDICINA GENERALA

PROIECT METODOLOGIA CERCETARII STIINTIFICE


DITU GEORGIANA

ANUL 4 SERIA 8 GRUPA 60

Hipertrofia ventricular stng indus prin not modificri ale fenomenelor electrice i mecanice n muchiul papilar de obolan
Alina Scridon, D. Dobreanu, . R. Constantin
Rezumat: Ca rspuns la o larg varietate de stimuli miocardul se adapteaz prin hipertrofia miocitelor. Mecanismele implicate

n hipertrofia fiziologic sunt nc incomplet elucidate. Scopul studiului a fost de a evalua modificrile electrice i mecanice asociate hipertrofiei fiziologice. Metod 40 obolani Wistar au fost distribuii n grup control (CONT) i grup antrenat prin not (PHYS) - 90 minute/zi, 5 zile/sptmn, 8 sptmni. Au fost analizai: durata potenialului de aciune (PA) pn la atingerea a 90, 75, 50 i 25% din repolarizarea complet (APD), amplitudinea maxim a contraciei (PT), timpul pn la atingerea amplitudinii maxime a contraciei (TPT), timpul pn la jumtatea relaxrii (T1/2R). Rezultate APD a fost mai mare la PHYS fa de CONT: APD90 (89,10,4 vs 75,41,1(msec), p<0,001), APD75 (54,50,6 vs 45,40,7(msec), p<0,001), APD50 (29,90,5 vs 21,10,6(msec), p<0,001) i APD25 (21,40,5 vs 13,10,8(msec), p<0,001). PT a fost de asemenea mai mare pentru PHYS (746,12,7 vs 485,12,3(mN), p<0,001), la fel TPT (110,10,5 vs 87,92,3(msec), p<0,001) i T1/2R (194,10,6 vs 126,12,8(msec), p<0,001). Concluzii Pentru PHYS am obinut o alungire semnificativ a tuturor fazelor PA, bazat mai ales pe alungirea fazei de depolarizare i creterea PT. Durata depolarizrii membranare ar putea influena contracia prin reglarea eliberrii i recaptrii Ca2+ de ctre reticulul sarcoplasmic. Cuvinte cheie: cord atletic, depolarizare, potenial de aciune.
Abstract: As response to a large variety of stimuli the myocardium adapts through the hypertrophy of muscle cells. The

mechanisms involved in physiological hypertrophy are still unclear. The purpose of this study was to evaluate the electrical and mechanical changes associated with physiological hypertrophy. Methods 40 Wistar rats were randomly assigned into control group (CONT) and the group trained by swimming (PHYS) 90 min/day, 5 days/week, 8 weeks. The following parameters were measured: action potential duration (APD) to 90, 75, 50 and 25% of complete repolarization, peak tension (PT), time to peak tension (TPT) and time to half relaxation (T1/2R). Results The APD recorded from PHYS was substantially longer than that recorded from CONT: APD90 (89.10.4 vs 75.41.1(msec), p<0.001), APD75 (54.50.6 vs 45.40.7(msec), p<0.001), APD50 (29.90.5 vs 21.10.6(msec), p<0.001) i APD25 (21.40.5 vs 13.10.8(msec), p<0.0001). PT was also greater for PHYS (746.12.7 vs 485.12.3(mN), p<0.001), same as TPT (110.10.5 vs 87.92.3(msec), p<0.001) and T1/2R (194.10.6 vs 126.12.8(msec), p<0.001). Conclusions For PHYS we obtained a significant prolongation of all APD phases, based especially on the prolongation of depolarization, and increased PT. The duration of membrane depolarization could influence contraction by regulating the release and uptake of Ca2+ from the sarcoplasmic reticulum. Key words: athlets heart, depolarization, action potential

INTRODUCERE
Ca rspuns la o larg varietate de stimuli - mecanici, hemodinamici, hormonali - miocardul se adapteaz necesitilor crescute prin hipertrofia celulelor musculare1,2. Hipertrofia cardiac se poate produce ca rspuns adaptativ la creterea travaliului cardiac de natur fiziologic (aa-numitul cord atletic) sau patologic, aa

cum se ntmpl n valvulopatii, hipertensiunea arterial, ca i ntr-un numr mare de alte afeciuni (congenitale, infiltrative, idiopatice)3,4. Hipertrofia cardiac este un factor de risc independent pentru evenimente cardiovasculare morbide5, dar creterea masei ventriculare nu se nsoete n mod obligatoriu de alterarea performanelor cardiace, fapt

demonstrat de evoluia cordului atletic6. Dimpotriv, numeroase studii, datnd de pn la 40 de ani n urm, au demonstrat c hipertrofia ventricular stng (HVS) uoar spre moderat, observat la atlei intens antrenai, crete performanele cardiace prin creterea volumului btaie, a contractilitii miocardice7, ameliorarea metabolismului bioenergetic8, scderea rigiditii miocardice9. Aceast observaie surprinztoare, c grade similare de HVS pot dezvolta profile extrem de diferite ale funciei cardiovasculare, a dus la o serie de studii pe animale de experien, care au ncercat s stabileasc legtura dintre fiziologia cordului ca ntreg i fiziologia miocelular9. Lucrarea de fa face parte dintr-un studiu mai amplu10, elaborat pentru a compara hipertrofia cardiac indus prin antrenament fizic cu cea indus prin constricie de aort, pornind de la ipoteza c hipertrofia cardiac fiziologic i cea patologic se asociaz cu profile diferite ale aspectului electric i mecanic. Elucidarea mecanismelor care stau la baza acestor diferene ar putea reprezenta un punct de plecare pentru identificarea unor noi strategii terapeutice la pacienii cu insuficien cardiac (IC).

OBIECTIVELE STUDIULUI
Scopul studiului a fost acela de a identifica modificrile electrice i mecanice asociate cu hipertrofia cardiac indus de antrenamentul fizic prin not. Pentru a realiza acest deziderat am utilizat un protocol de inducere a hipertrofiei cardiace fiziologice robust i reproductibil. O serie de parametrii au fost folosii pentru a confirma dezvoltarea hipertrofiei cardiace. Dac hipertrofia patologic a fost i este intens studiat, iar modificrile parametrilor electrici i mecanici sunt relativ bine caracterizate11-13, datele existente pn n prezent asupra hipertrofiei fiziologice sunt extrem de limitate. nelegerea detaliat a bazelor electro-mecanice ale hipertofiei cardiace ar putea deschide ci pentru identificarea a noi indicatori de prognostic i elaborarea de noi strategii terapeutice. Identificarea i caracterizarea fenomenelor electrice i mecanice implicate n aceste procese reprezint un element critic n elucidarea mecanismelor care stau la baza procesului hipertrofic.

MATERIAL I METOD
Toate experimentele realizate n cadrul acestui studiu au fost n conformitate cu Declaraia de la Helsinki din 1964 i cu reglementrile Ministerului Agriculturii, ordin nr. 400, din 20 mai 2002.

Studiul a fost realizat pe un numr de 40 de obolani masculi Wistar, distribuii aleator n dou grupuri: grupul control i grupul supus antrenamentului fizic prin not. obolanii au fost hrnii i hidratai ad libitum, i inui n locaii cu lumin i temperatur controlate (cicluri de 12 ore lumin/12 ore ntuneric, la o temperatur de 22C). Toate animalele au fost inute pe toat perioada experimentului n aceeai ncpere. Grupul control nu a fost supus antrenamentului fizic, dar, pentru a minimaliza efectul stresului n comparaia dintre grupuri, cei 20 de obolani au fost plasai n bazinul de not timp de 5 minute, de dou ori pe sptmn. notul a fost preferat ca model de antrenament fizic datorit eficacitii sale recunoscute n inducerea hipertrofiei cardiace fiziologice14. n cadrul acestui studiu am utilizat un protocol de antrenament fizic prin not riguros i reproductibil, n vederea dezvoltrii hipertrofiei cardiace la obolani. Antrenamentul fizic prin not s-a desfurat ntr-un bazin de 120 cm lungime, 70 cm lime i 60 cm nlime. Un sistem de nclzire a meninut temperatura apei ntre 30 i 32C. Antrenamentul s-a desfurat la o durat de 90 de minute pe zi, 5 zile pe sptmn, timp de 6 sptmni, dup o perioad de acomodare de 2 sptmni, timp n care durata antrenamentului a fost crescut progresiv de la 5 la 90 de minute pe zi. Dup perioada de 8 sptmni, considerat necesar i suficient pentru dezvoltarea hipertrofiei cardiace, animalele din ambele loturi au fost anesteziate cu un amestec de Xilazin i Ketamin i sacrificate. Pentru a confirma dezvoltarea hipertrofiei ventriculare stngi la animalele supuse antrenamentului fizic prin not au fost msurate masa corporal, masele cardiace, raportul dintre masa ventriculului stng (VS) i masa corporal i s-a efectuat examenul histopatologic al unui fragment de VS. S-au realizat seciuni miocardice transmurale transversale, perpendiculare pe axul longitudinal al cordului, care au fost ulterior procesate convenional pentru examinarea histologic. Au fost selectate randomizat cmpuri, cu o mrire de X200. Distanele internucleare ale miocitelor orientate longitudinal, selectate aleator, din fasciculele stratului muscular circular mijlociu, au fost msurate cu un microscop optic calibrat (cte 10 fibre pentru fiecare prob). Pe lng determinarea grosimii miocitelor s-a efectuat i determinarea lungimii lor. Un muchi papilar a fost prelevat i transferat n baia de organe. Dup introducerea muchiului papilar n baia Steiert, s-a fixat sistemul de nclzire astfel nct

s menin temperatura soluiei Tyrode circulante la o valoare constant de 36C i s-a realizat oxigenarea soluiei cu O2 95%. S-a fixat muchiul n baie i a fost stimulat electric. Dup o perioad de 20-30 minute, necesar pentru echilibrare, s-a trecut la nregistrarea fenomenelor electrice i mecanice (Figura 1). Amplitudinea potenialului de aciune (AP) i de repaus (RP), durata potenialului de aciune pn la atingerea a 90 (APD90), 75 (APD75), 50 (APD50) i respectiv 25% (APD25) din repolarizarea complet i viteza depolarizrii (p/t) au fost analizai ca para-

metri electrici (Figura 2). Spre deosebire de alte studii n domeniu, s-a folosit un numr mai mare de parametri care caracterizeaz potenialul de aciune, ceea ce a permis analiza cu acuratee a modificrilor observate. Concomitent cu nregistrarea fenomenelor electrice s-a fcut i nregistrarea fenomenelor mecanice care au loc la nivelul muchiului papilar. Amplitudinea maxim a contraciei (PT), timpul pn la atingerea amplitudinii maxime a contraciei (TPT) precum i timpul pn la jumtatea relaxrii (T1/2R) au fost utilizai ca parametri mecanici (Figura 3).

Figura 1. nregistrarea simultan a fenomenelor electrice (traseul verde) i mecanice (traseul galben) la nivelul muchiului papilar.

Figura 2. Msurarea duratei potenialului de aciune pn la atingerea a 75% din repolarizarea complet (APD75).

Figura 3. Msurarea timpului scurs pn la atingerea a 50% din relaxarea complet (T1/2R).

Pentru analiza statistic a studiului s-a folosit programul GraphPad InStat 3.0 i programul Microsoft Excel 2007. Toate rezultatele au fost exprimate ca media valorilor obinute deviaia standard (DS). Semnificaia statistic a diferenelor dintre grupurile experimentale a fost determinat cu testul Student i o probabilitate mai mic de 0,05 a fost considerat semnificativ.

REZULTATE
Pentru grupul de obolani supui antrenamentului fizic s-a obinut o scdere semnificativ, cu 32,874,3g (12,34%) (p<0,001), a masei corporale (Figura 4A), o cretere semnificativ a masei totale uscate a VS cu 21,464,69mg a (21,12%) (p<0,001) (Figura 4B) i a raportului mas uscat a VS/mas corporal cu (151,66,06)*10-3 (39,56%) (p<0,001) a raportului dintre masa total uscat a ventriculului stng i masa corporal (Figura 4C), comparativ cu grupul control. Pentru grupul de obolani antrenai prin not s-a obinut o cretere cu 13,70,28 m a lungimii fibrelor miocardice (13,03%) (p<0,001) (Figura 5), fa de grupul
Tabelul 1. Caracteristicile grupurilor de studiu
Parametru Masa corporal (g) Masa VS (mg) Lungimea miocitelor (m) Grosimea miocitelor (m) CONT 266,339,09 101,6112,60 105,141,31 19,260,78 PHYS 233,4628,01 123,4912,00 118,841,31 19,440,66

control, dar grosimea fibrelor nu a prezentat modificri semnificative (p=0,503) (Tabelul 1). Nu s-au nregistrat diferene semnificative ale valorilor amplitudinii potenialului de aciune ntre cele dou grupuri (p=0,18), i n mod similar nici ale valorii potenialului de repaus (p=0,34). Pentru grupul cu hipertrofie am obinut o alungire semnificativ a tuturor fazelor potenialului de aciune comparativ cu grupul control, i n mod similar o cretere a tuturor parametrilor contractili. Pentru grupul de obolani cu hipertrofie s-a obinut o alungire a APD90 cu 13,670,12 msec (18,12%) (p <0,001), a APD75 cu 9,060,04 msec (19,94%) (p <0,001), a APD50 cu 8,780,04 msec (41,57%) (p <0,001) i a APD25 cu 8,360,03 msec (53,95%) (p <0,001) fa de grupul control. Pentru grupul de obolani antrenai prin not s-a obinut o scdere a p/t cu 8,800,15V/sec (56,79%) (p<0,001), fa de grupul control (Tabelul 2).
Tabelul 2. Parametrii electrici
Parametru AP (mV) RP (mV) APD90 (msec) APD75 (msec) APD50 (msec) APD25 (msec) p/t (V/sec) CONT 92,290,63 -83,040,19 75,441,03 45,440,67 21,120,61 13,020,83 15,490,62 PHYS 97,620,66 -82,920,43 89,110,43 54,510,61 29,910,51 21,390,58 6,690,19

Raportul mas corporal/mas VS (*10-3) 385,1844,10 536,7886,20

CONT grupul control, PHYS grupul supus antrenamentului fizic prin not, VS ventriculul stng

CONT grupul control, PHYS grupul supus antrenamentului fizic prin not, AP potenialul de aciune, RP potenialul de repaus, APD durata potenialului de aciune

C Figura 4. A - Masele corporale (g), B - Masa total uscat a venticulului stng (mg), C - Raportul mas total uscat a venticulului stng/mas corporal (*10-3)
CONT grupul control, PHYS grupul supus antrenamentului fizic prin not.

Pentru grupul de obolani antrenai prin not s-a obinut o cretere a PT cu 261,02,4 N (53,8%) (p<0,001), a TPT cu 22,070,8 msec (25,1%) (p<0,001) i a T1/2R cu 68,03,1 msec (53,9%) (p<0,001), fa de grupul control (Tabelul 3).

DISCUII
Pe baza creterilor semnificative, n paralel, ale maselor cardiace, ale raportului mas total uscat a VS / mas corporal i ale lungimii cardiomiocitelor la grupul de obolani antrenai prin not, fa de grupul control, putem afirma c modelul propus de noi a ndeplinit criteriile de hipertrofie cardiac. Pentru grupul cu hipertrofie am obinut o alungire semnificativ a tuturor fazelor potenialului de aciune. Cu toate acestea, cele mai

semnificative modificri s-au produs pe baza alungirii fazei de depolarizare, aa cum o demonstreaz alungirea mai important a APD25 i APD50, fa de alungirea APD75 i a APD90, precum i de scderea p/t n condiiile n care AP nu s-a modificat semnificativ. n plus, a fost confirmat ipoteza conform creia cordul atletic se asociaz cu creterea performanelor contractile, prin creterea semnificativ a PT n acest context. Explicaia ar putea fi aceea c durata depolarizrii membranare ar putea influena contracia prin

Tabelul 3. Parametrii mecanici


Parametru PT (N) TPT (msec) T1/2R (msec) CONT 485,062,28 87,962,30 126,022,76 PHYS 746,062,76 110,030,53 194,020,59 Figura 5. Lungimea cardiomiocitelor (m)
CONT grupul control, PHYS grupul supus antrenamentului fizic prin not.

CONT grupul control, PHYS grupul supus antrenamentului fizic prin not, PT amplitudinea maxim a contraciei, TPT timpul pn la atingerea amplitudinii maxime contraciei, T1/2R timpul pn la jumtatea relaxrii

reglarea eliberrii i recaptrii de calciu din reticulul sarcoplasmic15. Durata mai lung a depolarizrii determin o depolarizare mai complet a sistemului T membranar, rezultnd eliberarea unei cantiti mai importante de calciu. O serie de investigaii recente au adus informaii noi legate de mecanismele care stau la baza mbuntirii funciei cardiovasculare, observate la modelele supuse antrenamentului fizic. Acestea sugereaz c creterea sensibilitii miofilamentelor pentru Ca2+, mbuntirea distribuiei Ca2+-ului intracelular i reglarea pH-ului ar contribui la ameliorarea contractilitii, observate la obolanii supui antrenamentului fizic16. Creterea sensibilitii la Ca2+ a fost totodat observat n miocitele animalelor supuse antrenamentului fizic. Astfel, n cordul animalelor antrenate, se produce o cretere semnificativ a presiunii de ejecie, la nivele de Ca2+ submaximale17. Ca atare, acest beneficiu nu este dependent de nivelul intracelular al concentraiei de Ca2+, cu toate c i utilizarea calciului este crescut prin antrenament fizic. ntruct cordul atletic, n absena altor condiii patologice preexistente, nu se asociaz cu creterea morbi-mortalitii cardiovasculare, n timp ce hipertrofia patologic este un factor de risc important pentru insuficiena cardiac i mortalitatea cardiovascular, diferenierea celor dou forme de hipertrofie cardiac este de o extrem importan. Teorii epidemiologice sugereaz c hipertrofia ventricular stng este o variabil continu, pentru care nu se poate preciza un moment iniial precis, n timp ce studii morfologice arat c structura i funcia miocardului, i nu cantitatea masei miocardice confer risc cardiovascular. O explicaie posibil a diferenei dintre cele dou forme de hipertrofie ar putea fi legat de modificrile complementare, precum faptul c n contextul hipertrofiei fiziologice creterea masei cardiace este nsoit de creterea densitii capilare i a rezervei fluxului coronarian. Dimpotriv, hipertrofia cardiac patologic este asociat tipic cu factori de risc precum diabetul zaharat, obezitatea sau hipertensiunea arterial, care contribuie la disfuncia endotelial i la rspunsul angiogenic neadecvat. Dei ambele forme de hipertrofie cardiac, fiziologic i patologic, sunt asociate cu o cretere a masei cardiace, hipertrofia patologic este asociat cu o gam complex de evenimente, inclusiv up-regularea de gene fetale, modificri histopatologice specifice i disfuncie cardiac. n contrast, hipertrofia fiziologic este asociat cu meninerea structurii cardiace normale i funcie contractil normal sau crescut. Rezultatele unor studii demonstreaz clar c hiper-

trofia fiziologic i patologic sunt mediate de molecule semnal diferite18,19. Pn n prezent cercetarea i terapia n insuficiena cardiac s-au axat pe identificarea i inhibarea proceselor patologice. Intervenii terapeutice active, bazate pe stimuli i gene care induc o cretere fiziologic, pot oferi o strategie suplimentar pentru tratamentul sau reversia insuficienei cardiace. n acest sens, alungirea fazei de depolarizare observate n contextul hipertrofiei fiziologice, ar putea reprezenta o nou int terapeutic n tratamentul insuficienei cardiace. ntruct alungirea fazei de depolarizare este consecina unei stimulri a canalelor de Na+, agenii terapeutici ar trebui s se bazeze pe aceste date. Agentul care s corespund acestor cerine ar trebui s fac parte din clasa agonitilor specifici ai canalelor de Na+. Agoniti sintetici ai canalelor de Na+ au fost propui ca o posibil nou abordare terapeutic pentru mbuntirea contractilitii miocardice la pacienii cu IC20. Cu toate acestea, agonitii sintetici ai canalelor de Na+ au un dezavantaj major, ceea ce determin i reinerea n utilizarea lor clinic, i anume efectul proaritmic.

CONCLUZII
Cele mai importante concluzii ale studiului nostru au fost: 1. n cazul grupului de obolani supui antrenamentului fizic prin not au fost ndeplinite criteriile de HVS. 2. Grupul cu hipertrofie a prezentat o alungire semnificativ a tuturor fazelor potenialului de aciune, dar cele mai importante modificri s-au produs pe baza alungirii fazei de depolarizare. 3. n cazul grupului cu hipertrofie fiziologic s-au produs modificri semnificative ale parametrilor mecanici, n sensul cresterii att a amplitudinii i duratei contraciei, ct i a duratei relaxrii.

LIMITRILE STUDIULUI
Observaiile noastre nu pot fi ns extrapolate n totalitate la patologia uman, principala limitare fiind aceea c PA de obolan prezint o morfologie diferit de cea a potenialului uman, prin faptul c primul nu prezint faz de platou. n plus, mecanismele Ca2+-ului n celula miocardic de obolan difer de cele umane, prin faptul c recaptarea Ca2+-ului n cazul cordului de obolan se face n cea mai mare parte pe seama reticulului sarcoplasmic, ntr-o proporie mult superioar celei ntlnite n cordul uman.

Referine
1. Lorel BH, Carabello BA. Left Ventricular Hypertrophy - Pathogenesis, Detection, and Prognosis. Circulation, 2000; 102:470. 2. Tamai J., Hori M., Kagiya T. si col. Role of 1-adrenoceptor activity in progression of cardiac hypertrophy in guinea pig hearts with pressure overload. Cardiovasc. Res., 1989; 23(4): 315-322. 3. Jamshidi Y., Montgomery HE., Hense HW. si col. Peroxisome ProliferatorActivated Receptor Gene Regulates Left Ventricular Growth in Response to Exercise and Hypertension. Circulation, 2002; 105: 950-955. 4. IemitsuM.,MiyauchiT.,MaedaS.sicol.Physiologicalandpathological cardiac hypertrophy induce different molecular phenotypes in the rat. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol, 2001; 281: R2029-R2036. 5. Kang YJ., Cardiac Hypertrophy: A Risk Factor for QT-Prolongation and Cardiac Sudden Death. Toxicologic Pathology, 2006; 34(1): 5866. 6. Levine BD., Zuckerman JH., Zhang R. si col. Adaptive range of human physiological hypertrophy/atrophy. Circulation, 1999; 100: I140I141. 7. Kemi OH., Ceci M., Wisloff U. si col. Activation or inactivation of cardiac Akt/mTOR signaling diverges physiological from pathological hypertrophy. Journal of Cellular Physiology, 2007, 214(2): 316-321. 8. Fenning A., Harrison G., Dwyer D., RoseMeyer R., Brown L. Cardiac adaptation to endurance exercise in rats. In Biochemistry of Hypertrophy and Heart Failure. Eds: LA. Kirshenbaum, IMC. Dixon, PK. Singal. Kluwer Academic Publishers, Netherlands, 2003, 51-59. 9. Tardiff JC. Cardiac hypertrophy: stressing out the heart. J. Clin. Invest., 2006; 116(6): 1467-1470. 10. Scridon A., Dobreanu D, Perian M, Serban RC. Effects of physical training and aortic constriction on electrical and mechanical activity in rat papillary muscles. European Heart Journal 2009; 30: 224.

11. Nerbonne JM., Kass RS. Molecular physiology of cardiac repolarization. Physiol Rev, 2005; 85: 12051253. 12. Akar FG., Wu RC., Juang GJ. si col. Molecular mechanisms underlying K current downregulation in canine tachycardia-induced heart failure. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2005; 288: H2887-H2896. 13. Zicha S., Xiao L., Stafford S. si col. Transmural expression of transient outward potassium current subunits in normal and failing canine and human hearts. J Physiol, 2004; 561: 735-748. 14. Evangelista FS, Brum PC, Krieger JE. Duration-controlled swimming exercise training induces cardiac hypertrophy in mice. Braz J Med Biol Res, 2003; 36(12): 1751-1759. 15. Capasso JM, Aronson RS, Sonnenblick EH. Reversible alterations in excitation-contraction coupling during myocardial hypertrophy in rat papillary muscle. Circ. Res, 1982; 51: 189-195. 16. Wisloff U, Loennechen JP, Falck G i col. Increased contractility and calcium sensitivity in cardiac myocytes isolated from endurance trained rats. Cardiovasc. Res., 2001; 50(3): 495-508. 17. Diffee GM, Nagle DF. Exercise training alters length dependence of contractile properties in rat myocardium. J Appl Physiol, 2003; 94: 1137-1144. 18. Mc Mullen JR, Sadoshima J, Izumo S. Physiological versus pathological cardiachypertrophy.In:WalshRA(ed.).MolecularMechanismsofCardiac Hypertrophy and Failure. Taylor & Francis, London. 2005; 117-136 19. McMullen JR, Shioi T, Zhang L, et al. Phosphoinositide 3-kinase (p110) plays a critical role for the induction of physiological, but not pathological, cardiac hypertrophy. Proc Natl Acad Sci. USA. 2003; 100: 12 355-360 20. Yoon JY, Ahn SH, Oh H si col. A novel Na+ channel agonist, dimethyl lithospermate B, slows Na+ current inactivation and increases action potential duration in isolated rat ventricular myocytes. Br J Pharmacol, 2004; 143(6): 765773.