Triglicridos (GPO) (Lquido) Set de Reactivos

La intensidad del complejo colorante formado es directamente proporcional a la concentracin de triglicridos de la muestra. COMPOSICION DEL REACTIVO. Buffer de Good (pH 7.4 0.1) 50 mM, 4clorofenol 3.5 mM, ATP 0.5mM, sal de magnesio 12 mM, 4-aminofenazona 0.3 mM, quinasa de glicerol (microbiana) 250 U/L, Lipasa (microbiana) 200.000 U/L, emulsificantes, estabilizadores y conservador, incluyendo azidas de sodio (0.01%). PREPARACION DEL REACTIVO El reactivo est listo para su uso. ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD DEL REACTIVO Guardar el reactivo en refrigeracin de 2-80C. El reactivo es estable hasta la fecha de caducidad marcada en la etiqueta siempre y cuando se almacene como se indica. Proteger de la luz directa del sol. Evitar cualquier contaminacin microbiana. No utilizar el reactivo si: La Absorbancia inicial del reactivo medida a 500 nm es mayor de 0.350 , utilizando agua como blanco. Si el reactivo est turbio o presenta evidencia de contaminacin microbiana. PRECAUCIONES Este reactivo ha sido preparado solo para uso diagnstico en laboratorio. El reactivo contiene azidas de sodio (0.01%) como conservador. No debe ingerirse. Evitar cualquier contacto con los ojos o piel. Las azidas de sodio pueden reaccionar con el cobre o corroer los metales y formar compuestos explosivos. Una vez utilizado, eliminar con suficiente agua. Todas las muestras y controles deben manejarse como potencialmente infecciosos. Utilizar el procedimiento se seguridad de laboratorio adecuado (NCCLS M29-T)3 RECOLECCION DE LA MUESTRA Y ALMACENAMIENTO 1. Se requiere de suero no hemolizado, claro y fresco. La muestra debe tomarse conforme a la gua adecuada. 2. El suero debe separarse rpidamente antes de que empiece a coagular. Evitar los anticoagulantes que contengan oxalatos o fluoruro. 3. El suero del plasma debe almacenarse mximo una semana a 2-80C o por 3 meses a -200C.

ESPECIFICACIONES DE USO Determinacin cuantitativa in vitro de triglicridos en suero o plasma sanguneo. SIGNIFICANCIA CLINICA La determinacin de triglicridos es de inters en el diagnstico y tratamiento de arterioesclerosis, diabetes mellitus mal controlada, nefrosis, padecimientos del hgado y otras enfermedades que involucren metabolismo de lpidos. RESUMEN DE LA PRUEBA El mtodo para la determinacin de triglicridos (GPO) est basado en la determinacin enzimtica de glicerol utilizando la enzima oxidasa glicerol fosfato despus de la hidrlisis por la lipoprotena lipasa. El principio de este mtodo lo describi por primera vez Fossati con la secuencia clsica de reacciones Trinder. Este procedimiento de nico reactivo cuantifica el total de glicridos en suero incluyendo mono y diglicridos, as como las fracciones libres del glicerol. Este enfoque es la base para el mtodo. PRINCIPIO Triglicridos cidos Grasos Glicerol + ATP fosfato +ADP Glicerol-1-fosfato + O2 DAP + H2O2 H2O2 + 4-AA + 4-Clorofenol de quinonimina + HCl + 2H2O Tintura GK GPO Glicerol + Glicerol-1-

Los triglicridos del suero son hidrolizados a glicerol y cidos grasos libres mediante la lipasa. En presencia de ATP y la quinasa del glicerol (GK) el glicerol se convierte en glicerol-1-fosfato. El glicerol-1-fosfato se oxida por la accin de la enzima oxidasa glicerol fosfato (GPO), para producir perxido de hidrgeno. La condensacin del perxido de hidrgeno con 4-clorofenol y 4-aminofenazona (4-AA) en la presencia de peroxidasa (POD) produce una coloracin roja de la quinonimina que se absorbe aproximadamente a 500 nm .

Pgina 1 de 3

Triglicridos (GPO) (Lquido) Set de Reactivos

4. Las muestras congeladas deben llevarse a temperatura ambiente y mezclarse perfectamente bien antes de realizar el anlisis. Las muestras descongeladas no podrn volverse a congelar. INTERFERENCIAS 1. Algunos frmacos y sustancias afectan la determinacin de triglicridos. Young, et al8 public una lista de estas sustancias. 2. El mtodo no tiene interferencia por valores altos de hemoglobina arriba de 100 mg/dl o por bilirrubina mayor de 12 mg/dl (5%). 3. Los detergentes pueden interferir con la accin de la lipasa. Debe tenerse cuidado de la contaminacin del material y equipo con residuos de detergente. MATERIAL PROPORCIONADO Reactivo de triglicridos (GPO). MATERIAL REQUERIDO 1. Pipetas para medir los volmenes exactos de muestra y reactivo. 2. Rejillas y tubos de ensayo. 3. Cronmetro. 4. Parrilla de calentamiento o bao mara (370C) 5. Espectrofotmetro adecuado para leer a 500 nm 6. Estndar de triglicridos o calibrador. PROCEDIMIENTO (DATOS FIJOS) Longitud de Onda: 500 nm Tipo de prueba: Punto final Proporcin Muestra/reactivo: 1:101 Direccin de la reaccin: aumento Temperatura: 37 0C Tiempo de Incubacin: 300 seg Bajo Normal: 44mg/dl Alto Normal: 148 mg/dl PROCEDIMIENTO DE ANALISIS (MANUAL) 1. Identificar los tubos de prueba: blanco, estndar/calibrador, paciente, control, etc. 2. Pipetear 1 ml del reactivo en los tubos y precalentar a 370C. 3. Aadir 0.010ml (10 l) de la muestra a su respectivo tubo. Agitar suavemente. 4. Incubar durante 5 minutos. 5. Despus de la incubacin, leer en el espectrofotmetro a 500 nm utilizando el blanco para llevar a cero el equipo. 6. Leer y registrar las Absorbancias para todas las muestras. El color final es estable por lo menos 60 minutos. LIMITACIONES El procedimiento es lineal hasta una concentracin 1000 mg/dl (11.3mM/L). Las muestras arriba del lmite debern diluirse 1:1 con solucin salina y multiplicar el resultado por 2 para compensar la dilucin. CALIBRACION Utilizar cualquier estndar de triglicridos o un calibrador de suero. El procedimiento deber calibrarse de acuerdo a las instrucciones de calibracin del equipo. Si los resultados del control se encuentran fuera del rango, el procedimiento deber calibrarse de nuevo. CONTROL DEL CALIDAD Se deben aplicar las prcticas estndar de control de calidad a este procedimiento. Deben monitorearse las variaciones aceptables de cada da. Deben probarse controles siempre que se cambie a un nuevo lote de reactivo, en cada cambio de turno o despus del mantenimiento del equipo. Puede obtenerse un nivel satisfactorio de los procesos cuando se obtienen valores del analito aceptables establecidos por el laboratorio. CALCULO El resultado de triglicridos se expresa en mg/dl o mM/L. Triglicridos = Abs M x Conc. Std Abs Std Ejemplo: Abs M = 0.243 Abs Std= 0.310 Conc. Std = 200 mg/dl Triglicridos = 0.243 x 200 mg/dl 0.310 Triglicridos = 157 mg/dl Nota: Para convertir los resultados a unidades SI (mmol/L) multiplicar el resultado (mg/dl) por 0.0113. VALORES ESPERADOS 44-148 mg/dl (0.50 1.67 mmol/L) Se cree que debido a un amplio rango de condiciones (edad, dieta, geogrficas, etc.) los rangos normales pueden variar, por lo que se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios rangos de referencia. DESARROLLO 1. Lmites de la Prueba: 0 1000 mg/dl (0 -11.3 mmol/L). Las muestras que excedan de esta concentracin debern diluirse con solucin salina y el resultado multiplicarlo por 2.

Pgina 2 de 3

Triglicridos (GPO) (Lquido) Set de Reactivos

2. Comparacin: Se realiz una comparacin de este mtodo con uno similar GPO utilizando 167 muestras entre los 41 mg/dl y 1026 mg/dl. El coeficiente de correlacin fue de 0.999. El anlisis de regresin lineal arroj la siguiente ecuacin: y = 0.97 x 4.5 Sy.x = 5.84 3. Precisin: Los estudios de precisin se llevaron a cabo segn las guas NCCLS EP5-T210 EN UN DIA DIFERENTES DIAS Media S.D. C.V. % Media S.D. C.V. % 62.6 162.4 301.9 1.14 1.73 3.24 1.82 1.07 1.07 59.1 158.1 299.3 1.12 2.63 3.65 1.90 1.66 1.22 44 B-1040 Brussels, Belgium

Rev. 1/09 P803-T7532-01

4. Sensibilidad: La sensibilidad del mtodo se comprob leyendo las Absorbancias a 500 nm de solucin salina y muestras de suero de concentracin conocida. Se realizaron 10 rplicas. Los resultados indicaron que el mtodo no muestra dispersin en las muestras. Bajo estas condiciones de reaccin 1mg/dl de triglicridos produce una Absorbancia de 0.001.

REFERENCIAS 1. Fossati, P., Lorenzo, P., Clin. Chem. 28:2077 (1982). 2. Trinder, P., Ann. Clin. Biol. Chem. 6:24 (1969). 3. NCCLS Document M29-T2, 2nd. Ed. (1991). 4. NCCLS Document H4-A3, 3rd. Ed. (1991). 5. Tietz, N.W., Textbook of Clinical Chemistry, Philadelphia, PA, WB Saunders Co. p888 (1986). 6. Martin, E., Hazards of Medication, Philadelphia, PA, J.B. Lippincott Co. pp.169-189 (1971). 7. Constantino, N.V., Kabat, H., Am. J. Hosp. Pharm. 30:24 (1973). 8. Young, D.S., 3rd Ed. AACC Press, Washington DC (1990). 9. Rifkin, B.M., JAMA 250:1869 (1983). 10. NCCLS document Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices, 2nd Ed. (1992).

Manufactured by Pointe Scientific, Inc. 5449 Research Drive Canton, MI 48188 "European Authorized Representative" (O.E.A.R.C.) Av. De Tervueren 34 bte

Pgina 3 de 3