BIOQUMICA DEL BIOFILM CARIOGNICO

ENFERMEDADES ASOCIADAS A PLACA: CARIOLOGIA Y PERIODONTOLOGIA

CTEDRA DE BIOQUMICA GENERAL Y BUCAL- FOUBA

2013

Direccin Nacional del Derecho de Autor Expediente N 832373

Ctedra de Bioqumica General y Bucal FOUBA-

INTRODUCCIN

El desarrollo de la biopelcula o biofilm dental puede considerarse el desencadenante de las enfermedades prevalentes en la cavidad bucal: caries y enfermedad periodontal. La caries dental es una enfermedad de origen bacteriano de etiologa multifactorial y que afecta a las estructuras mineralizadas dentales, como el esmalte dental. Cuando alcanza el lmite amelodentinario avanza a un ritmo mayor que en el esmalte pudiendo alterar tambin de esta forma a la dentina y an al cemento. Por tratarse de estructuras mineralizadas, no pueden ser aplicados los mtodos tradicionales para estudiar enfermedades infecciosas. La lesin cariosa es la manifestacin clnica de un proceso patolgico que viene aconteciendo desde mucho tiempo antes de la aparicin de la lesin; por lo tanto, no debe ser confundida con la enfermedad. Si bien esta enfermedad afecta prcticamente a la totalidad de la poblacin mundial portadora de dientes, su incidencia ha disminuido de manera importante en la mayor parte de los pases desarrollados en los ltimos aos, probablemente por las campaas de prevencin puestas en marcha. El biofilm, por ser una estructura viviente, no es definido y estable. Constituye un conglomerado dinmico y complejo de bacterias, materia orgnica y sustancias inorgnicas. Su composicin vara de una a otra persona, entre distintas localizaciones en la cavidad oral e incluso entre posiciones diferentes dentro de la misma pieza dental. Es innegable la relacin existente entre la actividad bacteriana y estos procesos, por lo cual trataremos de explicar los mecanismos de formacin de la biopelcula como tambin las vas metablicas de los microorganismos involucrados. El adecuado conocimiento de su estructura viable y de las relaciones que tiene con el alimento y los fluidos orales debe dar lugar a tcnicas para controlar, inhibir y eliminar el biofilm. Los dientes no se han de limpiar como si se tratara de un depsito inerte en la superficie del diente, esto implicara una gran simplificacin de la naturaleza del biofilm.

COMPOSICIN QUMICA DEL BIOFILM EN SALUD

Dado que el biofilm es una inmensa aglomeracin de clulas, su contenido en agua se parece al de las bacterias y flucta entre un 70 y 80%. Estudios recientes han sealado que existen dos compartimientos principales en el biofilm dental: una fase acuosa y otra fase slida o celular. La fase acuosa representa el 10 al 25% del peso total del mismo. Las protenas constituyen el componente principal de la fase slida (30-50% del peso seco), siendo aportadas por la secrecin salival y el fluido crevicular. Tambin se encuentran lpidos en una concentracin que vara entre el 10 y el 15% del peso seco. No se conoce la naturaleza de stos, ni su funcin en la actividad metablica del biofilm y su virulencia. Aproximadamente del 5 al 10% del peso seco est constituido por materia inorgnica, con predominio de calcio, fosfatos y potasio. Los oligoelementos como el flor, varan segn el
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contenido del mismo en el agua y alimentos consumidos. Los carbohidratos constituyen el otro componente del biofilm que est sometido a grandes variaciones de concentracin y composicin. Dicho biofilm contiene entre un 10 y un 20 % del volumen en forma de polisacridos. El principal polisacrido extracelular (PEC) aislado del biofilm es el glucano, un polmero de la glucosa cuyos enlaces predominantes son (16), adems de una elevada proporcin de (13). La fructosa es el componente principal de otro polisacrido hallado en el biofilm, denominado comnmente levano o fructano. Una de las diferencias importantes entre el fructano y el glucano soluble en agua, es que el primero puede ser degradado por el biofilm bacteriano, mientras que el segundo es muy resistente a la accin hidroltica enzimtica. Por consiguiente el levano desaparece frecuentemente del biofilm despus de haber sido sintetizado, constituyendo as una reserva de azcares fermentables para la flora oral. Otro polisacrido hallado en el biofilm es un polmero formado intracelularmente. El polmero intracelular (PIC) se parece al almidn o al glucgeno, y est constituido por unidades de glucosa enlazadas mediante uniones (14). El significado biolgico de los polisacridos en el biofilm ha sido sometido a numerosos estudios. Los puntos ms importantes son: 1. La formacin de polisacridos representa un mecanismo para almacenar energa en la clula y a su alrededor, de la cual se dispone en ocasiones cuando se presenta una necesidad metablica. 2. La sntesis de los polisacridos tambin representa una va metablica que permite a las clulas bacterianas manejar grandes concentraciones de carbohidratos sin tener que utilizar las vas glucolticas u oxidativas. 3. Los polisacridos extracelulares (PEC) son importantes en los procesos de adherencia entre las clulas, as como entre ellas y otras estructuras dentales, como la pelcula y la hidroxiapatita. 4. Los PEC actan como una barrera que impide la difusin de nutrientes y productos metablicos finales en su entrada o salida del biofilm. Todos estos factores tienen un significado importante para determinar la patogenia de las enfermedades asociadas al biofilm, y merecen una cuidadosa consideracin por los profesionales de la salud bucal. FACTORES NUTRICIONALES

Como toda forma de vida, los microorganismos requieren un aporte de nutrientes para su mantenimiento y crecimiento. stos nutrientes proporcionan a los organismos la energa necesaria para sus reacciones biosintticas, as como la materia prima para la sntesis de los componentes celulares. La microflora oral puede alimentarse de un conjunto de nutrientes que a veces es
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superabundante, pero en otras ocasiones es intermitente y limitado en los sustratos requeridos. Las fuentes pueden ser los tejidos y secreciones del husped, su dieta y tambin productos metablicos de los microorganismos que habitan en estrecha proximidad. Los microorganismos orales presentan gran diversidad de requerimientos nutricionales. Como fuente de energa algunos de ellos utilizan carbohidratos mientras que otros pueden preferir aminocidos o cidos orgnicos. Para el crecimiento todos necesitan componentes nitrogenados. Las necesidades de nitrgeno son satisfechas por pptidos, aminocidos o, en algunos casos, amonaco. Todos necesitan vitaminas, minerales, purinas, pirimidinas, cidos grasos y otros factores de crecimiento. Debido a la gran diversidad nutricional de los microorganismos, es lgico esperar que la localizacin de cada uno de ellos se vea grandemente influida por la disponibilidad de los nutrientes requeridos. Por lo tanto, el metabolismo y la actividad nutricional de las bacterias del biofilm dependen de la disponibilidad de nutrientes. En ocasiones, el metabolismo bacteriano se ha de efectuar con deficiencia de azcares, fosfatos o compuestos nitrogenados, segn la localizacin del biofilm. FORMACIN DEL BIOFILM

La formacin del biofilm tiene lugar an en perodos de ayuno. Por tal motivo, la matriz del biofilm dental en la que estn inmersas las bacterias, presentar diferentes texturas, grosor y composicin segn se forme en ausencia o en presencia de alimentos. Formacin del biofilm en ausencia de ingesta de alimento Luego de un correcto cepillado, a las pocas horas se comienza a colonizar la superficie dentaria. En ausencia de ingesta de alimentos, las bacterias utilizarn fuentes endgenas de nutrientes. Son nutrientes endgenos los producidos en la cavidad oral del husped. Las fuentes de estas sustancias nutritivas incluyen la saliva, el fluido gingival, las clulas epiteliales

descamadas y los componentes de la sangre. Si bien, en comparacin con la saliva, se secretan pequeas cantidades de lquido del surco gingival, ste aporta albmina, hemina y -2-globulina, que son requeridos especficamente por algunos microorganismos. Adems, hay otra fuente de nutrientes endgenos, derivada de la facultad de algunos microorganismos para utilizar productos metablicos terminales o factores de crecimiento liberados por microorganismos vecinos. Los nutrientes endgenos pueden tener significado en algunos casos, por ejemplo, en pacientes alimentados exclusivamente por tubos gstricos, en cuyos dientes se ha observado abundante depsito de biofilm bacteriano. Por lo tanto, el metabolismo bacteriano depender de los sustratos metabolizables disponibles. En una situacin de ayuno y en ausencia de carbohidratos fcilmente metabolizables, slo disponen de los azcares derivados de las glicoprotenas salivales. Esto es posible por la
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accin conjunta de enzimas hidrolticas extracelulares de dos tipos: - neuraminidasas que remueven los residuos de cido silico provocando la desnaturalizacin proteica y su precipitacin a partir de la saliva, - glicosidasas que producen la liberacin secuencial de otros azcares que sern utilizados por las bacterias como fuente de energa. La protelisis de estas protenas desnaturalizadas produce pptidos y aminocidos libres que tambin podrn actuar como sustratos bacterianos. En estas condiciones, la matriz extracelular de la biopelcula es delgada y relativamente porosa derivada en su mayora de protenas salivales. Estas caractersticas permiten el paso del oxgeno y fluidos salivales y gingivales hacia el seno de la biopelcula, as como la difusin de los productos cidos del metabolismo bacteriano en sentido opuesto. De esta manera, estos cidos podrn neutralizarse por accin de los bufferes salivales o difundir hacia la saliva, con lo cual minimizan el ataque cido del esmalte. Formacin del biofilm en presencia de alimento Cuando hay ingesta de alimentos, los microorganismos los utilizarn como fuentes exgenas de nutrientes. La formacin de biopelcula dental es particularmente notoria en las reas con fisuras, en los puntos de contacto entre los dientes y en los mrgenes gingivales. En estas reas los nutrientes sern metabolizados por las bacterias generando productos que

afectarn la integridad de los tejidos dentarios. La composicin, forma y consistencia de la dieta, as como la frecuencia de la ingesta, son factores importantes a considerar cuando se intenta comprender las relaciones entre la utilizacin microbiana de los residuos alimentarios y la composicin de la poblacin de bacterias en los ecosistemas orales. Excepto en situaciones especiales, la eliminacin del alimento se completa en media hora. Adems, los nutrientes derivados de los alimentos raramente afectan a la microflora del surco gingival, ya que el flujo de salida de su lquido acta impidiendo la penetracin de la saliva y los nutrientes exgenos en este hbitat. La influencia del contenido de azcar en la dieta sobre los ecosistemas orales se ha estudiado ms que cualquier otro factor. Hay un gran predominio numrico de microorganismos que utilizan con preferencia carbohidratos como principal fuente de energa. La mayora de ellos elaboran cidos orgnicos como producto final del proceso, de forma que las zonas donde pueden acumularse tales cidos resultan ecolgicamente ventajosas para los microorganismos resistentes a ellos. La disponibilidad de carbohidratos procedentes de la dieta es intermitente, sin embargo, algunas bacterias pueden aprovechar el exceso de ellos convirtindolos en polisacridos intracelulares de reserva (PSI) y/o tambin en polisacridos extracelulares (PSE) solubles o insolubles de reserva y/o de adhesin. Es necesario tener en cuenta que el tipo de biopelcula que se forme depender de las caractersticas de la dieta que se ingiera. As, el consumo de una dieta rica en protenas y grasas y
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an aquella que contiene glucosa o almidn resultar poco estructurada y porosa. En cambio, en caso de dietas ricas en sacarosa la biopelcula adquiere el aspecto de una capa gelatinosa. Esto sugiere que existe una relacin directa entre el consumo de sacarosa y la presencia de ciertos homopolisacridos que sern sintetizados por la flora cariognica de la biopelcula y que darn a la misma las caractersticas de resistencia y adhesividad. ACTIVIDADES BIOQUMICAS DE LAS BACTERIAS DEL BIOFILM

ACTIVIDADES EXTRACELULARES DEL BIOFILM

Desde un punto de vista bioqumico, las reacciones ms importantes en el biofilm dental son las relacionadas con la utilizacin metablica del sustrato proporcionado por la mezcla alimento-saliva que entra en contacto con las bacterias del biofilm. Por esta razn, la clase de alimento y la frecuencia de ingestin tienen mxima importancia para determinar la naturaleza del biofilm formado, as como su potencial patgeno. Cuando se mastican alimentos, algunas partculas quedan retenidas sobre las mucosas y las superficies de la lengua, y tambin se depositan en los dientes, particularmente en las reas interproximales. La saliva contiene -amilasa, que acta aleatoriamente sobre las molculas de almidn dando, como productos de hidrlisis, una mezcla de glucosa, maltosa, dextrina y polmeros pequeos de glucosa (9-10 unidades). Este efecto de la amilasa salival tiene poca importancia desde el punto de vista de la digestin de alimentos; sin embargo, no debe ser subestimado en relacin con la salud oral. El almidn, debido a su alto peso molecular no es capaz de difundir en el biofilm, pero los productos derivados de la rotura del mismo pueden proporcionar sustratos fermentables algn tiempo despus del la masticacin del mismo, teniendo en cuenta que es una molcula con un alto grado de retentividad. La saliva contiene, adems, sistemas enzimticos como las xidorreductasas o las deshidrogenasas. Estas pueden convertir, en presencia de NAD, alguno de los polialcoholes (por ejemplo sorbitol) en fructosa, la que, a su vez, sera mejor metabolizada por las bacterias del biofilm. Estas reacciones enzimticas no han sido evaluadas extensamente con respecto a su contribucin al metabolismo del biofilm y deben ser consideradas en la futura investigacin. Sin embargo, el metabolismo de los monosacridos y disacridos ha sido estudiado con mayor detalle. Tanto los estreptococos cariognicos (Streptococcus mutans) como los no cariognicos (Streptococcus salivarius, mitis, sanguis, milleri) producen cantidades semejantes de polisacridos extracelulares pero slo los sintetizados por los cariognicos resultarn adhesivos.

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Es decir que:

La diferencia entre los microorganismos cariognicos y no cariognicos no reside en la cantidad sino en la calidad de los polisacridos que producen.
Estos polisacridos extracelulares pueden ser homopolmeros de glucosa (glucanos) o de fructosa (fructanos). Dentro de los glucanos se encuentran los dextranos y mutanos que difieren en el tipo de unin glucosdica como tambin en sus funciones y solubilidad en agua. Por su parte los fructanos estn representados por el grupo de los levanos que, en contraposicin, son lineales.

Estas caractersticas se resumen en el siguiente cuadro:

Denominacin

Tipos de uniones Cadena lineal Ramificacin

Funciones

Solubilidad

dextranos

1,6

1,4 1,3

Reserva energtica

Glucanos

mutanos

1,3

1,6 1,4

Adhesin

No

levanos Fructanos

2,6

---

Reserva energtica S

Las estructuras correspondientes a dextranos y levanos se muestran en el siguiente esquema:

Figura 1: Estructura de un glucano ramificado donde se ven los enlaces - 1, 6 de las cadenas lineales y las ramificaciones - 1, 4 y - 1,3.

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Figura 2: Estructura de un fructano lineal con enlaces - 2,6.

Formacin de polisacridos La sacarosa tiene importancia especial en el metabolismo del biofilm debido a que los estreptococos tienen enzimas extracelulares sintetizadoras de homopolisacridos: las

glucosiltransferasas. Estas enzimas aprovechan especficamente la sacarosa como sustrato para formar polmeros de elevado peso molecular. Tales enzimas extracelulares no slo son importantes por sus facultades sintetizadoras, sino tambin porque representan los mecanismos de enlace que producen la agregacin de las clulas. Los dos grupos principales de enzimas sintetizadoras de los homopolisacridos son las glucosiltransferasas y las fructosiltransferasas. Las glucosiltransferasas son un grupo de enzimas extracelulares encontradas en bacterias como St. sanguis y St. mutans. Son responsables de la sntesis de glucanos para lo cual hidroliza la molcula de sacarosa y transfiere el residuo de glucosa a un polmero de glucano preexistente. glucosiltransferasa Sacarosa + (glucosa)n (glucosa)n+1 + fructosa glucano Por su parte, el residuo de fructosa es captado por la clula bacteriana donde tiene dos destinos: es metabolizado dando como producto final cidos orgnicos bien es acumulado como polisacrido intracelular de reserva. Los cidos mencionados difundirn hacia la matriz de la biopelcula acidificando el entorno y produciendo el consiguiente descenso de pH. La reaccin no parece requerir un cofactor metlico ni coenzimas, y no resulta afectada por los iones fluoruro. La enzima tiene un amplio pH ptimo (entre 5 y 7). La enzima fructosiltransferasa encontrada en St. salivarius, A. viscosus y algunos St. mutans, sintetiza otro polisacrido extracelular importante, homopolmero de la fructosa, al que se denomina levano o fructano. Este es un polmero de la D-fructofuranosa que muestra un predominio de enlaces (26), tales polmeros tienen elevado peso molecular, son bastante solubles y fcilmente degradables. Dado que estas bacterias tambin son capaces de degradar dicho polmero, es difcil determinar la verdadera produccin de fructano por las bacterias del biofilm. El sustrato especfico para las fructosiltransferasas es la sacarosa, de la que se usa la fructosa para incrementar el polmero fructofuranosa, liberando una molcula de glucosa en el proceso. En este caso, la glucosa restante ser captada por la clula bacteriana y destinada a la obtencin de energa o almacenada como polmero intracelular de reserva, teniendo el mismo
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efecto sobre la biopelcula bacteriana que los descriptos en el caso de la glucosiltransferasa. fructosiltransferasa Sacarosa + (fructosa)n (fructosa)n+1 + glucosa fructano Aunque el glucano y el fructano son los principales polmeros extracelulares formados en el biofilm a partir de la sacarosa, no se deben considerar como los nicos polmeros del biofilm, o que otros azcares no pudieran ser utilizados por otros sistemas enzimticos para producir polisacridos diferentes.

Energa de enlace para la sntesis de los polisacridos

GLUCOSA FRUCTOSA
Figura 3: Estructura de la sacarosa

La sacarosa tiene una unin glucosdica entre -D-glucosa y -D-fructosa que incluye los grupos reactivos de ambas hexosas y que tiene una energa libre de hidrlisis equivalente a la del ATP. Tal energa es utilizada para la reaccin de polimerizacin. La energa libre de hidrlisis de maltosa y lactosa es mucho ms baja, por lo tanto estos disacridos no resultan efectivos para la sntesis de polisacridos extracelulares. Esto explica por que, si bien otros azcares pueden ser metabolizados por las bacterias, la sacarosa es el nico hidrato de carbono eficiente para la sntesis de polmeros extracelulares.

Propiedades del biofilm supragingival

Segn hemos explicado, la matriz del biofilm recin formado, en presencia de sacarosa se convierte con el tiempo en una malla gruesa y gelatinosa de protenas y polisacridos, a la que llamaremos biopelcula madura.

Esmalte

Sacarosa Bacteria Matriz proteica

Polisacridos extracelulares Glucosa Fructosa

Figura 4: Formacin de polisacridos extracelulares por bacterias del biofilm a partir de sacarosa dietaria. Ctedra de Bioqumica General y Bucal FOUBA9

El efecto de esta biopelcula gruesa consiste en una limitacin del libre movimiento de las molculas entre la saliva y el biofilm, por ejemplo el oxgeno. Se crea as un ambiente anaerbico que favorece la fermentacin de los azcares con produccin de distintos cidos orgnicos tales como: lctico, frmico, actico, propinico, butrico, que se acumulan al difundir con mayor

dificultad y no ser neutralizados por los buffers salivales.

Figura 5: Movimiento de los metabolitos entre la saliva y el fluido del biofilm

Algunos de los polisacridos formados presentan propiedades de adhesin impidiendo el barrido de la biopelcula por efecto de la saliva. Otros pueden actuar como reserva de carbohidratos para uso de las bacterias. En efecto, en el ayuno nocturno los levanos actan como reserva energtica ya que son degradados por levanasas bacterianas. El Streptococcus mutans tambin puede degradar sus depsitos intracelulares, semejantes al glucgeno, obteniendo energa durante los perodos de escasez de nutrientes. Es aceptado actualmente que el proceso cariognico depende ms de la forma y frecuencia de ingestin de azcar que de la cantidad total de ste que se consume. De modo que si se han de consumir dulces, es ms conveniente hacerlo durante las comidas (seguido de una correcta higiene dental) que entre ellas. Curva de Stephan

Es sabido que no todos los hidratos de carbono de la dieta sern utilizados de igual forma por las bacterias de la biopelcula. Los carbohidratos polimricos, como el almidn, son menos accesibles como sustratos para las bacterias de la biopelcula que aquellos de bajo peso molecular. Ello se debe a que los polisacridos, dado su alto peso molecular difunden con menor facilidad que los mono o disacridos. Adems los polisacridos deben ser hidrolizados antes de ser metabolizados. El impacto de los diferentes hidratos de carbono sobre el pH de la biopelcula bacteriana fue estudiado por Stephan en 1940, quien realiz una medicin directa de los cambios de pH en la
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biopelcula dental utilizando un electrodo de antimonio. As comprob que luego de realizar enjuagues con soluciones diludas de glucosa, fructosa o sacarosa se produca una cada del pH en minutos, originando condiciones de descalcificacin en la superficie dental. Este descenso del pH se debi a un incremento de la actividad glucoltica bacteriana. Sobre un biofilm bucal el pH mnimo (aproximadamente 5.5) se alcanz entre los 15 y 20 minutos despus del enjuague con el carbohidrato fermentable, correspondiendo ese valor a la mxima produccin de cido lctico. Despus de esto, hubo una recuperacin lenta hasta alcanzar los valores de pH iniciales, aproximadamente a los 60 minutos, a medida que el cido lctico fue reemplazado por otros cidos ms dbiles y se produjo la difusin y neutralizacin por bufferes salivales.
pH

Tiempo (min)

Figura 6: Curva de Stephan mostrando la respuesta de la biopelcula dental humana a la sacarosa.

El estudio se hizo sobre una biopelcula desarrollada durante 72 hs. A tiempo 0 los pacientes se realizan un enjuague prolongado (60 seg.) con solucin de sacarosa al 10%. En contraste con los monosacridos y la sacarosa, las soluciones de almidn al 10% tuvieron poco efecto o ninguno sobre el pH de la biopelcula por las razones antes comentadas. Los alcoholes o azcares como el xilitol (derivado de xilosa) o el sorbitol (derivado de glucosa) no son metabolizados por las bacterias de la biopelcula y por lo tanto no producen cada de pH. Por esta razn se ha extendido su uso como edulcorantes alternativos de la sacarosa para productos seguros dentalmente o no cariognicos. Stephan realiz la misma curva en un grupo de pacientes con baja actividad cariognica y en otro con alta actividad. En el primer grupo el descenso del pH del biofilm luego del enjuague fue menor y el retorno a los valores iniciales fue ms rpido que en el segundo grupo.

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pH en salud cariognico

Tiempo (min)

Figura 7: Curva de Stephan en un biofilm en salud y en biofilm cariognico.

Debemos tener en cuenta adems que los valores de pH varan de un sitio a otro dependiendo del espesor de la biopelcula y el acceso de saliva. De tal forma que en el grfico podemos comparar las variaciones de pH entre la biopelcula oclusal y la biopelcula interproximal.

pH de la placa

Oclusal

Interproximal

Tiempo (min)

Figura 8: Curva de Stephan en un biofilm oclusal y en otro interproximal.

ACTIVIDADES INTRACELULARES DEL BIOFILM

Una vez formado el biofilm en la superficie del diente, las bacterias continan metabolizando los sustratos disponibles para satisfacer sus necesidades energticas y producir componentes estructurales destinados al mantenimiento y la reproduccin. Los carbohidratos son la fuente principal de energa y pueden provenir de la dieta o de los polisacridos intracelulares. Desde el punto de vista metablico las biopelculas bacterianas pueden dividirse en dos grandes grupos segn su principal fuente energtica: a) las que utilizan preferentemente carbohidratos que convierten en cidos orgnicos y tienden a disminuir el pH. b) las que utilizan preferentemente material nitrogenado y producen sustancias bsicas que tienden a incrementar el pH; Es importante destacar que las bacterias usan ambos tipos de sustratos aunque cada bacteria en particular metaboliza preferencialmente uno de ellos. Las bacterias del biofilm
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supragingival utilizan como principal fuente de energa los hidratos de carbono. Todos estos sustratos pueden provenir de la dieta, del fluido de la biopelcula, de la saliva o del fluido gingival. El desarrollo de caries depende inversamente de la exposicin a la saliva; as, los dientes anteriores inferiores que estn continuamente baados por ella son en general ms resistentes a las caries mientras que los superiores, en dnde su acceso es ms limitado, son ms proclives a desarrollarlas. Por otra parte, aquellas regiones muy expuestas a la saliva, especialmente en el lado lingual de los incisivos inferiores y en el lado bucal de los molares superiores, tienden a desarrollarse con el tiempo clculos supragingivales. Esto es debido principalmente a que en esos puntos se localiza la salida del conducto excretor de glndulas salivales cuyo fluido presenta una alta concentracin de calcio y fosfatos que mineralizan a la biopelcula all formada. Metabolismo de azcares y produccin de cidos

Los estreptococos son los organismos ms importantes en trminos de produccin de cidos. Los azcares captados sern fermentados generando distintos tipos de cidos orgnicos: lctico principalmente, actico, butrico, frmico y propinico. Estos cidos sern responsables del descenso del pH y la consecuente desmineralizacin del esmalte.

Figura 9: Oxidacin aerbica y anaerbica de la glucosa

Mecanismos de captacin de azcares

Estos microorganismos pueden captar azcares del medio por dos mecanismos: 1) de alta afinidad 2) de baja afinidad Estos mecanismos operan en situaciones diferentes pero son ambos imprescindibles para el metabolismo bacteriano.

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1) De alta afinidad En condiciones de ausencia de alimento o muy baja concentracin de azcares en la biopelcula y por lo tanto a pH neutro, opera el sistema de la fosfotransferasa. Este es un sistema de transporte activo de azcares presente en muchas membranas bacterianas. Constituye el paso limitante en la produccin de energa cuando el estreptococo se desarrolla a bajas concentraciones extracelulares de azcares. Es un sistema altamente especfico, presenta alta afinidad para azcares y cataliza la transferencia de un grupo fosfato desde el fosfoenolpiruvato al azcar que es entonces transportado al interior de la clula. El azcar fosforilado ser utilizado como sustrato para la gluclisis generando dos moles de fosfoenolpiruvato, uno de los cuales ser usado para fosforilar la prxima molcula de azcar que ingrese y el otro se usar para la produccin de ATP.

Figura 10: Mecanismo de alta afinidad o sistema de la fosfotransferasa.

Este sistema de alta afinidad se satura a concentraciones relativamente bajas de azcares pero existe un mecanismo alternativo para la captacin de los mismos que le permite al microorganismo sobrevivir en estas condiciones. 2) De baja afinidad A medida que aumenta la concentracin extracelular de azcares el sistema de la fosfotransferasa se va inhibiendo gradualmente, al mismo tiempo se va activando el sistema de baja afinidad. Como vemos en la figura 9, en el entorno hay alta concentracin de azcares que sern metabolizados por los microorganismos generando cido lctico principalmente, que al pH intracelular se encuentra ionizado en forma de lactato que difunde al lquido extracelular. Para
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evitar el descenso del pH intracelular que inhibira a la va glucoltica los protones son expulsados en intercambio con iones K+ por la actividad de una ATPasa ligada a la membrana bacteriana. Se genera un gradiente de protones y por consiguiente una fuerza protomotriz a travs de la membrana celular. Esto favorece el transporte del azcar hacia el interior en simporte con H+. Este sistema resulta muy activo en el Streptococcus mutans, an a pH 5,5, el cual es desfavorable para otras bacterias de modo que le permite ser dominante en la biopelcula bacteriana.

Sistema dependiente de la fuerza protomotriz

Sistema del fosfoenolpiruvato

Figura 11: Mecanismo de baja afinidad.

Metabolismo de los azcares incorporados

Los estreptococos no contienen las enzimas del ciclo de Krebs ni las de la cadena respiratoria, requieren entonces de la gluclisis para la obtencin de energa. El destino final del piruvato depende de que la disponibilidad de azcares sea alta o baja:

Cuando la concentracin de azcar disponible es alta la enzima lcticodeshidrogenasa (LDH) es activada alostricamente por fructosa-1,6 bisfosfato y gliceraldehdo-3 fosfato que son intermediarios de la va glucoltica. As se favorece la formacin de lactato como principal producto.

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Figura 12: Metabolismo del piruvato en alta disponibilidad de azcares.

Cuando la concentracin de azcar disponible es baja, la va alternativa es la catalizada por la enzima piruvato formiato liasa (PFL). Esta enzima es inhibida por altas concentraciones de gliceraldehdo-3 fosfato de modo que slo estar activada cuando este intermediario de la gluclisis se encuentre en bajas concentraciones. Esta va presenta una ventaja para las condiciones desfavorables que debe afrontar la bacteria ya que genera una molcula extra de ATP a partir del intermediario acetil~ fosfato por cada molcula de glucosa metabolizada. Los cidos producidos por estas vas son transportados fuera de la clula y se acumulan en el medio externo. Esta acumulacin externa retardara cada vez ms la secrecin del lactato intracelular causando una gradual acidificacin del citoplasma bacteriano inhibiendo la gluclisis.

Figura 13: Metabolismo del piruvato en baja disponibilidad de azcares

Sin embargo esto no ocurre porque otras bacterias como las del gnero Veillonella utilizan el cido lctico como sustrato removiendo de este modo un producto perjudicial para el estreptococo. La Veillonella metaboliza el lactato de la siguiente forma: lactato + H2O acetato + CO2 + 2 H2
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lactato + H2

propionato + H2O

Los cidos propinico y actico son ms dbiles que el lctico y actan como bufferes elevando el pH del medio.

En resumen, podemos decir que:

El metabolismo bacteriano produce cambios en el pH del biofilm, los cuales en un biofilm en salud estn sujetos a factores de control que se resisten a dichos cambios. Por otra parte, en un biofilm cariognico, con poco acceso de saliva, los cambios de pH no podrn ser neutralizados tan fcilmente por lo cual pueden causar alteraciones en la solubilidad de los fosfatos de calcio produciendo cambios clnicos en la superficie del esmalte.

CMO ES EL MECANISMO BIOQUIMICO INVOLUCRADO EN EL DESARROLLO DE UNA CARIES DENTAL?

La caries dental causa una reversin de los procesos fisicoqumicos involucrados en la maduracin de los tejidos duros dentales. Una reversin similar se produce en la enfermedad periodontal, donde hay prdida del tejido alveolar que sostiene al diente. Ambas condiciones son el resultado de una persistente acumulacin de biofilm de placa bacteriana. Los fosfatos de calcio existen en una variedad de formas y fases. El pH regula la naturaleza de la fase slida y sus propiedades. En el hueso, el pH se mantiene entre 6.5 y 75, y la actividad celular es capaz de controlar el intercambio de calcio y fosfato entre la fase slida y los fluidos tisulares. En cambio, en el biofilm, como resultado de la actividad metablica de los microorganismos, el pH vara entre 4.5 y 8.5. Cuando el pH baja, la hidroxiapatita (HA) se convierte en una sal ms soluble con una relacin calcio/fosfato menor. Ca10(PO4)6(OH)2 + 8H+ 6CaHPO4 + 2H2O + 4Ca2+

Aunque a pH medianamente cido el fosfato diclcico (CaHPO4) es la ms estable de estas sales, gradualmente se disocia en sus iones constitutivos que se pierden en saliva. CaHPO4 + H+ Ca2+ + H2PO4-

Un factor crtico en la solubilizacin es el rea superficial expuesta. El fosfato diclcico forma una cubierta protectora para la HA que se encuentra debajo, dado que es removida lentamente, y la velocidad depende de la concentracin de los iones de calcio y fosfato a la que
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est expuesta la superficie del diente. En la medida en que el cido es neutralizado a travs de esta reaccin con la HA, el pH se incrementa y las condiciones de equilibrio se restablecen. Como la HA es la forma ms estable a pH neutro, el proceso tiende a revertirse; es decir, el fosfato diclcico expuesto a soluciones cada vez ms alcalinas se convierte en una sal con una relacin calcio/fosfato mayor. 10CaHPO4 + 8OHCa10(PO4)6(OH)2 + 4HPO42- + 6H2O

Sin embrago, la estructura de la HA hace improbable que esta reaccin ocurra directamente. Se piensa que el fosfato diclcico puede sufrir reorientacin molecular para formar fosfato de calcio amorfo no cristalino que acta como un intermediario en el proceso. La remineralizacin es favorecida por la accin cataltica de los iones fluoruros. Como en la mineralizacin normal el proceso entero es probablemente dirigido y controlado por la matriz orgnica, no es sorprendente que la solubilizacin y la remineralizacin no presente la estructura ordenada del esmalte original. Luego de frecuentes y prolongadas exposiciones al ataque cido, el proceso ya no es reversible y gradualmente se produce la prdida permanente de calcio y fosfato a partir del esmalte, en particular en las regiones ms solubles ricas en magnesio y carbonato. Una zona de descalcificacin se forma inmediatamente debajo de la superficie del esmalte, clnicamente conocida como mancha blanca.
MANCHA BLANCA Zona de reprecipitacin

Biofilm

Biofilm

Esmalte

Esmalte

(a)

(b)

Figura 14: Formacin de la mancha blanca

En esta figura se esquematiza el intercambio inico entre la superficie del esmalte y el fluido de la placa que produce una superficie altamente sustituida (a) y una incipiente lesin cariosa (b), donde el ataque cido severo sobre la superficie del esmalte produce una subsuperficie descalcificada sobre una superficie externa relativamente densa debido a la reprecipitacin y a la migracin neta de iones fuera del esmalte. Eventualmente, la superficie irregular y permeable se rompe y las bacterias invaden el lugar y se forma ms placa dentro de la cavidad, la cual bajo
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condiciones de un sistema cerrado causa un ataque cido ms severo y finalmente la destruccin del esmalte.

CONCLUSION: La cariogenicidad va a depender de: Tipo de Hidrato de Carbono en la dieta Tipo de bacteria Tipo de polisacrido producido Frecuencia y oportunidad de exposicin al azcar Localizacin del biofilm Todo esto en funcin del tiempo.

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