CICLODEDIVISIONCELULAR FACTORESQUECONTROLANELCICLO:FACTORESEXTERNOSYFACTORESDIFUSIBLES INTERFASE MITOSIS MEIOSIS GAMETOGENESIS ESPERMATOGENESIS OOGENESIS FECUNDACION FORMACIONDELABLASTULA HOJASEMBRIONARIAS:ECTODERMO,MESODERMOYENDODERMO HISTOLOGIA TEJIDOEPITELIAL TEJIDOCONJUNTIVO TEJIDOMUSCULAR

EJIDOMUSCULAR TEJIDONERVIOSO Bibliograa: CICLOCELULAR

LACELULAG.M.COOPERS BIOLOGIACELULARYMOLECULARH.LODISH,J.DARNELL BIOLOGIAMOLECULARDELACELULAB.ALBERTS

El ciclo celular

Pluricelulares:Paraladivisinesimprescindible
ReplicarADN Segregacindeloscromosomasreplicados Repartodelmaterialgen>coequita>vamente Aumentardetamao Duplicarorgnulos Reorganizarcitoesqueleto

Sociedadcelular:colec>vidad;unasclulassedividenotrasno;equilibrio entremuerteydivisin. NecesidaddeFactoresdeControlenelciclodedivisincelular:

Molculas de Permiso

Go

FORMACIN DE HETEROCARIONTE

AUTORRADIOGRAFIA CON H3-dT

Factores Difusibles del Ciclo de Divisin Celular Los sucesos del ciclo estn encadenados independientemente. Factor Activador de la fase S Factor Inhibidor de la Re-replicacin Factor de Retraso de la Fase M Factor Promotor de la Fase M (MPF) Los tiempos intervalos que median entre sus apariciones durante el ciclo de divisin celular, determina la longitud de dicho ciclo celular. Las relaciones causales entre los factores difusibles hacen que los sucesos del ciclo cromosmico (replicacin-Mitosis) ocurran en un orden fijo:

MPF;

- La clula no puede entrar en fase M hasta que no se produzca

- MPF no puede ser producido hasta que el Factor de Retraso de Fase M y el Activador de Fase S no se hayan desactivado; - El Factor de Retraso de Fase M y el Activador de Fase S no se desactivan hasta que la sntesis de ADN haya concluido; La sntesis de ADN no acaba hasta que todo el DNA haya terminado de replicar; - El ADN no comienza a replicar hasta que el bloqueo de la Rereplicacin del ADN haya sido eliminado mediante el paso de la clula por Fase M hasta llegar a la fase G1; - La clula no puede pasar desde la Fase M a G1 hasta que los cromosomas se hayan segregado en el huso mittico; Las cromtidas hermanas no se separan hasta que no se produzca el MPF. Los procesos del Ciclo Cromosmico estn relacionados entre si a travs de una Secuencia Dependiente.

Clulas en Fase S

hasta cuando?

hasta cuando?

(MPF)
Oocito de Xenopus leavis

1,5 mm.

Cls. Humanas en metafase Cls. PtK en interfase

Materiales experimentales que contribuyeron a identicar las molculas clave responsables de la regulacin del ciclo celular: Oocitos de sapo, levaduras mutantes y embriones tempranos de erizos de mar A)1971 Oocitos de Xenopus en G2 Seal hormonal Entrada en Fase M

factor hormonal G2 M

G2

Inyeccin de citoplasma de oocitos estimulados hormonalmente para su paso a fase M

Entran en Mitosis

Un factor citoplsmico contenido en los oocitos tratados hormonalmente era suciente para inducir la transicin de G2 a M. FACTOR PROMOTOR DE MADURACIN (MPF). No solo en oocitos, tambin en clulas somticas:

MPF: Regulador General del paso de G2 a M

B)1972: anlisis gentico de levaduras, Saccharomyces cerevisiae (gemacin) y S. Pombe (fisin) Levaduras mutantes sensibles a temperatura Mutantes que se detenan en diferentes puntos del ciclo, denominados cdc (mutantes del Ciclo de Divisin Celular). -cdc2: detenidos en G1 y G2/M; requieren protena cdc2 para superarlo. (s.pombe) -cdc28: detenido en Start; requieren protena cdc28 para superarlo. (s.cerevisiae) Se aisla el gen cdc2: codifica para una Quinasa; 1 evidencia de fosforilacin de protenas en la regulacin del ciclo. Se identifica un gen humano relacionado con cdc2 que es tambin funcional en levaduras: Conservacin evolutiva. Se postula que las protenas quinasa son las reguladoras del ciclo, y se les llama: Kinasas del Ciclo de Divisin : CDK (equivalentes a las cdc). La nomenclatura de la quinasa cambia con los conocimientos de su funcin en el ciclo Cdc= ciclo divisin celular Cdk= kinasa de ciclo de divisin Cdk= kinasa dependiente de cilina Como Cdc2 fue la 1 conocida se llama Cdk1, mientras las otras identicadas se designan por Cdk2 hasta Cdk8.

C)1983-1986 Estudios de sntesis de protenas en embriones tempranos de erizos de mar. Sufren mltiples divisiones mitticas tras la fecundacin. La entrada en cada mitosis requiere sntesis previa de protenas Se identifican 2 protenas que mostraban un patrn peridico de acumulacin y degradacin Se les llamo CICLINAS. Se acumulan durante interfase Se degradan rpidamente, al final de fase M Se sugiri que eran Controladores de Mitosis: - su acumulacin controlara la Entrada en Fase M - su degradacin controlara la Salida de Fase M

1971: Factor Promotor de Maduracin (MPF) que controla el paso a Fase M. 1972: 1 evidencia de Fosforilacin en el Ciclo.- Quinasas de Ciclo de Divisin (Cdk). 1986: Las ciclinas se sintetizan y se destruyen durante el ciclo. 1988: se purica el MPF y se relaciona con las Quinasas y las Ciclinas

D) 1988 Se Purifica el MPF en Oocitos de ranas 2 subunidades: Cdc2: Una Quinasa con actividad cataltica dependiente de ciclina. Ciclina B: subunidad reguladora que se requiere para la actividad cataltica de la quinasa cdc2 (cdk) El MPF tiene dos estados, dependiendo de la concentracin de Ciclina B: . a concentraciones bajas de Ciclina B en la clula, es Inactivo; . a concentraciones ms alta se vuelve Activo.

La Ciclina B se degradar cuando el MPF est activo y lo har debido a actividad cataltica que posee la quinasa cdc2 (cdk1).

la

a) En mamferos la sntesis de Ciclina B comienza en fase S, se acumula, y se une con cdk1 para forma el complejo MPF inactivo, durante S y G2. b) A medida que se sintetiza ms ciclina se activa el MPF. c) Se inicia la Fase M, se hacen las pertinentes fosforilaciones y se Activa el Complejo Promotor de la Anafase.

- cdk1 forma complejo con la ciclina B durante S y G2, y al formar complejo, cdk1 es fosforilada en la treonina-161, esta fosforilacin es requerida para la actividad cataltica (degradacin posterior de la ciclina B) de cdk1 (cdc2). - Tambin se fosforila en la tirosina-15 (y treonina 14 en vertebrados), estas fosforilaciones inhiben la actividad Quinasa de la cdk1 y lleva a que se acumule complejo MPF inactivo. - Llegado cierto umbral de sntesis de Ciclina B, se activa una Fosfatasa, la cdc25, y desfosforila a Tirosina 15 (y treonina 14 en vetebrados). Entrada en Fase M - Esto hace que se active el MPF y se inicie la Mitosis, fosforilando a diferentes substratos. Uno de los substratos es la COHESINA, que une cromtidas hermanas, y al fosforilarse se activa el Complejo Promotor de la Anafase. Se produce entonces la Degradacin de la Ciclina B debido a la actividad cataltica de cdk1 (via de la degradacin proteica por ubiquitina-proteasoma). e) Inactivacin del MPF y desfosforilacin de la treonina 161 por desaparecer la ciclina. f) Salida de la fase M

fosfatasa Cdc25

P P

Complejos Cdk/ciclina Cdk1/ciclina B Cdk4/ciclina D Cdk6/ciclinaD

Fase que controla G2 G1 G1

Cdk2/ciclina E G1/S Cdk2/ ciclina A S

Complejos Reguladores Ciclina-Cdk

-Factor Promotor de la Mitosis:MPF (Mphase promoting factor):

-Ciclina G1-Cdk: Interviene en el inicio de la fase S

La actividades de las CDKs se regulan por cuatro mecanismos moleculares

CICLO DE DIVISIN CELULAR - 4 procesos: Crecimiento celular Replicacin del ADN Distribucin de cromosomas Divisin del citoplasma - 3 conceptos de Ciclo celular: Cromosmico Centrosmico Citoplsmico Sntesis de ADN
segregacin exacta de ADN

LAS RELACIONES CUSALES ENTRE LOS FACTORES DIFUSIBLES HACEN QUE LOS SUCESOS DEL CICLO CROMOSOMICO* OCURRAN EN UN ORDEN FIJO *[REPLICACIONMITOSIS]

Segregacin de cromosomas
Divisin precisa del centrosoma Aumento de volumen

Crecimiento celular Citosinesis

Factores de control

Externos

factores de crecimiento inhibicin por contacto anclaje al substrato tamao celular factores difusibles (calendario estricto) G1 S G2 S G2 M G1 S G2 M

Internos
Punto de restriccin :

G1

G2

M Go

paro S

paro G2

Cl. Quiescente Diferenciacin Muerte

G1

cariocinesis citocinesis

G1

M paro

DETERMINACION DEL TIEMPO DE CICLO CELULAR EN CELULAS EM9

A 10 placas con cultivos de clulas EM9, hemos suministrado un pulso de deoxitimidina tritiada (H3-dT) durante 5 minutos; hemos posteriormente hemos fijado las placas de cultivos cada hora previa administracin de colcemida para parar el ciclo en metafase mittica. Tras revelar la autorradiografa obtenemos la siguiente grfica.

100% % de metafases Marcadas con H3-dT 50%

1h

2h

5h

7h

Tiempo, en horas despus del pulso con H3-dT

Cada cultivo duplica su poblacin cada 16 horas. Las clulas EM9 tardan 1 hora en realizar la Fase M. Si queremos estudiar el efecto de un nuevo producto quimico sobre el ADN, Cunto tiempo (en horas), antes de la observacin, en metafase, del posible dao producido por el qumico en el ADN, tendremos que suministrar dicho qumico.