II.

CINETICA ENZIMATICA
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas enzimticamente

Definicin de la velocidad de reaccin V= -d[S] = d[P] dt dt

Conceptos bsicos de cintica qumica

Las reacciones qumicas se clasifican en: Monomoleculares, bimoleculares y trimoleculares segn el nmero de reaccionantes sea uno, dos o tres. A P A+B P A+B+C P

Las reacciones qumicas tambin se clasifican en: reacciones de orden cero, primer orden, segundo orden y tercer orden dependiendo de cmo la velocidad de reaccin es influenciada por la concentracin de los reaccionantes. V= -d[S] =d[P] dt dt

Conceptos bsicos de cintica qumica

En una reaccin de orden cero, la velocidad de formacin del producto es independiente de la concentracin de sustrato: v = k En una reaccin de primer orden la velocidad de formacin de los productos es directamente proporcional a la concentracin del sustrato: v = k [A] Una reaccin de segundo orden es aquella en la que la velocidad de formacin del producto depende de la concentracin de dos sustratos (como en una reaccin de condensacin): v = k [A1] [A2] del cuadrado de la concentracin de un nico sustrato (reaccin de dimerizacin): v = k [A]2

Factores que afectan la velocidad de una reaccin enzimtica

1. 2. 3. 4. 5. Concentracin de Enzima Concentracin de sustrato pH Temperatura Presencia de Inhibidores

Factores que afectan la velocidad de una reaccin enzimtica

1. Concentracin de Enzima

2. Concentracin de sustrato

Modelo Cintico de Michaelis - Menten

Desarrollaron la ecuacin de la velocidad de una reaccin catalizada por enzima

La derivacin de la ecuacin se basa en:

1) que la concentracin de S es mayor que la concentracin de E 2) La concentracin de Producto al inicio de la reaccin es insignificante

3) el paso limitante de la velocidad es la transformacin de ES a E+P

Se puede asumir:
En equilibrio rpido:

En estado estacionario:

En equilibrio rpido: Ks= k2 = [E] [S] k1 [ ES] Si vo=k3 [ES]

[ES ] = [E][S]/Ks Vo = [E]t k3 [ES] [E]+ [ES]

Si k3 [E]t = Vmax

Vo = Vmax Vo = Vmax

[ES] [E]+ [ES] [S]/Ks 1 + [S]/Ks

Vo = Vmax
Vo
=

[E][S]/Ks [E]+ [E][S]/Ks

Vmax [S] Ks + [S]

En estado estacionario: k1 [E] [S] = k2 [ES] + k3 [ES]

[ES] =k1 [E] [S] (k2 + k3 ) Vo = [E]t k3 [ES] [E]+ [ES]

Si vo=k3 [ES]

Si k3 [E]t = Vmax

Vo = Vmax Vo = Vmax Km=

[ES] [E]+ [ES] [S]/Km 1 + [S]/Km (k2 + K3 ) K1

Vo = K1 [E][S]/(k2 + K3 ) Vmax [E]+ K1 [E][S]/(k2 + K3 ) Vo

=

Vmax [S] Km + [S]

Estado estacionario: La concentracion del complejo ES se Mantiene constante en el tiempo

Ecuacin de la velocidad de una reaccin enzimtica

Por qu determinar Km? Km es una medida de la afinidad de la enzima por el sustrato cuando k3<k2. Km=(k 2+k3)/k1 Km establece un valor aprox. para el valor intracelular de sustrato Km es constante para una enzima dada, permite comparar enzimas de diferentes organismos o tejidos o entre distintas protenas Un cambio en el valor de Km es un modo de regular la enzima

Nmero de recambio: kcat

k3 = kcat

Vmax = kcat Et

kcat=Vmax/Et Eficiencia cataltica:

Kcat/ Km es una medida de la eficiencia cataltica

Tomando las inversas de la ecuacin de velocidad, tenemos:

Plot de Lineweaber-Burk

3. pH del medio

3. Efecto del pH del medio El sitio activo de la enzima esta frecuentemente compuesto de grupos ionizables que deben estar en la forma inica adecuada para mantener la conformacin, unir los sustratos o catalizar la reaccin. La actividad de la enzima debe ser medida al pH ptimo

4. Efecto de la Temperatura

4. Temperatura

A medida que aumenta la temperatura por lo general aumenta la actividad catalitica dentro del margen de estabilidad de la enzima

Ecuacin de Arrhenius:

log k= -Ea 1 + log A 2.3RT T

La forma integrada:

log k2 = Ea T2-T1 k1 2.3R T2T1 Ea = 2.3RT2T1 log k2 T2-T1 k1 Ea = 2.3RT2T1 log Q10 10