TALLER DE BIOQUIMICA PRCTICA

PAULA ACOSTA CRESPO ANDREINA ARIAS SIOSSI ANDREA HERRERA MENESES YAMINA GRANDETH JIMENEZ

MARTIN NUEZ CANTILLO

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE LA SALUD INSTRUMENTACION QUIRURGICA BIOQUIMICA GRUPO #1 VALLEDUPAR 2013

UNIVERSIDAD POPULAR DEL CESAR FACULTAD DE LA SALUD TALLER DE BIOQUIMICA PRCTICA PROFESOR MARTIN NUEZ CANTILLO 1. Como se utilizan los matraces aforados para preparar una disolucin a partir de un producto lquido y solido Disolucin a partir de un producto solido: se empieza tanto donde se disuelve con un pequeo volumen del disolvente; una vez disuelto se trasvasa al matraz aforado con ayuda de un embudo lavndose varias veces el vaso con el disolvente para asegurarse de que se ha trasvasado toda la disolucin. Se llena el matraz con el disolvente hasta llegar casi a la lnea de cuidado disolvente gota a gota hasta la lnea enrase Disolucin a partir de un lquido: se mide el volumen de este con ayuda de una pipeta o de una probeta; a continuacin se deja caer dentro del matraz aforado , de forma que el lquido resbale por las paredes del mismo, y luego se aade el disolvente de la misma forma explicada en el prrafo anterior 2. Que son las pipetas, micro pipetas, buretas, Erlenmeyer, y probetas. Cmo se manejan y cules son sus funciones? Pipetas:

Son instrumentos que se utilizan normalmente para transferir un volumen determinado de lquido; estas permiten medir un volumen cualquiera sea su capacidad mxima. Existen pipetas de muy distinta capacidad, como son las de 1, 2, 4, 5, 10, 25, 50 mililitros. Las pipetas deben estar perfectamente limpias y secas antes de su utilizacin: Adaptar los labios a la parte superior de la pipeta. Succionar suavemente tomar una pequea porcin del lquido que se va a

medir, enjuagando de este modo el interior de las pipetas varias veces. Expulsar el lquido soplando suavemente. Desechar el lquido. Llenar la pipeta con el lquido a medir aspirando despacio hasta que el lquido rebase levemente el trazo superior. Cerrar el extremo superior de la pipeta con el dedo ndice y colocar el resto de los dedos alrededor del mismo. Separa la pipeta del lquido y colocar la lnea de enrase a la misma altura de los ojos del operador y disminuyendo ligeramente la presin del dedo ndice dejar pasar el lquido necesario para que la parte inferior del menisco coincida con el enrase. Secar las paredes exteriores con un trozo de papel filtro, teniendo cuidado de no tocar el orificio de salida. Introducir el extremo inferior de la pipeta en el recipiente donde se va a verter el lquido, de manera que forme ngulo con la pared del recipiente. Dejar pasar el hasta la graduacin deseada. Esperar unos segundos. Este clsico procedimiento de manejo de las pipetas con el dedo y con la boca es totalmente en desacuerdo con las medidas de seguridad e higiene que imperan actualmente en todas las tcnicas de trabajo de los laboratorios clnicos. Nunca debe pipetearse directamente con la boca liquidos corrosivos o venenosos como los acidos concentrados. Actualmente se tienen a la utilizacin auxiliares de pipeteado (aspiradores), que se incorporan a la parte superior de las pipetas permitiendo el llenado y vaciado de las mismas por simple presin con la mano de una pera de caucho o material plstico

 Micro pipetas:

Como su nombre lo indica son instrumentos que se utilizan para transferir cantidades muy pequeas de lquidos; contienen generalmente cantidades comprendidas entre 1 y 500 micro litros. Se las conoce tambin con el nombre de pipetas lambda ya que 1 lambda () corresponde a 1 micro lito (|). Este tipo de pipetas son muy exactas pero muy poco utilizadas debido principalmente a su fragilidad de limpieza. Otras micro pipetas son tubos capilares con lneas de aforo indicando un volumen determinado; generalmente se llenan por capilaridad y se vacan por medio dela incorporacin a la parte superior de la pipeta de un gotero que facilite el vaciado de la misma.

 Buretas:

Son instrumentos muy utilizados en anlisis volumtrico. Se utilizan principalmente en la valoracin de disoluciones de concentracin desconocida. Una bureta es un tubo de vidrio de dimetro ms grande que el de las pipetas, y que puede contener un volumen de lquido variable graduado en mililitro y decimas de mililitro. Tambin podemos encontrarnos las llamadas micro buretas, destinadas a medir pequeas cantidades de lquido, Las buretas disponen, por su parte inferior de una llave de vidrio esmerilado o material plstico que permite dispensar distintos volmenes de lquido. Estas llaves se manejan con la mano izquierda dejando libre la derecha para agitar el recipiente en el cual se realiza la valoracin. La llave de la bureta debe girar fcil y suavemente y no debe tener fugas. Para su uso debe estar perfectamente limpia y seca sostener la bureta en posicin totalmente vertical con la ayuda de un dispositivo adecuado. Con la llave cerrada y con ayuda de un embudo colocando en su parte superior, llenar la bureta unos centmetros por encima del comienzo de la graduacin. Abrir la llave y dejar salir unas gotas hasta que se expulse el aire contenido en el tubo de salida; a continuacin, dejar salir el lquido gota a gota a hasta que coincida la parte inferior del menisco con el cero de la graduacin. Colocar el recipiente con el problema debajo del extremo inferior de la bureta sujetndolo con la mano derecha, para con la izquierda manejar la llave de la bureta. Dejar caer gota a gota la disolucin.

Cuando se acerque el final sea reaccin, lo que se pone de manifiesto por el indicador, hacer ms lenta la adicin. Erlenmeyer:

Recipientes no calibrados. Son vasijas de fondo plano y cuello corto. Son adecuados para evitar prdidas de materiales en la efervescencia o en un calentamiento prolongado para conseguir una disolucin, pues la parte alta del matraz acta como condensador de vapores, con lo que se retarda la evaporacin. Probetas:

Son recipientes graduados de forma cilndrica, con base para sujecin en su parte inferior. Se utilizan para medidas de volumen que requieran poca precisin. Podemos encontrarlas de tamaos muy variados, y pueden ser utilizadas para dispensar (Presentan un pico en la parte superior para facilitar el vertido del lquido), o para contener (con tapn).

3. Cules son las normas de seguridad y manejo de muestras biolgicas, materiales equipos y procedimientos. Normas generales dentro del laboratorio Utiliza una bata y tenla siempre bien abrochada, as protegers tu ropa. No fumes, comas o bebas en el laboratorio. Guarda tus prendas de abrigo y los objetos personales en un armario o taquilla y no los dejes nunca sobre la mesa de trabajo. No lleves bufandas, pauelos largos ni prendas u objetos que dificulten tu movilidad.

Procura no andar de un lado para otro sin motivo y, sobre todo, no corras dentro del laboratorio. Si tienes el cabello largo, recgetelo. Dispn sobre la mesa slo los libros y cuadernos que sean necesarios. Ten siempre tus manos limpias y secas. Si tienes alguna herida, tpala. No pruebes ni ingieras los productos. En caso de producirse un accidente, quemadura o lesin, comuncalo inmediatamente al profesor. Recuerda dnde est situado el botiqun.

Mantn el rea de trabajo limpia y ordenada. Normas para manipular instrumentos y productos Antes de manipular un aparato o montaje elctrico, desconctalo de la red elctrica. No pongas en funcionamiento un circuito elctrico sin que el profesor haya revisado la instalacin. No utilices ninguna herramienta o mquina sin conocer su uso, funcionamiento y normas de seguridad especficas. Maneja con especial cuidado el material frgil, por ejemplo, el vidrio. Informa al profesor del material roto o averiado.

Fjate en los signos de peligrosidad que aparecen en los frascos de los productos qumicos. Lvate las manos con jabn despus de tocar cualquier producto qumico. Al acabar la prctica, limpia y ordena el material utilizado. Si te salpicas accidentalmente, lava la zona afectada con agua abundante. Si salpicas la mesa, lmpiala con agua y scala despus con un pao. Evita el contacto con fuentes de calor. No manipules cerca de ellas sustancias inflamables. Para sujetar el instrumental de vidrio y retirarlo del

fuego, utiliza pinzas de madera. Cuando calientes los tubos de ensayo con la ayuda de dichas pinzas, procura darles cierta inclinacin. Nunca mires directamente al interior del tubo por su abertura ni dirijas esta hacia algn compaero. Todos los productos inflamables deben almacenarse en un lugar adecuado y separados de los cidos, las bases y los reactivos oxidantes. Los cidos y las bases fuertes han de manejarse con mucha precaucin, ya que la mayora son corrosivos y, si caen sobre la piel o la ropa, pueden producir heridas y quemaduras importantes. Si tienes que mezclar algn cido (por ejemplo, cido sulfrico) con agua, aade el cido sobre el agua, nunca al contrario, pues el cido saltara y podra provocarte quemaduras en la cara y los ojos. No dejes destapados los frascos ni aspires su contenido. Muchas sustancias lquidas (alcohol, ter, cloroformo, amonaco...) emiten vapores txicos.

4. Investigue cules son las sustancias cancergenas y que cuidados debe de tenerse en los laboratorios. Determinar que una sustancia es cancergena, entraa gran dificultad debido a que en la aparicin de un cncer intervienen muchos factores y a su larga historia natural. Sin embargo, en la actualidad existen pruebas que permiten determinar si una sustancia es cancergena o no. Organismos internacionales como la Agencia Internacional para la Investigacin del Cncer (IARC) y la Comunidad Econmica Europea (CEE) se dedican a elaborar listas de sustancias cancergenas, mutagenas y teratogenas

IARC

Es un organismo de la Organizacin Mundial de la Salud que clasifica las sustancias en tres grandes grupos:
o

Grupo 1: procesos industriales, compuestos qumicos o grupos de los mismos que son cancergenos para el hombre. Grupo 2: productos clasificados como probables carcingenos para el hombre. Este grupo se subdivide en dos:

2A alta probabilidad cancergena 2B baja probabilidad cancergena

Grupo 3: productos que no pueden considerarse cancergenos para el hombre.

CEE

La Comunidad Econmica Europea asigna la siguiente denominacin en funcin del riesgo: Productos cancergenos R 45: pueden causar cncer. Sustancias mutgenas R 46: pueden causar alteraciones genticas hereditarias. o Sustancias tertogenas R 47: pueden causar malformaciones congnitas. La Ley 31/1995 de prevencin de Riesgos Laborales obliga al empresario (Artculo 18) a adoptar las medidas adecuadas para que los trabajadores reciban toda la informacin necesaria sobre los riesgos para la seguridad y salud derivados de su actividad, as como de las medidas y actividades de proteccin que deben ser aplicadas.
o o

En el Artculo 41 del Captulo 6 se recoge la obligatoriedad que tienen los fabricantes, importadores, suministradores de envasar y etiquetar adecuadamente los productos utilizados en el trabajo. Agentes cancergenos sitio del cncer con suficiente Labios Cavidad oral bebidas alcohlicas, Virus del papiloma humano tipo 16, Tabaco sin humo, El consumo de tabaco Radiacin X, radiacin gamma Virus de Epstein-Barr formaldehdo, el pescado salado al estilo chino, el consumo de tabaco, el polvo de madera El acetaldehdo superior asociado con, el consumo de bebidas alcohlicas pruebas en seres humanos Los agentes con evidencia limitada en los seres humano Labios Hidroclorotiazida, la radiacin solar Virus del papiloma humano tipo 18

glndula salival

El yodo radiactivo, incluyendo yodo-131

Nasofaringe

Aparato digestivo

Estmago

Helicobacter pylori; Industria de la produccin de caucho, el consumo de tabaco, radiacin X, radiacin gamma

El asbesto (todas las formas) Virus de EpsteinBarr Compuestos de plomo inorgnicos Nitrato o nitrito (ingerida en condiciones que resultan) en nitrosacin endgena Verduras en escabeche (tradicionales asitico) El pescado salado al estilo chino El asbesto (todas las formas) Schistosoma japonicum Tipos de virus del papiloma humano 18, 33

Colon y recto

bebidas alcohlicas el consumo de tabaco radiacin X, radiacin gamma Virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 ;Virus del papiloma humano tipo 16

Ano

5. Cules son las sustancias incompatibles y por qu lo son en los laboratorios? Almacenamiento: Un almacenamiento inadecuado de sustancias qumicas puede originar situaciones potencialmente peligrosas. Los almacenes deben estar situados en lugares frescos y a prueba de fuego. El almacenamiento no ha de hacerse en orden alfabtico, pues pueden colocar juntas sustancias que no deban estarlo. Algunos ejemplos de incompatibilidad qumica se presentan en la siguiente tabla.

c. Inorg cidos inorg. cidos oxidantes cidos orgnicos lcalis Oxidante s Txicos, inorg. Txicos, orgnicos Reactivos con agua Solventes orgnicos

c. Oxidante

c. Org

lcalis

Oxidante

Txico inorg.

Txico org.

Reactivo con agua

Solvente org.

6. Como se realiza la obtencin de muestras biolgicas en el laboratorio

Para la obtencion de una muestra lo primero que demos tener en cuenta es que Antes de proceder a extraer la dicha muestra se debe examinar solicitud para constatar que ha sido correctamente cumplimentada. En una solicitud debe constar, como mnimo, el nombre y dos apellidos del paciente, su edad o fecha de nacimiento, su nmero nico de historia de salud, el cdigo del mdico peticionario y la firma del mismo, la fecha de extraccin o recogida de la muestra, el diagnstico o sospecha diagnstica y las pruebas de laboratorio que se solicitan. Lo ideal es utilizar etiquetas identificativas del paciente, ya que esta incluye todos los datos que identifican inequvocamente al paciente. Hay muchas formas de obtener muestras biolgicas las usadas son: Sangre: Es el espcimen ms usado habitualmente para los estudios analticos por la riqueza de datos que puede aportar, por su funcionalidad y por ser relativamente fcil su obtencin. Dependiendo del tipo de estudio que se vaya a realizar, el tipo de muestra puede coincidir con el espcimen (sangre total) o ser una parte del mismo (plasma, suero). Extraccin Venosa El Torniquete: se realiza para facilitar la localizacin de una vena apropiada para realizar la puncin. Extraccin Arterial: Los sitios ms comunes de puncin arterial son las arterias femoral, braquial o radial. En recin nacidos o en lactantes pueden

utilizarse otros lugares, como la arteria umbilical a las arterias del cuero cabelludo. La puncin arterial es necesaria fundamentalmente para la realizacin de gasometras, ya que los resultados de la gasometra venosa son generalmente poco valorables. La puncin arterial es un procedimiento delicado, que requiere notable experiencia. La sangre obtenida por puncin arterial debera procesarse inmediatamente despus de extrada, por lo que, lo ideal, es contar con equipos de gasometra en la propia sala donde se realiza la extraccin. En todo caso, el traslado al laboratorio debe ser lo ms rpido posible, pues los resultados son tanto ms fiables cuanto con mayor rapidez se analice la muestra. Extraccin Capilar: La obtencin de sangre por puncin cutnea es el procedimiento de eleccin en nios pequeos en los que la ven puncin puede ser difcil y traumtica. Adems, de esta manera, se extraen pequeas cantidades de sangre: hay que tener en cuenta que en recin nacidos, especialmente si son de bajo peso, la extraccin repetida de muestras analticas es causa de anodizacin significativa que, no infrecuentemente, pueden obligar a transfundir para reponer las considerables prdidas sanguneas. Tambin en adultos puede ser el procedimiento de extraccin de eleccin en algunos casos (por ejemplo para control de la glucemia a la cabecera del paciente). Orina: Orina de una sola miccin (Elemental de orina) La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que es la ms concentrada. No obstante, en determinaciones urgentes, se recoger la primera orina que realice el paciente. Es suficiente un volumen de orina de 5-10 mL. Normalmente el propio paciente recoger la muestra de orina Orina de 24 horas: La orina excretada durante 24 horas se utiliza para la determinacin de algunas magnitudes bioqumicas cuyo clculo depende de la cantidad exacta de orina emitida en ese perodo de tiempo Lquido Cefalorraqudeo (LCR) La obtencin del LCR la debe realizar personal facultativo experimentado, por puncin lumbar. Se recoger en tubos estriles de tapn a rosca. Otros Lquidos Orgnicos (Peritoneal, Pleural, Articular, Pericardio) La obtencin la realiza personal sanitario experimentado por puncin percutnea, con las debidas medidas aspticas y recogindose en frasco estril Para determinaciones bioqumicas el volumen mnimo necesario oscila entre 2 y 10 mL. Si es necesario evitar la coagulacin de alguno de estos lquidos se utilizar heparina libre de conservantes (5-10 unidades/mL). El recipiente idneo es un tubo estril de tapn de rosca. Para determinaciones hematolgicas (leucocitos, hemoglobina, hematocrito...) se recoger en un tubo de tapn malva (anticoagulante: EDTA), indicando muy claramente en la solicitud de qu lquido orgnico se trata. El volumen, en este caso, ser el que marca la etiqueta del tubo. Para determinaciones microbiolgicas: se depositar el lquido en

Frasco estril con cierre hermtico y se enviar lo antes posible al Laboratorio. Heces: Las heces deben recogerse en frascos, bien limpios, de boca ancha y cierre hermtico o en los recolectores especficos destinados al efecto. Las pruebas ms frecuentemente realizadas en heces es la determinacin de sangre oculta en heces: Se deben recoger tres muestras seriadas de das diferentes en tres frascos distintos. Saliva

1. Utilizar tubos de 14 x 75 mm. 2. Aspirar la saliva con pipeta Pasteur y depositar en el tubo, hasta aproximadamente un volumen de 1 mL.

7. Que es centrifugacin y cules son los lineamientos que se deben seguir del uso adecuado de la centrifuga La centrifugacin es un mtodo por el cual se pueden separar slidos de lquidos de diferente densidad mediante una fuerza centrfuga. La fuerza centrfuga es provista por una mquina llamada centrifugadora, la cual imprime a la mezcla un movimiento de rotacin que origina una fuerza que produce la sedimentacin de los slidos o de las partculas de mayor densidad. Las centrifugas empleadas en el laboratorio pueden ser de varios tipos. Existen algunas con sistema de control de la temperatura. Esto permite el ajuste de la misma en funcin de la muestra que estamos centrifugando. Tambin puede haber de velocidad ajustable o fija, se usan fundamentalmente para: Obtener suero o plasma a partir de la sangre total. Concentracin de clulas Separacin de fases cuando se utilizan tcnicas en las cuales se hace la extraccin con disolventes orgnicos. Centrifugas Especiales Un modelo de centrifuga muy caracterstico del laboratorio clnico es la de microhematocrito. Es la velocidad constante y alcanza elevadas revoluciones por minuto (10.000rmp) consiguiendo una rpida separacin de los elementos formes sanguneos (clulas). Est diseada para introducir capilares en lugar de tubos. Las denominadas ultracentrfugas sonde alta velocidad de giro y disponen de u sistema de vaco en el compartimiento donde va alojado el rotor, para de este modo evitar el calentamiento y rozamiento con el rotor y las muestras. Son poco utilizadas en laboratorio clnico, pero se aplican en la separacin de lipoprotenas plasmticas.

Control y mantenimiento: los rotores o cabezones las centrifugas deben mantenerse limpios y libres de residuos que pueden suponer un foco de contaminacin y desequilibrio del eje de giro. Para e correcto uso de la centrifuga hemos de tener en cuenta una serie de aspectos: Usar tubos resistentes que no se rompan en el proceso. Equilibrio de la centrifuga. Se colocara el material de igual peso en posicin opuesta dentro de la centrifuga, para evitar las descompensaciones del rotor y consiguiente deterioro del eje. Chequeo de la velocidad de centrifugacin cada cierto tiempo para comprobar el correcto funcionamiento. el correcto funcionamiento.

CONCLUSIN

Gracias a este trabajo logramos adquirir conocimiento acerca del manejo de los instrumentos, y tambin como manejar maquinas del laboratorio como lo es la centrifugadora que es de gran aprovechamiento para realizar ciertos experimentos que son muy beneficiosos para el ser humano y especialmente para nosotros los estudiantes, ya que desde esta rama de la medicina podemos abarcar muchos campos de investigacin.