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1 x 50 pruebas 5 x 50 pruebas
56356 56353
1- INTERES CLINICO
PASTOREX TM STAPH-PLUS es una prueba rpida de aglutinacin en portaobjetos para la deteccin simultnea de la afinidad para el fibringeno ("clumping factor"), de la protena A y de los polisacridos capsulares de Staphylococcus aureus.
2- RESUMEN Y EXPLICACIN
El Staphylococcus aureus es uno de los patgenos ms frecuentes en las muestras clnicas. Para un control adecuado de los pacientes, es muy importante poder distinguir rpidamente a esta especie de otros estafilococos menos virulentos. La prueba, que detecta la produccin de coagulasa libre, permite la identificacin de Staphylococcus aureus (11, 12). Sin embargo, esta prueba tarda entre 4 y 24 horas y las variaciones del plasma entre un lote y otro pueden afectar a la reaccin (16). Se han desarrollo reactivos de aglutinacin que permiten detectar al Staphylococcus aureus de forma ms rpida y ms fiable (3). Estos ensayos de aglutinacin se constituyen de partculas de ltex sensibilizadas con fibringeno y IgG con el fin de detectar el "clumping factor" y la protena A, que son caractersticas bioqumicas del S. aureus. Se ha observado, sin embargo, que algunas cepas de Staphylococcus aureus (esencialmente las resistentes a la meticilina) no se aglutinan con estas pruebas (15). Un estudio de estas cepas muestra que todas ellas poseen un polisacrido capsular (4). As, es probable que esta cpsula de polisacrido, que envuelve a toda la bacteria en determinadas condiciones (aislamiento en fresco, condiciones de cultivo, clones bacterianos), enmascare a la protena A y al factor de afinidad para el fibringeno y, de este modo, impida la aglutinacin de las partculas de ltex sensibilizadas nicamente con fibringeno e IgG.
3- PRINCIPIO
El reactivo PASTOREXTM STAPH PLUS se dise para permitir la deteccin simultnea de los tres componentes siguientes : 1) el factor de afinidad para el fibringeno, tambin conocido como coagulasa unida o "clumping factor"; 2) la protena A, que muestra afinidad por el fragmento cristalizable (Fc) de las gamaglobulinas (IgG) y
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3) los polisacridos capsulares de Staphylococcus aureus. El reactivo est compuesto por partculas de ltex sensibilizadas con fibringeno e IgG, as como con anticuerpos monoclonales especficos (patente del Instituto Pasteur) desarrollados contra los polisacridos capsulares de Staphylococcus aureus (1, 5, 6, 8, 10). La combinacin de fibringeno, IgG y anticuerpos monoclonales anticapsulares en el mismo reactivo permite detectar tanto a las cepas muy encapsuladas de Staphylococcus aureus como a las cepas poco encapsuladas de Staphylococcus aureus. En el caso de las cepas muy encapsuladas son los anticuerpos contra los polisacridos capsulares los que aglutinan a las bacterias. En el caso de las cepas que han perdido la cpsula de polisacridos, las bacterias se aglutinan por el fibringeno y la IgG. Se mezclan cultivos aislados de Staphylococcus aureus con el reactivo de ltex en un portaobjetos. Una vez que estn completamente mezclados, se observa el portaobjetos para detectar signos de aglutinacin, que indica la presencia de los microorganismos Staphylococcus aureus.
4- DESCRIPCIN
1) PASTOREXTM STAPH-PLUS, caja con 50 pruebas, cdigo 56356
Latex test: reactivo de prueba, 1 frasco cuentagotas con 1 ml de ltex rojo sensibilizado con fibringeno, IgG y anticuerpos monoclonales contra los polisacridos capsulares de Staphylococcus aureus.Contiene 0,02% de mertiolato de sodio y menos del 0,1% de azida sdica. Negative control: reactivo de control negativo, 1 frasco cuentagotas con 1 ml de ltex sensibilizado con una solucin de albmina de bovino. Contiene 0,02% de mertiolato de sodio y menos del 0,1% de azida sdica. 1 x 16 cartulinas de aglutinacin desechables. 1 x 150 bastoncillos.
5- CONSERVACIN
Una vez se ha abierto, todos los reactivos son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta, si se conservan a una temperatura de entre 2 y 8 C y en ausencia de contaminacin microbiana. Conservar el frasco que contiene el reactivo de ltex en posicin vertical. NO CONGELAR NUNCA EL REACTIVO DE LTEX.
7- PRECAUCIONES
El kit PASTOREXTM STAPH-PLUS est diseado nicamente para utilizarse en pruebas de confirmacin en cultivos y no debe utilizarse en muestras clnicas frescas. La calidad de los resultados depende del cumplimiento estricto de la buena prctica de laboratorio. Todos los reactivos y la muestra deben utilizarse a una temperatura de entre 18 y 30 C No tocar las superficies de reaccin de la cartulina con los dedos. Agitar los frascos de ltex antes de utilizarlos. Limpie la punta del frasco cuentagotas del reactivo a fin de obtener gotas bien calibradas. Mantenga la botella de reactivo en posicin vertical para depositar las gotas. Utilizar los bastoncillos de plastico del kit para mezclar el ltex y la suspensin de bacterias. No utilizar bastoncillos de madera. Cambie la varilla de mezclado para cada reaccin. Tirar todas las asas de cultivo desechables y las cartulinas de aglutinacin utilizadas en un recipiente autoclavable o desinfectante. No reutilizar las cartulinas de aglutinacin.
Los reactivos de ltex y los testigos contienen azida sdica como conservante. Se ha descrito que la azida sdica forma azidas de plomo o cobre en la fontanera de los laboratorios. Estas azidas son explosivas. Para evitar su formacin, debe hacerse pasar un gran volumen de agua por el desage si se desechan en la pila las soluciones que contienen azida despus de la inactivacin. Evitar el contacto con los ojos, la piel y las mucosas.
8- PROCEDIMIENTO
1) PREPARACIN DE LAS MUESTRAS
Las muestras utilizadas con este kit deben ser puras y frescas. Se recomiendan los siguientes medios de aislamiento o equivalentes : Medios de gelosa - Gelosa tripto-casena-soja - Gelosa Columbia + sangre de cordero - Gelosa Columbia - Gelosa con sangre - Medio Chapmann - Medio Baird-Parker con aditivos Realizar una tincin de Gram y pruebas de catalasa con los microorganismos cultivados. Las colonias en las que se utilice el reactivo PASTOREXTM STAPH-PLUS deben ser cocos Gram positivos, positivos para catalasa.
2) AGLUTINACIN REACCIN
Homogeneizar completamente el reactivo de ltex por agitacin. Mezclar con un "Vortex" si necesario. Depositar una gota del reactivo de ltex de prueba en uno de los crculos de la cartulina de aglutinacin. Depositar una gota de reactivo de ltex de control negativo en otro crculo. Con un asa de cultivo o un bastoncillo de plastico, tomar 1 a 3 colonias de cocos Gram positivos, positivos para catalasa y emulsionarlas en una gota de ltex durante 10 segundos. Repetir el paso 4 con el ltex de control negativo.
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Homogeneizar girando lentamente la cartulina. La lectura debe hacerse durante los 30 segundos que siguen el principio de los movimientos de la cartulina. Evaluar los resultados de acuerdo con los siguientes criterios y desechar la cartulina en un recipiente desinfectante. No reutilizarla.
Reaccin negativa
En el caso de una reaccin negativa, no se producirn agregados y la suspensin conservar un aspecto lechoso.
Resultados no interpretables
La aglutinacin de la suspensin con el reactivo de control negativo constituye un resultado no interpretable. En caso de que esto suceda, la identificacin deber realizarse por otro mtodo, como las pruebas para detectar la presencia de coagulasa libre o de DNAsa termoestable.
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12- RENDIMIENTO
El rendimiento de PASTOREXTM STAPH-PLUS se ha evaluado en varios laboratorios distintos (2, 13, 14). Se analiz un total de 440 cepas de S. aureus y 138 cepas de estafilococos distintas de S. aureus con el kit. La identificacin de los cultivos se llev a cabo con la tincin de Gram, determinando la actividad de catalasa y con la prueba del tubo de coagulasa. Las muestras discrepantes se analizaron posteriormente por medio de un anlisis bioqumico y con una prueba alternativa rpida comercializada. Las cepas de S. aureus se analizaron tambin para determinar su sensibilidad a la meticilina. Los resultados de las pruebas de sensibilidad realizadas con S. aureus resistentes (MRSA) y sensibles (MSSA) a la meticilina, y los resultados totales obtenidos con todos los Staphylococcus aureus se muestran en la tabla 1. Los resultados de las pruebas de especificidad realizadas con cepas de estafilococos distintas de S. aureus se muestran en la tabla 2.
Otros estafilococos Tabla 2 Rendimiento de PASTOREXTM STAPH-PLUS con otras cepas de estafilococos
Total Otras cepas de estafilococos 138 Positivos 1 Negativos 137 Especificidad relativa 99,3%
Se analizaron tambin 138 cultivos aislados de estafilococos distintos de S. aureus , como S. epidermidis, S. haemolyticus, S. hominis, S. saprophyticus, S. schleiferi, S. lugdunensis y otras especies, con el kit PASTOREXTM STAPH-PLUS. Se obtuvieron resultados negativos con 137 de los 138 cultivos, como se indica en la tabla 2. El resultado discrepante se identificaron como S. lugdunensis y tambin resultaron positivo con una prueba alternativa rpida.
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11. Kloos W.E. and Lambe D.W. (1991). Staphylococcus Manual of Clinical Microbiology, 5th Ed. Edited by Balows A., Hausler W.J., Herrmann K.L., Isenberg H.D., and Shadomy J.J. American Society for Microbiology, Washington, D.C., Pages 222-237. 12. Kloos W.E., and Scleifer K.H. Staphylococcus Bergeys manual of systematic bacteriology. 1986, vol. 2, 1013-1035. 13. Luijendijk AD., Alex van Belkum, Verbrugh H., and Kluytmans J. Comparison of Five Tests for Identification of Staphylococcus aureus from Clinical Samples. J. Clin. Microbiol., 1996, 34:2267-2269. 14. Neher C., Allerberger F., Prodinger W. Dierich M.P., Evaluation of commercially available agglutination tests for methicillin-resistant. 8th ECCMID Congress, Lausanne, 1997. 15. Ruane P.J., Morgan M.A., Citron D.M., and Mulligan M.E. Failure of rapid agglutination methods to detect oxacillin-resistant Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol. 1986. 24:490-492. 16. Selepack S.T., and Witebsky F.G. Inoculum size and lot-to-lot variation as significant variables in the tube coagulase test for Staphylococcus aureus. J. Clin. Microbiol., 1985, 22:835-837. 17. Kronvall G.. A Surface Component in Group A, C, and G Streptococci with Non-Immune Reactivity for Immunoglobulin G. J. Immunology., 1973, vol.11, 1401-1406.
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