Documente Academic
Documente Profesional
Documente Cultură
SUPERIOR DE MISANTLA
Manual de Prácticas
1
Introducción.
Cultivo in vitro
Un dato para dar una idea comercial es que en España había en 1.990 28 laboratorios
dedicados a la producción de plantas por cultivo in vitro como negocio.
El cultivo in vitro consiste en tomar un trocito de hoja, un embrión, una porción pequeñita de
tallo (de 0,2 a 1 milímetro) o cualquier otra parte de una planta y ponerla a cultivar en un tubo
de ensayo sobre un medio acuoso nutritivo.
El cultivo in vitro es muy caro, entre otras cosas porque no se puede mecanizar. Sólo son
rentables aquellos laboratorios muy grandes y con mucho mercado.
• - Organogénesis de callos
2
• Cultivo de meristemos
• Permite hacer germinar semillas que son muy difícil de hacer en condiciones normales.
Ejemplo: algunas Orquídeas tienen en los campos unos parásitos obligados y en
viveros no se pueden reproducir; se inoculan esos parásitos o in vitro.
• Aplicación en mejora genética para obtener híbridos, para introducir material genético,
etc.
• Acortar los ciclos de mejora genética. No hay que esperar que pase el periodo juvenil
del árbol para ver resultados.
• Ventajas:
- Autoclave
- Cámara de flujo laminar
- Medio de cultivo
- Planta
- Cámara de cultivo
- Autoclave
Es donde se "esteriliza" todo lo que vamos a utilizar: agua, algunos nutrientes, material, etc. No
se pueden meter proteinas. Es como una olla a presión, pero de mayor tamaño, donde se
controla la presión y la temperatura (hasta 120º).
3
Es donde se realizan todas las manipulaciones con la planta. Es un habitáculo con un operario
en un ambiente estéril. Se usan rayos ultravioletas para esterilizar el aire.
- Medio de cultivo
Agua y nutrientes (hormonas) en un tubo de ensayo, que se tapa con un tapón. Dependiendo
del material que se va a propagar, el tubo se pone vertical o un poco inclinado.
- Planta
El material vegetal de partida puede ser del campo, pero esto conlleva un alto riesgo de
enfermedades y contaminación, aunque se lave mucho y bien. Lo más corriente es utilizar
brotes que crecen en condiciones controlada para que halla menos infecciones.
- Cámara de cultivo
4
La cámara de cultivo es una habitación de dimensiones muy variables, en la que se controlan
las condiciones de luz, temperatura, humedad, variación día-noche, etc..
• El vidrio ha de ser de muy buena calidad para que no suministre al medio sustancias
contaminantes para la planta. Normalmente se prepara el medio y se filtra
directamente. El problema es que se absorben en el filtro determinadas sustancias.
• El medio de cultivo realmente sólo tiene que llevar agua, fuente de energía (azúcares)
y reguladores de crecimiento.
Subcultivos o replicado
Cuando sembramos microestaquillas en cultivo in vitro, no nos interesa que se emitan raíces ni
hojas, sino que se produzca una proliferación (crecimiento) para obtener nuevas
microestaquillas. Son lo que se denominan subcultivos.
No se pueden hacer infinitamente ya que se agota el material vegetal; tan sólo se hace 8-10
veces.
5
Fases del cultivo de meristemos
Micropropagación
Entre la fase de proliferación y de enraizamiento hay muchos subcultivos (para obtener más
plantas).
Se parte de un trozo de hoja o de tallo; bien de una planta madre de maceta o de una planta
que viene de cultivo in vitro.
6
El medio puede ser sólido o líquido.
Se forma entonces una estructura de callo, de la que parten brotes, o también proembriones,
que al unirse forman una estructura similar al embrión.
De una yema de flor se coge una antera antes de que se abra y se hace un cultivo; bien por
embriogénesis u organogénesis.
• Organogénesis: se forma una estructura de callo que puede venir o bien de tejidos de
la antera (diploide), o bien del grano de polen (haploide).
* Contaminación: es grave.
* Vitrificación: es una reacción de las plantas que las hace adquirir apariencia de vidrio. La
única solución es hacer un subcultivo de material sano, es decir, se saca y se cortan los
trocitos que estén bien.
7
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
1 Identificación de las partes de la planta
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 2
Objetivo:
Identificación de las partes de la planta que se utilizaran para realizar las técnicas de
cultivos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Estuche de disección.
1 Mesa de laboratorio.
1 Hipoclorito de sodio al 5,3,1 %v/v.
1 Solución de jabón al 1%.
1 Cepillo o esponja suave
1 Microscopio.
Procedimiento:
1.- Tomar la planta tratada con el fungicida durante dos a tres semanas anteriores en el
invernadero.
2.- Lavar las plantas con la solución jabonosa.
3.- Limpiar el jabón con agua destilada haciendo varios lavados hasta quitar el exceso de jabón.
4.- Dejar reposar ahora los explantes en una solución de hipoclorito de sodio al 5 % y hacer los
enjuagues pertinentes.
5.- Hacer los cortes a la planta y revisar las partes en el microscopio y anotar tus observaciones.
7.- Colocar los explanes identificados dentro de un tubo con agua destilada estéril.
8.- Dejar reposar los tubos en presencia de luz para observar comportamiento durante tres días.
Nota: en caso de presentar contaminación en la siembra; desechar los tubos con los ex plantes y
volver a tratar con diferentes concentraciones de las soluciones para desinfección.
Buscar otras técnicas en publicaciones con otros métodos de desinfección de la planta. Ya que
recuerda que cada planta tiene su propia colonización de microorganismos.
Introducción.
Marco Teórico.
Desarrollo de la Práctica.
Resultados.
Conclusiones y recomendaciones.
Bibliografía.
Anexos.
R00/02/08 F-SA-67
8
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
1 Identificación de las partes de la planta
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 2
R00/02/08 F-SA-67
9
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
2 Preparación de las partes de la planta
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 2
Objetivo:
Preparación de las partes de la planta que se utilizaran para realizar las técnicas de
cultivos vegetales. (limpieza de la planta).
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Estuche de disección.
1 Mesa de laboratorio.
1 Hipoclorito de sodio 5, 3, 1 %.
1 Solución de jabón 10%.
1 Cepillo o esponja suave
1 Microscopio.
Procedimiento:
1.- Tomar la planta tratada con el fungicida durante dos a tres semanas anteriores.
2.- Lavar las plantas con la solución jabonosa.
3.- Limpiar el jabón con agua destilada haciendo varios lavados hasta quitar el exceso de jabón.
4.- Deje reposar ahora los explanes en una solución de hipoclorito de sodio al 5 %v/v. y hacer los
enjuagues pertinentes.
5.- Rociar sobre la planta una solución de fenol al 1% para eliminar hongos y deje reposar por un
periodo corto este puede variar de 2 a 10 min. Y enjuague la planta con varios lavados de agua
destilada.
6.- Hacer los cortes a la planta y revisar las partes en el microscopio y anotar tus observaciones.
7.- Colocar los explanes identificados dentro de un tubo con agua destilada estéril.
8.- Dejar reposar los tubos en presencia de luz para observar comportamiento durante tres días.
Nota: En caso de presentar contaminación en la siembra; desechar los tubos con los ex plantes y
volver a tratar con diferentes concentraciones de las soluciones para desinfección.
Buscar otras técnicas en publicaciones con otros métodos de desinfección de la planta. Ya que
recuerda que cada planta tiene su propia colonización de m.o.
R00/02/08 F-SA-67
10
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
2 Preparación de las partes de la planta
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 2
Los antibióticos más utilizados están en el cuadro 1.1 en la siguiente pagina. Cabe
mencionar que probablemente no se cuenten con estos en el laboratorio. Pero se podrían
conseguir en una farmacia o droguería.
Introducción.
Marco Teórico.
Desarrollo de la Práctica.
Resultados.
Conclusiones y recomendaciones.
Bibliografía.
Anexos.
R00/02/08 F-SA-67
11
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
3 Medios de cultivo MS o WPM para cultivo de tejidos vegetales
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 1
Objetivo:
Preparar los medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Matraz de laboratorio
1 Mesa de laboratorio.
1 Medio MS y sales minerales.
1 Autoclave.
1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante.
1 Estuche de disección.
Procedimiento:
1.- Tomar el frasco del medio MS y leer las indicaciones para preparar 500 ml.
2. Disolver los macronutrientes en 100 ml de agua destilada estéril. (Esto puede requerir dos o tres
gotas de HCl 5M.para mejorar o facilitar su dilución)
3. Añadir soluciones madre de nutrientes inorgánicos según indique la formula.
4. Añadir sólidos orgánicos y llevar a 500 ml. con agua destilada.
5.- Agitar para disolver aunado a ello adicione la cantidad de sacarosa aproximadamente 30 g/l.
6. Añadir la solución madre de vitaminas, a continuación, agregue las cantidades de las sustancias
de crecimiento (Hormonas).
Nota: Algunas hormonas no son Autoclave-hables, antes de adicionar las hormonas al medio de
cultivo verificar si estas pueden o no meterse a la autoclave.
7. Ajustar la mezcla a un pH de 6,5 (± 0,3).
8. Añadir de 7.5 a 9 g Agar.
9. Mezclar la solución y hierba hasta que se disuelva el agar.
El contenedor debe ser sellado con papel de aluminio para reducir la evaporación.
10. Añadir vidrio para hacer agua destilada hasta 1 litro.
11. Meter el medio preparado al Autoclave a 15 p.s.i. exactamente 15 minutos.
12. Vuelva el pH. Debe estar en el rango de pH 5,5-6,3.
13.- Esterilizar el material suficiente para hacer la siembra en frascos.
14- Una vez esterilizado el material y el medio en los frascos realizar el
Notas:
El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º
Guardar el medio asépticamente según sea necesario en contenedores estériles.
R00/02/08 F-SA-67
12
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
4 Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 5
Objetivo:
Preparar los medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Matraz de laboratorio
1 Mesa de laboratorio.
1 Medio MS y sales minerales.
1 Autoclave.
1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante.
1 Estuche de disección.
Procedimiento:
1.- Tomar el frasco del medio MS y leer las indicaciones para preparar 500 ml.
2. Disolver los micronutrientes en 100 ml de agua destilada estéril. (Esto puede requerir dos o tres
gotas de HCl 5M.)
3. Añadir soluciones madre de nutrientes inorgánicos.
4. Añadir sólidos orgánicos y llevar a 500 ml con agua destilada.
5.- Agitar para disolver.
6. Añadir la solución madre de vitaminas, a continuación, agregue las cantidades de las sustancias
de crecimiento (Hormonas).
Nota: Algunas hormonas no son Autoclave-hables.
7. Ajustar la mezcla a un pH de 6,5 (± 0,3).
8. Añadir 7,5-9 g de Agar.
9. Revuelva la mezcla hierba y se disuelva el agar.
El contenedor debe ser sellado con papel de aluminio para reducir la evaporación.
10. Añadir vidrio para hacer agua destilada hasta 1 litro.
11. meter el medio al Autoclave a 15 p.s.i. exactamente 15 minutos.
12. Vuelva el pH. debe estar en el rango de pH 5,5-6,3 ..
13.- Esterilizar el material suficiente para hacer la siembra en frascos.
14- Una vez esterilizado el material y el medio en los frascos realizar la siembra de explantes.
Notas:
El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º
Dispensar el medio asépticamente según sea necesario en contenedores esteriles.
R00/02/08 F-SA-67
13
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
5 Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 5
Preparación de soluciones:
Solución Stock A:
1.- Pesar las siguientes cantidades:
R00/02/08 F-SA-67
14
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
5 Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 3 de 5
2.- Disolver en 200 ml de agua destilada
3.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente en 400 CC.
4. Pesar 5 mg de los reactivos siguientes: CuSO4.5H2O O CoCL2.6H2
5.- Disolver en 10 ml de agua destilada. A 1 ml de la solución anterior y añadir 200 ml de agua.
6.- Guardar la solución en un frasco rotulado convenientemente a 400.
Solucion Stock C:
1. Pesar 0,75 g de Na2EDTA.
2.- Disolver en caliente en 20 ml de agua destilada. Deje enfriar la solución.
3.-Pese 0,55 g de FeSO4.7H2O y disuelva en 20 ml de agua destilada
3. Mezclar las dos soluciones y llenar hasta 100 ml por adición de agua destilada Guarde la
solución en un lugar oscuro, convenientemente etiquetados vial a 4 ° C.
MS BASAL SOLUTION*
Para 1 litro de medio basal de mezclar:
R00/02/08 F-SA-67
15
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
5 Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 4 de 5
Nota: Utilizar 5 MI / I
* Esta solución antes se llamaba de DPM
El ácido giberélico puede ser esterilizados junto con el medio de cultivo: sin embargo, la pérdida de
alguna actividad también es posible.
BENCYLAMINOPURINE (BAP]
La solución madre de BAP: 1.000 ppm
1. Pesar 0. 2 g BAP y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N.
2.- Añadir 200 ml de agua destilada.
3. Guardar en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C.
Nota: La esterilización de BAP puede hacerse junto con el medio de cultivo, sin embargo, la
pérdida de alguna actividad es también posible.
Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de BAP
R00/02/08 F-SA-67
16
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
5 Medios de cultivo a utilizar en cultivo de tejidos vegetales
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 5 de 5
KINETINE (KIN)
La solución madre de KIN: 1.000 ppm
1. Pesar 0,2 g KIN y disolver bien con algunas gotas de NaOH 1N.
2.-Añadir 200 ml de agua destilada.
3. Guardar en un frasco rotulado convenientemente a los 0 ° C.
Nota:KIN pueden ser esterilizados junto con el medio de cultivo, sin embargo, la pérdida de su
actividad es también posible.
Un ml de la solución madre (1000 ppm) contiene 1 mg de KIN.
2, 4-D
La solución madre de 2,4-D: 1.000 ppm
1. Pesar 0,2 g de 2,4-D y disolver bien con algunas gotas de alcohol.
2.- Añadir 200 ml de agua destilada.
3.- Mantenga en un vial convenientemente etiquetados a 0 ° C.
Nota: 2,4-0 pueden ser esterilizados junto con el medio de cultivo, sin embargo, una pérdida de su
actividad es también posible.
Un ml de la solución madre (1 000 ppm) contiene 1 mg de 2,4-0.
R00/02/08 F-SA-67
17
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
6 Medios de cultivo para plantas.
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 5
Objetivo:
Preparar los medios de cultivo para plantas en cultivo de tejidos vegetales.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Matraz de laboratorio
1 Mesa de laboratorio.
1 Medio MS y sales minerales.
1 Autoclave.
1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante.
1 Estuche de disección.
Procedimiento:
Parte 1 Preparar el medio:
• 1 sobre de Murashige y Skoog basal con un mínimo de sales orgánicas medio (MS). Si desea
hacer su propio medio de cultivo, el uso dado a la receta el final de esta hoja de trabajo.
• 1 L de agua destilada
• 6 g de agar
• 1,5 L o 2 L recipiente para preparar el medio de cultivo.
• Tubos de policarbonato con tapas de rosca o en su defecto frascos de Gerber.
Su material vegetal debe ser esterilizado para eliminar cualquier bacteria o esporas de hongos.
El proceso de esterilización se hace para matar a todos los microorganismos, pero que no afectará
negativamente a la materia vegetal.
Nota: En caso de que la planta ya haya sido tratada asépticamente antes, omita el paso 2.
R00/02/08 F-SA-67
18
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
6 Medios de cultivo para plantas leñosas
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 5
2. Lavar el material vegetal en detergente mezclado con agua durante unos 20 minutos.
Nota: Si en material vegetal es peludo, como tallos de plantas de matorral, con un cepillo suave
limpie para ayudar a eliminar los hongos etc detergente ayudará a humedecer el material y
eliminar las burbujas de aire que pueden ser atrapados entre los diminutos pelos de una planta.
Nota: Las raíces pueden aparecer dentro de 6 semanas en la coliflor. Rosas y otras plantas pueden
haber crecido con éxito utilizando técnicas de cultivo de tejidos. Sin embargo, una vez que los
brotes han desarrollados tendrán que ser colocados en la base del brote en una solución con
hormonas para estimular el crecimiento y el desarrollo de la raíz.
R00/02/08 F-SA-67
19
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
6 Medios de cultivo para plantas leñosas
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 3 de 5
R00/02/08 F-SA-67
20
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
6 Medios de cultivo para plantas leñosas
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 4 de 5
Nota:
El medio es estable durante varias semanas en el refrigerador a bajas temperaturas 2-5º
Mantener el medio asépticamente según sea necesario en contenedores esteriles.
R00/02/08 F-SA-67
21
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
6 Medios de cultivo para plantas leñosas
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 5 de 5
Lloyd and McCown (WPM)
Inorganic Salt Formulation
Sucrose 20g/l
a= Originally printed as Na2EDTA
b= Originally printed as 37.3 mg/l anhydrous form
c= Originally printed as MnSO4*H2O
Lloyd, G. and McCown,B. 1980 Combined Proceedings of the International Plant Propagators Society.
30:421-427.
Owen H.R. and Miller A.R. 1992. An examination and correction of plant tissue culture basal medium
formulations.
Plant Cell, Tissue and Organ Culture 28: 147-150.
Media Recipe Database | Plant Tissue Culture Network | Media Information Page
Reporte de práctica: Selecciones la(s) opciones a solicitar
Introducción.
Marco Teórico.
Desarrollo de la Práctica.
Resultados.
Conclusiones y recomendaciones.
Bibliografía.
R00/02/08 F-SA-67
22
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
7 Micro propagación de plantas
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 2
Objetivo:
Micro propagación de plantas in vitro
Micropropagación
Plántulas in vitro, que son libres de patógenos, se utilizan como material inicial para la patata y
programas de semillas de camote. Los métodos utilizados en estos programas, principalmente
micropropagación dependerá de su volumen de producción y la infraestructura disponible. En el
caso de la patata micropropagación, los métodos han sido ya descritos (Dodds, 1985; Espinoza et
al. 1992). Que se han verificado en muchas instituciones y que se basan en el rápido crecimiento
de cada nodo de recortes, con múltiples tallos o esquejes de nodo. Después, la base
se describen los métodos de micropropagación.
Nodo A. micropropagación
Este método se basa en el principio de que el nodo de una in vitro de plántulas en un
medio de cultivo induce el desarrollo de las yemas axilares, lo que resulta en un nuevo in vitro de
plántulas.
Este tipo de propagación promueve el desarrollo de una preexistente estructura morfológica.
La condición nutricional y hormonal del medio rompe la latencia de las yemas axilares
y promueve su desarrollo rápido (Lizárraga et al. 1989).
Formación de callo y regeneración de plantas se debe evitar porque tienden a afectar a la genética
estabilidad del genotipo.
En virtud de la sala de condiciones controladas micropropagación es rápida. Cada nodo plantado
en una propagación producirá un medio de plántulas que ocupará toda la longitud del tubo de
ensayo, después de aproximadamente cuatro semanas para la patata, y de seis semanas de
camote. El resultado in vitro plántulas pueden ser trasplantadas a condiciones in vitro en pequeñas
macetas en el invernadero.
B. Micropropagación por esquejes de nodo en un medio líquido
Esta técnica se aplica tanto con la papa y el camote para producir un gran número de nodos
rápidamente. Tallo con 5 a 8 nodos son preparados por la eliminación de ambos y el ápice de la
raíz in vitro de plantas para ser reproducido. Los tallos son colocados en los correspondientes
propagación líquido medio (Espinoza et al., 1992: Lizárraga et al. 1989). También es posible utilizar
los ganglios aislados: los nodos y las nuevas plántulas germinadas se desarrollarán durante un
período de 3 a 4 semanas.
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Matraz de laboratorio
1 Mesa de laboratorio.
1 Medio MS y sales minerales.
1 Autoclave.
1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante.
1 Estuche de disección.
R00/02/08 F-SA-67
23
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
7 Micro propagación de plantas
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 2
Procedimiento:
1. Esterilizar placas de Petri (colocados en bolsas de papel) y preparar la cámara de flujo laminar
por la desinfección de las superficies internas con el alcohol.
2.- Esterilizar los instrumentos con un instrumento esterilizador y colóquelos en un recipiente
estéril.
3. Abrir el tubo, quitar la de plántulas y colóquelo sobre una placa de Petri con la ayuda de fórceps.
4. Quitar las hojas y cortar los nudos.
5. Abrir un tubo estéril que contiene frescos de mediano y lugar dentro de un nodo, tratando de
hundir ligeramente en el medio con el botón arriba.
Cerrar el tubo.
6. Sellar el tubo con un gas permeable cinta de plástico (o parafilm Saram recapitulación) y
etiquetar correctamente.
Nota:
Se recomienda colocar dos explantes en 16 x 125 mm tubos, tres en 18 x 150 mm tubos, cinco
en 25 x 150 mm tubos, magenta y 20-30 en los buques.
R00/02/08 F-SA-67
24
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
8 Método para aislar protoplastos
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 1 de 3
Objetivo: Utilizar un método para aislar un gran número de metabólicamente competente de
protoplastos hojas de monocotiledóneas (gramíneas), dicotiledóneas (como la espinaca y la
girasol), o de hipocotilo tejido (por ejemplo, Brassica napus).
Material y equipo:
Descripción
Cantidad
1 Matraz de laboratorio
1 Mesa de laboratorio.
1 Medio MS y sales minerales.
1 Autoclave.
1 Frascos estériles y/o tubos donde se sembrara el explante.
1 Estuche de disección.
Procedimiento:
1. Corte rodajas de hojas de monocotiledóneas y dicotiledóneas con las hojas de corte o con una
cuchilla afilada en segmentos 0,5-1 mm de tamaño. En el caso de las dicotiledóneas, la epidermis
se puede raspar fuera antes de cortar por el roce con una multa carborúndum polvo o con un pincel
fino de nylon.
2. Suspender en 50 mL de sulucion de digestión (de 10-15 g de tejido vegetal), de acuerdo
a la receta de solución A.
3. Incubar la hoja rodajas o en trozos de 19 cm de diámetro que contiene el plato digestión medio
durante 3 horas a 25 ° C, cubierta con una película plástica. Es posible ser ventajoso para sustituir
a la digestión medio a intervalos de 1 hora, como las enzimas pueden ser inactivadas por
sustancias liberadas de roto células.
4. Después de la terminación de la digestión de incubación medio es cuidadosamente se extrae y
se desecha. Por lo general, contiene muy pocos protoplastos. El tejido de la planta se lavan 3
veces agitando suavemente con 20 ml de lavado medio (Solución B).
5. Después de cada lavado, el tejido es recogida por colada a través de un colador de té (0,5-a 1-
mm de tamaño de poro) y la combinación de lavados luego se filtra a través de malla de nylon
(100-200 mm de tamaño de poro) para eliminar tejido vascular y sin digerir el material.
6. Los protoplastos son recogidos por centrifugación durante 3 minutos a 500-1000 rpm y el
sobrenadante es aspirado y puede desecharse.
7. Este crudo protoplasto preparación también contiene algunas células y cloroplastos y es
importante purificar la protoplastos para eliminar estos contaminantes. Esto puede hacerse con
soluciones de sacarosa y sorbitol de diferentes densidades.
8. El protoplasto es suavemente precipitado resuspendido en 40 ml de solución C, y esta
suspensión se divide entre los dos 100-ml tubos de centrífuga.
9. Para cada tubo, agregue lentamente 5 ml de solución D y, a continuación, esta superposición
con 5 ml de medio de lavado (Solución B) para hacer un 3-paso gradiente.
10. Centrifugar a 3000 rpm durante 5 minutos.
11. Los protoplastos ahora recoger como una banda en la interfaz entre el 2 arriba capas. Retirar
cuidadosamente con una pipeta Pasteur.
12. Losl protoplastos deben ser examinados con un microscopio de luz para asegurar que la
reparación es libre de células y cloroplastos.
13. Cuando una gran parte de protoplastos este en este sacarosa / sorbitol gradiente, la densidad
R00/02/08 F-SA-67
25
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
8 Método para aislar Protoplastos
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 2 de 3
de las 2 capas se puede aumentar mediante la adición de 5% -10% Dextrano (15000-20000
Señor) o el 10% -20% Ficoll para aumentar el porcentaje de protoplastos flotante.
14. Los Protoplastos purificados puede ser concentrarse al diluir con 10 mL de Solución B, y
centrifugar a 1000 rpm por 3 minutos y luego la resuspenda el precipitado en una pequeña
cantidad de medio agitando suavemente los tubos.
15. Los protoplastos son estables durante un máximo de 24 horas cuando se almacena en hielo.
La actividad Fotosintética de los protoplastos puede ser determinada mediante la medición con un
electrodo de oxígeno, siempre revolviendo rápido se evita el daño a los protoplatos, ya que de no
hacerse asi se llega a romper algunos de los protoplastos. Un medio adecuado para aparece
como Solución E.
R00/02/08 F-SA-67
26
INSTITUTO TECNOLÓGICO
SUPERIOR DE MISANTLA
Nombre de la Asignatura:
Técnicas de cultivos Vegetales
No. de Práctica: Nombre de la Práctica:
8 Método para aislar protoplastos
Carrera: Ingeniería Bioquímica Hoja: 3 de 3
R00/02/08 F-SA-67
27
Bibliografía
Alan Doyle & J. Bryan Griffiths. p.(1998);Cell and tissue culture : laboratory procedures
in biotechnology I edited by cm. Includes bibliographical references and index.
ISBN 0-471-98255-5 (alk. paper) 1. Cell culture-Laboratory manuals. 2. Tissue
culture- Laboratory manuals. 1. Doyle, Alan. 11. Griffiths, J. B.
~P248,2S.C44C448 1998
Biotechnology Online School Resource (2008) For further information contact the Gene
Technology Information Service on freecall Australia-wide 1800 631 276.©
CSIRO 2008
Jeffrey W Pollard and John M Walker, 01990 by The Humana Press Methods in
Molecular B&gy, vol. 6, P/ml Cell and ksue Cullure Edited
Jennie P. Mather and Penelope E. Roberts. P(1998). Introduction to cell and tissue
culture : theory and technique / cm.¡ª (Introductory cell and molecular biology
techniques) Includes bibliographical references and index. ISBN 0-306-45859-4
Mineo, L. 1990. Plant tissue culture techniques. Pages 151-174, in Tested studies for
laboratoryteaching. Volume 11. (C. A. Goldman, Editor). Proceedings of the
Eleventh Workshop/Conference of the Association for Biology Laboratory
Education (ABLE), 195 pages.
Tonny Storr (2002); Plant Tissue Culture Sharnbrook upper School, Bedfor in
association with uniliver PLC, Colworth House, Bebfroshire.SCSST 1985.
28
Anexos:
29
1
Basal Medium
Basal Medium
w/ Vitamins
All components expressed in
Medium
mg/L
COMPONENT A267 B144 C206 C216 C212 C222 C287 C167 C416 D146
Aluminum Chloride•6H2O
Ammonium Nitrate 400 1650 400 825 1650 400
Ammonium Phosphate, Monobasic
Ammonium Sulfate 134 134 463 463
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 3.1 3 3 6.2 1.6 1.6 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 333 332.2 166.5 113.24 113.24 125.33 125.33 64.14
Calcium Nitrate 492.3 386.31
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.25
Na2EDTA•2H2O 74.5 74.5 37.26 37.26 37.3 37.25 37.25 37.3
Ferric Chloride
Ferric Sodium EDTA 36.7 18.35
Ferrous Sulfate•7H2O 55.7 55.7 27.8 27.8 27.8 27.85 27.85 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 181 180.7 90.5 122.09 122.09 180.6 90.37 90.37 180.7
Manganese Chloride•4H2O
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 8.45 10 10 0.845 3.3 3.3 22.3
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25
Molybdenum Trioxide
Nickel Chloride•6H2O 0.025
Nickel Sulfate•6H2O
Potassium Chloride
Potassium Iodide 0.3 0.83 0.415 0.75 0.75 0.8 0.8 0.83
Potassium Nitrate 480 1900 480 950 2500 2500 1900 2830 2830 340
Potassium Phosphate, Dibasic
Potassium Phosphate, Monobasic 170 85 170 400 400 170
Potassium Sulfate
Sodium Nitrate
Sodium Phosphate Monobasic 330.6 295 380 150 150
Sodium Sulfate
Zinc Nitrate•6H2O
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 4.3 2 2 8.6 1.5 1.5 8.6
Adenine Hemisulfate 80
Glycine (Free Base) 2
2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid 1
6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 10 1
Indole-3-acetic Acid 1
Kinetin 0.2
L(-)Malic Acid
myo-Inositol 100 100 50 100 100 10
Nicotinic Acid (Free Acid) 1 1 1 0.5
Pyridoxine•HCI 1 1 1 0.5
Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.2 10 10 1 1
Grams of powder to prepare 1 liter 1.89 4.71 2.12 2.20 3.21 3.21 4.49 3.99 3.98 1.64
pH±0.5 at RT 3.7 5.7 3.5 4.3 3.0 4.0 4.0 4.0 4.1 4.0
NS = No Specification Established rev 11/2005
31
3
32
4
Hoagland Modified
Medium w/ 30 g/L
(PRL-4-DM) Long
Gamborg Basal
Modified Basal
Modified Basal
Basal Medium
Basal Medium
Basal Medium
Gamborg B-5
Heller/ White
Salt Mixture
Salt Mixture
DKW Basal
DKW Basal
Gamborg
All components
Sucrose
Sucrose
Medium
Mixture
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT D190 D191 D189 G768 G398 G359 G371 H393 H396 H353 K413 K427
Aluminum Chloride•6H2O 0.0543 0.03
Ammonium Nitrate 1416 1416 1416 1000 600 600
Ammonium Phosphate, 115.03
Monobasic
Ammonium Sulfate 134 134 200
Boric Acid 4.8 4.8 4.8 3 3 3 0.3 1 1.24 2.86 3 3
Calcium Chloride, Anhydrous 112.5 112.5 112.5 113.24 113.24 113.24 56.7 453 453
Calcium Nitrate 1367 1367 1367 241.2 300 656.4
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.25 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.25 0.25 0.25 0.025 0.025 0.25 0.025 0.03 0.03 0.08 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 45.4 45.4 45.4 37.26 37.26 186.0 37.25 3.35 37.26 37.26
Ferric Chloride 1
Ferrous Sulfate•7H2O 33.8 33.8 33.8 27.8 27.8 139.0 27.85 25 2.5 27.85 27.85
Magnesium Sulfate, Anhydrous 361.49 361.49 361.49 122.09 122.09 122.09 17.099 122.1 351.63 240.76 146.55 146.55
Manganese Chloride•4H2O 1.81
Manganese Sulfate•H2O 33.5 33.5 33.5 10 10 132.0 1 0.0758 0.01 10 10
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.39 0.39 0.39 0.25 0.25 0.25 0.025 0.25 0.25
Molybdenum Trioxide 0.016
Nickel Chloride 0.03 0.03
Nickel Sulfate•6H2O 0.005 0.005 0.005
Potassium Chloride 300 65 750 65 300 300
Potassium Iodide 0.75 0.75 0.75 0.8 0.01 0.01 0.75 0.75
Potassium Nitrate 2500 2500 1000 1000 80 606.6 1900 1900
Potassium Phosphate, Monobasic 265 265 265 300 170 170
Potassium Sulfate 1559 1559 1559
Sodium Nitrate 600
Sodium Phosphate Monobasic 150 150 90.0 108.75 16.5
Sodium Sulfate 200
Zinc Nitrate•6H2O 17 17 17
Zinc Sulfate•7H2O 2 2 3 0.3 1 1 0.22 2 2
p-Aminobenzoic Acid 0.2 0.02
L-Arginine (Free Base) 40
L-Ascorbic Acid 0.4 2
Asparagine 40
D-Biotin 0.00025 0.2 0.01
D-Calcium Pantothenate 0.4 1
Choline Chloride 0.2 1
Citric Acid (Free Acid) Anhydrous 40
Cyancobalamin, Vit B12 0.02
Folic Acid 0.015 0.4
Fumaric Acid 40
L-Glutamine 60
Glycine (Free Base) 20 4
L(-)-Maleic Acid 40
L-Methionine 30.0
myo-Inositol 100 100 10 100
Nicotinamide 1
Nicotinic Acid (Free Acid) 1 0.5 0.1
L-Phenylalanine 20
Pyridoxine•HCI 1 0.5 0.1 1
Pyruvic Acid 20
Riboflavin 0.015 0.2
Sucrose 10,000 30,000
Thiamine•HCI 10 0.5 1 1
L-Tryptophan 40
Vitamin A 0.01
Vitamin D3 0.01
Grams of powder to prepare 1 liter 5.22 15.22 35.22 3.10 3.21 3.64 2.71 1.64 1.04 1.63 3.65 3.9
pH±0.5 at RT 4.3 4.0 4.1 4.0 33
4.0 NS 3.9 4.9 4.7 4.5 4.0 4.4
NS = No Specification Established
rev 11/2005
5
Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
L689 LINSMAIER & SKOOG BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium may be sold as Murashige & Skoog Medium with Minimal Organics Soluble In Water 10 L
(MSMO) by some media suppliers. 50 L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier &
Skoog (1965).
Plant Tissue Culture Tested
L477 LINSMAIER & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
pH Adjusted and Buffered Soluble In Water 10 L
This medium may be sold as Murashige & Skoog Medium with Minimal Organics 50 L
(MSMO) by some media suppliers.
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier &
Skoog (1965).
Plant Tissue Culture Tested
L467 LINSMAIER & SKOOG BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
w/ 30 g/L SUCROSE & 7 g/L AGAR Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier & 50 L
Skoog (1965).
Plant Tissue Culture Tested
L452 LINSMAIER & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
w/ 30 g/L SUCROSE & 7 g/L AGAR Soluble In Water 10 L
pH Adjusted and Buffered 50 L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Linsmaier &
Skoog (1965).
Plant Tissue Culture Tested
L154 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the WPM macro- and micronutrients as described by Lloyd & McCown Soluble In Water 10 L
(1981). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
L449 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the WPM macro- and micronutrients, and vitamins as described by Lloyd & Soluble In Water 10 L
McCown (1981). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
L444 LLOYD & McCOWN WOODY PLANT MICRONUTRIENT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the WPM micronutrients described by Lloyd & McCown (1981). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M419 MG BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Modified Murashige & Skoog/ Gamborg Basal Salt Mixture Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
MURASHIGE & SKOOG BASAL SALTS & MEDIA
See Murashige & Skoog-Based Basal Salts & Media Section (following this section)
N492 NB BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Modified Chu/ Gamborg Basal Medium Soluble In Water 10 L
Contains the macronutrients as described by Chu (1975) and the micronutrients as 50 L
described by Gamborg, et al. (1968).
Plant Tissue Culture Tested
N613 NITSCH & NITSCH BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Nitsch & Nitsch (1969). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
N616 NITSCH & NITSCH BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Nitsch & Nitsch Soluble In Water 10 L
(1969). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
N608 NITSCH & NITSCH VITAMIN POWDER (1000x)
See Vitamin Section (following the MS-based media section)
N603 NITSCH & NITSCH VITAMIN SOLUTION (1000x)
See Vitamin Section (following the MS-based media section)
34
6
(Modified MS/Gamborg
MG Basal Salt Mixture
NB Basal Medium
Basal Medium
(MSMO)
(MSMO)
All components
Medium
Medium
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT L689 L477 L467 L452 L154 L449 L444 M419 N492 N613 N616
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 400 400 720 720
Ammonium Sulfate 33.5 463
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 2.3 3 10 10
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 332.2 332.2 332.2 72.5 72.5 72.5 111.36 125.33 166 166
Calcium Nitrate 386 386
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.0125 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.25 0.25 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.3 37.3 37.3 18.64 37.26 37.26 37.26
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.85 27.85 27.85 13.9 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7 75.7 90.37 90.372 90.372
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 22.3 22.3 22.3 6.7 10 18.9 18.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.125 0.25 0.25 0.25
Potassium Hydroxide 100 100
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.4 0.75
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1100 2830 950 950
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 170 42.5 400 68 68
Potassium Sulfate 990 990
Sodium Nitrate 437.8
Sodium Phosphate Monobasic 32.6
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 2.7 2 10 10
Agar 7000 7000
D-Biotin 0.05
Folic Acid 0.5
Glycine (Free Base) 2 2
MES (Free Acid) 1000 1000
myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100
Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 1 5
Pyridoxine•HCI 0.5 1 0.5
Sucrose 30,000 30,000
Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.4 0.4 1 10 0.5
Grams of powder to prepare 1 liter 4.43 5.53 41.43 42.53 2.30 2.41 0.53 1.88 4.10 2.10 2.21
pH±0.5 at RT NS 6.2 NS NS NS NS 4.3 4.0 3.8 NS
NS = No Specification Established rev 11/2005
35
7
36
8
Parker-Thompson Basic C
Multiplication Basal
Basal Medium
Salt Mixture
All components
Medium
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT N479 P713 Q673 R756 R757 R758 S816 S811 S808 S806 S813
Ammonium Molybdate 0.037
Ammonium Nitrate 125 400 1650 1650 412.5
Ammonium Phosphate, 300 300 150 300 300
Monobasic
Boric Acid 10 1.86 6.2 6.2 6.2 1.55 5.0 5.0 2.5 5.0 5.0
Calcium Chloride, Anhydrous 19.628 333 333 83.25 151 151 75.5 151
Calcium Nitrate 347 833.77
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.006 0.1 0.1 0.05 0.1 0.1
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.37 0.025 0.025 0.025 0.006 0.2 0.2 0.1 0.2 0.2
Na2EDTA•2H2O 37.3 37.3 20 20 10 20 20
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 9.175
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 15 15 7.5 15 15
Magnesium Sulfate, Anhydrous 61 58.565 175.79 181 181 45.25 195.4 195.4 97.7 195.4 195.4
Manganese Sulfate•H2O 18.95 0.25 0.76 16.9 16.9 4.225 10 10 5 10 10
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.063 0.1 0.1 0.05 0.1 0.1
Potassium Iodide 0.08 0.83 0.83 0.208 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0
Potassium Nitrate 125 1800 1900 1900 475 2500 2500 1250 2500 2500
Potassium Phosphate, Monobasic 125 500 270 170 170 42.5
Zinc Sulfate•7H2O 10 0.52 8.6 8.6 8.6 2.15 1.0 1.0 0.5 1.0 1.0
L-Ascorbic Acid 50 50
6-Benzylaminopurine (BA) 2.0 3.0
D-Biotin 0.05
Citric Acid (Free Acid) Anhydrous 50 50
Folic Acid 0.5
L-Glutamine 800
Glutathion 30
Glycine (Free Base) 2.0 2.0 2.0 2.0
Indole-3-acetic Acid 0.30 0.30
myo-Inositol 100 100 100 100 500 1000
α-Naphthaleneacetic Acid 0.03
Nicotinic Acid (Free Acid) 5.0 0.5 0.5 0.5 2.5 5.0
Pyridoxine•HCI 0.5 0.5 0.5 0.5 0.25 0.5
L-Serine 100
Sucrose 10000 10000 10000
Thiamine•HCI 0.5 0.4 0.4 0.4 2.5 5.0
Grams of powder to prepare 1 liter 1.93 0.77 3.56 4.51 4.51 1.18 3.20 13.20 12.10 3.05 14.21
pH±0.5 at RT 4.5 3.8 3.9 3.5 3.5 5.0 4.2 4.3 4.5 4.3 4.3
NS = No Specification Established
rev 11/2005
37
9
Murashige & Skoog Basal Salts and Media following this section.
38
10
Medium
Medium
All components expressed
in mg/L
COMPONENT T853 T868 T856 T864 T867 T861 W863 W865 W898
Ammonium Nitrate 320 320 1650 1650 1650 1650 700
Ammonium Phosphate, Monobasic 230 230
Ammonium Sulfate 130 130
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 31.0 31.0 1.5
Calcium Chloride, Anhydrous 113.25 113.25 333 333 333 333 452.88 452.88
Calcium Nitrate 208.5
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.25 0.25 0.001
Na2EDTA•2H2O 18.65 18.65
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7 36.7 36.71
Ferric Sulfate 2.5
Ferrous Sulfate 13.9 13.9
Magnesium Sulfate, Anhydrous 122.12 122.12 181 181 181 181 903.79 903.79 351.62
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 15.16 15.16 5.31
Molybdenum Trioxide 0.001
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Chloride 656.79 718.67 65.0
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.75
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 910.06 1084.06 80.0
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 270 270
Sodium Phosphate Monobasic 16.5
Sodium Sulfate 200
Zinc Sulfate•7H2O 9.2 9.2 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 3.0
D-Biotin 0.05
Casein, Enzymatic Hydrolysate 1000 1000 1000 1000
Folic Acid 0.5
Glycine (Free Base) 2.5 2.0 2.0 2.0 2.0
Indole-3-acetic Acid 2.0 0.03 3.0
Kinetin 0.2 1.0 1.0
myo-Inositol 100 100 100 100 100 1000 1000
Nicotinic Acid (Free Acid) 5.0 0.5 0.5 0.5 0.5
Pyridoxine•HCI 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
Thiamine•HCI 0.5 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
Grams of powder to prepare 1 liter 2.88 2.99 5.41 5.41 5.41 5.41 5.22 0.934
pH±0.5 at RT NS NS 5.5 4.3 NS 5.0 NS NS 4.7
NS = No Specification Established rev 11/2005
39
11
Murashige & Skoog-Based Basal Salts
Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
M524 MURASHIGE & SKOOG BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
See Product No. M519 for Murashige & Skoog Basal Medium w/ Vitamins
M499 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNa–EDTA Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M502 MURASHIGE & SKOOG MACRONUTRIENT SALT BASE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M654 MURASHIGE & SKOOG MACRONUTRIENT STOCK SOLUTION (10x) Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M554 MURASHIGE & SKOOG MICRONUTRIENT SALT BASE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M529 MURASHIGE & SKOOG MICRONUTRIENT STOCK SOLUTION (10x) Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M153 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains 1⁄2x macro- and 1⁄2x micronutrients as described by Murashige & Skoog Soluble In Water 10 L
(1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M561 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains 1⁄2x Ammonium Nitrate and 1⁄2x Potassium Nitrate, with the remaining macro- Soluble In Water 10 L
and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M290 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Contains 1⁄2x Ammonium Nitrate, 1⁄2x Potassium Nitrate, and 1⁄2x Calcium Chloride, with Soluble In Water 10 L
the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M571 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Without Ammonium Nitrate. Contains the remaining macro- and micronutrients as Soluble In Water 10 L
described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M531 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Without Nitrogen. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige Soluble In Water 10 L
& Skoog (1962), modified by eliminating NH4NO3 and KNO3. 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M407 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL SALT MIXTURE Storage Temp 2-6° C 1L
Without Nitrogen, Phosphorous, and Potassium Soluble In Water 10 L
Contains the remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog 50 L
(1962).
Plant Tissue Culture Tested
40
12
MS Macronutrient Stock
MS Modified Basal Salt
MS Micronutrient Stock
Mixture (No N, P, or K)
Mixture w/ FeNaEDTA
Solution (10x)
Solution (10x)
All components
Mixture
Mixture
expressed in mg/L
COMPONENT M524 M499 M502 M654 M554 M529 M153 M561 M290 M571 M531 M407
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 16500 825 825 825
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 62 3.1 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 333 332.2 3322 166.1 332.2 166.1 332.2 332.2 332.2
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.25 0.0125 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 373 18.63 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 278 13.9 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 181 180.7 1810 90.35 180.7 180.7 180.7 180.7 180.7
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 169 8.45 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium
0.25 0.25 0.25 2.5 0.125 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Salt)•2H2O
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 8.30 0.415 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 19000 950 950 950 1900
Potassium Phosphate,
170 170 170 1700 85 170 170 170 170
Monobasic
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 86 4.3 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
Grams of powder to prepare
4.33 4.30 4.23 N/A 0.10 NA 2.17 2.56 2.39 2.68 0.78 0.61
1 liter
pH±0.5 at RT 3.9 NS NS 4.3 4.3 3.2 NS 4.3 NS NS 4.3 4.3
41
13
Murashige & Skoog-Based Media
Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
M519 MURASHIGE & SKOOG BASAL MEDIUM w/ VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
With the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Murashige & Skoog Soluble In Water 10 L
(1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
Contains the basal salts of Product No. M524
M541 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Without Potassium Phosphate; contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Soluble In Water 10 L
Disodium EDTA. Contains the remaining macro- and micronutrients, and modified vitamins 50 L
as described by Murashige & Skoog (1962). Also contains (mg/L): 300 Sodium Phosphate
Monobasic, 150 Adenine Hemisulfate, and 1000 Casein Hydrolysate.
Plant Tissue Culture Tested
M404 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM w/ GAMBORG VITAMINS Storage Temp 2-6° C 1L
With the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962), and Soluble In Water 10 L
vitamins as described by Gamborg, et al. (1966). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M401 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); Soluble In Water 10 L
modified with the addition of (mg/L): 1.0 BA and 0.1 NAA 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M701 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium was formerly listed as M506. Soluble In Water 10 L
This medium may be sold as Murashige Begonia Multiplication Medium by some media 50 L
suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog
(1962); modified with the addition of (mg/L): 10 2iP and 30 Adenine Hemisulfate.
Plant Tissue Culture Tested
M702 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); Soluble In Water 10 L
modified with the addition of (mg/L): 30 2iP and 80 Adenine Hemisulfate, and 0.3 IAA 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M535 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Without Nicotinic Acid, Pyridoxine•HCl, and Glycine Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962); 50 L
modified with the addition of (mg/L) 0.4 Thiamine•HCl, 100 myo-Inositol, and 80 Adenine
Hemisulfate.
Plant Tissue Culture Tested
MURASHIGE MEDIUM WITH MINIMAL ORGANICS (MSMO)
See L689 & L477 Linsmaier & Skoog Basal Medium
M536 MURASHIGE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains the macro- and micronutrients, and vitamins as described by Murashige & Skoog Soluble In Water 10 L
(1962); modified with the addition of (mg/L): 2.0 2iP, 80 Adenine Hemisulfate, and 170 50 L
Sodium Phosphate.
Plant Tissue Culture Tested
M555 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium may be sold as Murashige & Skoog Shoot Multiplication Medium C by some Soluble In Water 10 L
media suppliers. Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & 50 L
Skoog (1962); modified with the addition of (mg/L): 1.0 Kinetin, 80 Adenine Hemisulfate,
and 148 Sodium Phosphate Monobasic.
Plant Tissue Culture Tested
M527 MURASHIGE MODIFIED MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium is sold as Murashige Shoot Tip Rooting Medium by some media suppliers. Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962) and 50 L
vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965); modified with the addition of (mg/L):
0.3 IAA, 1.0 Kinetin, and FeNaEDTA.
Plant Tissue Culture Tested
M491 MURASHIGE MODIFIED SHOOT MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
This medium is sold as MS Shoot Multiplication Medium A by some media suppliers. Soluble In Water 10 L
Contains the macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962) and 50 L
vitamins as described by Linsmaier & Skoog (1965); modified with the addition of (mg/L):
170 Sodium Phosphate Monobasic, 80 Adenine Hemisulfate, 30 2iP, and 0.3 IAA.
Plant Tissue Culture Tested
MURASHIGE & SKOOG VITAMIN POWDERS & SOLUTIONS
42
See Vitamin Section (following this section)
14
w/ Gamborg Vitamins
Murashige Modified
Murashige Modified
Medium w/ Kinetin
(w/out KH2PO4)
Medium
& NAA
w/ 2iP
w/ 2iP
& IAA
expressed in mg/L
COMPONENT M519 M541 M404 M401 M701 M702 M535 M536 M555 M527 M491
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 332.2 332.2 332.2 332.2 333 332.2 332.2 332.2 332.2 333 333
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 180.7 180.7 180.7 180.7 181 180.7 180.7 180.7 180.7 181 181
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 170 170 170 170
Sodium Phosphate Monobasic 300 148 170 148 170
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
Adenine Hemisulfate 150 30 80 80 80 80 80
6-Benzylaminopurine (BA) 1
Casein, Enzymatic Hydrolysate 1000
Glycine (Free Base) 2 2 2 2.0
6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 10 30 30
Indole-3-acetic Acid 1 0.3 0.3 0.3
Indole-3-butyric Acid
Kinetin 1 1
myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
α-Naphthaleneacetic Acid 0.1 0.1
Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 5 1 0.5 0.5
Pyridoxine•HCI 0.5 1 1 0.5 0.5
Sucrose 30000 30000 30000
Thiamine•HCI 0.1 0.5 10 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
Grams of powder to prepare 1 liter 4.43 5.69 4.44 34.44 4.44 34.69 4.51 4.68 34.66 4.41 4.68
pH±0.5 at RT 3.9 4.0 4.0 4.0 3.9 3.8 4.0 3.5 4.4 NS NS
NS = No Specification Established Rev 11/2005
43
15
MS-Based Plant-Specific Media
Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
M517 MURASHIGE MODIFIED AFRICAN VIOLET/ GLOXINIA Storage Temp 2-6° C 1L
MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Soluble In Water 10 L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the 50 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).
Plant Tissue Culture Tested
M518 MURASHIGE MODIFIED AFRICAN VIOLET/ GLOXINIA Storage Temp 2-6° C 1L
PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Soluble In Water 10 L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the 50 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962).
Plant Tissue Culture Tested
M550 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Arabidopsis Culture Medium Soluble In Water 10 L
Modified with the addition of (mg/L): 2.0 2,4-D, and 0.05 Kinetin 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M506 MURASHIGE BEGONIA MULTIPLICATION MEDIUM
See Product No. M701 Murashige & Skoog Modified Medium (same formulation)
M508 MURASHIGE MODIFIED FERN MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M509 MURASHIGE MODIFIED GERBERA MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M510 MURASHIGE MODIFIED GERBERA PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
H435 HOSTA INITIATION/ MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage I/II Medium Soluble In Water 10 L
Modified Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 2.0 BA, 160 Adenine Hemisulfate, 500 50 L
Casein Hydrolysate, and 0.5 NAA
Plant Tissue Culture Tested
H436 HOSTA MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage II Medium Soluble In Water 10 L
Modified Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 0.1 BA, 160 Adenine Hemisulfate, 500 50 L
Casein Hydrolysate, and 0.5 NAA
Plant Tissue Culture Tested
H437 HOSTA ROOTING MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Stage III Medium Soluble In Water 10 L
Modified Murashige & Skoog (1962) with (mg/L): 0.1 BA, 500 Casein Hydrolysate, and 0.5 50 L
NAA
Plant Tissue Culture Tested
44
16
Medium
expressed in mg/L
COMPONENT M517 M518 M550 M508 M509 M510 H435 H436 H437 M519
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650 1650
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 333 333 332.2 333 333 333 332.2 332.2 332.2 332.2
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.26 37.26 37.26 37.26 37.26
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7 36.7
Ferrous Sulfate•7H2O 27.8 27.8 27.8 27.8 27.8
Magnesium Sulfate, Anhydrous 181 181 180.7 181 181 181 180.7 180.7 180.7 180.7
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900 1900
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170 170 300 300 300 170
Sodium Phosphate Monobasic 170 255 85 85 170 170 170
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
Adenine Hemisulfate 80 80 160 160
Agar 8000 8000 8000
6-Benzylaminopurine (BA) 2.0 0.1 0.1
Casein, Enzymatic Hydrolysate 500 500 500
Glycine (Free Base) 2.0 2.0 2.0
2,4-Dichlorophenoxyacetic Acid 2.0
Indole-3-acetic Acid 2.0 1.0 0.5 10
Indole-3-butyric Acid
Kinetin 2.0 0.05 2.0 10
MES (Free Acid)
myo-Inositol 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
a-Naphthaleneacetic Acid 0.1 0.5 0.5 0.5
Nicotinic Acid (Free Acid) 1.0 10 10 0.5
Peptone from Meat
Pyridoxine•HCI 1.0 1.0 1.0 0.5
Sucrose 20000 30000 30000 30000
Thiamine•HCI 0.4 0.4 10 0.4 30 30 0.4 0.4 0.4 0.1
L-Tyrosine 100 100
Grams of powder to prepare 1 liter 4.66 4.4 24.44 4.66 4.72 4.64 43.40 43.39 43.23 4.43
pH±0.5 at RT 4.0 4.8 4.0 4.5 NS 5.9 4.3 4.3 4.3 3.9
NS = No Specification Established Rev 11/2005
45
17
MS-Based Plant-Specific Media (continued)
Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
M511 MURASHIGE MODIFIED KALANCHOE MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M512 MURASHIGE MODIFIED KALANCHOE PRETRANSPLANT BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M513 MURASHIGE MODIFIED LILY MULTIPLICATION BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
M462 MUSA (BANANA) MULTIPLICATION MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
IITA Formulation as described by Vuylsteke (1998). Soluble In Water 10 L
Plant Tissue Culture Tested 50 L
M516 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED BC POTATO BASAL MEDIUM Storage Temp 2-6° C 1L
Contains FeNaEDTA in place of Ferrous Sulfate and Disodium EDTA. Contains the Soluble In Water 10 L
remaining macro- and micronutrients as described by Murashige & Skoog (1962). 50 L
Plant Tissue Culture Tested
Kalanchoe
Kalanchoe
Murashige
Murashige
Murashige
BC Potato
transplant
Lily Multi-
(Banana)
Modified
Modified
Modified
Modified
All components
plication
plication
plication
Medium
Medium
Medium
Medium
Medium
Basal
Basal
Basal
Basal
Musa
Multi-
Mult-
Pre-
MS
expressed in mg/L
COMPONENT M511 M512 M513 M462 M516
Ammonium Nitrate 1650 1650 1650 1650 1650
Boric Acid 6.2 6.2 6.2 6.2 6.2
Calcium Chloride, Anhydrous 333 333 333 332.2 333
Cobalt Chloride•6H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Cupric Sulfate•5H2O 0.025 0.025 0.025 0.025 0.025
Na2EDTA•2H2O 37.25
Ferric Sodium EDTA 36.7 36.7 36.7 36.7
Ferrous Sulfate•7H2O 27.85
Magnesium Sulfate, Anhydrous 181 181 181 180.74 181
Manganese Sulfate•H2O 16.9 16.9 16.9 16.9 16.9
Molybdic Acid (Sodium Salt)•2H2O 0.25 0.25 0.25 0.25 0.25
Potassium Iodide 0.83 0.83 0.83 0.83 0.83
Potassium Nitrate 1900 1900 1900 1900 1900
Potassium Phosphate, Monobasic 170 170 170 170 170
Zinc Sulfate•7H2O 8.6 8.6 8.6 8.6 8.6
L-Ascorbic Acid 20
6-Benzylaminopurine (BA) 4.5
Gelrite 2000
D-Glucose 2.0
Glycine (Free Base) 2.0 2.0
6-γ,γ-Dimethylallylaminopurine (2iP) 3.0
Indole-3-acetic Acid 3.0 0.175
Kinetin 0.04
myo-Inositol 100 100 100 100
α-Naphthaleneacetic Acid 0.03
Nicotinic Acid (Free Acid) 0.5 0.5
Pyridoxine•HCI 0.5 0.5
Sucrose 30,000
Thiamine•HCI 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
Grams of powder to prepare 1 liter 4.41 4.41 4.4 36.36 4.41
pH±0.5 at RT 4.8 4.8 4.8 4.3 NS
NS = No Specification Established 46
18
Vitamins
Product Package
Product Description Product Notes
Number Size
C149 CHU N6 VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Chu (1975). Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
E330 ERIKSSON VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Eriksson (1965). Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
G249 GAMBORG VITAMIN POWDER (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Gamborg, et al. (1968). Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
G219 GAMBORG VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Gamborg, et al. (1968). Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
K421 KAO & MICHAYLUK VITAMIN SOLUTION (100x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins described by Kao & Michayluk (1975). Soluble In Water 500 mL
Plant Tissue Culture Tested 1L
M533 MURASHIGE & SKOOG VITAMIN POWDER (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water 250 mL
Plant Tissue Culture Tested
M553 MURASHIGE & SKOOG VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Murashige & Skoog (1962). Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
M547 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN POWDER (1000x) 100 mL
Murashige & Skoog (1962) vitamins modified with additional Thiamine•HCl. 250 mL
Plant Tissue Culture Tested
M557 MURASHIGE & SKOOG MODIFIED VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Murashige & Skoog (1962) vitamins modified with additional Thiamine•HCl. Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
N608 NITSCH & NITSCH VITAMIN POWDER (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969). Soluble In Water 250 mL
Plant Tissue Culture Tested
N603 NITSCH & NITSCH VITAMIN SOLUTION (1000x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Nitsch & Nitsch (1969). Soluble In Water
Plant Tissue Culture Tested
S826 SCHENK & HILDEBRANDT VITAMIN POWDER (100x) Storage Temp 2-6° C 100 mL
Contains the vitamins as described by Schenk & Hildebrandt (1972). Soluble In Water 1L
Plant Tissue Culture Tested
Gamborg Vitamin
Gamborg Vitamin
Solution (1000x)
Solution (1000x)
Solution (1000x)
Vitamin Solution
Vitamin Solution
Vitamin Solution
Powder (1000x)
Powder (1000x)
Chu N6 Vitamin
Vitamin Powder
Vitamin Powder
Vitamin Powder
Nitsch & Nitsch
MS Modified
Hildebrandt
MS Vitamin
MS Vitamin
Schenk &
All components
(1000x)
(1000x)
(1000x)
(1000x)
(100x)
(100x)
expressed in mg/L
COMPONENT C149 E330 G249 G219 K421 M533 M553 M547 M557 N608 N603 S826
p-Aminobenzoic Acid 2.0
L-Ascorbic Acid 200
D-Biotin 1.0 50 50
D-Calcium Pantothenate 100
Choline Chloride 100
Cyancobalamin, Vit B12 2.0
Folic Acid 40.0.0 500 500
Glycine (Free Base) 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000 2000
myo-Inositol 100000 100000 10000 100000 100000 100000 100000 100000 100000 100000
Nicotinamide 100
Nicotinic Acid (Free Acid) 500 500 1000 1000 500 500 500 500 5000 5000 500
Pyridoxine•HCl 500 500 1000 1000 100 500 500 500 500 500 500 50.0
Riboflavin 20.0
Thiamine•HCI 1000 500 10000 10000 100 100 100 1000 1000 500 500 500
Vitamin A 1.0
47
Grams of powder to prepare 1 L N/A N/A 112 N/A N/A 103.1 N/A 104 N/A 108.55 N/A 101.05
Rev 11/2005