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CORPORACIN TECNOLGICA DE BOGOT PLANTILLA GUIA PRACTICAS DE LABORATORIO Versin: 01 Fecha: 19/01/2012 Cdigo: DO-RG-014 Pgina: 1 de 5

PROGRAMA QUIMICA INDUSTRIAL PRACTICA No 4

NOMBRE DEL CURSO MICROBIOLOGA NOMBRE DE LA PRACTICA DURACIN EN HORAS 4

REACCIONES BIOQUIMICAS Y ACCION ENZIMATICA DE LAS BACTERIAS Y FLORA NORMAL ( FARINGE, BOCA, OIDO, OJOS Y NARIZ )

1. INTRODUCCIN: Las Enterobacterias para su desarrollo siguen diferentes rutas metablicas que permiten obtener subproductos que logran caracterizarlos permitiendo as su identificacin. Este tipo de procesos permiten ser aplicados en procesos industriales para obtencin de variedad de productos y materias primas. El conocer la variedad microbiana que existe como flora normal permite controlarla para permitir una excelente calidad de los productos terminados en diferentes procesos industriales.

2. FUNDAMENTACIN TERICA: El medio de cultivo est formado por cuatro elementos : La naturaleza del sustrato, las condiciones fsico-qumicas y fisiolgicas del medio, la naturaleza y composicin ambiental area y las condiciones de incubacin, incluyendo humedad y temperatura. Existen diferentes tipos de siembra de microorganismos, las cuales dependen muchas veces de diferentes caractersticas de los medios de cultivo de tal forma que permitan el crecimiento ptimo de las clulas.

3. OBJETIVOS: 3.1 Generales:

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Descubrir el mundo microbiano que existe en nosotros de forma natural y poder realizar identificacin de algunos que pueden causar efectos nocivos.

3.2 Especficos: - Conocer las diversas reacciones bioqumicas que ms se trabajan en el laboratorio de Microbiologa para identificar Enterobacterias - Conocer el sistema antiguo para tal diferenciacin y conocer algunos mtodos que la nueva tecnologa nos presenta para facilitar el trabajo de identificacin - Analizar diferentes reacciones que se pueden observar para determinar la accin de diferentes enzimas de algunas bacterias. - Demostrar la presencia de algunos microorganismos en diferentes partes del cuerpo como flora normal. - Analizar y comparar el tipo de microorganismos hallados en variados puntos del cuerpo humano. - Aprender a tomar muestras de diferentes sitios del cuerpo para anlisis microbiolgico.

4. MATERIALES Y REACTIVOS: Autoclave Microscopio Incubadora Mechero MATERIALES Asas Bacteriolgicas Bajalenguas estriles Hisopos Escobillones estriles Lminas o portaobjetos

REACTIVOS Violeta de Gram Agar Sangre en cajas de petri Lugol de Gram Agar Chocolate en cajas de petri Alcohol Acetona ( 3:1 ) Caldo Tioglicolato en tubo Fucsina de Gram Caldo Nutritivo en tubo Aceite de Inmersin Agar Citrato inclinado en tubo Agar TSI inclinado en tubo Caldo RMVP en tubo Agar LIA inclinado en tubo Medio Gelatina en tubo Medio SIM en tubo Agar Urea inclinado en tubo Tubos con Escherichia coli Tubos con Staphylococcus aureus Tubos con Klebsiella pneumoniae Tubos con Enterobacteria

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5. PRECAUCIONES: Se deben cumplir las normas de ingreso y trabajo en el laboratorio Todo el material a trabajar o a incubar debe estar debidamente marcado en el momento de realizar los procesos del laboratorio Se debe trabajar cerca al mechero siguiendo las instrucciones Utilizar todos los elementos de proteccin Tener cuidado en el manejo de los microorganismos ya que pueden llegar a causar infecciones oportunistas

6. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:

REACCIONES BIOQUMICAS A partir del cultivo original sembrar as : Por puncin en SIM y GELATINA Por puncin y espiral en TSI, CITRATO, UREA Con asa redonda en RMVP Prueba Coagulasa 1. En Tubo: A partir del cultivo marcado con Staphylococcus aureus, sembrar con asa redonda en plasma, e incubar por 2 horas. Observar formacin de cogulo 2. En Lmina: A una lmina limpia adicionar una gota de plasma estril, con un asa redonda tomar un inculo de la cepa indicada, mezclar y observar formacin de grumos. FLORA NORMAL

Toma de Muestra de Boca, Encas y Dientes : 1. BOCA :

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Con aplicadores estriles tomar muestras de las encas, de los surcos a los lados de los dientes. Sembrar en Agar Sangre una parte masiva para realizar aislamiento, y en tioglicolato. Con otro aplicador tomar la muestra del mismo lugar, realizar frotis y colorear con Gram.

2. DIENTES : Tomar las muestras de la caries, si hay, desinfectando previamente la zona expuesta a la contaminacin con la saliva. Sembrar en Agar Sangre y en tioglicolato. Con otro hisopo o aplicador tomar nueva muestra y hacer frotis en lmina. Colorear con Gram. Llevar a incubar a 37 grados Centgrados por 24 horas y realizar lmina del crecimiento obtenido. Observar los frotis directos.

Toma de Muestra de Secreciones Amigdalina y Farngea : Cuando hay exudados inflamatorios, se toma la muestra con un hisopo. La muestra no debe ser superficial sino que debe procurarse obtenerla de los tejidos infectados. Introducir un aplicador en la cavidad bucal evitando contaminacin con saliva y flora normal de la mucosa. Se debe realizar con buena iluminacin para no tocar ms que la parte inflamada. Sembrar en Agar Sangre ( por aislamiento ) e introducir en tioglicolato. Con otro aplicador realizar frotis directo y colorear con Gram. Incubar 24 horas a 37 grados Centgrados y observar presentia y tipo de hemlisis. Observar el frotis directo y anotar los microorganismos encontrados.

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Observar los cultivos, con anlisis macroscpico, y realizar frotis, para anlisis microscpico.

Toma de muestra de Oidos, Ojos y Nariz : Se realiza el mismo procedimiento que en los anteriores, teniendo cuidado al introducir los aplicadores de no lastimar los conductos nasales o del oido evitando ralladuras taponamientos. No introducir demasiado el hisopo dentro del oido. Realizar tambin anlisis microscpico y macroscpico. Para muestra de ojos, bajar el prpado inferior y tomar la muestra suavemente con hisopo estril.

7. INVESTIGUE: 1. Composicin y tipos de reacciones que se presentan en cada medio a trabajar 2. Cual es la enzima que peptoniza la leche ? 3. Qu son exoenzimas y endoenzimas ? 4. La amilasa, la coagulasa y enzimas proteolticas son exoenzimas o endoenzimas 5. Cual es el objetivo de determinar el tipo de flora presente en un rea del cuerpo ? 6. Porqu es tan importante dar un diagnstico rpido en caso de sospecha de difteria? 7. Cuales son los microorganismos que se encuentran normalmente en la faringe, oido, ojos, nariz y boca ? 8. Qu coloracin se utiliza para el frotis en caso de averiguar si hay presencia o no del bacilo diftrico ?

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