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-En biochimie, on utilise surtout des IgG (+ affinit) -On peut prparer des Ac polyclonaux (srum dun animal immunis) ou des Ac monoclonaux (technique des hybridomes). -on peut tre amen devoir purifier ces prparations (Protine G ou Protine A).
La dtection et le dosage des antignes (par des mthodes dont il faut vrifier la spcificit, la reproductibilit et la sensibilit).
La dtection et le titrage des anticorps (vis--vis d'un Ag ou d'un mlange d'Ag).
Interaction Antigne-Anticorps
Ac + Ag k1=constante de vitesse d'association k1 k2=constante de vitesse de dissociation ka= k1/k2 = constante d'association ou d'affinit (l/mol) Affinit: force par laquelle un ligand (pitope) entre en interaction avec un site de liaison (paratope). Ex : forte affinit : 1011 l.mol-1 faible affinit : 104 l.mol-1 Valence Ac: nombre de site de fixation de l'Ag, 1 IgG (bivalent), 1IgM (decavalent). Valence Ag: nombre de molcule Ac qui se fixe sur Ag saturation.
Avidit: force de liaison entre lAg (multivalent) et lAc (multivalent) plus proche de la ralit. (affinit, conformation Ag, valence) 3
k2
Ac-Ag
[Ac-Ag]
Ka =
[Ac]x[Ag]
1b -Ka
c) Immuno-electrophorse
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Raction d'Agglutination (pour des cellules) Ac peuvent agglutiner des bactries, cellules (hmaties).
Ex: l'Hmagglutination : Globules rouges (GR) + Ac anti GR
Hmagglutination (rseau)
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anti-espce du primaire
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LELISpot
But quantifier les cellules produisant la molcule recherche
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rvlation
Ac I+ AcII-Enz
HRP Ac II coupl une enzyme anti-Ac I (anti espce)
Ac I anti-Protine dintrt
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Peroxydase
Phosphatase
Peroxydase
Phosphatase
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Limmunoprcipitation (IP)
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Cytofluoromtrie en flux
(FACS :Fluorescence-activated cell sorting)
gate
Les mthodes de fixation des tissus ou des cellules vont influer sur la structure des pitopes de lantigne, donc jouer sur la reconnaissance des anticorps.
Plusieurs mthodes de fixation et de dure devront tre tests pour que lanticorps puisse reconnatre lpitope.
Immunohistochimie
Microscopie optique
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Immunofluorescence
Microscopie fluorescence
Ac anti pericentrine
Ac anti tubuline
Immuno-Electroscopie
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Pathogne
anticorps
1er composant du
-LAc se fixe sur le pathogne -Fixation du 1er lment dun rseau complexe de protines sriques (le complment) -Activation de la cascade du complment
complment
Pathogne quelconque
Pore
3) Opsonisation
=aide la phagocytose
-Macrophage reconnait les parties Fc des Ac par rcepteurs Fc (RFc), activation de la phagocytose.
Fc
Rcepteurs au Fc
Opsonisation
Macrophage
Principalement IgG et rcepteur RFc.
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