Genética y Biotecnología 6 BTO Q

Ejercitación de Tecnología del ADN recombinante

1) Entrar a este link http://recursos.cnice.mec.es/biosfera/alumno/2bachillerato/biotec/actividades.htm

y resolver en forma interactiva las actividades 1 a 6. Se autocorrigen. El resto de las actividades no son obligatorias porque
no abarcamos tantos temas pero pueden entrar y mirar. Ayuda: en esa misma página vayan a la barra de arriba donde dice
contenidos y tendras explicaciones que ayudaran a resolver y entender las actividades

2) Responde :
a) ¿Cómo es que la rápida reproducción bacteriana las hace ser una buena opción para clonar un gen ajeno?
b) ¿Qué es un plásmido? ¿Qué características debe reunir para funcionar como vector? Esquematizalo ¿A qué se
llama plásmido recombinante? ¿Cómo se logra?
c) Al hacer ADN recombinante, ¿Cuál es el beneficio de usar una enzima de restricción que corte el ADN dejando
extremos pegajosos?
d) ¿Qué es una biblioteca de ADN? ¿Cómo se construye?
e) ¿Cómo es que una sonda que consiste en ADN o ARN radioactivo permite que un investigador encuentre los
clones bacterianos que portan un gen en particular?
3) Sitúa en el esquema (usando las letras) los siguientes elementos, reactivos o técnicas, indicando brevemente en una
frase el propósito de éstos:

(A) DNA cromosómico (B) ADN recombinante (C) Inseto (D) Vector (E) Enzima restricción

(F) Ligasa (G) Electroporación (H) Célula huesped

4) Con el objeto de amplificar el gen de resistencia a la ampicilina (450 pb) mediante la técnica de PCR se prepararón los
siguientes tubos eppendorf que contienen los siguientes elementos:

Tubo 1: Buffer PCR, primer 1, dNTPs, MgCl2 (cofactor), ADN molde, H2O, Taq polimerasa
Tubo 2: Buffer PCR, primer 2, dNTPs, MgCl2 (cofactor), H2O, Taq polimerasa
Tubo 3: Buffer PCR, primer 1, primer 2, dNTPs, MgCl 2 (cofactor), ADN molde H2O Taq polimerasa
Tubo 4: Buffer PCR, primer 1, primer 2, dNTPs, MgCl 2 (cofactor), H2O, ADN molde
a) ¿Cuál o cuáles de estos tubos elegirías para poner en el termociclador? ¿Por qué?
b) Explica por qué no elegiste cada uno de los otros tubos
 c) ¿Cómo serían los controles positivos y negativos de esta experiencia?
d) Explica en qué consiste cada uno de los 3 pasos de cada ciclo
Una vez concluida la reacción de PCR, se analizará el producto mediante un gel de agarosa. Se utilizaron los siguientes
marcadores de peso molecular: 50, 100, 200, 400, 600, 900 y 1200 pb. Se sacó una foto del gel

e) Dibuja el gel, indicando: ánodo y cátodo, bandas correspondientes a los marcadores de peso molecular y la/s banda/s
correspondientes a si hubo amplificación

5) Coloca según corresponda(N=Northern; S= Southern; W=Western o X= Ninguna) a qué técnica de hibridación

corresponde cada una de las siguientes afirmaciones

La detección de fragmentos de ARN sobre una membrana usando anticuerpos específicos radioactivos
La detección de fragmentos de ARN sobre una membrana usando una sonda de ADN radioactivo
La detección de proteínas sobre una membrana usando anticuerpos específicos marcados
La detección de de fragmentos de ADN sobre una membrana usando anticuerpos específicos radioactivos
La detección de de fragmentos de ADN sobre una membrana usando una sonda de ADN radioactivos

6) Una fragmento de ADN fué incubado por separado con una enzima de restriccíon 1 y 2 y luego con ambas. Se lo
sometió una electroforesis en gel de agarosa obteniéndose las siguientes bandas:

Enzima 1: 1 banda de 45 Kb y una banda de 15 Kb

Enzima 2: 1 banda de 43 Kb, 1 de 10 Kb y 1 7 Kb

Enzima1/ 2: 1 banda de 35 Kb, 1 de 10 Kb, 1 de 8 Kb y 1 de 7 Kb

a) EL siguiente esquema representa el mapa de restricción de un fragmento de ADN lineal: coloca el tamaño de cada
fragmento

2 1 2

b) Cuál de los siguientes corridas electroforéticas representa este mapa.justificá

1 2 3 4 1 2 3 4
B
A