UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE MEDICINA
ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA DEPARTAMENTO ACADMICO DE PATOLOGA EXPERIMENTAL SECCIN PATOLOGA EXPERIMENTAL

GRUPO: 8 / BIOTERIO: 8

Toxicidad aguda del extracto etanlico de la vaina de Caesalpinia spinosa administrado va oral en ratones BALB/c
Autores: Castillo Verstegui, Julio Alonso Eugenio uflo, Stephanie Carolina Garca La Hoz, Marisel Monroy Condori, Grecia Mara del Carmen Soto Mosquera, Elmer Enrique Vega Landa, Josue Ismael Verstegui Zapata, Csar Alberto Villanueva Villegas, Renzo Jhess Yupari Jimeno, Alex Alejandro Zrate Lizarzaburo, Jazmin Karina Profesora Asesora: Mg. Nancy Rojas Morn Profesora Principal de Patologa experimental.

AGOSTO 2011

NDICE

I.- TTULO:
Toxicidad aguda del extracto etanlico de la vaina de Caesalpinia spinosa administrado va oral en ratones BALB/c

II.- GENERALIDADES:
a. Antecedentes: La Caesalpinia spinosa conocida comnmente como tara o taya se encuentra distribuido desde Venezuela hasta Chile y Bolivia. El Per, siendo el primer productor mundial de tara, report en el 2008 un ingreso de divisa de aproximadamente de 42 millones de dlares por la exportacin del polvo de tara. Esta planta est siendo cultivada en los valles interandinos secos entre 800 y 2800 msnm siendo su productor principal el departamento de Cajamarca. Sus frutos y vainas tienen amplia aplicacin en la medicina tradicional. Segn estudios previos, se ha encontrado que posee diversas propiedades como la antimicrobiana y antitumoral evaluadas a travs de estudios experimentales de extractos de la vaina de esta planta. Dentro de sus aplicaciones en la industria, se ha demostrado que la tara, sobre todo en el extracto de la hoja, presenta propiedades insecticidas utilizadas con el fin de minimizar las prdidas en cereales sin daar este alimento y antiincrustante que favorece al sistema protector de las embarcaciones. Por otro lado, la goma contenida en el endospermo de las semillas, tiene gran aplicacin en la industria cosmtica y alimentaria, al igual que la goma arbiga. Esta goma posee las caractersticas propias de las gomas vegetales actuando como espesante, aglomerante, estabilizador, coloide y capa protectora vistas en una investigacin peruana. El componente ms importante de la vaina de tara son sus taninos, encontrndolos en un 40 62%. Se ha encontrado una estrecha relacin entre este componente y nefrotoxicidad, hepatoxicidad, anemia, dao en la

flora intestinal, mala absorcin proteica y metahemoglobinemia; pero no se ha registrado una investigacin especfica que evale la toxicidad de los taninos de la tara ni los efectos adversos que esta pueda ocasionar. b. Marco Terico: La Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze o tambin conocida como Tara o Taya (Per) es un rbol pequeo (2 3 m) de la Divisin Magnoliophyta (Angioespermas), Clase Magniolpsida (Dicotiledonea), Familia Cesalpinaceae, Gnero Caesalpinia, Especie Caesalpinia spinosa o C. tintoria. La Caesalpinia spinosa se encuentra en pases como Venezuela, Colombia, Ecuador, Per, Bolivia y hasta norte de Chile. Entre estos pases resaltamos al Per que tiene el mayor bosque de Tara con un 80 % de la produccin mundial. La produccin de Tara se lleva a cabo en las 4 estaciones del ao. La zona productora de Tara en el Per se encuentra entre los 800 y 2800 msnm, resaltando a los siguientes departamentos Cajamarca (41%), Ayacucho (16%), La Libertad (13%), Hunuco (13%), Huancavelica, Ancash, Apurmac, Caete, entre otros. En los usos de esta planta se resalta a la vaina y la semilla . Como uso medicinal tradicional (popular) funciona como cicatrizante, antisptico, antidiarrico, antimictico, antibacteriano, antiescorbticos, odontlgicos, antidisentrico, etc. Como uso industrial se utiliza la vaina para la extraccin de taninos y cido glico (antioxidante), la semilla para la obtencin de hidrocorticoides. La vaina de la Tara es un extraordinario producto de exportacin como materia prima para la obtencin de cido tnico, pues estas contienen taninos hidrolizables (galotaninos) en un rango de 40 62 % (en la regin de Ayacucho encontramos el Cultivar Almidn que se encuentra en la zona sur y presenta el mayor nivel de taninos). En la composicin qumica de los frutos (vaina y semilla) encontramos protenas (7,17%), fibra bruta (4%), carbohidratos (67,58%) y taninos (62% -

vaina). En los taninos hallados los clasificamos de la siguiente manera galotanino (53,1%), cido glico (9,5%), elagitanino (6,9%) y derivados (30,5%).

Los taninos son compuestos polifenlicos que se encuentran distribuidos ampliamente en el reino vegetal principalmente en leguminosas y en aquellas plantas que muestran un color rojo-morado particular (flavonoides). Adems, son responsables de la palatalabilidad por su sabor astringente en los alimentos y se caracteriza por formar precipitados de complejos proteicos. Se clasifican como taninos hidrolizables y condensados o proantocianidinicos. A los taninos condensados se les atribuye los efectos benficos en contraste con los hidrolizables, que por ser degradables en el organismo pueden causar efectos adversos. Los taninos hidrolizables son steres de cido fenlico, como cido glico y cido elgico con un azcar( principalmente, glucosa) o un polialcohol. Existen investigaciones en modelos murinos, las cuales sealan el poder antimicrobiano, antioaxidante, antimalrico, antiinflamatorio, antidiarreico y antihemorrgico de estos compuestos. Se ha investigado acerca de los taninos hidrolizables, los cuales son fcilmente degradados por la flora microbiana a nivel del tubo digestivo en rumiantes, los productos metablicos se comportan como hepatotoxinas y nefrotoxinas que ocasionan lesiones e incluso pueden llegar a necrosar el tejido heptico. Estos compuestos polifenlicos disminuyen el valor nutritivo de los alimentos al formar un complejo protenatanino a nivel intestinal que impide la correcta absorcin de iones metlicos como el hierro, aminocidos y carbohidratos. En estudios con cabras se evidencio a la 24 hrs de administracin de la dosis de un extracto con alto porcentaje de taninos un descenso en los

niveles de protena sricos, aumento del pH sanguneo, alto nivel de transaminasas y metahemoglobinemia. Se ha reportado que los galotaninos, taninos con alto nmero de acido glico en su composicin, utilizado como agente estabilizante en la industria peletera y textil produce dao en la mucosa respiratoria, irritacin gstrica, inflamacin renal, necrosis heptica al ser accidentalmente ingerido.

c. Justificacin En los ltimos tiempos, la tara ha cobrado importancia en nuestra economa, y ha sido fuente de muchos proyectos y estudios sobre su mercado internacional, as como sus posibilidades de exportacin a pases de Europa como Francia. El xito en su exportacin reside en sus grandes cualidades como curtiente vegetal, proporcionado por su alta concentracin de taninos y debido a los nuevos lineamientos medioambientales sealados por la Unin Europea. As tambin se ha abierto un amplio campo de investigacin en lo que concierne a aplicaciones mdicas de la tara, sin embargo, no existe en la bibliografa revisada estudios sobre la toxicidad de esta planta. Por tanto, este proyecto inicia una nueva lnea de estudios de investigacin sobre esta importante especie, que servir de base para estudios posteriores. As mismo es importante recalcar que los estudios de toxicidad son importantes dentro del desarrollo en la investigacin de nuevas especies aplicables a la terapia medicinal. Al presentar este proyecto, se pretende innovar en cuanto a estilo y tipo de estudio desarrollados clsicamente en la seccin de Patologa Experimental, mostrando una forma menos habitual de investigacin utilizando para ello a la Caesalpinia Spinosa, que est por convertirse en uno de los tantos productos bandera del pas.

III.- PROBLEMA:

La administracin va oral del extracto etanlico de Caesalpinia spinosa produce toxicidad aguda multiorgnica en ratones BALB/c?

IV.- HIPTESIS:

H0: La administracin va oral del extracto etanlico de Caesalpinia spinosa no ocasiona toxicidad aguda multiorgnico en los ratones BALB/c.

H1: La administracin va oral del extracto etanlico de Caesalpinia spinosa ocasiona toxicidad aguda multiorgnica en los ratones BALB/c.

V.- OBJETIVOS:
a. Del piloto: 1. GENERAL: Determinar la dosis mnima en la cual se evidencien alteraciones conductuales o morfolgicas en los animales de experimentacin. 2. ESPECFICO: Adiestrarse en la manejo de animales de laboratorio. b. Del ensayo definitivo: 1. GENERAL: Determinar los efectos txicos del extracto etanlico de la vaina de Caesalpinia spinosa administrado va oral en ratones BALB/c. 2. ESPECFICOS: BIOQUMICOS: Evaluar indicadores de dao heptico, renal, y del tubo digestivo. ANATOMOPATOLGICOS: Macroscpicos: Evaluar cambios en el color, tamao y peso de los rganos a estudiar Microscpicos: Evaluar y describir lesiones microscpicas en los diversos tejidos. CLNICO: Evaluar cambios en el color, tamao y peso de los ratones. Evaluar cambios conductuales (sed, apetito, actividad) 1

VI.- FLUJOGRAMA

VII.- MATERIALES
a. Materiales 1. Biolgicos:

MTODOS

Ratones, especie Mus musculus , cepa BALB/c, sexo macho y hembras, animal haloxnico,con 6 semanas de edad, peso promedio 20 +/-2 gr.

Extracto etanlico de la vaina de tara: Se extraer en un equipo soxleth y se utilizar 10 g de muestra polvo de vaina en 150 ml de solvente etanol Q.P, por 7 horas a 80 C, luego se llevar a evaporacin total en un vaso de precipitacin a 50 C hasta obtener polvo.

2. Qumicos: Kits de anlisis bioqumico.

3. Fsicos: Bioterio 8 (Sede Baquero, 3er piso) Material de limpieza 1

b. Mtodos: 1. Diseo: Experimental Verdadero 2. Ensayo piloto: Up-Donw-Procedure Este procedimiento, es utilizado en primer lugar pues minimiza el nmero de ratones que se emplean para estimar la toxicidad aguda del un qumico y aproximar la DL50. A parte de medir la mortandad, tambin permite la observacin de los signos de toxicidad. Se contar con un nmero total de 17 ratones especie Mus musculus, cepa BALB/c, sexo macho y hembras, cuyo peso no tiene una variacin mayor de 2 gr. Se realizar el correspondiente proceso de aleatorizacin y se nmerar del 1 al 10 a los ratones macho, teniendo 2 como grupo

blanco. Se seguir el mismo proceso de aleatorizacin para el procedimiento de extrapolacin a las hembras, teniendo de la misma manera 2 ratones hembras de grupo blanco y 3 numeradas ordinalmente en el grupo experimental. Previo a la prueba piloto se tendr una semana de aclimatacin. El procedimiento consiste en aplicar las dosis individualmente a cada animal,en secuencia de intervalos de 24h, observndolos como mnimo 24h. Al primer animal se le aplica la dosis ms cercana a la DL50; si el animal sobrevive, al segundo se le aplica una dosis mayor; si no sobrevive, la dosis para el segundo animal, ser disminuida. Los animales moribundos y evidentemente agnicos, sern sacrificados por razones humanitarias. Para seleccionar la dosis adecuada, se debe utilizar toda la informacin posible y conocida; de no tener referencias, se recomienda empezar con una dosis inicial entre 200 a 500 mg/kg de peso y se continuar con factores de progresin segn los resultados evidenciados, sin llegar al lmite de 2000 mg/kg de peso. La extrapolacin al sexo contrario del de la prueba inicial se realizar administrando, a no ms de 3 animales, dosis por encima o debajo de la estimada DL50 calculada anteriormente; segn sean las reacciones del animal anterior. Con los resultados obtenidos se analizarn las dosis que fueron txicas mas no causaron la muerte de los animales, esta dosis obtenida servir para el procedimiento del ensayo definitivo del proyecto. 3. Ensayo definitivo: Dosis fijas adaptado. Posterior al ensayo piloto se proceder al ensayo experimental, en el cual tambin se llev a cabo la aleatorizacin para separar los grupos control (3 ratones) y los 5 grupos experimental (6 ratones por grupo) para cada uno de los sexos correspondientes. A estos grupos experimentales se les administrar distintas dosis en base a la dosis hallada en la prueba piloto, aumentando en progresin

hasta llegar a una dosis menor de la causante de mortalidad. Terminado este procedimiento se llevar a cabo el sacrificio de los animales de experimentacin.

4. Toma de muestras Los fluidos corporales a estudiar son la sangre y la orina a las cuales se les realizarn las correspondientes pruebas bioqumicas. Los rganos seleccionados, fijados y consevados son el hgado, el rion y el tubo digestivo y seguirn el proceso correspondiente para la obtencin de las lminas de las estructuras microscpicas a estudiar. 5. Prueba estadsticas Se emplearn el test de normalidad y el de ANOVA o KW. Posterior a esto se proceder al anlisis e interpretacin de los resultados obtenidos, su discusin y posterior publicacin. 1

REFERENCIAS

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