Aceites esenciales : Tcnicas de extraccin y anlisis

Elaborado: Elena E. Stashenko, Qumica, Ph.D. Yajaira Combariza, Qumica, M.Sc.

Laboratorio de Fitoqumica & Cromatografa Escuela de Qumica Universidad Industrial de Santander Bucaramanga - Colombia, 1998

Aceites Esenciales

DEFINICIN
E l aceite esencial es una mezcla de componentes voltiles, producto del metabolismo secundario de las plantas. Las esencias son mezclas ms o menos complejas en cuya composicin entra una porcin de hidrocarburos de la serie polimetilnica del grupo de los terpenos que responden a la frmula (C5H8)n (monoterpenos, n=2; sesquiterpenos, n=3; diterpenos, n=4; etc.) junto con otros compuestos casi siempre oxigenados (alcoholes, teres, steres, aldehdos y compuestos fenlicos) que son los que transmiten a los aceites esenciales el aroma que las caracteriza. Se les llama aceites por su apariencia fsica y consistencia que es bastante parecida a los aceites grasos, pero se distinguen de ellos, porque al dejar caer unas gotas de esencia sobre el papel, stas se volatilizan fcilmente sin dejar ninguna huella ni mancha grasosa.

LOCALIZACIN EN LA PLANTA
L os aceites esenciales se encuentran muy difundidos en el reino vegetal, especialmente en las Fanergamas, en las cuales se hallan repartidas en unas sesenta familias ( Compuestas, Labiadas, Laureceas, Mirtceas, Rosceas, Rutceas, Umbelferas, etc.). Se pueden encontrar localizados en diferentes partes de la planta, por ejemplo: en las hojas (albahaca, mejorana, menta, romero, salvia, etc.), en las races (clamo, valeriana, vetver, etc.), en la corteza (canela, cedro, sndalo, etc.), en las flores (jazmn, rosa,

ylang-ylang, etc. ), en la cscara del fruto (limn, mandarina, naranja, etc. ), en los frutos (ans, cardamomo, eneldo, hinojo, etc.). En ocasiones las diferentes partes de la misma planta suministran esencias distintas en su composicin como, por ejemplo, los aceites extrados de la raz, el tallo y las hojas del hinojo. La canela de Ceiln encierra en la corteza una esencia rica en el aldehdo cinmico, mientras que en sus hojas y en las races predominan el eugenol y el alcanfor, respectivamente. La cantidad y composicin del aceite vara de una especie a otra, y dentro de los mismos gneros de la planta. En la Figura 1 aparecen cromatogramas de los extractos voltiles obtenidos por la tcnica de destilacin - extraccin con solvente simultnea (DES) de hojas (A), tallos (B), flores (C) y races (D) de Ruda (Ruta graveolens). Mientras que los compuestos oxigenados (cetonas, alcoholes, acetatos, 1,3-benzodioxoles y furanocumarinas) prevalecen en las partes areas de la planta, (geigerenos, C12H18, C12H16) se concentran en las races (Figura 2). los hidrocarburos

tie m p o (m in )

tie m p o (m in )

Figura 1. Cromatogramas en la columna DB-1 (60 m) del aceite de ruda ( R. graveolens) obtenido por DES de (A) hojas, (B) tallos, (C) flores y (D) races. ( E.E. Stashenko, H.S. Villa and M. Y. Combariza, J. Microcolumn Separations, 1995, Vol 7, No. 2, 527)

Area relativa (Ai/Aistd)

6 4 2

Cetonas C12H18, C12H16 Derivados de 1,3 - Benzodioxol Furanocumarinas Alcoholes Acetatos

Races Tallos Hojas Flores

Figura 2. Variacin en la composicin de los aceites esenciales aislados por DES de diferentes partes de R. graveolens. ( E.E. Stashenko, H.S. Villa and M. Y. Combariza , J. Microcolumn Separations, 1995, 7(2), 117) En la Figura 3 aparecen perfiles cromatogrficos de los voltiles aislados de la cscara de mandarinas (A) C. reticulata y (B) C. nobilis. Las diferencias en composicin de los extractos se pueden observar en la Tabla I.
61015 13 2

6 10

24 32 1 22 27 20 0 20 40 41 60 80 Tiempo (min) 0 13 16 17 19 24 29 3531 39 20 40

40 60 80 Tiempo (min)

Figura 3. Cromatogramas tpicos en la columna DB-1 (60 m) de los aceites esenciales de mandarina (A) C. reticulata y (B) C. nobilis, obtenidos por arrastre con vapor (C. Blanco Tirado, E.E. Stashenko, M.Y. Combariza and J. R. Martnez, J. of Chromatogr. A, 1995, 697, 501) TABLA I Composicin qumica de los aceites esenciales de la cascara de mandarina

C. reticulata y C. nobilis (C. Blanco Tirado, E.E. Stashenko, M.Y. Combariza and J. R. Martnez, J. of Chromatogr. A, 1995, 697, 501)
Pico No. COMPUESTO Ik Cantidad Relativa*, % Citrus reticulata Citrus nobilis DB-1 DB-1 DBWAX 1 -Tuyeno 924 1025 0.11 2 -Pineno 932 1021 0.53 0.67 3 Sabin 967 1120 0.17 0.17 eno 4 -Pineno 973 1107 0.46 0.03 5 n977 1270 0.39 0.57 Octa 6 -Mirceno 982 1162 1.49 3.66 7 -Felandreno 994 1177 0.04 0.07 8 1,41009 1177 0.09 Cine 9 p1013 1284 0.24 tr Cime 10 d1026 1201 83.71 96.02 Limo 11 cis-1028 1235 tr Ocim 12 trans 1035 1252 0.14 0.04 -13 -Terpineno 1051 1248 3.85 0.15 14 Hidra 1054 1463 0.33 to de 15 No 1078 0.18 identi 16 Terpi 1080 1291 5.95 0.02 nolen 17 Linal 1083 1553 0.12 ol 18 cis 1118 0.02 0.07 Epox 19 1,21121 1449 0.07 Dihid 20 Citro 1131 1472 0.07 0.06 nelal 21 Isopu 1146 1565 0.05 legol 22 Nona 1161 0.13 0.08 nol 23 No 1173 0.07 identi 24 -Terpineol 1179 1740 0.35 0.19 25 Deca 1183 1482 0.13 0.02 nal 26 Metil 1196 0.06 Timo 27 Citro 1203 1751 0.23 nelol 28 Nerol 1208 1832 0.07 0.03 29 Neral 1215 1705 0.13 0.02 30 Gera 1237 1789 0.12 0.08 niol 31 Gera 1248 1735 0.05 0.03 nial 32 Perill 1265 0.36 aldeh 33 Deca 1270 1729 0.09 0.05 nol 34 Aceta 1335 1645 0.07 0.07 to -Elemeno de 35 1384 1475 0.05 0.07 36 -Cariofileno 1424 1654 0.04 37 -Bergamoteno 1435 1589 0.04 38 Germ 1477 1714 0.06 acren 39 -Bisaboleno 1495 1770 0.06 0.09 40 -Cadineno 1511 1766 0.07 41 -Sinensal 1725 0.15 * Los porcentajes se calcularon con base en el rea de los picos en la columna DB-1 (FID)

La concentracin del limoneno es ms alta en las esencias de C. nobilis (96.02%) en comparacin con C. reticulata (83.71%). Los monoterpenos -terpineno (3.85%) y terpinoleno (5.95%) prevalecen en C. reticulata; en las cscaras de C. nobilis se destaca el -mirceno (3.66%) como componente ms abundante despus del limoneno.

COMPOSICIN QUMICA

ctualmente se conocen ms de doscientos aceites esenciales de apreciado valor comercial en los cuales se han identificado alrededor de cuatrocientos componentes

qumicos. Junto con los terpenos, se encuentran compuestos oxigenados como alcoholes libres (borneol, geraniol, linalol, nerol, mentol, terpineol, etc. ) o en forma de steres, aldehdos (cinmico, benzaldehdo, neral (citral, geranial), citronelal, saliclico, etc. ), cetonas (alcanfor, carvona, fenchona, mentona, tuyona, etc.), fenoles (carvacrol, eugenol, isoeugenol, timol, etc. ), cidos libres (actico, benzoico, cianhdrico, cinmico, propinico, valerinico, etc. ) en pequeas cantidades o en forma de steres o teres.

FACTORES QUE INFLUYEN SOBRE LA COMPOSICIN Y EL RENDIMIENTO DEL ACEITE ESENCIAL EN LA PLANTA

Muchos factores influyen sobre la composicin del aceite esencial, entre ellos figuran:

CONDICIONES GEOBOTANICAS DEL MEDIO (Clima, altitud, tipo de suelo, cantidad de lluvias, etc.) MTODO DE CULTIVO (Uso de fertilizantes, abono, pesticidas, otros qumicos, etc. ) POCA DE RECOLECCIN Y PARTE DE LA PLANTA (Raz, tallo, hojas, semillas, etc. )

MODO DE MANEJO Y ALMACENAMIENTO DEL MATERIAL VEGETAL (Fresco, seco, fermentado, etc. ) MTODO DE OBTENCIN DEL ACEITE (Destilacin, maceracin, prensado, extraccin con solventes, extraccin con fluidos supercriticos, etc.) EDAD DE LA PLANTA Y ESTADO FENOLGICO

Los aceites esenciales aislados de la cscara y de las hojas de ctricos ( C. sinensis) se diferencian notoriamente tanto en su composicin qumica, como en la proporcin en la cual se encuentran sus constituyentes (Figura 4).

20

40

60 80 0 Tiempo (min)

20

40

60 80 Tiempo (min)

Figura 4. Cromatogramas en la columna DB-1 (60 m) de las esencias obtenidas de (A) cscara de fruta y (B) hojas de naranja ( C. sinensis) (C. Blanco Tirado, E.E. Stashenko, M.Y. Combariza and J. R. Martnez, J. of Chromatogr. A, 1995, 697, 501). En las hojas de los ctricos predominan compuestos oxigenados y monoterpnicos (Figura 5A), mientras que en la cscara de los frutos se encuentran en mayor proporcin los hidrocarburos mono- y sesquiterpnicos (superior a 96 - 98%) (Figura 5B).

A
16 Area relativa, (Ai/Astd) 12 8 4 0 Limon Mandarina Naranja Voltiles totales Monoterpenos Compuestos oxigenados Sesquiterpenos

30 Area relativa (Ai/Astd) 25 20 15 10 5 0 I II III I II III I II III I III C. nobilis

Voltiles totales Monoterpenos Compuestos oxigenados Sesquiterpenos

C. volkameriana

C. reticulata

C. sinensis

Figura 5. Composicin qumica comparativa de las esencias obtenidas por arrastre con vapor de (A) petit grain (hojas de limn, C. volkameriana; mandarina, C. reticulada; y naranja, C.sinensis) y (B) cscara de frutos ctricos en diferentes grados de maduracin (I - 100% verde; II - 45-75% verde; III - frutos completamente maduros, con coloracin amarillo-naranja) (C. Blanco Tirado, E.E. Stashenko, M.Y. Combariza and J. R. Martnez, J. of Chromatogr. A, 1995, 697, 501).

La composicin de las esencias aisladas de la cscara de frutos ctricos depende del grado de maduracin de la fruta (Figura 5B). La mayor generacin de metabolitos secundarios voltiles (representados por el limoneno) se registra en esencias extradas de frutos en la etapa intermedia de maduracin (coloracin verde-amarilla de la cscara) (Figura 6).

25 Area relativa (Ai/Astd) 20 15 10 5 0 I II III I II III I II III I II C. volkameriana C. reticulata C. sinensis C. nobilis Prensado en fro Arrastre con vapor

Figura 6. Variacin del contenido de limoneno en los aceites de ctricos, obtenidos por arrastre con vapor y prensado en fro, de frutos en diferentes estados de maduracin (I - 100% verde; II - 45-75% verde; III - frutos completamente maduros, con coloracin amarillo-naranja) (C. Blanco Tirado, E.E. Stashenko, M.Y. Combariza and J. R. Martnez, J. of Chromatogr. A, 1995, 697, 501). La composicin qumica de un aceite depende de su mtodo de obtencin. En el caso de la ruda (R. graveolens), solamente la extraccin con fluido supercrtico (SFE, CO2) permite aislar alcaloides, quinolinas y furanoquinolinas (Figura 7).
FID

FID FID

NPD

1,4-dimetilpiperazina 3-pirrolidinol 3-pyrrolidinol NPD NPD

20

40

60

80 100 Tiempo (min)

20

40

60

80

100 Tiempo (min.)

Figura 7. Cromatogramas en la columna DB-1 (detectores FID y NPD) del aceite esencial de R. graveolens obtenido por (A) extraccin con fluido supercrtico (SFE) y (B) destilacin - extraccin simultnea con solvente (DES) ( E.E. Stashenko, H.S. Villa and M. Y. Combariza, J. Microcolumn Separations, 1995, 7(2), 117). Los exquisitos extractos de las flores de Ylang-ylang (Cananga odorata) poseen diferentes composiciones qumicas dependiendo del estado de maduracin de la flor (Figura 8).

Flores Verdes

20

40

60

80

100
Flores Amarillas

120

20

40

60

80

100

Tiempo (min.)

Figura 8. Cromatogramas en la columna DB-1 del aceite de Ylang-ylang extrado de flores en diferentes estados de madurez (E.E. Stashenko, W. Torres and J.R. Martnez, J. High Resol. Chromatogr., 1995, 18(2), 101). Mientras que en las flores verdes abundan los hidrocarburos (mono- y sesquiterpenos), en las amarillas, totalmente desarrolladas, prevalecen los compuestos oxigenados (Figura 9, Tabla II).

Area relativa

16

(Ai/Aistd)

12 8 4 0 C ompuestos oxigenados livianos S esquiterpenos C ompuestos oxigenados pesados Monoterpenos

II

III

Figura 11. Variacin en la composicin de las esencias de Ylang-ylang obtenidas por destilacin - extraccin con solvente simultnea de flores en diferentes estados de maduracin: (I)- flores pequeas verdes, (II)- flores grandes, verdes y (III)- flores grandes, amarillas, completamente desarrolladas (E. E. Stashenko, W. Torres and J. R. Martnez, J. High Resol. Chromatogr., 1995, 18(2), 101) Tabla II. Composicin del aceite esencial obtenido de las flores de ylang-ylang ( Cananga odorata) en diferentes estados de desarrollo (verdes pequeas-I, verdes grandes-II,

amarillas grandes-III) (E. E. Stashenko, W. Torres and J. R. Martnez, Chromatogr., 1995, 18(2), 101).
N pico 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 Compuesto DB-1 2-Metil-3-buten-1-ol 3-Metil-2-buten-1-ol 3-Z-Hexen-1-ol 2-Hexenol Acetato de 3-metil-2-buten-1-ilo Benzaldehdo -Pineno Canfeno -Pineno -Mirceno Acetato de 3-(Z)-hexenilo p-Metilanisol Alcohol benclico 1,8-Cineol (Eucaliptol) Limoneno trans--Ocimeno 2-Metoxi-fenol Benzoato de metilo p-Cresol Linalol Fenilacetonitrilo Acetato de bencilo Benzoato de etilo 2-Metoxi-4-metilfenol Salicilato de metilo -Terpineol 3,4-Dimetoxi-tolueno 1,4-Dimetoxi-benceno Nerol 2-Fenil-1-nitroetano Anetol Alcohol cinmico Metoxibenzoato de metilo Antranilato de metilo 850 857 860 862 902 926 930 942 968 982 986 997 1002 1018 1020 1037 1058 1067 1070 1084 1111 1133 1143 1158 1167 1171 1174 1205 1224 1246 1255 1265 1292 1296 Ik DB-WAX 1263 1322 1368 1382 1322 1490 1092 1127 1136 1166 1310 1409 1930 1230 1217 1250 1582 1900 1517 1703 1692 1634 1754 1661 1780 1808 2200 2180 I 0.210.03 9.640.95 1.300.89 3.030.22 0.490.04 0.340.04 0.230.09 0.320.09 0.350.15 0.160.02 20.952.81 0.150.01 0.250.01 0.170.05 -

J. High Resol.

Cantidad relativa *, % II 0.140.04 0.890.02 0.780.17 2.850.61 0.030.01 0.900.18 0.240.04 0.130.02 6.300.83 0.430.12 0.140.02 0.110.03 0.180.05 3.201.09 38.974.27 tr) 4.781.25 0.130.01 tr 0.130.01 0.130.03 0.100.05 0.270.09 tr III 0.070.01 0.060.01 0.280.05 0.330.08 0.940.02 1.870.32 0.660.11 0.160.05 0.160.04 9.651.46 2.200.60 0.090.01 0.070.01 0.140.03 0.170.03 6.501.42 0.090.03 35.491.14 0.140.02 11.631.87 1.460.44 0.070.01 0.290.19 0.140.02 0.170.01 0.130.01 0.270.04 0.200.02 0.350.10 0.260.04 0.050.01 0.080.03

Tabla II, continuacin

35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71

n-Butirato de bencilo 4-(2-Propenil)-fenol 4-Metoxibenzoato de metilo Benzoato de butilo Acetato de geranilo -Copaeno Acetato de 4-metoxifenilmetilo -Ylangeno -Cariofileno Acetato de cinamilo Isoeugenol -Cubebeno -Bourboneno -Humuleno Benzoato de 3-buten-2-ilo Metileugenol Germacreno D Sesquiterpenol, M 222 -Muuroleno -Amorfeno (E,E)-Farneseno Sesquiterpenol, M 222 -Cadineno -Cadineno Benzoato de Z-3-hexen-1-ilo trans-Nerolidol Oxido de cariofileno -Bisabolol Cedrol -Cadinol -Cadinol -Cadinol Muurolol T (E,E)-Farnesol Benzoato de bencilo Acetato de (E,E)-farnesilo Salicilato de bencilo

1305 1310 1320 1339 1359 1368 1376 1382 1417 1418 1429 1451 1455 1460 1467 1470 1475 1487 1492 1495 1496 1507 1515 1525 1545 1553 1555 1569 1584 1620 1629 1639 1639 1700 1724 1814 1828

1846 1839 1728 1482 1471 1575 2102 1560 1586 1641 1942 1687 1661 1655 1755 1757 1759 1763 2008 1202 2021 2152 2122 2137 2148 2187 2340 2490 2234 2615

0.870.08 0.370.03 0.540.04 5.460.56 0.250.03 0.170.01 0.190.02 2.290.43 0.190.07 11.231.47 0.260.03 0.370.07 0.170.03 1.470.52 0.410.08 0.340.08 0.810.14 0.160.04 0.230.07 0.620.06 1.270.30 0.090.01 1.580.39 4.721.05 0.441.19 0.480.18

0.030.01 2.990.38 0.210.03 0.270.05 3.690.45 1.420.67 1.030.12 0.910.03 1.250.32 0.200.01 1.980.07 7.060.29 0.240.03 0.190.02 0.100.02 1.060.58 0.100.01 0.180.03 0.170.03 0.080.03 0.180.03 0.160.02 0.230.05 1.190.33 7.212.17 0.280.07 0.510.13

0.040.01 0.080.02 0.060.01 0.080.02 1.960.09 0.130.03 0.110.02 0.160.04 1.690.27 2.090.39 0.370.08 0.580.07 0.740.11 0.710.03 0.860.06 5.550.17 0.120.02 0.140.04 0.130.04 2.340.05 0.160.03 0.120.01 0.190.01 0.130.03 0.070.02 0.070.01 0.110.02 0.120.03 0.120.01 0.840.04 6.191.78 0.610.30 1.370.48

* Los porcentajes fueron calculados con base en las reas de los picos en la columna DB-1

ntre los compuestos mayoritarios de los aceites esenciales figuran los terpenoides. Estos compuestos son las sustancias ms abundantes en el mundo de los productos

naturales y estn formados por varias unidades isoprnicas, cuyo nmero sirve como criterio para la clasificacin de los terpenos:

H2 C

CH

CH2

CH3
ISOPRENO (2-metilbutan-1,3-dieno, C5H8)
Nombre Monoterpenos Sesquiterpenos Diterpenos Sesterterpenos Triterpenos Carotenoides Resinoides Unidades isoprnicas 2 3 4 5 6 8 n Numero de tomos de carbono C10 C15 C20 C25 C30 C40 (C5)n

Durante los ltimos 60 aos los terpenoides han sido objeto de intensa investigacin, por ejemplo en el rea de qumica orgnica: estudio de mecanismos de reacciones (carbocationes y sus reordenamientos); en el establecimiento de relaciones tipo estructura molecular - color, estructura molecular - olor; en el estudio de reactividad de sistemas cclicos y en el anlisis conformacional. En cuanto a su aplicacin y comercializacin los terpenoides han sido productos tradicionales en la industria perfumstica, en la elaboracin de cosmticos, jabones, fragancias, aromatizantes de alimentos, colorantes naturales y otros productos utilizados como desinfectantes, detergentes, preparaciones farmacuticas y suplementos vitamnicos. Aunque algunos terpenoides se aislan de las plantas, muchos de ellos se sintetizan industrialmente a gran escala. Los terpenoides presentes en las plantas y otros organismos vivos que los metabolizan estn involucrados en numerosos procesos bioqumicos cumpliendo diversas funciones como hormonas sexuales, feromonas de insectos, sustancias reguladoras de crecimiento,

insecticidas naturales, pigmentos, receptores en el proceso de visin en los animales. La distribucin de terpenoides puede servir como base de la identificacin taxonmica de plantas y microorganismos. Su implicacin directa en interacciones planta - insecto y planta - planta yace en el fundamento de la naciente ciencia Qumica ecolgica. En los ltimos aos un gran nmero de terpenoides (ms de 15000) que se encuentran en la naturaleza han sido aislados y caracterizados. Existen por lo menos 38 tipos diferentes de esqueletos de monoterpenoides, alrededor de 200 de sesquiterpenoides y han sido descubiertas cerca de 500 molculas individuales de iridoides, uno de los grupos de monoterpenoides.

MONOTERPENOIDES L os compuestos monoterpnicos forman parte de la mayora de los aceites esenciales que se extraen de las flores, hojas y tallos de plantas aromticas. Comnmente se presentan como mezclas isomricas muy complejas y de difcil separacin. Solamente el alcanfor puede ser aislado en forma bastante pura a travs de un proceso de cristalizacin de la esencia que lo contenga. Los monoterpenoides de acuerdo con su estructura pueden ser divididos en los siguientes grupos: Monoterpenoides acclicos Monoterpenoides monocclicos Monoterpenoides bicclicos

MONOTERPENOIDES ACICLICOS

a estructura de los monoterpenoides acclicos puede ser deducida a partir del hidrocarburo, 2,6-dimetiloctano. A travs de las reacciones de ozonlisis se ha

establecido que los monoterpenoides se encuentran bsicamente en dos formas, con el grupo isopropilidnico (ismero ) y grupo isopropenlico (ismero ):

2,6-Dimetiloctano

Ismero
(grupo isopropilidnico)

Ismero
(grupo isopropenlico)

Como se ha mostrado por la espectroscopa infrarroja en la naturaleza la mayora de los monoterpenos acclicos se encuentran bsicamente en forma isopropilidnica (ismeros ). Los ismeros pueden ser preparados sintticamente o se forman en los aceites esenciales por medio de diversos procesos de isomerizacin que tienen lugar durante la pirlisis de los alcoholes y sus acetatos, el craqueo trmico de los terpenos cclicos, el tratamiento con radiaciones UV y gamma o por el contacto con superficies catalticamente activas. Tres monoterpenos alicclicos se encuentran en la naturaleza: ocimeno, mirceno y alloocimeno. El mirceno existe en forma de dos ismeros: - y -; los otros dos monoterpenos se presentan en 4 formas isomricas: cis- -ocimeno, trans--ocimeno, cis- -ocimeno, trans--ocimeno y 4-trans-6-trans-allo-ocimeno, 4-trans-6-cis-allo-ocimeno, 4-cis-6-transallo-ocimeno y 4-cis-6-cis-allo-ocimeno. En la industria, el mirceno se obtiene por medio del craqueo trmico del -pineno. El craqueo del -pineno produce ocimeno, bsicamente el ismero cis--. Los -ocimenos tambin se obtienen por medio de la pirlisis del acetato de linalol. El -mirceno se utiliza

en la industria para la obtencin de compuestos aromatizantes como linalol, geraniol, mircenal y mircenol, entre otros. Los monoterpenoles acclicos, C10H18O, ms abundantes en la naturaleza son linalol, nerol y geraniol: OH CH2OH
Linalool Nerol Geraniol

CH2OH

El linalool se encuentra en la naturaleza en diferentes formas pticas (+)-, (-)- y ()-, cuyas propiedades y constantes fisicoqumicas son muy similares aunque tienen olores diferentes. Se encuentra en aceites de bergamota, ylang-ylang, lavanda, geranio, etc. Se utiliza como componente importante de preparaciones perfumsticas, como materia prima para la obtencin de citral, acetato de linalilo y otros ingredientes aromatizantes. El linalol posee propiedades bactericidas, sedantes y puede actuar como atrayente para algunos insectos y repelente para otros. Es empleado tambin en la sntesis de la vitamina E y otros preparados medicinales. La produccin mundial del linalol alcanza 6.000 toneladas/ao. El nerol posee una agradable y tenue fragancia que evoca el aroma de las rosas, est presente en muchos aceites esenciales y es una materia prima valiosa en la industria de perfumes. El geraniol se encuentra ampliamente distribuido en la naturaleza, bsicamente en forma de steres en los aceites de geranio, citronela, rosa, palmarrosa y otros. Se utiliza como componente aromatizante de jabones, artculos de limpieza, productos de perfumera, en la industria qumica se usa para la sntesis de citronelol, citral, acetato de geranilo y otros compuestos de inters perfumstico. La produccin mundial de geraniol alcanza 10.000 toneladas/ao.

Por medio de la reaccin de hidrogenacin parcial del geraniol se obtiene industrialmente el citronelol, un alcohol terpnico con intenso olor a rosas:

OH Citronelol

La oxidacin del geraniol y del nerol produce los aldehdos biinsaturados, geranial y neral, respectivamente, comnmente conocidos como citral A y citral B:

CHO CHO

Geranial (Citral A)

Neral (Citral B)

La mezcla de citrales A y B es muy difcil de separar y se conoce con el nombre de citral, cuya condensacin con acetona en condiciones cidas de reaccin produce la mezcla de dos ismeros, -ionona y -ionona, sustancias cuyo aroma en soluciones muy diluidas recuerda la dulce fragancia floral de las violetas:

O CH CHCCH3 CH

O CHCCH3

-Ionona

-Ionona

MONOTERPENOIDES MONOCICLICOS

a estructura de los terpenoides monocclicos puede ser deducida del ciclohexano bisustitudo; p-mentano, en cuyo anillo el grupo isoproplico, el ms voluminoso,

ocupa una posicin ecuatorial:

p-Mentano

Los monoterpenoles monocclicos se encuentran estereoqumicamente en forma de silla, con excepcin de los cineoles y del ascaridol, que poseen en su estructura un enlace con puente de oxgeno:

1,4-Cineol

1,8-Cineol

Ascaridol

Tericamente pueden existir 14 dienos isomricos con el esqueleto molecular del ellas se encuentran en la naturaleza:

p-

mentano. Actualmente todas estas molculas han sido sintetizadas. Sin embargo, slo 6 de

Limoneno

-Felandreno

-Felandreno

Terpinoleno

-Terpineno

-Terpineno

Bajo la accin de superficies cidas (e.g.. la slica gel), la irradiacin con rayos gamma o UV, o en la presencia de cidos (bases) estos monoterpenos pueden fcilmente isomerizarse, interconvirtindose uno en otro. A partir del -terpineno, por medio de una reaccin de oxidacin fotosensibilizada, se obtiene el ascaridol, el nico perxido terpnico que se encuentra en la naturaleza, bsicamente en el aceite de Paico (Chenopodium ambrosioides) y en el Boldo. Los alcoholes terpnicos monoinsaturados se forman por medio de los procesos de hidratacin de los p-mentadienos; se pueden distinguir varios grupos isomricos: pulegoles, isopulegoles, terpineoles, etc.:

OH

HO

HO

HO

HO

Isopulegol

Neoisopulegol

Neo-iso-isopulegol

Iso-isopulegol

Terpinen-1-ol

OH

CH3

OH

OH Terpinen-4-ol

OH -Terpineol -Terpineol -Terpineol

Entre los alcoholes monocclicos saturados figuran los cuatro ismeros del mentol y del carvomentol, sustancias abundantes en las plantas aromticas del gnero Mentha:

OH Mentol Neomentol

OH

OH Isomentol

OH Neoisomentol

HO

HO

HO

HO

Carvomentol

Neocarvomentol

Isocarvomentol

Neoisocarvomentol

Entre las cetonas monoterpnicas diinsaturadas ms abundantes en la naturaleza, se encuentra la carvona, que figura entre los componentes mayoritarios de los aceites de alcaravea, eneldo y de menta spearmint. En las esencias de menta (diferentes especies) se encuentran las cetonas piperitenona e isopiperitenona:
O O O

Carvona

Piperitenona

Isopiperitenona

En la naturaleza las cetonas monoinsaturadas ms abundantes son pulegona, piperitona, junto con isopulegona e iso-iso-pulegona :

O H

Piperitona

Pulegona

Isopulegona

Iso-isopulegona

Las cetonas saturadas con grupos funcionales en los tomos C2 y C3, forman respectivamente series de carvomentonas y mentonas, componentes bsicos de las esencias de las plantas de gnero Mentha:
H

CH3 O

H3 C

H3 C

CH3

Carvomentona

Isocarvomentona

Mentona

Isomentona

MONOTERPENIODES BICICLICOS La serie del carano L os monoterpenos bicclicos de esta serie tienen el esqueleto molecular del carano:

Carano

cis-Carano

trans-Carano

El carano existe en las formas isomricas cis- y trans-, pero ninguna de ellas se encuentra en la naturaleza. Estas se preparan por reduccin de los caranoles y caranonas. El compuesto ms comn de esta familia es el 3-careno:

3-Careno El 3-careno se encuentra prcticamente en todas las especies vegetales y se obtiene industrialmente por la destilacin fraccionada de algunas calidades de trementina. Por medio del tratamiento con cidos (bases) o la irradiacin UV (o gamma) en presencia de sustancias fotosensibilizadoras (benceno, tolueno, etc.) o a travs del tratamiento con superficies activas, el 3-careno se isomeriza a 2-careno y otros terpenos monocclicos entre los cuales figuran el -terpineno, el diterpeno, el terpinoleno y el silvestreno.

 2-Careno Entre los compuestos oxigenados de la serie del carano se encuentran distribuidos en la naturaleza los caranoles y las caranonas, por ejemplo:
OH O

cis-Caran-trans-2-ol

4-Caranona

La serie del tuyano

os monoterpenos bicclicos de la serie del tuyano tienen los esqueletos bsicos de los tuyanos isomricos, cuyas configuraciones absolutas son las siguientes:

(+)-cis-Tuyano

(+)-trans-Tuyano

En la naturaleza existen 4 tuyenos isomricos:

CH3 H H CH3

-Tuyeno

-Tuyeno

-Isotuyeno

Sabineno

Estos monoterpenos se encuentran difundidos en los aceites esenciales del gnero Eucalyptus; el sabineno est presente en alta concentracin en la esencia de Savin. En los aceites esenciales del gnero Salvia se encuentran las monoterpenonas saturadas de la serie del tuyano, la tuyona y la isotuyona:

H3C

H3C

Tuyona

Isotuyona

Entre los alcoholes tuylicos obtenidos por medio de la reduccin de la tuyona y de la isotuyona se encuentran en la naturaleza los siguientes ismeros:

H3C

OH H

H3C

H OH

CH3

CH3 OH H

OH

Tuyol

Neotuyol

Isotuyol

Neoisotuyol

Los alcoholes insaturados de la serie del tuyano se obtienen por medio de la oxidacin fotosensibilizada del -tuyeno:
OH OH

OH trans-4-Hidroxi--tuyeno Umbellulol cis-Sabinol

La umbellulona, producto de la oxidacin del umbellulol, se encuentra en la naturaleza y por primera vez fue detectada en la esencia de hojas de Laurel californiano:

O Umbellulona

Bajo el efecto de la radiacin UV o gamma la umbellulona se convierte en el timol:

OH Timol

La serie del pinano L a fuente de los terpenos de la serie del pinano es la trementina, que contiene grandes cantidades de -pineno y -pineno:

-Pineno

-Pineno

Los - y -pinenos son productos importantes en la industria de sntesis orgnica fina y en perfumera. Entre los compuestos oxigenados de la serie del pinano se encuentran difundidos en la naturaleza las cetonas verbenona, crisantenona y pinocarvona:

O Verbenona

O Crisantenona

Pinocarvona

Entre los alcoholes monoinsaturados se hallan los ismeros del verbenol y del pinocarvenol:

OH OH H cis-Verbenol H OH trans-Verbenol cis-Pinocarveol H

OH H trans-Pinocarveol

Los alcoholes saturados de la serie del pinano se encuentran en la naturaleza en diferentes formas isomricas:

H OH H Verbanol

H H OH Neoverbanol

H OH H Isoverbanol

H H OH Neoisoverbanol

OH H

OH H

OH H

OH H

Pinocanfenol

Neopinocanfenol

Isopinocanfenol

Neoisopinocanfenol

H3C

OH

H3C

OH

HOH2C

HOH2C

cis-2-Pinanol

trans-2-Pinanol

cis-Mirtanol

trans-Mirtanol

La serie del canfano

os monoterpenos de la serie del canfano se encuentran en la trementina, en los aceites esenciales extrados de pino, abeto, ciprs, etc.:

Canfeno

Canfano

Bornileno

exo -Isocanfeno

endo -Isocanfeno

Tricicleno

Entre los compuestos ms importantes de la serie del canfano figuran el alcanfor y el borneol (componentes de las esencias de plantas de los gneros Salvia y Rosmarinus), junto con algunos de sus ismeros y derivados:

O O O epi-Alcanfor Isofenchona Borneol OH

Alcanfor

HO

Isoborneol

El alcanfor es uno de los terpenos ms importantes en la industria, y aunque puede ser aislado en forma pura de los aceites que lo contienen, actualmente se sintetiza a partir del pineno.

La serie del fenchano

ntre los monoterpenos que pertenecen a esta serie los -, -, y -fenchenos son los que se hallan ms frecuentemente en las esencias de plantas de diferentes gneros:

-Fencheno

-Fencheno

-Fencheno

Aunque existen 8 alcoholes con el esqueleto molecular del fenchano, en la naturaleza se encuentran los siguientes:

HO HO -Fenchol -Isofenchol OH -Isofenchol

-Fenchol

OH

En los aceites esenciales de plantas aromticas de la familia Umbelliferae (eneldo, hinojo, cilantro, ans, etc.) se encuentran las cetonas de la serie del fenchano:

Fenchona

O Isofenchona

O -Fenchocanforona

O -Fenchocanforona

SESQUITERPENOIDES

os sesquiterpenoides se definen como el grupo de hidrocarburos terpnicos C15, compuestos de tres unidades isoprnicas. Son productos del metabolismo secundario

de las plantas y se encuentran prcticamente en todos los aceites esenciales, obtenidos por arrastre con vapor, extraccin con solventes o fluidos supercrticos. Los primeros estudios de sesquiterpenos fueron desarrollados por Wallach, Semmler y particularmente, por Ruzicka. Las investigaciones en el rea de los sesquirterpenos se incrementaron con velocidad exponencial paralelamente con el desarrollo de los mtodos de separacin, purificacin, sntesis y anlisis estructural. apenas a 50. Las estructuras sesquiterpnicas se pueden dividir en acclicas, mono-, bi-, tri- y tetracclicas. Entre los sesquiterpenoles acclicos, el farnesol y el nerolidol, junto con sus acetatos, son los ms frecuentes sobre todo en las esencias extradas de las flores o de la cscara de algunas frutas (manzanas, peras, etc.) Actualmente se conocen ms de 2000 estructuras sesquiterpnicas. En los aos 70 esta cifra alcanzaba 600 mientras que en los 50 llegaba

OH Farnesol

HO Nerolidol

El inters hacia las estructuras de tipo farneseno se despert a raz del descubrimiento de la hormona juvenil extrada de Hyalophora cecropia, que posee el efecto de prevenir la metamorfsis de insectos inmaduros y se biosintetiza a partir del pirofosfato de farnesilo:

CO2CH3 O Hormona juvenil

A continuacin se presentan ejemplos de los sesquiterpenoides ms abundantes, clasificados por grupos de sustancias mono-, di-, tri- y tetracclicas: Sesquiterpenos monocclicos:

(+)--Bisaboleno

(-)--Zingibereno

-Humuleno

Sesquiterpenos bicclicos:

(-)--Muuroleno

(-)- -cis-Bergamoteno

H HO H

-Cariofileno

Carotol

Sesquiterpenos tricclicos:
H OH H (+)--Ilangeno Cedrol H (-)--Copaeno H

Sesquiterpenos tetracclicos:

Neocloveno

Longicicleno

CLASIFICACIN

Los aceites esenciales se clasifican con base en diferentes criterios: consistencia, origen y naturaleza de los compuestos mayoritarios, entre otros. De acuerdo con su consistencia las esencias se dividen en: fluidas, blsamos y oleorresinas. Esencias fluidas son lquidos muy voltiles a temperatura ambiente. Blsamos principalmente contienen sesquiterpenoides y su consistencia es ms viscosa, son poco voltiles y propensos a polimerizarse (blsamo de Copaiba, blsamo de Per, etc.). Oleorresinas tienen el aroma caracterstico de las plantas y son tpicamente lquidos muy viscosos o sustancias semislidas (caucho, guttapercha, oleorresinas de pprica, de pimienta negra, de clavero, etc. ) (Tabla III). Por su origen las esencias se clasifican como naturales, artificiales y sintticas. Las

esencias naturales se obtienen directamente de la planta y no se someten posteriormente a ninguna modificacin fsicoqumica o qumica, son costosas y variables en su composicin. Las esencias artificiales se obtienen a travs de los procesos de enriquecimiento de la misma esencia con uno de sus componentes, o son las mezclas de varias esencias naturales extradas de distintas plantas, por ejemplo, la mezcla de esencias de rosa, geranio y jazmn enriquecida en linalol, o la esencia de ans enriquecida en anetol. Las esencias sintticas son mezclas de diversos productos obtenidos por medio de

procesos qumicos. Se utilizan ampliamente en la preparacin de sustancias aromatizantes y saborizantes (esencias de vainilla, limn, fresa, etc. ) (Tabla III). Segn la estructura qumica de los componentes mayoritarios que determinan el olor particular de los aceites, stos se dividen en tres grupos principales: Tabla III. Clasificacin de los aceites esenciales. CRITERIO CLASIFICACIN
Lquidos FLUIDOS

EJEMPLOS
muy voltiles a

temperatura ambiente: esencias de menta, salvia, limn, albahaca, etc.

De

consistencia y

espesa, propensos

poco a

CONSISTENCIA

BLSAMOS

voltiles

polimerizarse: blsamo de copaiba, blsamo de Per, etc. Lquidos muy viscosos o sustancias OLEORRESINAS semislidas: caucho, gutapercha, oleorresina de pprica, etc. Se obtienen directamente de la planta NATURALES y no fsica se a o someten ninguna qumica: posteriormente modificacin

esencias de plantas aromticas y flores. Se obtienen a travs de los procesos de enriquecimiento de la misma esencia con uno de sus componentes ARTIFICIALES principales, o son la mezcla de varias esencias naturales, por ejemplo, esencia de ans enriquecida con anetol. Mezclas de SINTTICAS MONOTERPENOIDES diversos productos

ORIGEN

qumicos obtenidos sintticamente. Esencias de albahaca, salvia, menta, etc. Esencias de ciprs, geranio, copaiba, jazmn,

NATURALEZA QUMICA DE LOS COMPONENTES

SESQUITERPENOIDES COMPUESTOS

jengibre, etc. Esencias de

OXIGENADOS MAYORITARIOS MONOTERPENOIDES SESQUITERPENOIDES COMPUESTOS OXIGENADOS

lavanda, ylang-ylang, etc.

El primero lo constituyen aceites esenciales que bsicamente contienen monoterpenos, C10H16, y monoterpenoides, C10H18, C10H20, C10H18O, C10H16O (aceites de albahaca, menta, romero, salvia, etc. ). El segundo lo constituyen aceites cuyos principales componentes son sesquiterpenos, C15H24 y sesquiterpenoides, C15H26, C15H26O, etc. (aceites de ciprs, copaiba, jengibre, etc. ) y el tercero est formado por las esencias cuyos

principales constituyentes son diferentes compuestos oxigenados, como alcoholes, cetonas, aldehdos, steres, teres y lactonas (aceites de geranio, jazmn, lavanda, rosa, ylang-ylang, etc. ). Los aceites de este ltimo grupo poseen olores pronunciados y caractersticos y se utilizan como valiosa materia prima para fabricacin de perfumes finos (Tabla III). En la Figura 10 aparece el cromatograma tpico del aceite de Copaiba (Blsamo) constituido por sesquiterpenos y sesquiterpenoles (Tabla IV).

30

35

40

Tiempo (min.)

45

Figura 10. Cromatograma en la columna DB-1 (60 m) del blsamo de copaiba (Copaifera officinalis) (E.E. Stashenko, H. Wiame, S. Dassy and J.R. Martnez, J. High Resol. Chromatogr, 1995, 18(1), 54) El aceite de Ylang-ylang (Cananga odorata) es un ejemplo tpico de aceite fluido, compuesto principalmente por sustancias oxigenadas, mono- y sesquiterpenos (Figura 11), cada uno de los cuales contribuye al aroma del aceite con diferentes notas aromticas (Figura 12).

 -Pineno Metilanisol Benzoato de metilo Linalol Acetato de bencilo Acetato de geranilo -Cariofileno Acetato de cinamilo Isoeugenol Germacreno D Farnesol Benzoato de bencilo ...ms de 80 componentes

20

40

60

80 Tiempo (min.)

Figura 11. Cromatograma en la columna DB-1 (60 m) del aceite esencial de Ylang-ylang (Cananga odorata) (E.E. Stashenko, J.R. Martnez, C. Macku and T. Shibamoto, J. High Resol. Chromatogr., 1993, 16(7), 441).
COMPUESTO Acetato de 3-hexenilo Acetato de bencilo Salicilato de bencilo Geraniol Linalol Acetato de linalilo Alcohol feniletlico Terpineol Cariofileno Benzoato de metilo Salicilato de metilo Pineno Farnesol NOTA herbceo floral, jazmn floral floral, rosa, geranio herbcea, lavanda floral, herbcea floral, rosa herbcea, lilas madera frutal frutal, medicinal madera frutal

Figura 12. Caractersticas odorferas de los principales componentes del aceite esencial de Ylang-ylang. Tabla IV. Composicin qumica del aceite de copaiba ( Copaifera officinalis) (E.E. Stashenko, H. Wiame, S. Dassy and J.R. Martnez, J. High Resol. Chromatogr, 1995, 18(1), 54)
Pico No. Compuesto Ik Cantidad relativa *, %

DB-1 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 17 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 -Elemeno -Ylangeno -Cubebeno -Copaeno -Cubebeno -Elemeno -Cariofileno trans--Bergamoteno -Copaeno -Guaieno -Humuleno Germacreno D Alloaromadendreno -Guaieno -Selineno -Muuroleno -Muuroleno -Selineno -Bisaboleno -Guaieno -Cadineno -Cadineno Calameneno C15H24 Himachaleno C15H24 C15H24 C15H24 C15H24 C15H26O Cedrol C15H24 Cadaleno 1341 1355 1379 1385 1394 1400 1429 1438 1445 1447 1460 1468 1478 1482 1485 1491 1495 1498 1500 1508 1515 1522 1525 1533 1538 1568 1585 1593 1604 1613 1622 1635 1647

DBWAX 1452 1465 1475 1488 1532 1600 1597 1586 1631 1652 1700 1713 1648 1662 1723 1685 1727 1725 1733 1713 1753 1753 1827 1823 1914 1935 1960 1988 2069 2077 2200 1.59 2.90 1.99 20.73 2.65 0.87 24.70 0.41 0.49 0.25 2.67 2.30 1.79 0.47 4.07 1.24 0.71 0.79 1.53 0.93 5.51 7.71 0.21 0.47 1.05 0.18 0.33 0.19 0.21 1.23 4.83 1.15 0.73

* Los porcentajes fueron alculados con base en las reas de los picos en la columna DB-1 (60m)

APLICACIONES

ctualmente se han analizado ms de tres mil aceites esenciales de un gran nmero de especies botnicas. Ms de doscientos aceites tienen un alto valor

comercial y se utilizan ampliamente en diferentes ramas de la industria (alimentos, jabones, ambientadores, perfumes, cosmticos, licores, insecticidas, frmacos, etc.).

Las esencias naturales son empleadas como aromatizantes ( ans, cardamomo, clavo, menta, tomillo, naranja, etc.) y/o saborizantes ( ans, eneldo, hinojo, limn, naranja, etc.), como ingredientes de algunos preparados farmacuticos ( calndula, eucalipto, manzanilla, menta, salvia, etc.) o son base de perfumes y productos cosmticos finos (albahaca, geranio, jazmn, salvia, rosa, ylang-ylang, etc.), desodorantes, lociones, jabones lquidos (organo, salvia, yerbabuena, etc.), pastas dentfricas (ans, eucalipto, menta, organo, tomillo, etc.). Algunos de los aceites esenciales poseen propiedades insecticidas y fungicidas (ajenjo, citronella, ciprs, enebro, eucalipto, pino, etc.) y se utilizan en los preparados especiales. El valor comercial y el uso del aceite esencial dependen bsicamente de su composicin qumica, la cual a su vez est condicionada por diversos factores de tipo botnico y agrcola. La composicin final del aceite depende fuertemente del mtodo de extraccin.

OBTENCIN

ara la obtencin de esencias se emplean diferentes tcnicas de extraccin, cuya descripccin comparativa apareca en la Tabla V.

Tabla V. Anlisis comparativo de los principales mtodos de extraccin de aceites esenciales. MTODO DE EXTRACCIN DESTILACIN CON VAPOR VENTAJAS Mtodo industrial y de laboratorio. Buenos rendimientos en aceite extrado. Obtencin del aceite puro, libre de solvente. Bajo costo; LIMITACIONES Procesos colaterales como polimerizacin y resinificacin de los terpenos; hidrlisis de steres; destruccin trmica de algunos componentes; no

tecnologa no sofisticada. EXTRACCIN CON SOLVENTES VOLATILES (ter de petrleo, pentano, hexano, etc.) Uso de temperaturas bajas. No provoca termodestruccin ni alteracin qumica de los componentes del aceite. Posibilidad de separacin de componentes individuales. Alto rendimiento. Ecolgicamente limpio. Fcil retiro y reciclaje del solvente. Bajas temperaturas de extraccin. No hay alteracin qumica del aceite. Cambiando parmetros operacionales se puede variar la composicin del aceite. Uso de bajas temperaturas. Ausencia de destruccin trmica y deterioro qumico de los componentes del aceite. Extraccin de esencias de flores delicadas (rosa, jazmn, azahar, etc.)

es aplicable a flores. Costoso, contaminante del ambiente, riesgo de incendio y explosin. Difcil separar completamente el solvente sin alterar la composicin el aceite. Coextraccin de cidos grasos, ceras, pigmentos. cidos grasos, pigmentos y ceras tambin pueden ser extrados junto con el aceite esencial.
ALTA INVERSIN INICIAL

EXTRACCIN CON CO2 SUPERCRITICO

MACERACIN CON SOLVENTES NO VOLATILES Y ENFLEURAGE

Operacin costosa, demorada. Poco rendimiento del aceite. Difcil separacin del solvente (aceites vegetales)

METODOS DIRECTOS Compresin de cscara Raspado de cscara Lesiones mecnicas de la corteza DESTILACIN Destilacin con agua (hidrodestilacin) Destilacin con agua y vapor Destilacin con vapor seco Destilacion-extraccion con solvente simultnea
D

 EXTRACCIN (MACERACIN) Con solventes voltiles Con solventes no voltiles (aceites vegetales) Con fluidos supercrticos

ENFLEURAGE Adsorcin slido-lquido y/o slido - gas.

Los mtodos directos se aplican principalmente a los ctricos. La tcnica de enfleurage se utiliza para extraccin de sustancias voltiles de flores delicadas (jazmn, rosa), que a veces siguen metabolizando el aceite varios das despus de su recoleccin. Por su sencillez, bajo costo y altos rendimientos, el arrastre con vapor es la tcnica ms usada en la industria de aceites esenciales. Varias Farmacopeas la recomiendan como el mtodo optimo de obtencin de esencias. Durante la extraccin por arrastre con vapor pueden ocurrir procesos colaterales, tales como polimerizacin y resinificacin de los terpenos, hidrlisis de steres y formacin de algunas sustancias artefactos debido al empleo de temperaturas elevadas. La tcnica de extraccin con solventes (ter de petrleo, pentano, ter etlico, etc.) permite obviar estos inconvenientes, al trabajar a temperaturas bajas sin alterar la composicin original del aceite. Sin embargo, esta tcnica es costosa, contaminante, presenta dificultades en aislamiento completo del solvente y adems algunas sustancias como cidos grasos, ceras, pigmentos y otros pueden ser coextrados con el aceite. Frecuentemente la maceracin con solventes orgnicos se usa particularmente para la obtencin de los componentes individuales, y ms a menudo, como etapa previa a la de arrastre con vapor.

El creciente inters por las extracciones utilizando fluidos supercrticos se desprende de diversas ventajas tanto econmicas, como operacionales que esta tcnica presenta sobre los mtodos de extraccin convencionales. El mtodo de extraccin con fluidos supercrticos presenta mltiples ventajas ( alto rendimiento, ecolgicamente limpio, fcil retiro y reciclaje del solvente, bajas temperaturas de extraccin, sin alteracin qumica del aceite) (ver Tabla V). El mtodo se basa en que los aceites esenciales son completamente miscibles con el CO2 lquido y su solubilidad es variable dentro de la regin supercrtica. La extraccin con fluidos supercrticos presenta muchas opciones para lograr y controlar la selectividad deseada, la cual es bastante sensible a variaciones en la presin, la temperatura y el tipo de solvente ( CO2, Propano). El extracto queda prcticamente libre de solvente, pudindose recuperar ste con prdidas mnimas por el calentamiento isobrico o descomposicin isotrmica. La extraccin de aceites con fluidos supercrticos ha cobrado especial inters durante la ltima dcada. Entre las limitaciones de esta tcnica figura el alto costo en la inversin inicial. En la Figura 13 aparecen los perfiles cromatogrficos del aceite de ylang-ylang obtenidos por destilacin-extraccin simultnea con solvente (A) y con fludo supercrtico (CO2, 1100 psi) (B). Se puede observar mayor recuperacin de sesquiterpenoides y compuestos oxigenados pesados con el metodo de fludo supercrtico (Figura 14).

11 19 20 22 4

47 55 62

81

84

80

64 1 2 15 28 8 36 78 67 77 0 20 40 Time (min.) 11 19 20 22 17 4 43 73 80 60 81 84 83 80 100 120

55 62

47

1 3

8 12 29

34 36 86

87 88 100 89 90

20

40 Time (min.)

60

80

120

Figura 13. Cromatogramas tpicos, en la columna DB-1 (60m), del aceite esencial de Ylang-ylang obtenido por (A) extraccin-destilacin simultnea con solvente y (B) fludo supercrtico (E.E. Stashenko, N. Quiroz and J.R. Martnez, J. High Resol. Chromatogr., 1996, 19(6), 353).

70

Area relativa, %

60 50 40 30 20 10 0 SFE SDE

Compuestos oxigenados livianos Sesquiterpenos, C15H24 Compuestos oxigenados pesados Monoterpenos, C10H16 Compuestos nitrogenados

Figura 14. Variacin en la commposicin del aceite esencial de Ylang-ylang obtenido por extraccin-destilacin simultnea con solvente (SDE) y fludo supercrtico (SFE) (E.E. Stashenko, N. Quiroz and J.R. Martnez, J. High Resol. Chromatogr., 1996, 19(6), 353). Un equipo de extraccin para este mtodo consta bsicamente de un sistema de compresin, una cmara de extraccin en donde se pone en contacto a una temperatura controlada el material vegetal y el gas comprimido, una cmara de expansin donde el gas se separa para volver a la etapa inicial, dejando un extracto libre de solvente. Esta ltima caracterstica cobra ms importancia a medida que se hacen ms exigentes las normas internacionales con respecto a la presencia de trazas de solventes orgnicos en artculos para el consumo humano. Por su disponibilidad y bajo costo, el CO2 es el gas ms empleado para este tipo de extracciones, las cuales encuentran creciente aplicacin a nivel industrial, como lo atestigua el gran nmero de patentes otorgadas. Como se mencion anteriormente, la gran versatilidad de esta tcnica surge de la solubilidad de una sustancia orgnica en un solvente, y est relacionada con la densidad de este ltimo, que en el caso de los fluidos supercrticos esta puede variarse contnuamente

sobre un amplio rango a travs de la temperatura y la presin. Esto permite sintonizar el solvente al problema en cuestin y llevar a cabo extracciones selectivas. Otras ventajas sobre las tcnicas de extraccin convencionales son bajo riesgo de incendio y la baja contaminacin ambiental. Dentro de las desventajas figuran el alto costo de la inversin inicial y la extraccin preferencial de sustancias oxigenadas. Tal como en las otras tcnicas de extraccin es preciso optimizar las variables operacionales a fin de lograr mejores resultados, pero el numero de variables es mayor (temperatura, presin, tiempo de contacto), as como su intervalo de valores. Para el caso del CO2 las temperaturas y presiones de inters estn por encima de 32C y 82 atms, respectivamente. En general, para describir ms completamente la composicin de los metabolitos secundarios voltiles y semivoltiles de plantas, es menester combinar varias tcnicas de aislamiento. As, los mtodos de arrastre con vapor y destilacin-extraccin simultnea con solventes recuperan con mayor eficiencia monoterpenos y sus derivados oxigenados. La extraccin con solventes, asistida por la radiacin de microondas y la extraccin con fludos supercrticos enfocan el aislamiento de metabolitos secundarios hacia productos ms pesados : sesquiterpenoides, hidrocarburos mayores de C20 y diterpenos, como se observa en la Salvia negra (Lepechinia schiedeana) (Figura 15, Tabla VI)

PROPIEDADES

as esencias son generalmente lquidos a la temperatura ambiente, incoloros cuando se encuentran puras y poseen el aroma peculiar de las plantas de las cuales se extraen.

Las esencias de ajenjo y manzanilla presentan un color azul, debido a que contienen el hidrocarburo sesquiterpnico, chamazuleno.

Figura 15. Cromatogramas tpicos, en la columna HP-1 (60m), de los extractos de Salvia negra (Lepechinia schiedeana) obtenidos por A) arrastre con vapor, B) extraccin destilacin simultnea con solvente, C) extraccin con fludos supercrticos y D) extraccin con solventes asistida por radiacin de microondas. Tabla VI. Composicin qumica de los extractos de Salvia negra ( Lepechinia schiedeana) obtenidos por diferentes mtodos de extraccin.

Pico No. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44

Compuesto Tricicleno - Tuyeno - Pineno -Pineno Sabineno Canfeno Mirceno -Felandreno - 3-Careno p-Cimeno -Terpineno 1,8-Cineol Limoneno trans--Ocimeno - Terpineno n-Octanol Hidrato de transSabineno Terpinoleno Linalol Fenchona Tuyona Mircenal Terpinen-4-ol trans-Verbenol Fenilacetaldehdo Borneol Mirtenal -Terpineol Nerol Acetato de Bornilo Acetato de Nerol - Copaeno -Cubebeno Longifoleno -Elemeno Acetato de Linalilo -Gurgujeno Calareno -Cariofileno Aromadendreno Guaieno Humuleno Germacreno D Allo-aromadendreno

Area HP-1 Innowax del pico 922 1015 0.46 927 1020 tr 938 1101 0.50 965 1141 0.73 968 1156 tr 970 1114 tr 991 1160 4.66 993 1177 0.69 1000 1171 19.68 1009 1234 0.88 1015 1190 5.53 1018 1253 tr 1021 1199 tr 1046 1238 1.96 1048 1231 0.07 1069 0.81 1076 1077 1079 1086 1099 1105 1137 1144 1150 1169 1176 1190 1230 1272 1326 1368 1381 1388 1407 1415 1422 1429 1435 1449 1462 1465 1473 1477 1444 1274 1556 1410 1636 1715 1757 1594 1519 1458 1574 1591 1542 1529 1612 1662 1651 1682 1721 1662

Ika)

0.08 0.08 0.08

0.04 0.10 2.52 0.14 1.00

0.20 0.01 0.10

0.55 1.86 0.12 12.64 0.17 0.55 0.33 0.60 22.01 0.35 6.14 2.03 0.05 0.27 0.50 0.05 0.61 1.11 0.13 0.18 0.48 0.07 0.03 0.07 0.05 0.13 0.01 0.03 0.18 0.02 0.86 0.05 0.07 0.07 0.04 0.10 0.22 0.06 0.11 1.86 0.08 0.04 0.22 0.04

0.05 0.12 0.01 1.16 0.06 0.06 0.04 0.04 2.17 0.03 0.56 0.16 0.00 0.02 0.02 0.00 0.02 0.06 0.03 0.02 0.06 0.00 0.00 0.01 0.01 0.01 0.00 0.00 0.03 0.01 0.15 0.00 0.02 0.01 0.00 0.02 0.02 0.01 0.03 0.19 0.01 0.00 0.03 0.01

0.44 1.21 0.08 7.67

0.31 0.20 15.78 0.33 4.73

1.49 0.23 0.40

tr tr tr tr

0.26 0.02 0.03 0.03

0.03 0.03 0.02 0.03 0.03

0.31 1.15 0.09 6.35 0.13 0.53 0.24 0.52 15.90 0.31 4.65 1.55

0.03 0.03 0.03 0.03 0.01 0.02 0.03

tr 0.20 0.36 0.05 0.48 0.98 0.07 0.17 0.31 0.08 0.02 0.03 0.04 0.11 0.06 0.09 0.72 0.08 0.06 0.06 0.09 0.13 0.40 0.20 0.20 2.84 0.14 0.08 0.37 0.09 tr tr

0.02 0.01 0.01 0.01 0.01 0.01 0.05 0.01 0.01 0.01 0.01 0.02 0.02 0.00 0.00 0.01 0.02 0.01 0.01 0.18 0.03 0.02 0.01 0.03 0.33 0.03 1.16 0.16 0.11 0.05 0.02 0.05 0.00 0.21 0.01 0.02 0.02 0.03 0.42 0.12 0.10

1.29 0.15 0.29 0.03 tr tr 0.06 0.00 tr tr tr tr 0.15 0.02 tr 0.21 0.02 0.20 0.03 tr 0.10 0.09 tr 0.93 0.07 tr 1.11 0.10 0.05 0.01 0.32 0.01 0.12 0.01 tr 0.17 0.02 2.70 0.23 0.08 0.01 0.11 0.02 tr

0.09 0.34 tr 0.57 0.07 tr tr tr tr 0.06 tr 0.08 0.07 tr 0.07 tr 0.06 0.67 0.06 0.09 0.51 0.09 tr 0.18 3.09 0.13 0.08 tr

0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03 0.03

Tabla VI. 45 -Farneseno Contin 46 Biciclogermacreno 47 - Muuroleno

1484 1490 1494

1744 1676

2.10 0.24 tr 0.66 0.06

2.71 0.05 1.32

0.15 0.01 0.05

tr tr 3.93

0.03

4.84 0.06 tr

0.03 0.32

48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89
b)

N.I. - Cadineno -Cadineno - Selineno Calameneno Elemol - Muuroleno -Nerolidol -Bisabolol -Nerolidol Viridiflorol Ledol Globulol -Cadinol -Cadinol N.I. - Eudesmol 1-Eicoseno Hidrocarburo, C20 Hidrocarburo, C22 Ferruginol (PM 286)* N.I. N.I. N.I. Acetato de eudesmol N.I. Totarol* Abietal (PM 286)* Palustrol Diterpeno (PM 300) Diterpeno (PM 286) Diterpeno (PM 286) 4,4-Dimetil, 5 ,13androst-8-eno* Acetato de totarol * Abietol (PM 288)* Diterpeno (PM 316) 13-Isopropil-podocarpen12-ol, 20-al* Hidrocarburo, C25 N.I. N.I. N.I. Hidrocarburo, C27

1500 1497 1510 1512 1514 1524 1534 1547 1551 1555 1580 1585 1595 1620 1631 1663 1665 1994 2000 2200 2226 2252 2258 2274 2281 2284 2290 2303 2329 2339 2352 2390 2428 2437 2453 2463 2502 2500 2521 2531 2563 2700

1768 1772 1744 1842 2076 1769 2008 2029 2051 2163 2104 2150 2224 2248 -

1.41 tr 2.84 tr tr 0.08 tr 0.53 1.92 tr 0.05 36.87 tr 0.58 8.23 1.08 0.37 -

0.16 0.25

0.02 0.04 0.12 0.01 2.88 0.10 0.63 0.20 0.00

2.21 tr 0.13 0.03 0.06 0.04 0.30 0.02 tr 0.08 0.04 25.38 9.08 tr 0.16 0.23 0.20 -

0.23 0.01 0.01 0.00 0.00 0.04 0.00 0.01 0.02 3.17 1.28 0.03 0.02 0.03

1.97 3.57 0.27 tr tr 0.19 tr 0.07 0.86 tr 0.28 20.11 7.49 0.25 tr 0.15 tr 0.09 tr tr 0.28 0.17 0.23 0.32 0.12 0.17 1.05 0.26 1.35 4.93 0.20 0.32 2.93 0.99 1.09 1.62 4.33 0.99 0.25 tr tr tr

0.03 0.03 0.03

0.03 0.03 0.03 0.03 0.02 0.02 0.03 0.03 0.03

3.53 2.53 0.27 tr tr 0.08 0.26 tr 0.91 tr tr 20.34 2.31 8.13 0.26 0.12 0.18 0.07 0.07 0.07 0.24 0.25 0.13 0.20 0.25 0.14 0.13 0.27 1.23 0.13 2.46 0.87 0.92 0.39 0.55 0.05 0.31

0.02 0.02 0.05

0.00 0.01 0.00

0.03 0.01 0.03 5.54 0.01 0.01 0.00 0.09 0.01 0.04 0.07 0.23 0.03 0.16 0.01 0.26 0.01 0.00 0.05 0.09 0.02 0.19 0.05 0.49 0.17 0.23 0.16 0.19 0.06 0.28 0.22

0.03 0.03 0.03 0.03 0.01 0.03 0.03 0.03 0.03 0.02 0.01 0.02 0.03 0.03 0.61 0.10 0.01 0.02 0.03

3.61 0.50 0.99 0.17 0.30

Porcentajes calculados con base en las reas de los picos en la columna HP-1, promedio de tres extracciones. Tr-trazas *Identificado tentativamente

Por exposicin al aire los aceites esenciales se tornan espesos y se colorean intensamente. El olor de las esencias es extraordinariamente variable y constituye su caracterstica ms

definida; son muy poco solubles en agua, pero solubles en solventes orgnicos ( acetona, ter, pentano, alcohol etlico concentrado, etc.).

PROPIEDADES FISICOQUIMICAS

istoricamente, antes del uso de las tcnicas modernas del anlisis qumico instrumental (GC/MS, RMN-H1, RMN-C13, FT-IR, Cromatografa

multidimensional, anlisis headspace, etc.) la caracterizacin de aceites esenciales se limitaba a las siguientes determinaciones de propiedades macroscpicas: Solubilidad en varios solventes Punto (rango) de ebullicin Gravedad especfica Rotacin ptica ndice de acidez Nmero de ster Contenido de alcoholes y cetonas, y otros.

Valores de estos parmetros para un gran nmero de aceites se encuentran reunidos en los textos de Genter y Gildemeister & Hoffman. La evaluacin de estas constantes fisicoqumicas se realiza como un estudio preliminar con el fin de descubrir adulteraciones de los aceites voltiles, sobre todo para los que poseen alto valor comercial. ESTABLECIMIENTO DE LA COMPOSICIN QUMICA DE LOS ACEITES ESENCIALES A nteriormente, la identificacin de los componentes individuales del aceite se converta en una larga y tiempo-consumible operacin, que inclua el aislamiento y purificacin de stos (Cromatografa de capa delgada, cromatografa en columna, destilacin fraccionada, etc.) para su posterior determinacin estructural por mtodos qumicos tradicionales (Obtencin de derivados, reacciones de coloracin, pruebas de grupos funcionales, etc. )

El estudio de diferentes variables (Cultivo, condiciones geobotnicas, mtodos de extraccin, poca de recoleccin y partes de la planta, mtodos de almacenamiento y manejo del material vegetal, edad, actividad biolgica, propiedades organolpticas, etc. ) que condicionan la CALIDAD y la APLICABILIDAD del aceite esencial y, por ende, su precio y aceptabilidad en el mercado, se realiza a travs del establecimiento de la composicin qumica del aceite. MTODOS DE SEPARACIN E IDENTIFICACIN DE ACEITES ESENCIALES

Mtodos qumicos de separacin (Obtencin de derivados) Destilacin fraccionada Cromatografa de capa fina Cromatografia preparativa Cromatografia en columna Cromatografia lquida de alta eficiencia (Obtencin de fracciones) Cromatografia de gases (Columnas capilares de alta eficiencia)

Los mtodos modernos de anlisis de aceites esenciales estn fundamentados bsicamente en la cromatografa de gases capilar usando detectores convencionales, principalmente, de ionizacin en llama (FID) y selectivo de masas (MSD).

CROMATOGRAFIA DE GASES

nicialmente para el anlisis de los aceites esenciales se empleaban columnas empacadas, que permitan identificar satisfactoriamente slo componentes

mayoritarios de la mezcla. La aparicin en los aos ochenta de columnas capilares de alta eficiencia (columnas tubulares abiertas) de vidrio o de slica fundida con fases estacionarias entrecruzadas (cross-linked) e inmovilizadas (bonded) abri una nueva etapa en el anlisis de los aceites esenciales, pues permitan la deteccin de la mayora de los constituyentes de esencias, incluyendo componentes en trazas. Para la identificacin cromatogrfica se emplean diferentes sistemas de ndices de retencin, la mayora de los cuales se basa en el mtodo propuesto por Kovats. Para el anlisis se utilizan columnas cromatogrficas capilares de alta resolucin, que permiten separar las mezclas multicomponentes de las sustancias de diversa polaridad y/o ismeros (monoterpenos, sesquiterpenos, etc.). La identificacin de los componentes del aceite se realiza a travs de comparacin de los ndices de retencin de Kovats para dos fases estacionarias, polar y apolar, de las sustancias patrones, con los ndices de Kovats obtenidos para los componentes del aceite. Las fases estacionarias ms adecuadas son de CARBOWAX 20M (polietilenglicol, fase polar) y OV-101 (Ultra1, HP-1, DB-1, etc.) (polidimetilsiloxano, fase apolar). En la ltima dcada el desarrollo de la cromatografa multidimensional abri nuevas posibilidades en el anlisis de los aceites esenciales, sobre todo en la deteccin e identificacin de los compuestos minoritarios y en trazas a nivel de 10-14 gramos. El empleo de las columnas cromatogrficas con fases estacionarias quirales permite distinguir la presencia de ismeros pticos en los aceites.

CROMATOGRAFA DE GASES - ESPECTROMETRA DE MASAS

urante las dos ltimas dcadas se ha demostrado que el mejor mtodo para el estudio de la composicin de los aceites esenciales es la tcnica de acoplamiento

de cromatografa de gases con espectrometra de masas (GC/MS) . Es un mtodo completamente adecuado para la identificacin debido a que los componentes del aceite son compuestos voltiles y de bajo peso molecular (< 300 dalton). La esencia se aplica directamente al cromatgrafo sin ningn tratamiento previo. Esto elimina cualquier posibilidad de introducir modificaciones en la composicin de la muestra o en la estructura de sus constituyentes. Los componentes del aceite pueden ser simultneamente separados e identificados con base en sus tiempos e ndices de retencin y los espectros de masas, los cuales son caractersticos para cada sustancia. El mtodo GC-MS permite realizar en una sola operacin, para una muestra del orden de 1 L, un anlisis cualitativo junto con una indicacin de las proporciones en las que se encuentran los componentes. Cuando se dispone de sustancia patrn, la calibracin del equipo permite un anlisis cuantitativo exacto de la muestra. Los constituyentes del aceite se identifican tambin por sus espectros de masas (patrones de fragmentacin). La composicin de metabolitos secundarios en diferentes partes de la guaca (Spilanthes americana) fue establecida empleando cromatografa de gases de alta resolucin con diferentes detectores (FID, NPD, MSD). En la Figura 16 aparece el perfil cromatogrfico del extracto obtenido de las flores de guaca por SFE. Dentro de los componentes nitrogenados se destaca el espilantol, amida con propiedades insecticidas y medicinales. El espectro de masas del espilantol se muestra en la Figura 17. La diferencia composicional de los metabolitos secundarios de diferentes partes de la planta aparece en la Tabla VII.

6 13

23

52

60

F ID
73

F ID

37 70 67 65 57 80 56 7 3 0 15 50 16 18 69 71 72 74 75 77 76 78

24 32

79

T ie m p o (m in .)

100

60

NPD
N - i s o b u t i l - 2 Z ,6 E ,8 Z - d e c a t r ie n a m i d a ( E s p i la n t o l)
O (CH 3 ) 2 CHCH 2 NH C H H C C CH 2 H C CH 2 H C C C CH 3
67 57 65 66 68 71

NPD

H H

20

40

60 T ie m p o ( m i n .)

80

100

Figura 16. Cromatogramas del extracto de flores de Guaca (Spilanthes americana), columna DB-1 (60 m), FID y NPD (E.E. Stashenko, M. Puertas and M.Y. Combariza, J. Chormatogr. A, 1996, 725, 223).

Abundance 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 41 39 40 53

Scan 5133 (43.962 min): GUHSFE23.D (*) 81

141

68 86

98

126

115 60 80 100 120

142 140

155 167 178 192 206 221 160 180 200 220

Figura 17. Espectro de masas del Espilantol.

ESPECTROMETRIA DE MASAS

a identificacin confirmatoria de los componentes de los aceites esenciales se realiza con base en sus espectros de masas (MS). Se utilizan espectros de masas

obtenidos por el impacto de electrones (70 y/o 12-20 eV) y/o por la ionizacin qumica. Los espectros de ionizacin qumica son complementarios a los del impacto electrnico y especialmente tiles cuando en los espectros convencionales el in molecular (M+) no aparece. Varios analizadores msicos (magntico, cuadrupolar, de trampa inica) se utilizan en espectrmetros de masas acoplados a cromatgrafos de gases. En los ltimos aos los detectores de trampa inica se emplean cada vez con ms frecuencia en los estudios de mezclas complejas, incluyendo los aceites esenciales, sobre todo cuando se requiere alta sensibilidad en los anlisis.

TABLA VII. Composicin qumica de los extractos de tallos, hojas y flores de guaca (Sphilantes americana) obtenidos por SFE (E.E. Stashenko, M. Puertas and M.Y. Combariza, J. Chormatogr. A, 1996, 725, 223).
N pico en DB1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 41 42 43 44 45 46 47 48 49 COMPUESTO Ik DB-1 835 844 927 963 970 981 988 992 1004 1008 1017 1018 1019 1047 1076 1270 1275 1307 1333 1373 1376 1386 1400 1419 1428 1435 1452 1453 1464 1469 1474 1480 1486 1491 1492 1494 1500 1507 1511 1522 1531 1554 1566 1567 1586 1600 1606 1609 DB-Wax 1022 1018 1126 1120 1164 1169 1199 1211 1208 1272 1246 1391 1599 1582 2177 1497 1681 1542 1403 1607 1747 1601 1687 1668 1733 1699 1622 1769 1721 2007 1735 1765 1780 1871 2043 2008 1978 1919 1883 2065 Cantidad relativa, % Tallos Hojas 0.5992E-01 0.0411E-02 0.233E-02 0.6861E-01 0.0768E-03 0.0336E-03 0.0772E-03 2.293E-01 0.1632E-02 0.3311E-01 0.1359E-02 0.0853E-02 2.4793E-01 0.2549E-03 2.9996E-01 0.9011E+00 0.0862E-02 0.0692E-02 0.1293E-02 0.0761E-02 0.125E-03 0.1772E-02 0.2545E-02 0.6411E-02 0.092E-02 0.0481E-02 47.301E+00 30.203E+00 2.7123E-01 1.422E-01 0.0784E-02 0.1165E-02 0.1082E-02 0.1313E-02 0.152E-02 0.0612E-03 0.0587E-03 0.1063E-02 0.6641E-01 4.712E+00 0.0496E-03 3.4141E+00 0.062E-03 2.5353E-01 0.3871E-01 0.993E-01 0.1192E-02 0.5492E-01 13.571E+00 7.412E+00 0.0641E-02 0.1295E-03 0.1281E-02 0.2241E-01 0.2025E-02 0.1511E-01 0.101E-02 0.0673E-03 0.0988E-02 1.111E+00 0.4981E-01 0.0843E-02 0.2399E-02 0.1011E-02 0.0842E-02 Flores 0.0623E-04 0.7541E-01 0.1071E-02 4.6574E-01 0.2053E-02 0.0677E-03 0.0389E-03 0.0831E-02 0.8712E-03 2.8764E-01 0.087E-04 0.2232E-02 0.0388E-03 0.173E-02 0.0444E-03 0.0294E-03 0.0487E-03 29.581E+00 1.6793E-01 0.0821E-02 0.0294E-04 0.1021E-02 0.0241E-03 0.0932E-02 1.6013E-01 0.1132E-02 0.2153E-02 0.1332E-02 2.3013E-01 0.0353E-03 0.145E-02 0.1032E-02 0.0782E-03 0.0530E+00 0.0893E-04 0.023E-04 0.0377E-04 0.092E-02 0.0259E-03

2Iso He but Tuyeno Pineno Sa bin Pineno Mirceno Felandreno Fe 1,4 nil 1,8 ac Ci Felandreno p Ci trans- Ocimeno Fe 2nc Ac Un Ca eta nrva He Copaeno Pr opi Cubebeno IS TD Cariofileno Pr (n opi Cedreno on Amorfeno Guaieno Selineno Hu mu cis-Farneseno (Z) Ge -61rm Pe Ge Pe acr rm nta Bisaboleno Bisaboleno Farneseno Bu Tabla VII. tir continuacin Cadineno Bu Ne tir Ca rol ato Ox rio ido Ep ido fil Iso xi Pe pe Ce nta

50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80

Los

Pe Pe nta Ac nta no neta no No Va to 1, na ler Be Eoto Nnz 11, No Iso oat Sal ide but Nicil nti Ac Iso tao No ido but No ide he No ide nti Nide nti Co (2nti Nmp me Co (2ue Hi mp Fe Hi dr ue Co dr oc No mp oc Hi ide ue No dr nti No ide oc Hi ide nti No dr nti Hi ide oc No dr nti Hi ide oc dr nti espectros

1616 1642 1654? 1665 1668 1685 1723 1781 1830 1844 1853 1853 1946 1978 2006 2072 2098 2292 2351 2392 2493 2590 2607 2691 2790 2936 3077 3252

1921 1964 2687 2834 2546 2489 2290 2127 2907 -

0.1367E-02 0.0739E-03 3.1586E-01 0.075E-03 0.4172E-01 0.103E-02 0.1917E-02 10.124E-02 0.5475E-02 0.5275E-02 0.1754E-02 0.111E-02 0.9041E-01 0.0538E-03 0.231E-01 0.062E-02 0.1361E-02 -

0.0469E-03 13.92E+00 0.1685E-02 0.3291E-01 0.7978E-01 2.494E-01 0.2087E-02 0.2391E-01 21.42E+00 0.2823E-02 0.7844E-02 0.1967E-02 0.1394E-02 1.681E-01 0.2684E-02 1.021E-01 0.3953E-01 0.1272E-02 0.4192E-01 0.0885E-02 0.1375E-02 0.1376E-02 -

8.759E-01 0.1871E-03 0.0473E-03 0.6554E-02 1.5785E-02 0.1654E-03 0.8121E-02 17.032E-02 0.4531E-02 0.4523E-02 0.2694E-03 0.2794E-02 1.1825E-02 0.2331E-03 1.5081E-02 0.1775E-03 0.1453E-02 1.4526E-02 0.4762E-03 0.3983E-03 2.8232E-02 0.1781E-03 0.1497E-03 1.6792E-02 0.2143E-03 2.8436E-02 0.2484E-03 1.382E-02

de masas de terpenos, principales constituyentes de los aceites

esenciales, son en la mayora de los casos bastante parecidos. Su identificacin por los espectros est basada principalmente en las diferencias cuantitativas (intensidades de los iones). Sin embargo, las investigaciones de varios autores han permitido encontrar los criterios experimentales (relacin de las intensidades de los iones moleculares y caractersticos, espectros de masas de colisiones activadas, energas cinticas liberadas durante las transiciones metaestables, etc.) para la identificacin de terpenos (bsicamente, monoterpenoides) a travs de sus espectros de masas. Bibliotecas de espectros de terpenos, diferentes sistemas expertos para su identificacin, permiten hoy en da realizar con toda seguridad la correlacin tipo estructura-espectro de masas. Es necesario anotar que las correlaciones entre las estructuras de sesquiterpenos, C15H24, y sus espectros de masas no han sido estudiadas con tanto detalle como las de

los monoterpenoides. En varios trabajos la identificacin de sesquiterpenos se realiza a travs del uso de sus ndices de retencin. Se propone emplear simultneamente los datos de espectrometra de masas y los valores de ndices de retencin de Kovts para fases estacionarias polar y apolar, empleando como sustancias patrn hidrocarburos lineales y los steres etlicos de los cidos grasos. La estructura de un sesquiterpeno se considera establecida slo si coinciden los espectros de masas y los cuatro ndices de Kovts determinados experimentalmente con los datos reportados para compuestos patrn. EM de monoterpenos Los monoterpenos monocclicos (felandreno, -terpineno, -terpineno, terpinoleno), bicclicos ( 3-careno, -pineno, sabineno, canfeno) y acclicos (mirceno, allo-ocimeno) , poseen una fragmentacin caracterstica comn: presentan en sus EM el in m/z 93(>80%) como pico de base o de alta intensidad, producido por una ruptura allica en la molcula acompaada de la eliminacin de un radical C3H7. El in molecular M+ (m/z 136) es de intensidad media o baja (< 30%) y se descompone eliminando sucesivamente los radicales CH3 y C3H7, con formacin de los iones en m/z 121 y 93, respectivamente. El in (MC3H7)+ posteriormente pierde CH3 para generar el fragmento (M-C3H7-CH3)+ en m/z 79. En los EM de los monoterpenos se observan picos muy dbiles en la regin de masas pequeas (< m/z 79), lo que indica cierta estabilidad inherente del sistema cclico al impacto de electrones. La similitud cualitativa de los EM de los monoterpenos se atribuye a la rpida isomerizacin de sus iones moleculares debido a la fcil migracin de los enlaces dobles bajo el impacto de electrones, que conduce a la formacin de iones M+ isomerizados de estructura comn. Por consiguiente, estos iones poseen el mismo patrn de fragmentacin y las diferencias en las intensidades de los fragmentos caractersticos ( m/z 121, 93, 91, 79, 77) se deben solamente a las desigualdades iniciales en las energas conformacionales de los monoterpenos.

-Terpineno

El -terpineno posee en su espectro (Figura 18) los picos caractersticos para los monoterpenos, mencionados anteriormente.
Abundance 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 44 41 65 40 50 60 70 80 94 105 90 100 110 120 130 77 121 136

Scan 1495 (14.428 min): HOJLIM01.D (*) 93

30

Figura 18. Espectro de masas del -terpineno

+. - CH (CH3 )2 .
+ m/z 93(100% ) -2H. -CH3 . , -H.

C6 H5 + m/z 77(42.8% )

M+. m/z 136(29% )

+
m/z 91(42.8% )

Terpineno

- CH3 . +
m/z 121(83.7% )

- CH3 . , -H.

C8 H9 + m/z 105(22.8% ) -C2 H2 C6 H7 + m/z 79 (37.1% )

Esquema 1. Rutas de fragmentacin del -terpineno

Limoneno El compuesto mayoritario de los aceites esenciales de ctricos es el d-limoneno, un monoterpeno cclico con dos enlaces dobles aislados, cuyo espectro de masas aparece en la Figura 19. La ionizacin disociativa del d-limoneno se presenta en el Esquema 2. El in molecular M+ en m/z 136 (26.8%) tiene una estabilidad, Wm+ de 7.69% y su fragmentacin se caracteriza por una ruptura de tipo retro Diels-Alder (RDA), acompaada de la formacin de un pico de base en m/z 68 (100%). Otros iones importantes producidos a partir del in M+ por prdida del radical CH3, eliminacin del grupo isopropenlico y 2H son (M-CH3)+ en m/z 121(22.86%) y (MC3H5-2H)+ en m/z 93 (68.5%), respectivamente. El in (M-C3H5-2H)+ elimina posteriormente un radical CH3, originando el fragmento en m/z 79 (36.43%), tal como aparece en el Esquema 2.
Abundance 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 53 51 50 79 94 107 105 90 100 110 121 136 Scan 1042 (13.659 min): NARVEX01.D (*) 68 93

63 60 70

75

82 80

117 120 130 140

Figura 19. Espectro de masas del limoneno

+.

-CH3 .

(M-CH3 )+ m/z 121(22.8% )

-CH3 ., -H. -2H. -C2 H4

(M-2CH3 -H)+ m/z 105(5.7% )

-C2 H5 . M m/z 136 (25.9% )

+.

(M-C2 H5 )+ m/z 107(21.1% )

C6 H7 + m/z 79(36.4% ) -2H. C6 H5 + m/z 77(21.4% )

Limoneno

-C3 H5 ., -2H.

(M-C3 H5 -2H)+ m/z 93(68.5% ) +.

-CH3 ., -H.

RDA

-H.

m/z 67(74.3% )

m/z 68(100% )

Esquema 2. Rutas de fragmentacin del limoneno

EM de monoterpenoles La presencia del grupo -OH en las molculas de monoterpenoles modifica su fragmentacin generando nuevas rutas. Sus EM resultan ser ms complejos que los de monoterpenos correspondientes. Los iones moleculares de los alcoholes son generalmente de muy baja intensidad o a menudo no se detectan. En el caso de los monoterpenoles la presencia del grupo hidroxilo se puede confirmar por la aparicin en los EM de los iones (M-H2O)+ en m/z 136 y (M-H2O-CH3)+ en m/z 121. Monoterpenoles, tales como el terpineol, el terpinen-4-ol y el linalol, exhiben rutas de fragmentacin similares, generando iones caractersticos comunes en m/z 139, 136, 121 y 93.

-Terpineol

En el EM del -Terpineol (Figura 20) aparece el in C3H7O+ en m/z 59 (100%) como pico de base, que se produce por una ruptura del enlace exocclico. El fragmento m/z 59 decae posteriormente por eliminacin del CH3 y genera el in CH3CO+ en m/z 43 (35.4%). En el espectro del -terpineol el in molecular M+ en m/z 154 no se registra; sin embargo, los iones caractersticos (M-CH3)+ en m/z 139(7.1%), (M-H2O)+ en m/z 136 (34.2%), y (M-CH3-H2O)+ en m/z 121 (41.4%) indican su formacin inicial y permiten elucidar su peso molecular. El fragmento (M-H2O)+ en m/z 136 (34.2%), producto de la deshidratacin de la molcula ionizada, se disocia posteriormente eliminando los radicales CH3, C3H5 y 2H con formacin de los iones (M-H2O-CH3)+ en m/z 121(41.4%) y (MH2O-C3H5-2H)+ en m/z 93 (55.7%), respectivamente, tal como aparece en el Esquema 3:

Abundance 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 51 50 55

59

Scan 1829 (19.934 min): HOJMA01.D (*)

93 121 81 67 71 95 105 60 70 80 90 100 107 110 120 130 139 140 136

Figura 20. Espectro de masas del -terpineol

ruptura

+ OH

- CH3 .

CH3 C=O+ m/z 43(35.7% )

m/z 59(100% )

+. - CH3 . OH

RDA

+ OH m/z 71(8.5% )

+.
-H. m/z 68(14.3% ) C5 H7 + m/z 67(18.6% )

-H2 O + OH m/z 139(7.1% )

(M-CH3 -H2 O)+ m/z 121(41.4% )

PM 154 Terpineol
- H2 O

- CH3 . +.
RDA + m/z 91(8.6% )

-C3 H5 .,-2H. m/z 136(34.2% )

-2H. (M-H2 O-C3 H5 -2H)+ m/z 93(55.7% )

Esquema 3. Rutas de fragmentacin del -terpineol. Durante la reaccin RDA que ocurre en el in (M-CH3)+ se producen un fragmento oxigenado C4H7O+ (m/z 71) y su in complementario C5H8+ (m/z 68), este ltimo puede surgir tambin del rompimiento del tipo RDA en el fragmento (M-H2O)+ (m/z 136). La ocurrencia de la ruptura RDA en la molcula del -terpineol confirma la presencia y localizacin del enlace doble en el ciclo respecto al sustituyente 1-hidroxi-1-metiletilo. La presencia del grupo -OH (que no est unido directamente al ciclo, como en el caso del terpinen-4-ol) y su posicin en la molcula se corroboran por la aparicin en el EM de los iones (M-H2O)+, (M-H2O-CH3)+ y C3H7O+ en m/z 59 (100%). Este ltimo puede considerarse como el in diagnstico en el espectro de masas del -terpineol.

Terpinen-4-ol
En el EM del terpinen-4-ol (Figura 21) aparece el in molecular M+ en m/z 154 de intensidad mediana (13.4%). La presencia del grupo hidroxilo en la molcula se confirma por la aparicin de los fragmentos (M-H2O)+ en m/z 136 (7.1%), (M-H2O-CH3)+ en m/z 121 (5.71%) y (M-C3H7-H2O)+ en m/z 93 (46.1%). La localizacin del enlace doble en el

ciclo se corrobora por la reaccin monomolecular de tipo retro Diels-Alder (RDA) que ocurre tanto en el in M+ , como en el fragmento (M-C3H7)+ en m/z 111 (41.4%). Este proceso se acompaa por la formacin de fragmentos complementarios, hidrocarbonados C5H8+ en m/z 68(12.8%), C5H9+ en m/z 69 (26.4%) y oxigenados CH3CO+ en m/z 43 (47.1%), C5H10O+ en m/z 86 (37.8%), con distribucin de la carga positiva sobre ambas partes de la molcula disociada, respectivamente, tal como se observa en el Esquema 4.
Abundance 100 Scan 1774 (19.425 min): HOJLIM01.D 71

75
111

50
55 69 86 83

93

25
57 m/z-->0

97

136 121

154

Figura 21. Espectro de masas del terpinen-4-ol El pico de base en el espectro del terpinen-4-ol corresponde al fragmento oxigenado C4H7O+ en m/z 71 (100%) que se forma por eliminacin de un radical metlico del in C5H10O+ (m/z 86), producto de la reaccin RDA de la molcula ionizada. La posicin del grupo hidroxilo unido directamente al anillo ciclohexnico se ratifica por la formacin de los iones (M-C3H7)+ en m/z 111, (M-C3H7-H2O)+ en m/z 93 y del fragmento (M-C3H7C5H8)+ en m/z 43, producto de la reaccin RDA del in en m/z 111 (ver Esquema 4). Los fragmentos (M-C3H7)+ (m/z 111) y C4H7O+ (m/z 71) son iones diagnstico en el EM del terpinen-4-ol y permiten fcilmente distinguirlo de su ismero, -terpineol, cuyo espectro de masas se discuti anteriormente (ver Esquema 3).

- CH3 .
OH m/z 139(0.8% )
+

-H2 O

+.
-H2 O -CH3 .

m/z 121(5.7% )

+.

-C2 H4

m/z 136(7.1% )

OH
-H2 O M+. m/z 154(13.4% ) -2H.
+

Terpinen-4-ol

-C3 H7 .

+ m/z 93(46.1% ) m/z 91(17.3% )

+.
+ OH

RDA

m/z 111(41.4% )

CH3 - C

+ O

+
m/z 68(12.8% )

m/z 43(4.7% )

+H.

C5 H9 + m/z 69(26.4% )

- C2 H4
RDA

+. OH

- CH3 .

+ CH2 =CH-C=OH CH3 m/z 71(100% )

m/z 86(37.8% )

Esquema 4. Rutas de fragmentacin del terpinen-4-ol

Linalol
El linalol presenta un in molecular M+ en m/z 154 (1.43%) de baja intensidad (Figura 22), que se fragmenta eliminando una molcula de agua con la formacin del in (M-H 2O)+ en m/z 136 (7.1%). Este ltimo decae por prdida paralela de los radicales CH3 y C3H7 generando, respectivamente, los iones (M-H2O-CH3)+ en m/z 121 (26.4%) y (M-H2OC3H7)+ en m/z 93 (81.4%), tal como aparece en el Esquema 5. El pico de base del EM se produce por una ruptura allica (a) del in M+ , acompaada de la localizacin de la carga positiva sobre el fragmento oxigenado en m/z 71 (100%).

Figura 22. Espectro de masas del linalol Las dos rupturas allicas (a y b) en el in M+ generan el fragmento C4H70+ en m/z 71 (a), pico de base en el espectro, y el in hidrocarbonado en C5H9+ en m/z 69(40%) (b). El primero decae posteriormente por eliminacin de una molcula de etileno, con formacin del fragmento CH3CO+ en m/z 43 (74.2%), y el segundo forma un in allico (m/z 41), tambin por prdida de la molcula C2H4. Los iones C4H7O+ (m/z 71), C5H9+ (m/z 69), CH3CO+ (m/z 43) y C3H5+ (m/z 41) son fragmentos diagnstico en el EM del linalol y permiten distinguirlo fcilmente de otros monoterpenoles.

+.

-CH3 .

-H2 O H -C3 H7 .

+ m/z 121(20% )

+ m/z 93(64.2% )

(a) (b)

OH

m/z 136(7.1% )

+.
+ ruptura allica

OH
-C2 H4

M+. m/z 154(1.4% )

(a) m/z 71(100% )

+ CH3 C O m/z 43(74.2% )

Linalool
+ -C2 H4 CH CH2 + CH2

ruptura allica (b)

m/z 69(40% )

m/z 41(30.6% )

Esquema 5. Rutas de fragmentacin del linalool. EM de Sesquiterpenos

-Cadineno
En el EM del -cadineno (Figura 23) el in molecular M+ en m/z 204(45.71%) tiene una intensidad media. El pico de base en su espectro corresponde al fragmento (M-C 3H7)+ en m/z 161(100%), el cual se forma por la prdida del radical isopropilo de la molcula ionizada. La posicin del doble enlace en el ciclo A se comprueba por la aparicin de un in en m/z 134(60%), producto de la reaccin monomolecular de retro Diels-Alder (RDA) que ocurre tanto en el in M+ como en el fragmento (M-C3H7)+, tal como se observa en el Esquema 6.

Abundance 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 40 60 39 41 55

Scan 3766 (32.330 min): YA01.D (*)

161

119 105 91 81 69 79 189 123 80 100 120 147 140 205 163 176 160 180 200 134 204

Figura 23. Espectro de masas del -cadineno.

-CH3 .

+ m/z 189 (11.6% )

+. A B

-C2 H4

-C3 H7 . M+. m/z 204(45.7% )

RDA (B)

A + m/z 93 (21.4% )

-Cadineno

+ m/z 161 (100% )

RDA (A) +. RDA (A) -C3 H7 .

-2H.

m/z 134 (58.6% )

m/z 91 (30% )

-CH3 .

-C2 H5 .

-C2 H4

m/z 119 (65.7% )

m/z 105 (60% )

C5 H5 + m/z 65 (6.4% )

Esquema 6. Rutas de fragmentacin del -cadineno

El fragmento en m/z 134, producto de la reaccin RDA, posteriormente sufre reordenamientos y prdida sucesiva de los radicales CH3, C2H5 y C3H7, para formar los iones en m/z 119 (66.7%), m/z 105(60%) y m/z 91(30%), respectivamente. La presencia de la secuencia caracterstica, de los iones en m/z 65, m/z 91, 105, 119, 131, sugiere la formacin de estructuras aromticas con sustituyentes alqulicos.

-Bisaboleno
En el EM del -Bisaboleno (Figura 24) se registra el in molecular M+ de intensidad baja; el cual decae rpidamente dando lugar a los fragmentos (M-CH3)+ en m/z 189(8.6%), (M-C3H7)+ en m/z 161(24.3%) y (M- C3H7-C2H4)+ en m/z 133(80.0%). El pico de base es el in en m/z 93(100%) producto de la reaccin RDA de la molcula ionizada, acompaada del reordenamiento con eliminacin rpida del radical isopropilo C3H7, tal como se observa en el Esquema 7.
Scan 3616 (31.166 min): GUFSFE22.D (*) 93

Abundance 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 40 39 44

67 55

79 81

109 119 133 122 100 120 147 161 160 180 189

204

60

80

140

200

Figura 24. Espectro de masas del bisaboleno.

.
O
H

+.

PM 204

(M+.)*

- Bisaboleno
-CH3 . -C3 H7 . + -C2 H4 H -C2 H4

+ +
m/z 189(8.6% ) m/z 161(24.3% ) m/z 133(80% ) -C3 H6 .

RDA

+
m/z 91(74.3% )

-2H.

.
-C3 H7 .

O H

+
m/z 136 m/z 93(100% )

Esquema 7. Rutas de fragmentacin del -bisaboleno La descomposicin de los fragmentos m/z 93 y 133 con la prdida de 2H y C3H6, respectivamente, conduce a la formacin del in tropilio C7H7+ en m/z 91 de intensidad alta (74.3%). EM de alcoholes y aldehdos Los aceites esenciales de ctricos, de ruda y algunas plantas de la familia Umbelfera poseen alcoholes y aldehdos alifticos, por ejemplo, n-octanol, n-nonanol, n-nonanal, ndecanal y el -sinensal, responsables por el aroma fresco y agradable, tpico de los ctricos.

n-Octanol
En el EM del n-octanol (Figura 25) no se registra el in molecular M+. (P.M. 130) debido a su inestabilidad con respecto al impacto de electrones, comportamiento tpico de los alcoholes alifticos. Sin embargo, en el EM aparecen los fragmentos caractersticos (MH2O)+ en m/z 112 (1.43%) y (M-H2O-CH3)+ en m/z 97 (2.86%), producidos por la prdida sucesiva de una molcula de agua y del radical CH3. El pico de base en m/z 56(100%) se genera por desprendimiento del in molecular de un fragmento C4H90H. Los iones (M-46)+ en m/z 84(48.6%) y (M-60)+ en m/z 70(62.8%) se forman por la prdida paralela de las molculas C2H5OH y C3H7OH del in M+, respectivamente

Abundance 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 45 50

Scan 1183 (14.964 min): NARVAV01.D (*) 56

70 84

68 54 55 60 65 70 73 75 81 80 85 112 95 100 105 110 115 120 97

90

Figura 26. Espectro de masas del n-octanol.

n-Decanal
En el EM del n-decanal (Figura 26) no aparece el in M+ (PM 156), comportamiento caracterstico de los aldehdos alifticos saturados con ms de 10 tomos de carbono. En el EM del n-decanal, que es semejante al de los alcanos, donde prevalecen los fragmentos en la regin de masas pequeas (< m/z 80), se observan las secuencias de iones homlogos en m/z 29(44.2%), 43(94.2%), 57(100%), 71(30%), ..., CnH2n+1+ y m/z 41(87.1%), 55(77.1%),

69(34.3%), ..., CnH2n-1+. Los productos de descomposicin ms significativos desde el punto de vista de diagnstico estructural son los fragmentos resultantes de la transposicin de McLafferty; en donde la carga positiva se distribuye entre los fragmentos complementarios, oxigenado C2H4O+ en m/z 44(85.7%) e hidrocarbonado, C8H16+ en m/z 112(22.8%), tal como aparece en el Esquema 8.

Abundancia 90 80 70 60 50 40 30 20 10 m/z-->0 30 40 50 41 43

57

Scan 2386 (20.622 min): NARVEX22.D (*)

70

82

84 53 60 70 72

95

96

112 128

80

90

100

110

120

130

Figura 26. Espectro de masas del n-decanal

Los iones con la carga positiva localizada sobre el oxgeno, generan una serie de fragmentos homlogos en m/z 44(85.7%), 58(8.6%), 72(10.8%), ..., CnH2nO+. La localizacin de la carga sobre la parte hidrocarbonada de la molcula origina iones de las series olefnica CnH2n-1+ (m/z 41, 55, 69, 83 ...) y aliftica. CnH2n+1+ (m/z 43, 57, 71, 85 ...).

Transposicin de McLafferty:

H CH3 (CH2 )5 - CH CH2 CH2 PM 156

. O+ C H

+. OH
Transposicin McLafferty

+. (CH2 )5 - CH3

C CH2 H

CH CH2 m/z 112(22.8% )

m/z 44(85.7% )

n-Decanal Formacin de los iones hidrocarbonados a partir del fragmento m/z 112:

-CH2 =CH2 -CH2 =CH2

m/z 83(35.0% )

m/z 69(34.4% )

m/z 55(77.1% ) m/z 41(87.1% ) ruptura allica +.

CH2 = CH - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - CH2 - CH3

m/z 29(44.2% ) m/z 43(94.2% ) m/z 57(100% ) m/z 71(30.0% )
-CH2 =CH2 -CH2 =CH2

Esquema 8. Rutas de fragmentacin del n-decanal Geranial

En el EM del geranial (Figura 27), monoterpenal acclico, el in molecular M+ (PM 152) no se registra. Los procesos asociados a su ionizacin disociativa involucran la eliminacin de una molcula de agua y del radical C3H7, con formacin de los iones (M-H2O)+ en m/z 134(2.86%) y (M-C3H7)+ en m/z 109(24.3%). La ruptura allica origina el fragmento

hidrocarbonado en m/z 69(100%), pico de base en el espectro, que posteriormente elimina la molcula de etileno para convertirse en un in allico en m/z 41(90%), tal como se ilustra en el Esquema 9.
Abundance 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 m/z--> 50 53 59 60 67 81 94 95 90 100 109 123 107 110 119 120 137 134 130 140 150 160 152 84 Scan 2214 (23.494 min): LIMT002.D (*) 69

70

80

Figura 27. Espectro de masas del geranial.

-CH3 .

m/z 119(8.6% )

- H2 O

. (M-H2 O)+ m/z 134(2.8% ) -C3 H7 .

(M-H2O-C3H7)+
m/z 191(9.1% )

.
-C3 H7 .

CHO

(M-C3H7)+
m/z 109(24.3% )

-CH3 .

(M-C3H7-CH3)+
m/z 94(14.3% )

PM 152

Geranial
ruptura allica

+ +
m/z 69(100% )

- C2 H4

+
m/z 41(90% )

Esquema 9. Rutas de fragmentacin del geranial RESONANCIA MAGNTICA NUCLEAR

a espectroscopa de resonancia magntica nuclear de Carbono - 13 (RMN-13C) es un mtodo no destructivo que utiliza directamente el aceite esencial, sin

realizar ninguna separacin previa, produciendo un espectro en donde aparecen las contribuciones de todos los constituyentes del aceite a diferentes funcionalidades qumicas tales como grupos C=O, C=C, C-O-C, C-OH, etc. A travs de la espectroscopa de Resonancia Magntica Nuclear ( RMN) se obtiene informacin sobre la estructura y la composicin qumica de una muestra, gracias al estudio de la forma como sta absorbe energa cuando se halla dentro de un campo magntico. La energa absorbida est asociada con cambios en la orientacin de aquellos ncleos atmicos que se ordenan en respuesta a un campo aplicado. En particular, son de inters el hidrgeno y el istopo del carbono de peso atmico 13 (con una abundancia del 1.1 %), porque se comportan como pequeos imanes y se orientan paralela o antiparalelamente a la direccin del campo magntico aplicado. El gran poder analtico de la espectroscopa RMN surge del hecho que la energa necesaria para invertir la orientacin de un ncleo dado, no depende exclusivamente de la magnitud del campo magntico aplicado, sino que est modulada por la densidad electrnica alrededor del ncleo, su orientacin y distancia electrnica alrededor del ncleo, su orientacin y distancia relativas a otros ncleos vecinos, y por la geometra global de la molcula. Es decir, la estructura de la molcula hace que los ncleos que la constituyen requieran diferentes valores de energa para invertir su orientacin con respecto al campo magntico aplicado, ya que a cada uno corresponde un ambiente qumico diferente. En consecuencia, los ncleos de carbono-13 o hidrgeno en la muestra, se pueden distinguir en un grfico de intensidad de adsorcin versus energa (espectro RMN). En el espectro de RMN se distinguen diferentes regiones, las cuales estn asociadas con ambientes qumicos similares para los ncleos que forman parte del mismo tipo de grupo funcional. Por ejemplo, los hidrgenos de los grupos CH3 aparecen en el extremo derecho del espectro, mientras que los hidrgenos de los grupos aldehdo (R-CHO) aparecen en el extremo opuesto.

Dada la alta resolucin disponible hoy en da con esta tcnica, es posible distinguir dentro de los picos pertenecientes a una misma regin del espectro (funcionalidad) aquellos correspondientes a diferentes constituyentes del aceite esencial. Esto permite, a travs del estudio del comportamiento de sus intensidades y reas, utilizar esta tcnica para supervisar cambios cualitativos y cuantitativos en la composicin qumica del aceite esencial, para aquellos componentes presentes en concentraciones mayores del 1%. A travs de experimentos de RMN conocidos como DEPT, es posible obtener subespectros, en los cuales nicamente aparecen las seales de los carbonos con un mismo grado de protonacin. Es decir, pueden lograrse espectros en donde las seales son exclusivamente de carbonos cuaternarios o carbonos metlicos, o metilnicos o metnicos. Esta selectividad es de gran utilidad para la caracterizacin del aceite esencial y el control de su calidad.

ESPECTROSCOPIA INFRARROJA

a espectroscopa infrarroja es una ayuda rpida para identificar los principales grupos funcionales presentes en la mezcla, pero la naturaleza ancha de las

seales que constituyen el espectro conduce a una muy baja resolucin cuando se tienen mezclas de compuestos qumicamente similares, tal como es comn en el caso de los aceites esenciales. Las seales que aparecen en un espectro infrarrojo informan sobre la energa absorbida por las diferentes formas en que pueden vibrar las molculas constituyentes de la muestra, tales como variaciones en la longitud de los enlaces, torsiones y variaciones angulares. Una tcnica analtica bastante potente se obtiene al acoplar la cromatografa de gases con la espectroscopa infrarroja (GC-FT-IR). La corriente de gas que sale de la columna cromatogrfica se dirige por medio de lneas de transferencia calentadas, hasta una celda para gases o hasta un tubo de luz. Tpicamente ste est hecho de acero inoxidable, vidrio o cuarzo, con un recubrimiento interior en oro y con ventanas transparentes a la luz infrarroja (KBr).

Para obtener el espectro de los componentes de la mezcla gaseosa que circula por el tubo de luz, se hace pasar luz infrarroja desde una de las ventanas del tubo y en el otro extremo se instala un detector altamente sensible, cuya seal se analiza por el mtodo de la transformada de Fourier ( interferometra). Luego de atravesar el tubo de luz, la corriente gaseosa se lleva a un detector convencional de cromatografa de gases. De esta manera se obtiene el cromatograma de la muestra y los espectros infrarrojo de sus constituyentes. El paso final del anlisis es la bsqueda automtica de los espectros infrarrojo obtenidos en una biblioteca de espectros en fase vapor de compuestos patrones. La mayora de los productos naturales, tales como aceites, perfumes, carbones y destilados del petrleo, contienen muchos compuestos isomricos. Debido a que la mayora de estos ismeros difieren en sus espectros infrarrojo, la metodologa GC-FTIR se presta para el estudio. Las aplicaciones de esta metodologa a los aceites esenciales comenzaron a principios de la dcada de los 80, inicialmente con columnas empacadas y posteriormente con columnas capilares de alta resolucin. El anlisis de la composicin de los aceites y el estudio de su variacin como resultado de procesos qumicos como por ejemplo, la degradacin, se ven facilitados por la posibilidad que permite el mtodo GC-FT-IR de procesar los datos para obtener cromatogramas en los cuales aparezcan nicamente compuestos que poseen un mismo grupo funcional. De esta manera se pueden estudiar independientemente, por ejemplo, los alcoholes y las cetonas, presentes en un aceite. Una limitacin que est siendo subsanada crecientemente es la disponibilidad de bibliotecas suficientemente grandes de espectros en fase vapor de compuestos puros, para la identificacin de los componentes del aceite a travs de la bsqueda espectral automtica.